Inmunohistoqumica cast

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Manual de Calidad de
Inmunohistoqumica
en Anatoma
Patolgica

Dr. Manuel Vaquero

S. Anatoma Patolgica

2007

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NDICE

Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Fijacin de tejidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Recuperacin antignica . . . . . . . . . . . . . . . . .9
Cuantificacin del resultado
inmunohistoqumico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10
Realizacin de inmunohistoqumica
en preparaciones citolgicas . . . . . . . . . . . . . .11
Evaluacin de nuevos anticuerpos . . . . . . . . . .12
Tipos de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Anticuerpos disponibles . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Paneles de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Primario desconocido . . . . . . . . . . . . . . . .14
Tumores indiferenciados . . . . . . . . . . . . . .17
Utilidad del EMA . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
Mama . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
S. Nervioso: neurodeg. y tumores . . . . . . .18
Pulmn/mesotelio . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Piel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Hgado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Rin-urotelio/prstata/testes . . . . . . . . .21
Ovario/trofoblasto . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Endocrinos-neuroendocrinos . . . . . . . . . . .25
Partes blandas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Algoritmo en carcinoma colorectal . . . . . . .26
Hematopoyticos . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
Controles externos recomendados . . . . . . . . . .28

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Hoja de peticin de estudios

inmunohistoqumicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Anexo: Ejemplo de la base de datos
de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31

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Introduccin

(J Histotech 1999; 22:163; Arch

Pathol Lab Med 2000;124: 945)
El uso de tinciones de tejidos para facilitar su observacin microscpica se inici con la hematoxilina-eosina en
el siglo XIX. En el primer tercio del siglo XX se introduce la
histoenzimologa que utiliza tejidos sin fijar y de la que
quedan nicamente restos, como los estudios con DPNasa
y ATPasa en enfermedades musculares. La primera inmunohistoqumica se realiz con anticuerpos fluorescentes
sobre tejidos frescos como los que se utilizan actualmente en diversas enfermedades de piel y rin. Los mtodos
inmunoenzimticos (peroxidasa, avidita-biotina) que permitan amplificar la seal del cromgeno favorecieron la
utilizacin de tejidos fijados en formol e incluidos en parafina. Actualmente se utilizan polmeros sintticos para
amplificar la seal (Envision, Powervision).
La inmunohistoqumica es una tcnica esencial en el
diagnstico anatomopatolgico de las enfermedades, fundamentalmente de las neoplsicas. Para que su utilidad
sea plena es necesario realizar la fijacin de los tejidos,
las indicaciones de uso, las tcnicas y la lectura y valoracin de los resultados atenindose a unos criterios de
Controles de Calidad tanto internos del propio servicio
como externos, en nuestro caso los auspiciados por la
Sociedad Espaola de Anatoma Patolgica.
Con el objetivo de servir de gua para la obtencin de
resultados ptimos con las tcnicas de inmunohistoqumica se recogen en este Manual los distintos apartados
necesarios para conseguir, primero, unos niveles de calidad estndares y que ello conduzca despus a su mejora
continua.
En el Servicio de Anatoma Patolgica del Hospital
Donostia se cuenta con un laboratorio de Inmunohistoqumica con los medios tcnicos y una cantidad suficiente de anticuerpos que permiten obtener los mejores
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resultados diagnsticos. Sin embargo, es necesario organizarlos y gestionarlos adecuadamente para que cualquiera
de los patlogos del servicio obtenga la mayor eficacia y
reproducibilidad con los mismos. Por ello, es imprescindible contar con una base de datos que incluya todos los
anticuerpos y sus caractersticas, con una gua tcnica y
con indicaciones sobre paneles de conjuntos de anticuerpos segn las patologas a estudiar y algoritmos diagnsticos para las mismas; tambin deben existir controles
internos en el mismo corte o de tejidos o tumores ad hoc
que permitan unas valoraciones cuantitativas objetivas
con mnimas variaciones inter e intraobservador.
La estandarizacin de cada uno de los pasos, desde la
recogida del tejido hasta la valoracin final del resultado
obtenido, es clave para que la inmunohistoqumica sea
totalmente fiable y, a la vez, que el gasto realizado sea el
ms ajustado a las necesidades. Con estos fines nace este
Manual.
Agradezco la colaboracin de los patlogos del servicio,
as como el apoyo y la asistencia tcnica recibida para la
realizacin de este trabajo a los tcnicos del laboratorio
de inmunohistoqumica Elena, Juana y Puri; a Koro,
supervisora del servicio, y a Linda, por su apoyo informtico. Sin ellas la tarea hubiese sido mucho ms ardua y el
resultado inaccesible.

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Fijacin de los tejidos

La inmunohistoqumica se puede realizar en tejidos de
biopsia y de autopsia, generalmente fijados en formol e
incluidos en parafina, as como en material de citologa.
La fase de fijacin del material para inmunohistoqumica es esencial. Una fijacin inadecuada impide cualquier
resultado fiable.
El fijador que se utilizar para inmunohistoqumica es el
formaldehdo al 4% tamponado a pH 7,4 (formalina). El perodo ideal de fijacin no ser menor de 24 horas ni mayor de
48 horas. Fuera de estos estndares la calidad de la tcnica baja sensiblemente. Es aconsejable, por tanto, indicar
en la hoja de peticin de la biopsia la hora en que se introdujo en formol. Hay evidencias de que la fijacin a mayores temperaturas que la ambiental empeora los resultados.
Lo ideal para la piezas mayores es mantenerlas en el frigorfico a 4 C si se van a dejar toda la noche antes de tallarlas. El material autpsico ofrece generalmente malos resultados debido a los fenmenos postmorten que sufren los
tejidos. La inmunohistoqumica con vimentina permite
observar el deterioro sufrido durante la fijacin. Las piezas
que vayan a procesarse el fin de semana iniciarn dicho procesamiento el mismo viernes para evitar que permanezcan
excesivo tiempo en el formol; en caso de no ser posible, es
preferible iniciar el procesamiento por alcohol de 70.
Cuando el tejido ha estado menos de 24 horas en formol,
se produce una fijacin hbrida: perifricamente se fijan
con formol mientras las partes profundas centrales lo
hacen gracias a los alcoholes que se emplean durante el
procesamiento. Esto les hace ms sensibles a los mtodos
de recuperacin antignica y resultan ms falsos positivos.
Las citologas, al no tener que fijarse en formol, llevan
un procesamiento diferente que se recoge en el apartado
correspondiente.
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En caso de necesitarse utilizar un mtodo de descalcificacin se elegirn los ms suaves, preferiblemente el

EDTA. Si se han empleado cidos, es crtico realizar un
lavado de duracin variable con agua corriente, de mayor
duracin cuanto ms haya durado la descalcificacin.

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Mtodos de recuperacin antignica

Durante la fijacin con formalina se producen puentes
metilo cruzados entre las protenas y se forman compuestos clcicos adyacentes. Estos compuestos afectan tambin a las zonas antignicas y deben eliminarse para obtener un resultado ptimo en la inmunohistoqumica.
El mtodo de recuperacin antignica se realiza fundamentalmente mediante incubacin con calor, en torno a
los 100 C, en bferes de citrato o EDTA. Menos frecuente
es el uso de enzimas proteolticas, sin calentamiento, ya
que dejan un fondo mayor y favorecen el desprendimiento del tejido.
Protease-induced epitope retrieval (PIER)
Descrito para inmunofluorescencia por Huang en 1976.
En parafina tan slo es til para un nmero limitado de
anticuerpos y adems es difcil de reproducir. El que da
resultados ms estandarizados es la proteasa. Las variables ms importantes son el tiempo de digestin y la concentracin de la enzima.
Heat-induced epitope retrieval (HIER)
En 1991 Shi comienza a utilizar el microondas, entre 8 y
12 minutos, introduciendo las laminillas en buffer citrato
0,001 m a pH 6. El mayor problema es que algunos epitopos se daan con el calor de forma irreversible y esto
acontece ms fcilmente si el tejido est poco fijado. Para
evitar el desprendimiento de los cortes tisulares se utilizan laminillas adherentes especiales.

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Cuantificacin del resultado inmunohistoqumico (J Histoch 2005; 28:89)

Se seguir en general la siguiente pauta, aunque hay frecuentes casos especficos en los que los porcentajes y su
significado pueden variar:
Negativo (-): total negatividad o menos del 50% de las
clulas diana con menor intensidad que el control.
Positividad dbil (+/-): ms del 50% de las clulas
diana con menor intensidad que el control.
Positivo (+): ms del 50% de las clulas diana con
igual o mayor intensidad que el control.
El lmite de intensidades entre negativo y positividad
dbil o positivo se hace por comparacin con un control
interno existente u otro externo ad hoc.

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Realizacin de inmunohistoqumica en
preparaciones citolgicas
Lo mejor es prever siempre un bloque para procesar en
parafina. Hay dos posibilidades, o bien realizar la inmunohistoqumica sobre la misma laminilla citolgica o tambin
despegar las zonas deseadas y transferirlas a otros portas.
Esta ltima es ms tediosa pero ofrece los mejores resultados y permite sacar varios portas de una sola extensin
citolgica. El mtodo es muy reciente y se desarrolla de la
siguiente manera:
Es importante la utilizacin del medio Mount-Quick
(Newcomer supply. Middleton WI) (Cancer Cytopathol
2005;105:158/ J Histoch 2002;25:251).
Echad el medio sobre la laminilla y endurecerlo en
estufa a 50-60 C varias horas.
Marcad las zonas a estudiar con rotulador indeleble.
Calentad al bao Mara (45 C) durante 15-20 minutos
para ablandarlo.
Levantad el medio del porta con un bistur y cortadlo
en lonchas.
Transferid a porta adherente especial y mantened
durante un minuto una presin con papel de filtro
humedecido.
Mantened a 60 C durante toda la noche.
Retirad el MontQuick mediante tres pasos por xilol.
Rehidratar (No es necesario desteir si se va a utilizar
HIER).

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Evaluacin de nuevos anticuerpos

(J Histoch 2001; 24:275)
1. Seleccin de un nuevo anticuerpo primario: los motivos pueden ser por que existan nuevas demandas o para
sustituir a otro existente.
Deben predecirse el nmero de test que se realizarn
anualmente y el coste de cada estudio.
Deben conocerse la dilucin aunque se preferirn los
no diluidos previamente, el mtodo de recuperacin
antignica y la sensibilidad y especificidad del anticuerpo. Vg. para p53 el DO7 o el pAb 1801; HER2/neu
mejor el policlonal de conejo pero falsos +. Los policlonales tiene en general mayor afinidad y pueden
emplearse diluciones >1/1000, aunque tienden a dar
ms fondo lo que obliga a bloqueos suplementarios
(vg. con la clona LeuM1 tipo IgM debe utilizarse un
anticuerpo secundario de tipo IgM).
2. Optimizacin de la inmunorreactividad
Los factores ms importantes son.
Dilucin del anticuerpo primario.
Duracin de la incubacin del primario.
Tipo y concentracin del anticuerpo secundario.
Tcnica de recuperacin antignica empleada.
Temperatura de incubacin.
Sistema de deteccin y amplificacin.
En la prctica se manejan nicamente tres variables:
Dilucin del anticuerpo primario.
Tiempo de incubacin del primario (si se aumenta el
tiempo se pude diluir ms el anticuerpo primario).
Tcnica de recuperacin antignica (el EDTA alcalino
suele ser mejor que el citrato. Excepciones: LMP-1 y
CD21, en los que se preferirn enzimas).
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La hoja de trabajo para la validacin de nuevos anticuerpos es la siguiente (tabla orientativa):

Dilucin*
1/10
1/20
1/40
1/80

Recup
antg/ T **
10 mM
citrato
pH 6 /
20 minut

Tiempo
antc
32 minutos

Sist
Resultados ***
incubacin

Envision

0- negativo
1- positivo dbil
en algunas clulas diana

1/10

1/80

1mM EDTA
pH 8/
20 minut

32 minutos Envision

2- positivo dbil
en muchas clulas diana
3-positivo moderado en la
mayora clulas
diana

1/10

1/80

Proteasa
8 minutos

32 minutos Envision

4-positivo fuerte
en la mayora
clulas diana

* Seguid diluciones segn especificaciones de cada anticuerpo.

** Calentad (olla, microondas o autoclave) a 100C 15-20 minutos y otros tantos para enfriar. En muchos casos, es mejor el
pH 9.
*** Slo para ajustar la valoracin. No para resultados en diagnsticos.

Adems de la positividad de la diana debe valorarse el

fondo. Dicha tincin de fondo tiene causas variadas. A
veces es debido a que el anticuerpo no est totalmente
purificado y tiene inmunoglobulinas inespecficas. Muchas
veces es por una titulacin deficiente del anticuerpo primario y/o secundario (disminuid la concentracin y
aumentad los tiempos para solucionarlo). En las tinciones
citoplsmicas deben tenerse en cuenta los falsos positivos
como los debidos a biotina endgena (neutralizadla con
avidina despus del anticuerpo primario) y con las peroxidasas (se neutraliza con agua oxigenada) y fosfatasa (se
bloquea con levamisol) endgenas.
Para detectar problemas de fijacin es til introducir un
control de vimentina (Dako) pero sin realizar con ella
recuperacin antignica alguna.
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Tipos de anticuerpos
Los anticuerpos pueden ser poli o monoclonales. Estos
ltimos son ms especficos y se obtienen mediante el
mtodo de hibridoma de Kohler que consiste en la fusin
de clulas esplnicas de un ratn inmunizado con una lnea
celular de mieloma no secretor murino. Dado que el conejo es ms fcil de inmunizar que el ratn actualmente se
estn introduciendo anticuerpos monoclonales de conejo a
pesar de que este animal no padece mieloma, por lo que
deben generarse heterohibridomas conejo-ratn. Los anticuerpos de conejo son ms sensibles y parecen conservar
la especificidad. (Am J Clin Pathol 2005;124:295).

Anticuerpos disponibles
Como puede observarse en la base de datos, anexada a
modo de ejemplo al final del manual, se recogen todos los
datos necesarios para la identificacin, manejo y gestin
de calidad de la tcnica de inmunohistoqumica.
De ella, junto con la hoja de peticin, se desprendern
las estadsticas mensuales de anticuerpos utilizados, porcentaje de positividad de cada uno e incidencias tcnicas.

Paneles de anticuerpos

(Dabs. Diagnostic
Immunohistochemistry 2002; www. immunohipermart.net;
www.immunoquery.com/login.cfm; www.cap.org)
Metstasis de primario desconocido (J Histoch 1999;
22:209)
Las citoqueratinas (CK) se clasifican segn el Pm y el
punto isoelctrico (Moll). In vivo tienden a expresarse
en parejas, una bsica y la otra cida (CK8/CK18;
CK5/CK14). En la prctica las ms tiles son:

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- PanCK AE1-AE3.
- 34beta E12 (alto Pm): se detecta en epitelios complejos como el ductal, el transicional y los escamosos
(CK 1,5,10 y 14), en carcinomas escamosos pobremente diferenciados y en mesotelio.
- CK5/6: positivo en clulas basales, en carcinomas
escamosos pobremente diferenciados y en mesotelio.
- CK7: se detecta en epitelios simples de pulmn, crvix, mama, ductos biliares, tubos colectores renales,
vejiga y mesotelio.
- CK19 muy til en carcinoma de pncreas, estmago,
colon, tracto biliar, hgado y mama. El Ca papilar
tiroideo suele ser positivo frente al 50% de los foliculares.
- CK20: se detecta en clulas foveolares gstricas y
clulas umbrela de la vejiga. Muy positivo en carcinoma de clulas de Merkel. Positivo en carcinoma
de colon.
La utilizacin simultnea de CK 7 y CK20 ofrece grandes ventajas en la orientacin de un posible primario:
CK7/CK20
+

CK7/CK20
negativas

CK7+/ CK 20
negativa

CK7 negativa/ CK20 +

Pncreas
Vejiga
Mucinoso
de ovario
Ca Merkel

Escamoso pulmn
Neuroendocrinos
Hepatocarcinoma
Rin
Prstata

Timoma
Colorrectal
Pulmn No oat cell
Mesotelioma
Mama
Endometrio
Seroso de ovario

CEA: generalmente positivo en carcinomas de pulmn,

hgado y colorrectal. A veces positivo en mama, transicionales y crvix. Generalmente negativos en mesotelioma, rin, endometrio y ovario.
p 16- sobreexpresado en carcinomas y displasias asociadas a VPH.
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Otras combinaciones tiles para identificar el origen de

los carcinomas son:
34BE12 CAM 5.2 AE1/AE3 CK7 CK 20 TTF-1
C Merkel

Oat cell

-/+

Adc pulm

-/+

+/-

Mama

-/+

Seminoma

Endometr

-/+

Vejiga

-/+

Partida

-/+

Neuroend

Pncreas

-/+

+/-

-/+

Biliar

-/+

+/-

+/-

Gstrico

+/-

+/-

Colorrectal

Prstata

-/+

Renal

Germinal

Hepatoca

Muc ovari

No muc ov

-/+

-/+

+/-

Tiroides
Adrenal
Timo
Endocrvix

-/+

Algunos anticuerpos son ms rgano-especficos:

PSA, tiroglobulina, TTF-1, protena surfactante tipo A.
Receptores de estrgenos y/o progesterona generalmente positivos en mama, endometrio, crvix, ovario,
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tiroides, neuroendocrinos y sudorparos. Son siempre

negativos en hepatocarcinoma, carcinoma colorrectal
y en el pulmonar no oat cell.
Tumores indiferenciados
CAM 5.2

EMA

S-100

ALC

Fosf Al Plac

Carcinoma

-/+

-/+

Melanoma

Linfoma

No semino

Seminoma

R-N

Reactividad del EMA en carcinomas y tumores no epiteliales.

Tpicamente
positivo

Generalmente
negativo

Positividad ms
focal

Biliar ductos
Tumores germinales Perineuroma
Carcinomas sarco- excepto coriocarci- Neurofibrosarcomas
matoides
noma
Sarcoma sinovial
Endocrvix
Plasmticas
Endometrio
Eritroblastos
Mama
Cel L-H Hodgkin
Meningioma
ALK linfoma
Mesotelioma
Leiomiosarcoma
Pncreas
Hist fibroso maligno
Piel y anejos
Prstata ductos
Pulmn
Salival
Tiroides
Urotelio

Mama
- Para el diagnstico diferencial entre hyperplasia ductal e hyperplasia atpica-Ca in situ son tiles la citoqueratina 34bE12 y la CK 5/6.
- Para valorar la posible invasin estromal se utilizan la
p63 y la calponina.
17

18
LBD

vLB-AD

DF/DFT

Pick

DFTP-17

Fam+Park

DCB

ELA+D

Asta
anterior
AMS

SOLO
OVILLOS

PSP

Patologa tau en
neuronas y gla de
tronco y GB

D.C. argirfilos

Cuerpos argirfilos

Demencia
talmica

PrP -

Gliosis en tlamo

EETH

Cambios espongiform

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Pick-

Demencia vascular

Inclusiones tau+, -synuclena + en oligodendrogla

y neuronas

Mixta

Patologa vascular

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Pick+

Placas
astrocitarias

ALZHEIMER

Placas y ovillos

Atrofia lobar, vacuolizacin

superficial, gliosis subcortical,
neuronas abalonadas

Parkinson

Cuerpos de Lewy

ENFERMEDADES DEGENERATIVAS

Enfermedades neurodegenerativas

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En la clasificacin es importante la conjuncin de: datos

clnicos, distribucin anatmica de las lesiones, tipo de
cambios morfolgicos y positividad, segn en tipo de patologa, para los siguientes anticuerpos:
- Amiloide-
- Protena Glial Fibrilar cida
- Sinuclena
- Tau
- Ubicuitina
Tumores de sistema nervioso central
Muy importante: en las intraoperatorias hay que estar
seguros de que el material es representativo de la lesin.
Ojo!: En las biopsias obtenidas con esterotaxia, si se usa
toda la muestra para la tcnica de aplastamiento en vez
de las improntas, no quedar material para parafina. Hay
que tener adems en cuenta que algunos glioblastomas
pueden dar positividad para citoqueratinas, por lo que se
preferir el CAM 5.2. En general suelen ser tiles para el
diagnstico y clasificacin la utilizacin de Ki-67 y p53.
- Con clulas claras
PGFAP

EMA

Synapt

Kp-1

Oligodendroglioma

Xantoastrocitoma

Ependimoma

T disembriplstico

Neurocitoma

Meningioma

Hemangioblastoma

Ca renal

Desmialinizacin

Infarto

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Pgina 20

- Con clulas epitelioides

GFAP CAM 5.2 EMA S-100 Cromog Sinapt
Oligodendroglioma

Ependimoma

Papiloma plexos

Cordoma

Craneofaringioma

Carcinoma

Adenoma hipofisis

Paraganglioma

Meningioma

Melanoma

Hemangioblastoma

- Tumores con clulas pequeas/anaplsicas

Viment GFAP Synap S100 Desmi CK EMA CD20
Ependimoblast
Medulob/P
NET

+/-

-/+

-/+

+/-

-/+

+/-

+/-

+/-

-/+

Linfoma

Ca cel
pequea

+/-

Rabdomios
T
teratoide
Hemangioperic

Respiratorio
- Carcinomas pulmonares: epidermoide vs oat cell
Panqueratin/
CAM 5.2
Ca epidermoide
Oat cell
20

Cromogranina A

TTF-1

+ difuso

+/- puntiforme

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Pgina 21

- Mesotelioma epitelial vs carcinoma

Calre- Trombo
BerEP
DO 4 CK 5/6 CEA CD15
tinina modulin
4
Mesotelioma
+
+/+/+/Carcinoma

-/+

+/-

+/-

Piel
- Enfermedad de Paget vs carcinomas/ melanoma
CK 7

Pan CK

CK 20

CEA

S-100

Paget mama

- /+

Paget vulva

-/+

+/-

-/+

+/-

-/+

Ca recto

Ca urotelial

-/+

Melanoma

Bowen

Hgado
- Carcinomas hepticos primarios

Hepatocarcinoma
Colangiocarcinoma

CK AE1AE3
-/+
+/-

CEA
-/+
+/-

Hepatocito 1 Alfa FP
+
-/+

+/-/+

Genitourinario
- Tumores renales: perfiles inmunohistoqumicos
Adenoma metanfrico: WT1 y CD 57 positivos; CK 7 y
EMA negativos
Angiomiolipoma: HMB 45 y actina positivos; CK negativas
Carcinomas con translocacin Xp11.2/TFE3: protena
TFE 3 positiva nuclear
Carcinoma de clulas claras
Positivos
CK 7
EMA
Vicentina
CD10
Fosfatasa alcalina

Negativos
CK alto Pm
CEA
S-100
Inhibina
Otros:
Mucina, Oil red-O, hierro coloidal Hale
21

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Pgina 22

Carcinoma papilar renal

Negativos

Positivos
CK AE1-AE3
CK 7
Vicentina
Mucina

CK alto Pm
Ulex europeus lectina

Carcinoma cromfobo
Negativos

Positivos
CK AE1-AE3
CK 7
CK alto Pm (a veces negativo)
E-Cadherina
EMA
Hierro coloidal Hale
Azul alcin

CD10
Vimentina

Carcinoma ductos colectores

Negativos

Positivos
EMA
CK 7
CK alto Pm
Vimentina
CEA (focal)
Mucina

CD15

Carcinoma urotelial
Negativos

Positivos
CEA
CK alto Pm
p63
CK 7
CK 20 (*)
_-catenina (a diferencia de
colon)

Vimentina

CDX2

(*) CK20 para diag. Dif. Entre Ca in situ (+) e hiperplasia urotelial

22

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Pgina 23

Cuadro sinptico de neoplasias renales (Clin Lab

Med 2005; 25:247)

CD10

Cel
Claras

Papilar

Cromfobo

Oncocitoma

Ductos
colec

81-100%

63-100%

+/- 26%

+/- 33%

-----

75-96%

+/- 45%

------

+/-

------

+/-

75%

RCC marker 75-85%

Vimentina

EMA

CK 7

----

+ (tipo1)

CK 20

----

+/-(tipo 2)

----

+/- (50-80%)

CK 15

75%

100%

+/- (25%)

63%

57-100%
***
-----

70-100% ***

CD 117

+/- (15%) +/- (28%)

Racemasa

-/+ (25%)

100%

CK < Pm

CK >Pm

----

ECadherina

5%

-/+

73-100% * 19-100% **

+
+/---------

-/+ (15%)
+

----

0% (tipo1) 95100%
38% (tipo2)

----

100%
****

(*) intenso con refuerzo de membrana; (**) focal y dbil; (***)

membrana; (****) citoplsmico. A diferencia del cromfobo: ste
patrn en anillo con CK 7-CK 19 y AE1-AE3

- Prstata (Histopathology 2005; 47:1)

El AMARCR (antc monoclonal conejo P504S) es til en
PIN de alto grado y carcinoma prosttico. Puede
resultar positivo en adenosis y en el adenoma nefrognico.
PSA- debe utilizarse un policlonal y un carcinoma de
alto grado como control.
Para diferenciar un carcinoma de prstata de otro
urotelial resultan tiles: el PSA para el origen prosttico y las citoqueratinas de alto peso molecular (34
betaE12), p63 y la CK7 para identificar urotelio
(puede ser positivo en Gleason altos y lo contrario la
CK 20).
Para marcar basales resultan igual de eficaces la CK 5/6
y la p63 (sta resiste ms la electrocoagulacin).
23

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 24

- Tumores testiculares
Suelen ser tiles los siguientes anticuerpos:
Fosf Alcalina Placentaria (membrana)- Seminoma,
neopl germinal intratubular, gonadoblastoma, ca
embrionario, TSE.
HCG- Clulas sincitiotrofoblasto.
Lactgeno placentario- trofoblasto intermedio.
Inhibina- T estroma-cordones sexuales, trofoblasto
intermedio.
EMA-si sale positiva descartar un carcinoma metastsico.
PLAP CD 117 Pan CK CD30
Seminoma

+ (*)

Ca embrionar

-/+

alfa- Inhi- VimenFeto bina

tina
-

-/+

+/-

+/-

Tcel Leydig**

-/+

T cel Sertoli

+/-

TSE

(*) negativa en espermatoctico; (**) S-100 y Melan A pueden ser

positivos.

- Tumores ovricos
Epitelio Tecom Granu Sertoli Tum Disger TSE CaEm Corio
Superf
losa Leydig anex minom
Wolfi
EMA

Inhibina

+/-

MelanA

-/+

CK

AFP

-/+

HCG

-/+

CD30

- Ca mucionoso ovrico vs Ca colon

CK 7
CK 20
CEA
Vimentina
24

Colorrectal
+
+
-

Ovrico
+
-/+

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 25

- Lesiones trofoblsticas y simuladores

CK
Ki-67
HLP
PLAP

Lugar
placen
+
+
+

Ndulo
placen
+
-/+
+

T trofo
blastico
+
+/+/

Ca
escamoso
+
+
-

- Tumores endocrinos/neuroendocrinos (J Histoch 1999;

22:239): cromogranina A (a veces falla en carcinoides
hindgut y prolactinomas), sinaptofisina, Leu 7, CD57
(NCAM), inhibina alfa (clulas gonadales productoras
de esteroides y corteza adrenal).
- Tumores de partes blandas (J Histoch 1999;22:219)
CD31 (PECAM-1): endotelio, plaquetas, clulas madre
hematopoyticas.
CD34: dermatofibrosarcoma protuberans, tumor fibroso solitario, hemangiopericitoma, GIST, endotelio,
progenitores hematopoyticos, fibroblastos y lipoma
fusocelular.
Factor XIII: histiocitoma fibroso.
S-100: melanoma, sarcoma de clulas claras, lipoma
de clulas redondas.
HMB-45: melanomas, PEComas.
HHF.35, actina muscular alfa: clulas glmicas, miofibroblastos, mioepitelio y msculo liso.
Caldesmn: msculo liso y mioepitelio pero no en
miofibroblastos ni rabdo.
Calponina: msculo liso, miofibroblastos, mioepitelio
y, a veces, en sarcoma sinovial.
EMA: perineuromas, meningiomas, carcinoma renal y
sarcoma sinovial (en ste focalmente pueden resultar positivos S100 y CD99).
Myo D1: en el ncleo para que sea especfico de msculo estriado.
-catenina en fibromatosis (negativo en cicatrices).
Por tumores son tiles:
Sarcoma epitelioide: EMA, vicentina, CD34 (50%),
actina (33%). La CK7 es negativa.
25

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 26

Sarcoma alveolar: positividad de actina y desmina en

el 50% casos. Protena AE3 +.
Osteosarcoma: osteocalcina.
Swing/PNET: CD99; focalmente CK, neurofilamentos.
Neuroblastomas: NSE y sinaptofisina positivos; CD99
negativo.
T. cel. redondas pequeas desmoplsico: positividad
para CK, vimentina, EMA y desmina. NES +/-.
Tumores de clulas pequeas azules redondas (J
Histoch 1999;22:289).
ALC Vim Des Act MyoD CK CD NF CrA Sy- TdT Inhib S
99
nap
100
Leuc/linf

+/-

Rabdo

Neurobl

Swing

-/+ +/- -/+

-/+

S sinovial

+/- +/-

DSRCT

Cond ms

-/+

Granulosa

-/+

+/- +/-

-/+

-/+ -/+

Melanoma

Carcinoma

-/+

-/+

-/+

Algoritmo resultados IHQ con MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2

en Carcinoma colorrectal (Rev Esp Patol 2006;39:201-8).
Modificado
No prdidas
expresin

Criterios
Bethesda
revisados

No
CCR
espordico

Prdida
MLH1
+/- PMS2

26

No

Sndrome
Lynch

CCR
Familiar
NO Lynch

No

S
Mutacin
BRAF

Inestabilidad
Microsatlites
BAT-26

No

Criterios
Bethesda
revisados

Prdida
PMS2

Anlisis
germinal
S

Prdida
MSH6

+/-

Prdida
MSH2

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 27

Hematopoyticos y afines:
- Antgeno leucocitario comn (ALC: CD45RB/CD45):
clulas originadas en la mdula sea, incluyendo
linfocitos y monocitos. Son negativos en 50% casos:
linfoma ALK y linfoblsticos. Suelen ser negativos:
cel Hodgkin y plasmticas.
- ALK: varias localizaciones celulares.
- CD1a: cel Langerhans, timocitos corticales (inmaduros) y, a veces, Rosai-Dorfman.
- CD3: policlonal. Si monoclonal usad psilon (7S1).
- CD5: timocitos, linfos T, Carcinomas tmicos, LLC y
linfoma del manto.
- CD10: LLA, centro germinal, linfoma folicular, linf
Burkitt.
- CD15 (LeuM1): granulocitos, algunos macrfagos y
cel Reed-Sternberg (Golgi y membrana).
- CD20: linfocitos B.
- CD23: LLC, cel dendrticas.
- CD30: marcador de activacin linfocitario, linfoma
ALK, Carcinoma embrionario y cel Reed-Sternberg
(Golgi y membrana).
- CD38: linfos activados y plasmticas.
- CD43: linfos T, granulocitos (LMA), monocitos,
megacariocitos, mastocitos y un 30% de linfomas B.
- CD45RO (UCHL1): linfos T, monocitos y granulocitos
(LMA).
- CD63: plasmticas (marca retculo endoplsmico).
- CD68 (KP-1): positividad citoplsmica en monocitos, SER, osteoclastos, precursores mieloides y
algunos linfos B.
- CD79a: linfocitos B.
- CD99: timocitos corticales y timomas, PNET/Ewing
y LLA.
- CD123: precursor dendrtico hematodrmico.
- CD138: plasmticas.
- Mum 1: plasmticas.
- Pax-5: diferenciacin lnea B.
- Bcl-2: linfomas de bajo grado y linfocitos T.
- Bcl-6: origen centro germinal.
- Ciclina D1: linfoma del manto.
27

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 28

- S100 (nuclear y citoplsmico): cel Langerhans, cel

interdigitantes,Rosai-Dorfman, leucemia mieloide,
melanomas y cel Schwann.
- TdT: leucemias linfoides agudas.
- Triptasa: mastocitos.
- MIB-1 (Ki-67): marcador de proliferacin.
- ZAP70- indicador de peor pronstico en LLC y, probablemente, en linf manto.
Controles externos recomendados (www.ihcworld.com).
Anticuerpos
Actina msculo-especifica
AE1/AE3
AFP
ALK
Beta amiloide
Beta Catenina
BerEP4
CD (varios), bcl-2/bcl-6
CD15
CD30
CD99
CD117

Tejidos

Colon, bazo
Colon, piel, pncreas
Hgado fetal
Linfoma anaplsico
Cerebro Alzheimer
Ductos,dctulos biliares
Mama, colon
Amgdala
Hodgkin
Hodgkin, pncreas
Timo
Piel, cerebro, pulmn,
bazo
CEA (monoclonal)
Colon
CK AE1-AE3
Colon, piel, pncreas
CK7
Mama, pulmn
CK20
Colon, pncreas
Caldesmon
Msculo liso
Calretinina
Mesotelio, timo teste,
cerebelo
COX2
Colon, rin
Cromogranina A
Pncreas, adrenal, ovario
Desmina
Colon, bazo
E-Cadherina
Mama
EGF R
Placenta
EMA
Amgdala, rin
Estrogeno R
Mama, tero
Fosfatasa alc placentaria Placenta
Hepar 1
Hgado normal
hCG
Placenta
HMB-45
Melanoma
Inmunoglobulinas
Amigdala
Inhibina
Ovario
Ki-67 (MIB1)
Piel, timo, amigdala
Lactgeno placentario
Placenta, amgdala
Melan A
Melanoma
Mieloperoxidasa
Mdula sea

28

Localizacin
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Variable nuclear/citopl
Citoplasma
Ncleos
Citoplasma
Membrana
Membrana-Golgi
Membrana/Golgi
Membrana

Membrana/citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo-citoplasma

Granular citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Membrana
Membrana
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma granular

Inmunohistoqumica cast

Anticuerpos
Pax-5
p53
p63
PDGF R
Progesterona R
Protena Glial fibrilar
PSA
Racemasa
S-100
Sinaptofisina
Tau
TdT
Tiroglobulina
TTF-1
Triptasa
Vimentina
WT-1

25/6/07

15:58

Tejidos
Hodgkin nodular linf
Ca seroso, Ca mama
Mama
Mama
Mama, tero
Cerebelo
Prstata
Prstata
Piel
Cerebro, adrenal
Alzheimer
Timo
Tiroides
Tiroides
Mdula sea
Ca de colon
Rin

Pgina 29

Localizacin
Ncleo
Nuclear
Nuclear
Membrana
Nuclear
citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo + citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo
Citoplasma
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma
Nuclear

29

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 30

Peticin de estudios inmunohistoqumicos

N de la muestra
Urgente
Dr/Dra.

Fecha peticin:

Fecha entrega:

Observaciones para el tcnico:

Valoracin tcnica (1 a 10)
TEAP:
Patlogo:
Problemas tcnicos observados:

Actina musc esp

ALK protena
Alfa1-antitrip
Alfa-fetoprot
Alfa sinuclena
Amiloide AA
Amiloide beta
Anti HH3
Bcl-1
Bcl-2
Bcl-6
Bcl-10
BerEP 4
Caldesmn
Calmodulina
CD1a
CD3
CD4
CD5
CD7
CD8
CD10
CD15
CD20
CD23
CD30
CD31
CD34
CD43
CD45RA (ALC)
CD45RO/UCHL
CD56
CD57

30

CD68
CD79a
CD99
CD117
CD123
CEA
c-erb-2
Cromogranina A
Citoq AE1-AE3
Citoq 5/6
Citoqueratina 7
Citoqueratina 19
Citoqueratina 20
Citoq 34 B E12
Desmina
DO 4 D2-40
EBER
e-cadherina
Enolasa NE
Estrgeno recept
Factor XIII a
Fosfatasa cida
Fosfat alcalina
Granzima B
HCG-beta
Hepatocito 1
HMB-45
Inhibina alfa
Inmunoglob A
Inmunoglob D
Inmunoglob G
Inmunoglob M
Kappa

Ki-67
Lactgeno plac
Lambda
LMP-1
Melan A
Mieloperoxidasa
Myo-D1
MUM-1
MLH1-MSH2-MSH6PMS2
Neurofilamentos
p16
p53
p63
Pax-5
Perforina
Progesterona
recep
Prot glial fibrilar
PSA
Racemasa alfa
S-100
Sinaptofisina
Surfactante pr A
Tau
TdT
TIA-1
Tiroglobulina
Triptasa
Trombomodulin
TTF-1
Vimentina
ZAP-70

Inmunohistoqumica cast

25/6/07

15:58

Pgina 31

ANEXO

31

32
CLON

EMA
E29
E CADHERINA
AM 390SH
DESMINA
D33
DENTRITICAS
CNA.42
D B A 44 congelado
DBA 44
CROMOGRANINA
LK2H10
COLAGENA IV
CIV 22
CK 7
OV-TL12-30
CITOKERATINA CAM 5.2
MNF116
CALRETININA
POLI
CALDESMON
H-CD
CALCITONINA congelado
CA-3-F5
CADENAS LAMBDA congelado
POLI
CADENAS K KAPPDA
POLI
C K 34-12
C erb B2
POLI
CEA
TF3H8-1
C D 99
CD8
4B11
C D 79 a
JCB117
CD7
CD7-272
C D 68
PG-M1
C D 68
KP1

ANTICUERPO
NOTAS
DAKO
MENARINI
DAKO
DAKO
DAKO
MENARINI
DAKO
DAKO
DAKO
ZIMED
DAKO
DAKO
DAKO
DKO
DAKO
DAKO
BIOGENEX
MENARINI
NOVOCASTRA
DAKO
NOVOCASTRA
DAKO
DAKO

LABORATORIO

M 613
AM 390
M 760
M 7157
M 880
MU 126-UC
M 785
M 7018
M0821
08-1211
M 3557
M 3509
A 193
A 192
M 0630
A 0485
MU-187-UC
MIC2
NCLCD84B11
M 7050
NDLCD7272
M 0876
M 814

REFERENCIA

Anticuerpos

1/2500
PREDILUIDA
1/100
1/100
1/50
1/100
1/50
1/500
1/300
1/10
1/50
1/250
1/30000
1/30000
1/600
1/1500
1/350
PREDILUIDO
1/20
1/200
1/50
1/500
1/500

DILUCIN

OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA

ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISON
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION

REC.ANTIGENOS. VISUALIZACION CONTROL

Inmunohistoqumica cast
25/6/07
15:58
Pgina 32

C D 57
CD5
C D 43
CD4
C D 38 C 1
C D 34
C D 31congelado
CD3
C D 23
C D 21 congelado
C D 20
C D 15
C D 138
C D 117
C D 10
C D 1 congelado
BCL6
BCL2
ANTIGENO EPITELIAL
AMIELOIDE
ACTINA
ACTH
ALK
ALC
AFP

NK1
4C7
MT1
IF6
VS38 c
Qbend/10
JC/70
POLI
1B 12
IF8
L 26
MMA
ML 15
CKIT
56C6
010
PG-B6p
124
VER EP4
MC 1
HHF 35
02 A31
ALK1
PD7/26

NOVOCASTRA
NOVOCASTRA
BIOGENEX
NOVOCASTRA
DAKO
NOVOCASTRA
DAKO
DAKO
NOVOCASTRA
DAKO
DAKO
BDICKINSO
DAKO
DAKO
NOVOCASTRA
M-D
DAKO
DAKO
DAKO
NOVOCASTRA
DAKO
DAKO
DAKO
DAKO
DAKO

NCL-NK1
CD5 4C7
MU 155 UC
NCLCD41F6
M 7077
NCL-END
M 823
M-7254
NCLCD23 1B1
M 784
M 755
347420
M 7228
A 4502
NCLCD10270
0781 B
M 7211
M 887
N 1531
NCL-AAC
M635
N 1531
M 7195
M 833
A 0008

1/50
1/5
1/150
1/20
1/25
1/500
1/50
1/200
1/40
1/20
1/3500
1/20
1/100
1/150
1/15
PREDILUIDO
1/10
1/350
1/25
1/400
1/200
1/15
1/25
1/1000
1/1500

OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
ENZIMA 10'40
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA Ph.8
OLLA
M.300 10' PEPS
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA
OLLA

ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISIOLN
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION
ENVISION

Inmunohistoqumica cast
25/6/07
15:58
Pgina 33

33