Facultad de Ciencias Exactas

Fsicas y Naturales

Lic. PEDRO ELAS PATIO MARTNEZ

Lic. EDGAR ENRIQUE RAMREZ PARRA

Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales

Universidad de Santander
Telfono (57) 6516500 Ext 253 Fax (57) 6516492

BUCARAMANGA
2006

Justificacin
Durante el proceso de formacin del estudiante de la UDES, los
conceptos tericos requieren ser corroborados mediante la
experimentacin los cuales muchos de ellos se privilegian al interior
de las prcticas de laboratorio. Para dichas prcticas el alumno debe
utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos qumicos
los cuales son preparados por laboratoristas o docentes.
La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos qumicos
requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla
de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parmetros para
cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de
prepararlos y cuidados bsicos.
El presente manual permitir a los laboratoristas o docentes tener
una gua para la preparacin de las diferentes soluciones utilizadas en
las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales

Pedro Patio

CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE

BIOSEGURIDAD PERSONAL
La preparacin de las soluciones es un
Proceso que requiere todos los cuidados
bsicos posibles y el cumplimiento de
normas de Bioseguridad personal, ya que en
dicha preparacin se esta expuesto a qumicos que
son altamente txicos y nocivos para la salud humana
CUIDADOS BASICOS

Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente

nivelada y calibrada.
Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar
completamente limpia.
La vidriera donde se preparan los soluciones debe estar
completamente limpia y en algunos casos estril.
Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos
oscuros para evitar procesos de oxidacin por accin de la luz.
Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre,
concentracin, fecha de preparacin, fecha de vencimiento y
cdigo de riesgos.
Siempre se deben mezclar lentamente los cidos fuertes sobre el
agua.
La preparaciones de cidos fuertes o reactivos voltiles debe
hacerse en las campanas extractoras de gases.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL

Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la

preparacin que se realice
Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que
se prepare una solucin.
No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud
como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.

En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de

la zona de preparacin de reactivos o fuera de esta y consultar un
mdico.

SOLUCIONES
AGUA DE BROMO
Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de
bromo en tetracloruro de carbono.
Cuidados:

solucin altamente txica para el organismo

Uso: Para determinacin de compuestos orgnicos

ACETO-ORCEINA
Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de cido Actico Glacial
y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullicin por 2 minutos,
dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses
Cuidados: Txicos

1y corrosivos

Uso: Para tincin de material nuclear (cromosomas)

ACETO CARMIN
Pesar 0,5 gr de carmn, adicionarle 45 ml de cido actico glacial
y completar con 55 ml de agua destilada
Uso: Para tincin de material nuclear (cromosomas)

Cuidados: Txicos

y corrosivos

ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N

Medir 20.75 ml de HCl 37%, aforar a 100 ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos
y corrosivo
Uso: En pruebas de divisin celular (mitosis)
ALCOHOL- CETONA
Medir 70 ml de Alcohol Etlico absoluto y completar a 100 ml de
solucin con Acetona pura
Cuidados: Comburente
Uso: Decolorante para la coloracin de Gram

ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N

Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y
completar a 100 ml con agua destilada
Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Para titulacin cidobase y pruebas cualitativas de pH.

ACIDO SULFURICO 1 M
Medir 49 ml de cido Sulfrico
destilada

Cuidados: Txicos

y aforar a 1000 ml con agua

corrosivos

Uso: Para titulacin cidobase

ACIDO ACETICO 1 N
Medir 60.05 ml de cido actico 100% y aforar a 1000 ml con agua
destilada.

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Pruebas cualitativas de pH.

AZUL DE METILENO 1%
Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua
destilada hasta obtener una solucin uniforme

Cuidados: Txicos
Uso : Para tincin de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos
vegetales, pruebas de difusin celular

ALCOHOL ACIDO 3%
Medir 97 ml de alcohol etlico absoluto, adicionarle con mucho
cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de cido Clorhdrico al
37%

Cuidados: Comburente y corrosivos

Uso: Para coloracin de Microbiolgica
ACIDO OXALICO 1 N
Pesar 6,3 gr de cido oxlico y aforar a 100 ml con H2O destilada
Uso: Para titulacin de cido-base
ACIDO NITRICO 3M
Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de cido ntrico al
65% luego completar a 100 ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos y corrosivos

AZUL DE BROMOTIMOL
Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol
etlico al 20 %
Uso: Indicador para titulacin cido-base

BARFOED
Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego
adicionarle 1.8 ml de cido actico glacial

Cuidados: Txicos y corrosivos

Uso: Diferenciacin los Monosacridos reductores de los Disacridos
reductores
BIAL
Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y
aadir 20 gotas de Fe Cl3 1%

Cuidados: Txico y corrosivo

Uso: Para identificar pentosas
BIURET
Pesar 3 gr. de CuSO4 .5H2O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y
potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Aadir 5 gr. de KI y
completar a 1000 ml con NaOH .
(NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua)
Uso: Para determinacin de protenas(Enlace peptdico)

Cuidados: Txico y corrosivo

BENEDICT
Solucin A:
Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na2CO3
completar a 800 ml de H2O destilada. Filtrar y completar hasta 850
ml de H2O.
Solucin B:
Pesar 17.3 gr de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada
Disolver suavemente la solucin B en la A agitando continuamente.
Uso: Para determinacin de carbohidratos reductores

Cuidados: Txico y corrosivo

BUFFER DE FOSFATOS
Solucin I:
Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada
Solucin II:
Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada
Mezclar 212.5 ml de solucin I + 37.5 de solucin II y aforar a 500
ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Extraccin de DNA

BUFFER LISIS II
Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl
y aforar a 1000 ml con agua destilada

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Extraccin de DNA

BUFFER LISIS I
Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100,
adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M
aforar a 1000ml con H2O destilada
destilada.
(Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr
100 ml s/n
Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml
Mgcl2 1M).

Cuidados: Txicos

Uso: Extraccin de DNA

corrosivos

BFER DE EXTRACCIN
Mezclar las siguientes sustancias:
Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, BMercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%.
Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad
que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Extraccin de DNA

BFFER DE DILUCIN (TE)
Mezclar las siguientes sustancias:
Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm
Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad
que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos
corrosivos
Uso: Extraccin de DNA
BFFER TBE 5X
Mezclar las siguientes sustancias:
Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5
gr de cido Brico Completar con agua destilada en baln aforado a
la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos
corrosivos
Uso: Extraccin de DNA

BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA

Solucin A :
Fosfato cido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M
Solucin B :
cido ctrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M
BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B).
BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B)
BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B).
CLORURO DE SODIO 0.1 M
Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada
Uso: Para Fenmenos de membranas

DAMASHECK
Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15
gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada.
Adicionarle 3 gotas de formol 37 %
Uso: Para recuento de reticulocitos
|
DRABKIN
Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de
bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio
(K3Fe(CN)6)
Completar a 1000 ml con H2O destilada.
Uso: Para Recuento en Hematolgico

Cuidados: Txicos

corrosivos

2,4 DINITROFENILHIDRIZINA
Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4
concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol
absoluto, decantar y utilizar el filtrado.
Uso: Indicador

Cuidados: Txicos

DISOLUCION DE FERROCIANURO
Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr.
carbonato de sodio anhdrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada.
Guardar en frasco oscuro (duracin 2 meses) .
Uso: Indicador

Cuidados: Txicos

1
ETANOL 0.6 M

Medir 34.9 ml de alcohol etlico absoluto y completar a un 1 litro de

solucin con H2O destilada
Uso: Para Fenmenos de membrana.
ERLICH (PRUEBA)
cido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solucin de NaNO3 0.5% y
Na2CO3
FOUCHER
25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro frrico
al 10 %

FEHLING

Pesar 34.6 gr. de CuSO4 .5 H2O (vitriolo azul)

de H2O destilada

y disolverlo en 500 ml

Cuidados: Txicos
Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para
determinacin de azucares reductores
FEHLING

Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le aaden

62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O

Cuidados: Txicos

y corrosivo

Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinacin

de azucares reductores
FENOLFTALEINA
Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico
al 96 %
Uso: Indicador cido-Bsico
Cuidados: Txicos

1
GLUCOSA 0.1 M

Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada

Uso: Para Fenmenos de membrana.
GLICEROL 0.6 M
Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada
Uso: Para Fenmenos de membrana.

HAYEN
2.5 gr. de sulfato de sodio
0.5 gr. de cloruro de sodio
0.25 gr. cloruro de mercurio
completar a 1000 ml de H2O
HIDROXIDO DE SODIO 1M
Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada
Nota: La disolucin del NaOH en el agua se debe realizar en la
cmara extractora de gases
Uso: Diferentes usos, principalmente Titilacin cido-Bsico
Cuidados: Corrosivo
JUGO GASTRICO ARTIFICIAL
Medir 40 ml de cido Actico 0.1 N, adicionarle 15 ml de cido
Clorhdrico 0.1 N
y aforar a 100 ml con agua destilada
Uso: Titilacin cido-Bsico
Cuidados: Corrosivo

LUCAS
Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en
bao fro, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen
y guardar en nevera.
Uso: Diferenciacin de alcoholes primarios, secundarios y terciarios
Cuidados: Txico

y corrosivo

LUGOL
Tejidos vegetales
0.5 gr. de yodo
1 gr. de yoduro de potasio
100 ml de agua destilada

Parsitos
0.5 gr. de yodo
1 gr. de yoduro de potasio
300 ml de agua destilada

Uso: Colorante

Cuidados: Corrosivo
LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA
Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O
destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37%
MILLON
Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3
concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja
sedimentar y se decanta (preparacin en cmara extractora ).

Cuidados: Corrosivo

MOLISCH
Pesar 50 gr. de naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95%
(estable 1 semana)
Uso: Para determinacin general de Azucares
Cuidados: Txico

y corrosivo

MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA)

Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de
H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le
mezcla dicromato de potasio y finalmente s afora a 1000 ml con
H2O destilada.
Uso: Limpieza de material con restos carbnicos

Cuidados: Corrosivo

METIL NARANJA
Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol
etlico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada
Uso: Indicador cido Bsico
Cuidados: Txico

1
NESSLER

Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se

disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O.
Esta disolucin se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con
agitacin.
En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O
Luego se le adiciona la otra solucin y se agita, al final decantar y
separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo)
Cuidados: Txico

NITRATO DE PLATA

0.1 N

Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua

destilada.
Uso: Determinacin de cloruros (formacin de un precipitado blanco)
Cuidados: Txico

y corrosivo

NYLANDER
Pesar 2 gr. de nitrato dibsico de bismuto y adicionarle 4 gr. de
tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve
para disolucin completa de la sal , se enfra y se separa por
filtracin.

NINHIDRINA 0.2%
Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o
acetona
Uso: Determinacin del grupo amino de aminocidos y protenas

Cuidados: Txico

y corrosivo

NEGRO DE ERICROMO
Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de
alcohol etlico al 96 % (o triturarlo con solucin al 1 % de cloruro de
sodio)
Uso: Indicador

Cuidados: Txico

O-TOLUIDINA
Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego
disolverlos hasta completar a 1000 ml con cido actico al 95 %

Cuidados: Txico

1
ROJO CONGO 5%

Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de H2O

destilada

Uso: Para reconocimiento de lpidos

Cuidados: Txicos

1
ROJO DE METILO

Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol

etlico al 96 %
Uso: Indicador cido Bsico
Cuidados: Txico

1
REACTIVO DE SCHIFF

Pesar 2 gr. de fucsina bsica y disolverlo en 400 ml de H2O

hirviendo, enfriar a 50 C luego aadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de
metasulfito de potasio, 1 gr. de carbn activado filtrar y adicionarle
10 ml de HCl 2N
Almacenar en frasco oscuro y en nevera
SELIVANOFF
Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de
cido Clorhdrico al 20%
Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa)

Cuidados: Txicos

corrosivos

SOLUCION DE RINGER(Holfretter)
( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro
de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O
destilada
Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada
(1:9)

SOLUCION PATRON DE LIPIDOS

Pesar 1 gr. de cido esterico y disolver en 100 ml de cloroformo
Uso: Determinacin de lpidos

Cuidados: Txico

corrosivos

SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l )

Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O
destilada, aadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de
solucin. Conservar a 4 C.
Uso: Determinacin de lpidos

Cuidados: Txicos

SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS

MICROSCOPICAS
Proporcin 1: 3
1 ml de cido actico en 3 ml de alcohol etlico

SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4

Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O
destilada
Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra y calibracin del
espectrofotmetro

Cuidados: Txicos
SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N
Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y
llevarlo a 500 ml de solucin con agua destilada.
Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

corrosivos

SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4

Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solucin con H2O
destilada
Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

1
SACAROSA 0.1 M

3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solucin con H2O

destilada
Conservar en Nevera a 8 grados

SUDAN III 0.2%

Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etlico al 70%, se
mezclan(calentando en bao de Mara a 90 grados centgrados) y se
dejan en reposo durante 24 horas.
Uso: Para coloracin de cutcula y gotas de grasa en clulas vegetales

Cuidados: Txico

1
SUDAN III

1 gr. de sudan en polvo +30 ml de cido actico y completar con 70

ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolucin)
Uso: Para determinacin de lpidos por solubilidad en muestras
biolgicas

Cuidados: Txico

SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7

Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de cido benzoito, llevar a 250
ml de H2O destilada, calentar y aadir 0.2 gr. de almidn y 5 ml de
H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a
4 C.
SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm
Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada
Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

SULFATO 100 ppm

Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada
TIONINA
Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y
completar a 100 ml con H2O destilada.
Uso: Para coloracin de tejidos vegetales

Cuidados: Txico

TOLLENS
Solucin A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada
Solucin B: Preparar 20 ml de NaOH al 10%
Mezclar Solucin A y Solucin B, luego adicionarle amoniaco
concentrado hasta disolver el precipitado.
Guardar preferiblemente en frasco oscuro
Uso: Para formacin del espejo de plata

Cuidados: Txico

corrosivos

TURK
100 ml de cido actico al 3% + 3 gotas de azul de metileno
TIMOL AL 1 %
Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico absoluto
Uso: Indicador de pH

Cuidados: Txico

TIMOLFTALEINA

Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etlico al 50

%

TANRED
Solucin A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada.
Solucin B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada
La solucin B se disuelve sobre la A, agitar hasta que
desaparezca el naranja , completar con cido actico glacial
hasta 500 ml.

Cuidados: Txico

1
VIOLETA DE METILO

Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etlico al 20 %

Uso: Indicador de pH

WRIGHT
Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a
poco 60 ml de Metanol Analtico y homogenizarlo, dejarlo en
maduracin por lo menos ocho (8) das.
Filtrarlo cada dos meses
Uso: Colorante para identificacin de Clulas Sanguneas

Cuidados: Txico

Bibliografa
Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos qumicos 20052007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY.
J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty
Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA.

Products.2003

Promega, Life Science Catalog-2004

Merck, Productos de Laboratorio para la prctica-IndicadoresSustancias patrn primario.
Patio, Pedro; Edgar Ramrez, Manuel de Preparacin de
Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002
Plumer, David; Introduccin a la Bioqumica Prctica. McGraw
Hill