5975C SQ

7890 GC

5975T LTM SQ

5975E SQ
7820 GC

Seleccin de detectores
en cromatografa de
gases masas
220 IT

240 IT

7890 GC

7890 GC

7000 TQ

7200 Q-TOF

7890 GC

7890 GC

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27 septiembre 2011

CROMATOGRAFA DE GASES MASAS

ACOPLAMIENTO GC/MS

La espectrometra de masas es una tcnica analtica muy

potente utilizada para:

 Identificar compuestos desconocidos.
 Cuantificar compuestos conocidos.
 Elucidar la estructura qumica de las molculas.

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27 septiembre 2011

Tcnicas Analticas Instrumentales

Cromatografa
GC Compuestos no polares voltiles y semi-voltiles
LC Compuestos polares/moderadamente polares o compuestos termolbiles

Detectores
GC (detectores selectivos, FPD, NPD, ECD) alta sensibilidad, especifidad pobre
MS
SQ: alta fiabilidad en confirmacin espectral, MDL limitado
Trampa: Mxima sensibilidad en SCAN, flexibilidad en los modos de Ionizacin.
QQQ: bajos lmites de deteccin para compuestos target en matrices complejas
(MRM)
TOF/Q-TOF: Espectro completo y exactitud de masa para screening

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27 septiembre 2011

Por qu este Mix de MS?

Por qu un cuadrupolo?
Por qu full scan vs SIM?
Por qu una trampa de
iones?
Por qu un tiempo de vuelo?
Por qu MS/MS?

Ninguna tecnologa es lo
mejor en todo perfecto
Rendimiento vs costes
Cada tecnologa tiene sus
beneficios
Segn cambian los
requerimientos del mercado,
la tecnologa va cambiando

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27 septiembre 2011

Algunas guas bsicas en la seleccin de un

analizador de MS
La eleccin correcta de un analizador depende de
si el objetivo es BUSCAR DESCONOCIDOS o si
es CONFIRMAR & MEDIR CONOCIDOS.
La eleccin correcta del analizador depende
tambin de la COMPLEJIDAD de la MATRIZ.

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27 septiembre 2011

Cual es la solucin de MS para

Slo anlisis de target?

Scan o SIM o MS/MS

Anlisis de desconocidos?

Scan MS Quad, Trampa o QTOF

Cmo es la matriz?

Deconvolucin o MS/MS

Cual es la preparacin de
muestra?

Backflush o MS/MS

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Flujo de trabajo: Screen, Confirmacin y Cuantificacin

Muestra
representativa

GC/MS SIM/Scan
para conocidos y desconocidoa

Informe final de
Deconvolucin

GC Trampa Ms/Ms para targets

GC/QQQ MRM para targets

Extraccin

GCQTOF o TOF Full Spectrum

para desconocidos

Bsqueda en libreras de
masa exacta

Clean-up
Generacin de
Frmula molecular

Otra inyeccin
de MS/MS
(GC QTOF)

C16 H19 N3 P Cl
C15 H25 O P S Cl
C18 H21 O P Cl

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FUENTES DE
IONIZACIN EN
CROMATOGRAFA DE
GASES MASAS

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Proceso de Ionizacin por

Impacto Electrnico (EI)
Ionizacin:
+.
ABC + 2e

ABC + e Molcula Neutra

La curva depende
del producto (ABC)

#ABC . +

In Molecular Excitado
0

70

10

100
eV
Energa de los electrones

Fragmentacin:
ABC +.

.
AB + C+
A+ + BC .
AB +. + C
AC + + B
etc.

Espectro de Masas

(reordenamiento)

Abundancia
Seal

+
AB

+
C
+
A

(prdida de un neutro)

+
AC

+.
ABC

m/z
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Componentes Fuente de Iones

Foco de
electrones

Lentes "Draw-Out"
Lentes de
entrada

Filamento

Lnea de
transferencia de
columna

-->
Cuadruplo

Lentes de
focalizacin de
iones

"Repeler"
" Magnet"
(imn
colimador)

"Target"

Filamento: Proporciona electrones para la ionizacin

Lentes "Draw-Out":

Foco de electrones:

"Empuja" los electrones hacia

fuente de iones
Target: "Atrae" los electrones ionizantes hacia la fuente
Magnet: Controla la forma del haz de electrones
ionizantes
Repeller: "Empuja" los iones formados fuera de la fuente

"Arrastra" a los iones fuera de la

fuente
Actua como apertura de entrada
al juego de lentes de focalizacin

Lentes de focalizacin Focaliza los iones hacia las lentes

de iones:
de entrada
Lentes de entrada

Focaliza los iones hacia el campo

del cuadrupolo
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Espectro de Masas de impacto

electrnico
Dodecano : C12H26 (M=170)
Abundance

Average spectrum of dodecane from EVALDEMO.D

57
<--[C H ] +
4 9

100
90
80
70

71
43

60

<--[C H ]
5 11

50
85

40

<--[C H ] +
6 13

30
20
10
m/z->
20

+
M.

55

29

98
40

60

80

100

113

128

120

141
140

170
159
160

180

In Molecular (M +): prdida de un electrn

Pico Base: in ms abundante del espectro
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Qu es un espectro EI clsico?
M

Metil estearato (C19H 38 O2 ) M = 298

In M+1 = 299
Contribucin isotpica del carbono:
C19 x 1.1% de C13
= 20.9%
Contribucin isotpica del deuterio:
H38 x 0.015% de D
= 0.6%
Contribucin isotpica total

M +1 = 21.5%

= 21.5%

Los espectros clsicos de EI deben

proporcionar picos isotpicos con relaciones
respecto al ion molecular muy cercanas a los
valores tericos.

298 299

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Ionizacin Qumica Positiva (PCI)

Forma iones a partir del gas reactivo por bombardeo con electrones.
 Los iones del gas reactivo sufren reacciones con molculas de la muestra producindose
iones de la misma.
 La ionizacin qumica (CI) es mucho ms suave que la ionizacin por impacto
electrnico (EI), por lo que se produce menos fragmentacin.
 El gas reactivo ms comn es el metano, que produce iones con prcticamente cualquier
molcula de muestra.
 Otros gases reactivos (isobutano, amoniaco) son ms selectivos y producen incluso menos
fragmentacin.
 Presin de la fuente ~ 0.2 Torr.
Es el mtodo ms frecuentemente utilizado para determinar pesos moleculares de
compuestos.
 Con metano se forma: M+1, M+29; M+41. Muy til para asegurar M.
 Con amonaco se suele formar el M+1 y el M+18. Es muy selectivo (aminas).
 Con isobutano slo suele obtenerse el M+1.


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Laoratorio Aplicaciones Agilent-BCN

Qu es un Espectro CI clsico?
Ionizacin del fenobarbital [M/z-232] empleando CH4 como gas reactante

Formacin Iones Reactivos

Primaria
CH 4 +e CH4+ +2e
CH ++e CH+ +e- +H+
4
CH4+ +CH4
CH+3 +CH4
C H+ +CH4
2 5

CH 5+ +CH3
C 2 H 5+ [29] +H 2
C H+ [41] + 2H2
3 5
Reacciones Analito-Gas Reactivo

Secundaria

Las molculas neutras de muestras reaccionan con iones

secundarios del gas reactante para formar aductos

Transferencia de Protones
+

M + CH5
Adicin Alqulica

M + C2 H5+
M + C3H5+

[M+1] +

[M+29]+
[M+41]+

233 261 273

CH4 + [M-H]
+

[M-C2 H5 ]
[M-C3 H5 ] +
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Ionizacin Qumica Negativa (NCI)

Ionizacin qumica negativa por captura electrnica.
 Primero se forma una nube de electrones con poco exceso de energa
(electrones trmicos).
 Los electrones trmicos son capturados por molculas de muestra.
 Es necesario un gas amortiguador (que retira energa de los
electrones/iones). El metano es el ms utilizado.
 Presin de la fuente ~ 0.4 Torr (mayor que en PCI).
 Slamente ciertos tipos de molculas son capaces de capturar electrones
trmicos (selectividad).
 Extremadamente eficiente para algunas molculas (sensibilidad).
 Los lmites de deteccin son generalmente muy bajos debido a la falta de
respuesta de los contaminantes o de la matriz.
 Usado frecuentemente para anlisis selectivos y de alta sensibilidad de
compuestos electroflicos.
 Suele proporcionar el M(-).


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ESQUEMA GENERAL
DE LOS DETECTORES
DE CUADRUPOLO
SIMPLE

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Analizador-Filtro de Masas de
cuadrupolo
ELECTRODOS POSITIVOS
FRECUENCIA
RF
+

(+)
FILTR0
MASAS
BAJAS

+DC
AMPLITUD

( - ) FILTRO
MASAS
ALTAS

AMPLITUD RF

Los voltajes aplicados en ambos pares de

electrodos son iguales en magnitud pero de
signo opuesto. La magnitud del potencial DC
controla la masa seleccionada
ELECTRODOS NEGATIVOS
+

-DC
AMPLITUD

AMPLITUD RF

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Barrido de Masas (modo "SCAN")

con Cuadrupolo
Para barrer un rango de masas, los potenciales de DC y RF aplicados al cuadrupolo han de ser
variados, para variar las masas que son filtradas. La relacin entre los potenciales RF y DC es la
llamada LINEA DE BARRIDO.

TRABAJO EN MODO SCAN

BARRIDO- ELECTRODOS POSITIVOS

+
LINEA DE
BARRIDO
DC
AMPLITUD

RF
AMPLITUD

0
Amplitud RF/ DF = cte.

La magnitud del potencial DC controla la masa seleccionada,

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MS : Cuadrupolo simple

VENTAJAS:
MS
- Robustez, fiabilidad espectral mximas
Precio
- Solucin ms econmica de MS

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MS : Cuadrupolo simple

INCONVENIENTES:
Escasa capacidad para trabajar con muestras con alto efecto matriz

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ESQUEMA GENERAL
DE LOS DETECTORES
TRAMPA DE IONES

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 Por qu MS/MS ?
Hoy da, MS/MS es una tcnica de rutina y representa una poderosa herramienta
analtica para la determinacin de ultratrazas en matrices incluso complejas.
Gran selectividad: eliminacin del fondo de la matriz.
Inigualable sensibilidad.
Buena calidad espectral: confirmacin ms fiable
Informacin estructural adicional.
Preparacin de muestra ms sencilla.

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Qu significa MS/MS?
1: Aislamiento

2: Fragmentacin

3: Aislamiento

210

210
222
268

165
170

210

250

158

191 210

280
290

Espectro de MS
(MS)

190 210

Ion Aislado
(Precursor)

150

170

190

210

Espectro de MS del
Precursor (MS/MS)

158

191

160

190

Iones Aislados
(Productos)

210 ----> 158

TRANSICIONES (MRM)

210 ----> 191

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Qu significa MSn?
385

352

241

187

MS MS2 MS3 MS4

MS3 (385/352)

MS2 (385)
MS4 (385/352/241)

MS1

MS4 (385/352/241)
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Matrices complejas:
El fondo confunde en la identificacin
Anlisis de residuos de plaguicidas
Ethion
La matriz satura el espectro full scan,
e impide la identificacin del Ethion.

EI-MS
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MS/MS: Eliminacin del fondo

Resultados definitivos
Anlisis de residuos de plaguicidas
Ethion

Excelente comparacin espectral  Identificacin en bibliotecas

pico simtrico

EI-MS/MS

Lnea base plana

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Es ms sensible MS/MS que SIM?

Con patrones o matrices limpias

Con matrices complejas

NO
SI

MS/MS proporciona ms selectividad y mayor

poder de confirmacin

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MS/MS : Trampa de Iones

En una Trampa el
proceso de
3
transmisin de
Iones de Fuente a
Detector es un 2-Aislamiento
In
proceso
1-Acumulacin
discontinuo
Precursor

3-Excitacin

La energa de
Fragmentacin se aplica
selectivamente. Slo la
recibe el In Precursor o
rango de iones que interese
fragmentar

4-Fragmentacin
He

(C.I.D.: Disociacin Inducida por

Colisin (con helio) del in precursor)

He

5
6

6-Deteccin

Espectro

MSn

MS/MSMS/

5-Acumulacin
de Fragmentos

Espectro
de Masasn
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Ionizacin Qumica en trampas

Sensible

Flexible

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Ionizacin Qumica en trampas

EI/MS/MS

EI/MS

CI/MS/MS
CI/MS

EI/MS
EI/SIS

Diferentes modos de ionizacin (EI y CI) y opciones de Scan (Full scan,

MS/MS y SIS) en el mismo run.
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Ionizacin interna y externa

Internal Ionization
Off-Axis Conversion
Dynode - Detector

External Ionization
Off-Axis Conversion
Dynode - Detector

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ESQUEMA GENERAL
DE LOS DETECTORES
DE TRIPLE
CUADRUPOLO

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Ventajas del trabajo en MS/MS

Mejor selectividad que en SIM
EI-SIM
La selectividad es proporcional
a la resolucin espectral. Por
tanto no hay selectividad frente
a iones de igual m/z

interference

analyte

EI-MS/MS

La selectividad para el precursor es

igual que en SIM. Hay una alta
probablidad de que al menos un ion
producto sea diferencial entre el
compuesto de inters y la interferencia
Producto 2
Producto 1 interferencia
Producto 3

resolucin unidad

Ion
Precursor

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MS/MS Elimina el Ruido Qumico

EI: el espectro del analito puede incluir
iones de la matriz, sangrado de columna,
gases, etc.
Los iones de trazas de analito
pueden quedar enmascarados por
los iones de la matriz
Product 2
Product 1
Product 3

Q1 SIM

Aislar el
precursor antes
del CID

El Ruido Qumico
de todos estos
iones queda
eliminado

CID +
Q2 SIM

Iones Producto de
menor m/z medidos
frente a cero de ruido
qumico; linea de base
sin ruido
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ESQUEMA GCQQQ
Gas de Colisin

Fuente Inica

Cuadrupolo

Hexapolo Celda
de Colisin

Cuadrupolo

Detector

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7000 Series Cuadrupolo MS/MS

Optimizado para cromatografa de gases

Q1

Celda de Colisin

Q3

Q1 filtra todas las

masas permitiendo
nicamente el paso
del ion precursor m/z
210
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7000 Series Cuadrupolo MS/MS

Optimizado para cromatografa de gases

Q1

Celda de Colisin

Q3

En la celda de colisin
se produce la
disociacin del in
seleccionado en iones
producto
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7000 Series Cuadrupolo MS/MS

Optimizado para cromatografa de gases

Q1

Celda de Colisin

Q3

En Q3 se monitorizan al menos
dos de los iones caractersticos
generados correspondientes al
compuesto de inters. Uno con
finalidad cuantitativa y el otro con
finalidad cualitativa
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MS/MS Proceso de disociacin

Inducida por Colisin (CID)
Precursor
(Parent)
Ion

Product
(Daughter)
Ions

Collision
Gas
Kinetic
Energy

M2+

N
N

M1+

To Quad 2

From Quad 1

M3+
EI Ion

N2 Molecule

Ion Fragments

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Desarrollo en la celda de colisin

Hexaclorobenceno en matriz compleja
Eliminacin de particulas
metaestables de Helio de alta
energa en la celda de colisin

S/N 1294:1 Gas Helio ON

1 ml/min N2 Gas de colisin

Q1
He* + Entrada
de Iones

Salida
de
iones

Celda de
Colisin

S/N 341:1 Gas Helio OFF

He gas de apoyo Quench Gas
He* + He
He* + N2
Comparacin de
niveles de ruido
generados

N2+. + A

2 He + Q

N2+. + He + e-

A+. + N2

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MS/MS : Triple Cuadrupolo

VENTAJAS:
MS/MS en el ESPACIO (Proceso continuo)
- capacidad de realizar MS/MS de muchos compuestos simultneos
(MULTIRESIDUO)
MAYOR SELECTIVIDAD (Celda de colisin)
- El proceso de rotura genera MAS FRAGMENTOS para elegir
ALTA SENSIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
- RSDs menores
- Lmites de Deteccin mas bajos
BAJO MANTENIMIENTO
- Fuente de Ionizacin externa

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MS/MS : Triple Cuadrupolo

INCONVENIENTES:
Solo MS/MS no MSN
- Solo pueden obtenerse dos etapas de MS
No adecuados para la elucidacin estructural
Precio
- Ms Caros que las Trampas de Iones

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ESQUEMA GENERAL
DE LOS DETECTORES
DE TIEMPO DE VUELO
(Tof y Qtof)

ERROR: stackunderflow
OFFENDING COMMAND: ~
STACK: