Ensayo de Biuret:

Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto

con tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O64H2O). El reactivo, de color azul,
cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina
con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la
reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Consiste en tratar una protena o pptido con Cu ++ en medio alcalino,

producindose una coloracin violcea por formacin de un complejo de
coordinacin entre el Cu++ y los pares electrnicos libres de los nitrgenos de
los grupos amino de la unin peptdica. Son necesarias por lo menos dos
uniones peptdicas para que tenga lugar la reaccin.

La reaccin del biuret no es una reaccin especfica para protenas. Eso hace
que un resultado positivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado
para descartar los resultados falsos positivos

Un resultado negativo de la reaccin del biuret sobre una muestra problema no

necesariamente indica la ausencia de protenas, ya que puede ocurrir a) que no
existan protenas o pptidos en la muestra (ni tampoco otras sustancias no
proteicas biuret positivas), b) que existan una o ms
sustancias interferentes en la muestra que impidan que se produzca la
reaccin (lo que dara lugar a un resultado falso negativo). Esto puede
descartarse (o evitarse) si conozco de antemano la composicin aproximada de
la muestra. Por ejemplo, si deseo determinar el contenido de pptidos
generados por una reaccin de hidrlisis cida, los H + del medio interferirn
con la reaccin del biuret, ya que sta necesita de un medio alcalino para la
formacin del complejo con Cu++. En este caso la interferencia puede
eliminarse alcalinizando el medio antes de realizar el ensayo (en caso contrario
obtendra un falso negativo como resultado) y c) Que existan pptidos, pero a
una concentracin inferior al lmite de sensibilidad del mtodo. Todo mtodo
permite determinar la presencia de un compuesto slo si la concentracin del
mismo es superior a cierto valor. Existen mtodos mucho mas sensibles que el
biuret (ver mas abajo).

Figura 1: Reaccin de Biuret.

Ensayo de Xantroproteco:

Esta reaccin se usa para detectar la presencia de protenas solubles en una

solucin. Se realiza mediante el uso de HNO3 concentrado que, en presencia
de protenas o aminocidos con restos aromticos torna la solucin de un color
amarillo oscuro.

Los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados
produciendo un compuesto Amarillo. La produccin de un producto coloreado
Amarillo al aadir cido ntrico es una prueba para la presencia de tirosina o
triptfano en una protena. La adicin de base fuerte hace que el color se torne
ms oscuro hacia anaranjado. Las manchas amarillas en la piel causadas por
cido ntrico son el resultado de la reaccin xantoproteca.
La reaccion xantoproteica se puede considerar como una sustitucion
electrofilica aromatica de los residuos de tirosina de las proteinas por el acido
nitrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH acido.