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Manual de Adecuadabilidad de Metodos Analiticos
Manual de Adecuadabilidad de Metodos Analiticos
Juan Francisco Snchez R., Mara Elena Tejeda R., Wolfhard Koch, Jos Luis Alfredo Mora G., Rubn
Marroqun S., Vicente Hernndez A., Valentn Islas P., Elizabeth Guadalupe Snchez G., Alfredo De Len V.
Validacin de mtodos analticos no cuantitativos
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 41, nm. 2, abril-junio, 2010, pp. 15-24,
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57914151003
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Revisin Bibliogrfica
Resumen
En las ciencias farmacuticas es bien conocida la metodologa para validar mtodos analticos cuantitativos, sin embargo no
es muy abundante la informacin sobre la metodologa a seguir para validar un mtodo analtico cualitativo o no cuantitativo.
En este artculo se describen los aspectos importantes sobre los mtodos de anlisis cualitativos, se definen los principales
parmetros de calidad y se describe una metodologa de trabajo, soportada matemticamente, para validar un mtodo analtico
no cuantitativo.
Abstract
In pharmaceutical sciences the methodology to validate quantitative analytical methods is well-known, however the information
to validate a qualitative analytical method is not abundant. This paper describes the methods of qualitative analyses; the main
parameters of quality and a methodology to validate an analytical method nonquantitative are described.
Palabras clave: validacin de mtodos analticos no
cuantitativos, Validacin, Metodologa estadstica para
validacin.
Correspondencia
M en C Juan Francisco Snchez Ruiz
Laboratorio de Qumica Computacional
FES Zaragoza UNAM
Av. Guelatao 66 Col. Ejrcito de Oriente
CP 09230 Mxico D.F.
Tel. 5757 4555
e-mail: jforbital@yahoo.com.mx
15
Introduccin
La mayora de los mtodos analticos no cuantitativos identifican
la presencia o ausencia de un determinado sustrato, el cual puede
ser un metabolito, una propiedad o una sustancia que es de
inters para el diagnstico qumico, mdico, clnico, psicolgico,
judicial, administrativo, etc. El sustrato puede (o no) ser extrado
cuantitativamente de una muestra, de una determinada matriz
(un tejido, un fluido, un medicamento, un instrumento de
evaluacin etc.)1
Los mtodos analticos no cuantitativos tienen como fundamento
una reaccin o interaccin conocida de cualquier tipo (qumica, fsica,
fisicoqumica, etc.) del reactivo o reactivos con el sustrato, generando
una respuesta detectable mediante algn sistema fsico, qumico,
fisicoqumico, ptico, sensorial, etc. (respuesta analtica)1,2.
Un reactivo es algn tipo de agente (sustancia, instrumento
de evaluacin etc), que genera en un determinado sustrato
una respuesta analtica conocida, detectable y medible no
necesariamente de manera cuantitativa3.
Es importante mencionar que el resultado de prueba est en funcin
no slo de la selectividad de la reaccin o interaccin del reactivo o
reactivos con el sustrato, sino que tambin depende de3,4:
La presencia o ausencia fsica del sustrato a determinar.
El nivel al que se interese identificarlo.
El lmite mnimo de deteccin.
Los valores mximos permitidos, que en muchos casos
corresponden a valores determinados por la legislacin vigente.
En la mayora de los mtodos analticos no cuantitativos la
respuesta analtica es dicotmica y como respuesta analtica se
tiene1,2:
Resultado Positivo. Ocurre cuando se considera que est presente
en la matriz de estudio una cantidad mnima detectable del sustrato
de inters y por ello ha ocurrido una respuesta analtica.
Resultado Negativo. Ocurre cuando se considera que no
est presente en la matriz de estudio el sustrato de inters o se
encuentra en una cantidad inferior a la mnima detectable y por
ello no ha ocurrido una respuesta analtica.
De manera general, la validacin de un mtodo analtico presenta
dos etapas bien definidas, las cuales son complementarias e
indisolubles:
a) La ejecucin analtica, la cual considera protocolos especficos
de realizacin, mismos que son indispensables para recopilar los
datos generados por el proceso de medicin y
16
Mtodos
Los mtodos analticos no cuantitativos son finalmente mtodos
dicotmicos de diagnstico y la respuesta analtica es dicotmica.
En este trabajo, la metodologa para probar Homogeneidad o
Selectividad del mtodo analtico es la descrita como Integracin
de Tablas de Contingencia. Bajo las Hiptesis de existencia de
Homogeneidad 5,6,7,8 o Selectividad del mtodo analtico, las
diferencias encontradas entre las frecuencias observadas y las
esperadas son debidas exclusivamente a la variacin muestral,
es decir son eventos ocasionados por el proceso de muestreo y
no a otra condicin que implique diferencia de comportamiento,
por ello se us como estadstica de prueba la Xi2:
Xi2=
(Oij Eij)
Eij
i=1 j=1
Entonces:
P(Ei)P(A Ei)
P(A)
Resultados y discusin
Para validar un mtodo analtico no cuantitativo es necesario
compararlo contra una caracterstica de referencia exacta. El
procedimiento consiste en aplicar la prueba de diagnstico en
el mismo nmero de muestras o testigos verdaderos positivos
que presenten la caracterstica a estudiar y en testigos verdaderos
negativos ausentes de la caracterstica. Una condicin bsica de
origen es que la caracterstica que detecte el mtodo analtico sea
evaluada de manera positiva o negativa de manera inequvoca
med iante otra prueba de referencia, por evidencias clnicas,
fsicas o qumicas1,2,3,4.
Para validar un mtodo analtico no cuantitativo se deben evaluar
los siguientes parmetros:
I. Adecuabilidad
II. Homogeneidad o Selectividad
III. Sensibilidad
IV. Especificidad
V. Valor Predictivo
VI. Confiabilidad Diagnstica
VII. Lmite de Deteccin
I. Adecuabilidad
El correcto funcionamiento de cualquier mtodo analtico
depender en gran medida de que dicho mtodo se comporte
correctamente. Por lo tanto la Adecuabilidad del Mtodo
Analtico9 debe ser el primer paso a seguir en la validacin de
un mtodo analtico no cuantitativo.
La Adecuabilidad del Mtodo Analtico consiste en corroborar
que los componentes y reactivos involucrados en la obtencin
de datos funcionen apropiadamente, es decir, los reactivos o
partes del equipo que puedan afectar la determinacin, cubran
17
B1
P11
B2
P12
P2c
.
.
.
.
.
A2
P21
P22
P23
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Pr3
A3
Ar
P31
Pr1
P32
Pr2
P33
P1c
P3c
Prc
j=1
Pij = 1
i=1
(Oi ) (O j)
O
18
Oi =
P13
Bc
B3
O=
j=1
j=1
i=1
Oij
Oij =
Oj=
Oij
i=1
Oi = j=1
Oj
i=1
i=1 j=1
(Oij Eij)2
Eij
Positivo
Negativo
Presente
Ausente
E=A+C
F=B+D
G=A+B
H=C+D
I = A+B+C+D
ExG
I
Besperado=
FxG
I
Cesperado=
ExH
I
Desperado=
FxH
I
(A*)2
A esperado
(B*)2
Besperado
(C*)2
Cesperado
(D*)2
Desperado
f) Determinar la 2 calculada:
2 calculada = + + +
g) Buscar el valor de 2 de Tablas al 95% de confianza con 1
grado de libertad (r=1, c=1)
2
(r 1) (c 1)
=
0.95
h) Regla de decisin
Si Xi2 calculada > Xi2 de tablas se concluye que bajo las condiciones
de trabajo realizadas, el mtodo analtico tiene una Selectividad
tal que su respuesta analtica permite diferenciar de manera
estadsticamente significativa los testigos positivos verdaderos
de los testigos negativos verdaderos.
De lo contrario
Tabla 2
Resultado de
la Prueba
= A*
= B*
= C*
= D*
19
Resultado
de la Prueba
Positivo
Negativo
VPP=
Valor de la Caracterstica
Presente
Ausente
A+C
B+D
A+B
C+D
A+B+C+D
A
A+C
D
D+B
20
A
A+B
D
C+D
Tabla 4
Resultado
de la Prueba
T+ Positivo
T-
Negativo
Valor de la Caracterstica
Presente G +
Ausente G-
A+B
A+C
B+D
A+B+C+D
C+D
A = Verdaderos Positivos
B = Falsos Positivos
C = Falsos Negativos
D = Verdaderos Negativos
+
P(T |G )=
+
P(G )=
A
A+C
Por lo tanto:
A+0
A+0+0+D
A+0
A+0+0+D
A
A+0
A
A+D
A
A
A
A+D
=
(0)(0)
0+D
A+0+0+D
0
0+D
A
A
A
A+D
A
A
A+D
lim P(G |T )1
B0
C0
B
B+D
A+C
A
A+C
A
A+0
A
+
P(G |T )=
P(G |T )= 1
B+D
A+B+C+D
A+B+C+D
-
P(G )=
P(T |G )P(G )
+
+
P(T |G )P(G ) + P(T |G )P(G )
P(T |G )P(G )
+
+
+
+
P(T |G )P(G ) + P(T |G )P(G )
A+C
P(T |G )=
P(G |T )=
P(G |T )=
P(G |T )=
P(G |T )=
A+C
A+B+C+D
A+C
A+B+C+D
B
B+D
B+D
A+B+C+D
21
+
-
Presente G +
Ausente G-
Positivo
Negativo
C+D=H
B+D=F
A+B+C+D = I
A+C
A+B+C+D
A
A+C
P(G |T )=
A
A+C
A+C
A+B+C+D
B
B+D
B+D
A+B+C+D
A
E
P(G |T )=
A
E
E
I
E
I
B
F
A
I
A
I
F
I
A
I
B
I
A+B
I
A+B
22
A+B=G
A+C=E
Valor de la Caracterstica
Resultado
de la Prueba
P(G |T )=
P(T |G )P(G )
+
P(T |G )P(G ) + P(T |G )P(G )
-
P(G |T )=
P(T |G )=
P(T |G )P(G )
+
+
P(T |G )P(G ) + P(T |G )P(G )
C
A+C
=0
(A)
(C)
(F)
(B)
(D)
A+C
A
P(G )=
=
A+B+C+D A+D
+
P(T |G )=
-
P(G )=
D
D
D
=
=
=1
B+D 0+D D
B+D
A+B+C+D
A+D
P(G |T )=
A+D
A
A+D
0+1
0
D
A+D
0
D
A+D
Valor de la Caracterstica
P(G |T )= 0
Por lo tanto:
Resultado
de la Prueba
lim P(G |T )0
B0
C0
Presente G +
Ausente G-
T+ Positivo
T-
Negativo
A+B=G
A+C=E
C+D=H
B+D=F
A+B+C+D = I
A+C
A+B+C+D
C
A+C
P(G |T )=
C
A+C
A+C
A+B+C+D
D
B+D
B+D
A+B+C+D
C
E
P(G |T )=
C
E
E
I
E
I
D
F
C
I
C
I
F
I
C
I
D
I
C+D
I
C+D
(C.D.F.N.) o P(G |T )=
C
H
23
Consideraciones finales
Un mtodo analtico, f inalmente es una estrategia de
identificacin o determinacin, til no slo en la industria
farmacutica sino tambin en la investigacin cientfica y clnica o
en el laboratorio de anlisis clnicos, y puede equipararse con una
tcnica cientfica de diagnstico para estudios epidemiolgicos,
sociales y judiciales.
Los parmetros mnimos propuestos para validar un mtodo
analtico no cuantitativo son los siguientes: Adecuabilidad,
Homogeneidad o Selectividad, Sensibilidad, Especificidad,
Valor Predictivo, Confiabilidad Diagnstica y Lmite de
Deteccin. Para todos los parmetros propuestos en este trabajo,
se presenta una metodologa estadstica precisa y una regla de
decisin con una confianza estadstica definida, que le dan
solidez y soporte a los resultados obtenidos del procedimiento
analtico de medicin.
Mediante el proceso de validacin se determina si el mtodo
analtico cumple con el propsito para el cual fue desarrollado,
si es lo suficientemente confiable y si los resultados previstos se
obtienen dentro de las condiciones prefijadas.
24
Conclusiones
Los mtodos analticos no cuantitativos son mtodos dicotmicos
de diagnstico y para validarlos es necesario comparar el
resultado contra una caracterstica de referencia exacta.
Un mtodo analtico, f inalmente es una estrategia de
identificacin o determinacin, til no slo en la industria
farmacutica sino tambin en la investigacin cientfica y clnica o
en el laboratorio de anlisis clnicos, y puede equipararse con una
tcnica cientfica de diagnstico para estudios epidemiolgicos,
sociales y judiciales.
Los parmetros mnimos para validar un mtodo analtico no
cuantitativo son los siguientes: Adecuabilidad, Homogeneidad
o Selectividad, Sensibilidad, Especificidad, Valor Predictivo,
Confiabilidad Diagnstica y Lmite de Deteccin.
Para todos estos parmetros existe una metodologa estadstica
definida y una regla de decisin con una confianza estadstica,
que le dan solidez y soporte a los resultados obtenidos del
procedimiento analtico de medicin.
Referencias
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analticos cualitativos. Tcnicas de Laboratorio, 81: 328-335.
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