Notas Tcnicas de Prevencin

927

Riesgo biolgico en la industria biotecnolgica

Biological risk in the biotechnology industry
Le risque biologique dans lindustrie de la biotechnologie

Redactora:
Ana Hernndez Calleja
Licenciada en Ciencias Biolgicas
CENTRO NACIONAL DE CONDICIONES
DE TRABAJO

Vigencia

Por industria biotecnolgica se entiende un conjunto de

procesos cuya esencia es el uso deliberado de microorganismos para la obtencin de productos y servicios de
inters para el hombre. Algunos de los microorganismos
utilizados pueden ser perjudiciales para la salud. En esta
nota tcnica de prevencin se pretende revisar los aspectos generales de los procesos ms comunes, as como
las principales exigencias de bioseguridad relativas a los
equipos y a los locales de trabajo.

Actualizada

Observaciones

VLIDA

1. INTRODUCCIN
La microbiologa industrial trata del uso de microorganismos y de la aplicacin de las tcnicas biotecnolgicas en
procesos industriales para la obtencin de productos a
travs de la fermentacin y de servicios beneficiosos para
la humanidad. Las tcnicas biotecnolgicas consisten en
la manipulacin de los organismos, fundamentalmente
a escala gentica, para usos especficos. En esos conceptos est comprendida la biotecnologa tradicional y la
denominada biotecnologa moderna en la que la tecnologa del ADN recombinante (tambin llamada ingeniera
gentica) se ha convertido en parte central de la misma.
La biotecnologa tradicional hace referencia a las formas en las que, desde la antigedad, se han venido usando los seres vivos. Se podra decir que la biotecnologa se
inicia cuando los humanos, cazadores y recolectores, se
convierten en granjeros. Como tales, recolectan plantas
salvajes, las cultivan y seleccionan las variedades con un
mejor rendimiento para utilizarlas en la siguiente estacin.
Lo mismo ocurre con la ganadera.
Ms adelante y sin conocer su fundamento se descubre como usar determinados procesos biolgicos, que
ocurren en las clulas habitualmente. Se descubrieron
formas de maduracin de diversos alimentos que provocaban cambios de sabor, se trataba del proceso que
posteriormente se denomin fermentacin, que permita
la transformacin de la leche en queso o el jugo de las
uvas en vino. Fueron los estudios de Pasteur (1857) sobre la accin de los microorganismos en el proceso de
fermentacin alcohlica y las tcnicas de cultivo puro
desarrolladas por Hansen (1883), los avances que dieron lugar a la microbiologa industrial. Durante la primera
mitad del siglo XX se continuaron produciendo avances
en este campo, pero no fue hasta el descubrimiento por
parte de Watson y Crick (1953) de la estructura del cido
desoxirribonucleico (ADN) y la forma en la que se transmite la informacin gentica a travs de las generaciones,
que se inici la biotecnologa moderna con el desarrollo
de las tcnicas del ADN recombinante. Esta tecnologa
permite la transferencia de genes de una especie a otra
y se basa en la insercin de una secuencia especfica de

genes de un donante en un husped adecuado, a travs

de un vector de expresin.
De la progresin en el desarrollo de la biotecnologa
se puede inferir su utilidad en diversos campos. El principal es el propio avance de la Biologa. En el terreno
industrial es necesario destacar sus aplicaciones teraputicas (medicamentos, vacunas, hormonas, terapias
gnicas); su aplicacin en pruebas diagnsticas; las
mejoras en el campo de la alimentacin (obtencin de
alimentos, aditivos alimentarios, alimentos con perfiles
nutricionales determinados, etc.); produccin de enzimas
y otras protenas, bioinsecticidas, biopolmeros, etc.; su
aprovechamiento en la obtencin de energa (biomasa)
o su utilidad en la mejora del medio ambiente a travs de
la biorremediacin entre otros. En la tabla 1 se recogen
algunos ejemplos de microorganismos y sus usos en la
industria.

2. FERMENTACIN
En el proceso de obtencin del producto deseado, los
sistemas biolgicos actan como catalizadores de la
reaccin propiciando que sta se lleve a cabo en condiciones ptimas y con el mayor rendimiento. Los sistemas
biolgicos usados son: microorganismos, cultivos celulares, enzimas o esporas. De todos ellos destacan los
microorganismos debido a dos razones fundamentales:
su elevada diversidad y plasticidad metablica y la sencillez y economa de su cultivo.
La operacin tiene dos fases: la de preparacin, incluyendo la fermentacin, y la de obtencin del producto.
En la figura 1 se muestra un esquema de un proceso
de fermentacin y la curva de desarrollo microbiano en
condiciones de cultivo discontinuo.
La fase de preparacin se puede dividir en tres etapas
principales: la produccin del inculo, la preparacin del
medio de cultivo y la propia fermentacin. La fase de obtencin del producto, con las variaciones propias del tipo
de producto elaborado, incluye todos los procesos que
siguen a la fermentacin. A continuacin se describen
brevemente las diferentes etapas.

2
Notas Tcnicas de Prevencin

Preparacin del inculo

Microorganismos

Aplicacin

Saccharomyces

Bebidas alcohlicas (vino, cerveza),

biomasa (levadura panificacin).

Lactobacillus y
bacterias lcticas

cido lctico, queso, yogur, embutidos, col fermentada, etc.

Acetobacter

cido actico.

Aspergillus

cido ctrico, enzima amilasa, biosensores (anlisis de glucosa).

Corynebacterium

Aminocidos (L-Glutmico, L-Lisina).

Pseudomonas

Vitamina B12, biodegradacin de hidrocarburos.

Alcaligenes

Bioplsticos.

Streptomyces

Tetraciclinas, transformacin de esteroides.

Penicillium

Antibiticos.

Bacillus

Antibiticos, bioinsecticidas, enzimas

(proteasas).

Salmonella

Test mutagnicos (test de Ames).

Escherichia

Hormonas, interfern humano.

Thiobacillus

Biolixiviacin.

Bacterias aerobias

Depuracin de aguas residuales.

Bacterias
anaerobias

Biodigestin anaerobia (metano).

Tabla 1. Microorganismos y sus aplicaciones industriales ms

frecuentes

Los aspectos clave de esta etapa consisten en:

La localizacin de un microorganismo de inters industrial. Normalmente ese microorganismo provendr de
colecciones o bien de las cepas salvajes existentes en
la naturaleza. Pero adems, el microorganismo debe
cumplir con una serie de condiciones que idealmente
seran las siguientes:
Ser genticamente estable.
Tener una ruta biosinttica bien caracterizada y
una eficiente produccin del producto de inters.
Sin otros productos que dificulten los procesos de
recuperacin.
Presentar escasa o nula necesidad de vitaminas u
otros factores de crecimiento.
Ser capaz de utilizar una amplia gama de sustratos
(fuentes de carbono) asequibles y econmicos.
Tener requisitos de crecimiento que dificulten posibles contaminaciones (por ejemplo: pH determinados, temperaturas elevadas, etc.).
Ser susceptible de manipulacin gentica.
Ser seguro, no patgeno y no producir agentes txicos (excepto cuando son el producto buscado).
Elaborar productos fcilmente recuperables.
La mejora de los microorganismos para incrementar la
productividad y el rendimiento. Este aspecto se puede
lograr mejorando las condiciones de cultivo (medio, parmetros, etc.) o modificando su genoma. Las tcnicas
para lograr este punto son las siguientes: mutagnesis,
fusin de protoplastos o ADN recombinante. Las dos
primeras tienen un componente aleatorio importante
y requieren de procesos de seleccin posteriores. En
cambio, con la tcnica del ADN recombinante, se elabora el microorganismo especfico que producir el
producto deseado.

Sustrato

Microorganismo

Preparacin
medio de cultivo
Desarrollo del inculo
Fermentador
intermedio

Fermentador
de produccin

Estacionaria
Exponencial

Muerte

Log n clulas

Latencia

TROFOFASE

IDIOFASE

Tiempo

Tratamiento de
efluentes

Purificacin

Producto

Figura 1. Esquema del proceso de fermentacin y crecimiento microbiano

3
Notas Tcnicas de Prevencin

El mantenimiento de la pureza de la cepa que implica

toda una serie de procesos de conservacin de las
mismas. Las ms utilizadas son: subcultivos sucesivos, con el inconveniente de su posible contaminacin,
cambio por mutacin o muerte del cultivo; conservacin de esporas, nicamente vlido para los microorganismos que las producen; la congelacin y la liofilizacin siendo stas las que mejores resultados ofrecen.
La comprobacin de que sus capacidades se mantienen en las condiciones que regirn el proceso industrial.
La facilidad de recuperacin del producto final.

Gases
Motor
Sondas

Cultivo o aporte
de nutrientes

pH

O2 disuelto

Toma de
muestras

Agua de
refrigeracin

Vlvula

Agitadores

Preparacin del medio de cultivo

Los aspectos principales en este apartado son: la seleccin de los sustratos (fuentes de carbono y energa) y de
otros nutrientes esenciales, as como la optimizacin de
las condiciones del medio de cultivo para conseguir el
mximo rendimiento y produccin.
Los sustratos ms comnmente utilizados en las fermentaciones son: melazas; extracto de malta; almidn y
dextrinas; lquidos sulfticos de las papeleras; celulosa,
aceites vegetales, etanol, alcanos (C12 - C18); extracto de
levaduras, peptonas o lquido de maceracin del maz
como fuente de nitrgeno y de aminocidos.
Fermentacin
Es el proceso en que los microorganismos son cultivados
en condiciones rigurosamente controladas que han sido
desarrolladas para optimizar el crecimiento del microorganismo (biomasa) o el producto deseado. El microorganismo aumenta su concentracin mientras que el medio
se va modificando por la formacin de nuevos productos.
El comportamiento de un microorganismo es sensible
a las condiciones de operacin del proceso como por
ejemplo: la temperatura, la aireacin, la agitacin, tipo de
alimentacin del proceso, etc., que pueden condicionar
la produccin de algn metabolito.
El fermentador, las conducciones, los elementos de
sellado y los equipos asociados deben ser construidos
con materiales, usualmente acero inoxidable, que permitan sucesivas esterilizaciones, que no reaccione de
forma adversa con el microorganismo o con el producto y que aseguren la estanqueidad del proceso con el
objeto de evitar contaminaciones tanto hacia el interior
del fermentador como hacia el ambiente de trabajo. En
la figura 2 se muestra un esquema de un fermentador
aireado con agitacin y los elementos de control del
proceso.
Los principales elementos asociados al fermentador
son: el aporte de aire (estril) cuando as se requiera, el
mecanismo de agitacin que homogenice el medio y las
sustancias que se aporten, las sondas de control de los
diferentes parmetros (temperatura, pH, oxgeno disuelto,
etc.), los mecanismos o productos antiespumantes, etc.

Sensor de
temperatura
Biosensor
Agua de
refrigeracin
Vlvula
Aire
Vlvula
Filtro del aire

Lnea de
producto

Figura 2. Esquema de un fermentador

incorporan los elementos destinados al control y mantenimiento de las condiciones preestablecidas del proceso
(cidos o bases para el mantenimiento del pH, aire, etc.).
El modelo de crecimiento discontinuo permite explicar el
desarrollo microbiano y es uno de los tipos ms utilizado
en la industria. En la figura 3 se muestra la curva que
describe las diferentes fases de crecimiento, tambin recogida en la figura 1 a menor tamao.
Dependiendo del origen, edad, concentracin o viabilidad del inculo, se puede producir una fase de latencia
en la que no hay crecimiento, pero s actividad metablica de adaptacin a los nutrientes disponibles. Una
vez se ha producido la adaptacin, la divisin celular
se acelera aumentando su frecuencia hasta su valor
mximo dando comienzo la fase exponencial. Durante
esta fase o trofofase, se produce el crecimiento celular
y se producen los metabolitos primarios. A medida que
disminuyen los nutrientes se produce una desaceleracin del crecimiento. Cuando todo el nutriente crtico se
ha metabolizado el cultivo entra en la fase estacionaria

Estacionaria
Exponencial

Muerte

Tipos de proceso
Latencia
Log n clulas

Se pueden distinguir tres tipos de procesos en funcin

de la cintica del mismo y de la incorporacin del medio
de cultivo: discontinuos, discontinuos con alimentacin y
continuo. La eleccin del proceso depende del sistema
biolgico escogido y del producto que se pretenda obtener, segn sea ste un metabolito primario o secundario
o la formacin de biomasa.
En los cultivos discontinuos los nutrientes estn presentes desde el inicio y a lo largo del proceso slo se

TROFOFASE
Tiempo

Figura 3.

IDIOFASE

4
Notas Tcnicas de Prevencin

(la tasa de divisin celular es igual a la tasa de muerte

celular). En esta fase, o idiofase, los microorganismos
siguen activos metabolizando los compuestos almacenados intracelularmente y, en algunos casos, produciendo metabolitos secundarios. Tambin durante esta fase
se producen las esporas. A continuacin se inicia la fase
de muerte en la que se produce de forma exponencial
la muerte celular y, en ocasiones, la lisis o rotura celular.
En los cultivos discontinuos con alimentacin, los nutrientes crticos se van incorporando a lo largo de todo
el proceso en dosis pequeas. Este es el tipo de cultivo
que se utiliza para la sntesis de metabolitos secundarios.
Los cultivos continuos se utilizan cuando el producto
de inters se produce en la fase exponencial. El mantenimiento de esta fase se consigue equilibrando la entrada
de nutriente con la extraccin de cultivo.
Obtencin del producto
Finalmente, tras la fermentacin se ha de recuperar el
producto. Las tcnicas disponibles son mltiples, pero
en su eleccin hay que tener en cuenta diversos factores:
si presenta actividad biolgica o es un producto inerte,
dnde se ubica (dentro o fuera de la clula), sus caractersticas fisicoqumicas, su concentracin, el grado de
pureza necesario, etc.
Entre las tcnicas de recuperacin ms frecuentemente utilizadas se pueden destacar las siguientes: sedimentacin, centrifugacin, floculacin, filtracin, cromatografa (de adsorcin, de intercambio inico, de exclusin
molecular, de afinidad), electroforesis, dilisis, osmosis
inversa, cristalizacin, liofilizacin, lisis fsica, qumica o
enzimtica, etc.

3. RIESGO BIOLGICO
Buena parte de los microorganismos utilizados en los procesos biotecnolgicos no suponen ningn peligro para
las personas, de hecho, uno de los requisitos ideales
del microorganismo es que ste sea seguro, no patgeno y sin efectos txicos. Sin embargo existen determinados procesos en los que necesariamente intervienen
microorganismos peligrosos, por ejemplo, la fabricacin
de vacunas o la obtencin de determinados productos
con efectos txicos.
La propia definicin de los procesos industriales biotecnolgicos revela uno de los principales factores de
riesgo existente: la utilizacin de microorganismos en la
produccin de productos o servicios. Ningn ejemplo mejor de lo que significa actividad con intencin deliberada
de utilizar agentes biolgicos, en la que es obligada la

Agente biolgico
del grupo de riesgo

presencia del agente biolgico, y que define uno de los

mbitos de aplicacin del Real Decreto 664/1997, sobre
la proteccin de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos durante
el trabajo. Sin embargo, la mera utilizacin de un agente
biolgico no significa que exista un riesgo para los trabajadores que lo manejan, ser condicin indispensable
que, adems, la exposicin al agente tenga efectos adversos para la salud.
El artculo 2 del Real Decreto contiene la definicin
de lo que se entiende legalmente como agente biolgico
y los principales efectos asociados a la exposicin a los
mismos. Son agentes biolgicos: microorganismos, con
inclusin de los genticamente modificados, cultivos celulares y endoparsitos humanos, susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad.
En la definicin quedan incluidos: los virus, las bacterias, los hongos (naturales y los modificados genticamente), los cultivos celulares (fundamentalmente por su
posible contaminacin por virus) y los organismos que
colonizan el interior del cuerpo humano (protozoos y gusanos parsitos), que causen cualquiera de los efectos
mencionados. Se excluyen de la definicin legal: los organismos que parasitan el exterior del cuerpo humano
(caros, piojos, etc.), las toxinas y venenos producidos
por seres vivos (artrpodos, plantas, animales) y las sustancias derivadas de los agentes biolgicos con efectos
txicos o alrgicos cuando stas se manejen de forma
aislada, es decir, sin la presencia del agente productor.
Por ejemplo, los enzimas purificados utilizados en la fabricacin de detergentes no tendran consideracin de
agente biolgico, sin embargo, esos mismos enzimas
durante su produccin por un microorganismo s seran
considerados agentes biolgicos.
En el artculo 3 del Real Decreto Clasificacin de los
agentes biolgicos, se proporcionan los criterios por los
que los agentes biolgicos se clasifican en cuatro grupos
atendiendo al riesgo de infeccin que suponen y que se
resumen en la tabla 2.
El Anexo II del Real Decreto contiene la lista de los
agentes biolgicos clasificados por el momento en los
distintos grupos y, la informacin sobre sus efectos alrgicos (A) o txicos (T).
En el caso de los organismos modificados genticamente (OMG), a la hora de analizar su potencial peligrosidad, se ha de tener en cuenta, adems de la peligrosidad del organismo receptor, otros aspectos como son:
el organismo donante, el vector utilizado, el inserto y el
OMG resultante. La peligrosidad intrnseca del organismo receptor vendr reflejada por el grupo en el que est
clasificado. La del inserto tiene que ver con la actividad
biolgica potencialmente peligrosa de los productos que

Riesgo infeccioso

Riesgo de propagacin
a la colectividad

Profilaxis o
tratamiento eficaz

No

Innecesario

Poco probable que cause enfermedad

Pueden causar una enfermedad y constituir un

peligro para los trabajadores

Poco Probable

Disponible

Puede causar una enfermedad grave y presenta

un serio peligro para los trabajadores

Probable

Disponible

Causan una enfermedad grave y suponen un

serio peligro para los trabajadores

Elevado

No conocido

Tabla 2. Grupos de riesgo de los agentes biolgicos

5
Notas Tcnicas de Prevencin

codifican (toxinas, oncogenes, etc.). La del OMG deber

valorarse atendiendo a su viabilidad (capacidad de desarrollo y diseminacin) y la probabilidad de que ocurran
sucesos infrecuentes (mutaciones, reversiones, etc.).
Sin ser de aplicacin directa, la clasificacin de agentes
biolgicos del Real Decreto 664/1997 puede servir de
orientacin a la hora de estimar la peligrosidad del OMG
y de las actividades donde se utilicen.

4. EVALUACIN DE RIESGOS
El procedimiento de evaluacin de riesgos por exposicin
a agentes biolgicos queda recogido en el artculo 4 del
Real Decreto 664/1997 y en el artculo 12 y el anexo I del
Real Decreto 178/2004, por el que se aprueba el Reglamento general para el desarrollo y ejecucin de la Ley
9/2003, por la que se establece el rgimen jurdico de la
utilizacin confinada, liberacin voluntaria y comercializacin de organismos modificados genticamente. El primero se aplica a los agentes biolgicos naturales mientras
que el segundo es de aplicacin a los OMG.
Los principios de evaluacin de riesgos no difieren, en
cualquier caso, de los establecidos en la normativa general de Prevencin: determinar la naturaleza, el grado y
la duracin de la exposicin. Es decir, estimar el nivel de
riesgo en trminos de probabilidad de materializacin de
daos y la gravedad de sus consecuencias, y eliminar o
minimizar el riesgo mediante la aplicacin de las medidas
de control pertinentes.
La evaluacin de riesgos debe hacerse teniendo en
cuenta toda la informacin disponible y en particular:
La naturaleza de los agentes biolgicos y el grupo en
el que estn clasificados.
La informacin sobre las enfermedades susceptibles
de ser contradas por los trabajadores por su actividad
profesional.
Los efectos potenciales, tanto alrgicos como txicos,
que puedan derivarse de la actividad laboral de los
trabajadores.
Las recomendaciones de las autoridades sanitarias
sobre la conveniencia de controlar el agente biolgico
con el objeto de proteger la salud de los trabajadores
que estn o puedan estar expuestos a dicho agente
por razn de su trabajo.
El riesgo adicional para aquellos trabajadores especialmente sensibles en funcin de sus caractersticas
o estado biolgico conocido (patologas previas, medicacin, trastornos inmunitarios, embarazo o lactancia.
Cuando se trata de OMG, adems, se deben considerar los efectos deletreos debidos a su establecimiento
o a la diseminacin en el medio ambiente y los efectos
deletreos debidos a la transferencia natural de material gentico insertado a otros organismos, aunque
estos ltimos no son considerados en esta nota tcnica de prevencin.

5. MEDIDAS PREVENTIVAS Y DE
CONTENCIN
El resultado de la evaluacin de riesgos ha de permitir
determinar las actuaciones preventivas y la extensin de
las mismas, en funcin del tipo de actividad desarrollada. Los procesos industriales biotecnolgicos, como se

ha indicado anteriormente, son actividades con intencin deliberada de manipular agentes biolgicos, por lo
que, adems de las medidas preventivas y de control
establecidas en el articulado del Real Decreto 664/1997,
se deben aplicar las medidas especiales establecidas
en el artculo 15 y en los anexos IV y V del mismo. En
concreto para procedimientos industriales, el punto 2 del
citado artculo requiere el establecimiento de un nivel de
contencin, as como de las medidas de contencin que
figuran en el anexo V, de forma que las actividades que
supongan manipulacin del agente biolgico se ejecuten nicamente en zonas de trabajo que correspondan
por lo menos a un nivel de contencin 2 para un agente
biolgico del grupo 2, a un nivel de contencin 3 para
un agente biolgico del grupo 3 y a un nivel 4 para un
agente biolgico del grupo 4. Cuando no haya sido posible proceder a una evaluacin concluyente de un agente
biolgico, pero de cuya utilizacin prevista parezca que
puede derivarse un riesgo grave para la salud de los
trabajadores, nicamente podrn realizarse en locales
de trabajo cuyo nivel de contencin corresponda, al menos, al nivel 3.
En el caso de los OMG, en el artculo 12 del Real Decreto 178/2004, las actividades de utilizacin confinada
de OMG se clasifican, en funcin de la evaluacin previa
de los riesgos para la salud humana y el medio ambiente,
en cuatro tipos:
Tipo 1. Actividades con riesgo nulo o insignificante:
aquellas en las que el grado 1 de confinamiento es
suficiente para proteger la salud humana y el medio
ambiente.
Tipo 2. Actividades de bajo riesgo: las que requieren
el grado 2 de confinamiento.
Tipo 3. Actividades de riesgo moderado: las que requieren el grado 3 de confinamiento.
Tipo 4. Actividades de alto riesgo: las que requieren el
grado 4 de confinamiento.
Un caso particular lo constituyen aquellos procesos industriales realizados a cielo abierto como son los denominados de biorremediacin a los cuales no es posible
aplicar los principios de contencin/confinamiento, pero
s todas aquellas medidas preventivas oportunas que
se deriven de la evaluacin de riesgos para el control
del riesgo.
Las tablas 3 y 4 contienen las medidas y la exigencia
en su cumplimiento para los procedimientos industriales
biotecnolgicos, tanto los contemplados en el anexo V
(RD 664/1997) como en el anexo II (RD 178/2004). En
ambos casos, las medidas son equivalentes, aunque su
nmero total, su formulacin y la exigencia en su cumplimiento puedan diferir ligeramente, en cualquier caso, es
conveniente recordar que contienen requisitos mnimos.
La tabla 4 incorpora el grado de confinamiento 1 establecido para el trabajo con OMG clasificado como actividad
con riesgo nulo o insignificante o Tipo I. Su equivalencia
en el anexo V quedara reflejada en la nota introductoria
que dice: Cuando se trabaje con agentes biolgicos del
grupo 1, comprendidas las vacunas de grmenes vivos
atenuados, se observarn los principios de correcta seguridad e higiene profesional.
En cada tabla se indica la correspondencia entre las
medidas de contencin y las de confinamiento. Asimismo
se sealan (en sombreado) las discrepancias en cuanto a
la exigencia en el cumplimiento de la medida que existen
entre ambas.

6
Notas Tcnicas de Prevencin

B. Niveles de contencin
A. Medidas de contencin
2

1. Los microorganismos viables debern ser manipulados en un

sistema que separe fsicamente el proceso del medio ambiente.
(Medida 1, tabla 4)

2. Debern tratarse los gases de escape del sistema cerrado

para: (Medida 2, tabla 4)

Minimizar la liberacin

Impedir la liberacin

Impedir la liberacin

3. La toma de muestras, la adicin de materiales a un sistema

cerrado y la transferencia de organismos viables a otro sistema
cerrado debern realizarse de un modo que permita: (Medida
3, tabla 4)

Minimizar la liberacin

Impedir la liberacin

Impedir la liberacin

4. Los fluidos de grandes cultivos no debern retirarse del sistema cerrado a menos que los microorganismos viables hayan
sido: (Medida 4, tabla 4)

Inactivados mediante medios de eficacia

probada

Inactivados mediante medios fsicos o

qumicos de eficacia
probada

Inactivados mediante medios fsicos o

qumicos de eficacia
probada

5. Los precintos debern disearse con el fin de: (Medida 5,

tabla 4)

Minimizar la liberacin

Impedir la liberacin

Impedir la liberacin

6. Los sistemas cerrados debern ubicarse en una

zona controlada: (Medida 13, tabla 4)

Facultativo

Facultativo

S, expresamente
construida

a) Debern colocarse seales de peligro biolgico. (Medida

15, tabla 4)

Facultativo

b) Slo deber permitirse el acceso al personal designado.

(Medida 14, tabla 4)

Facultativo

S, mediante esclusa
de aire. (Medida 8,
tabla 4)

c) El personal deber vestir indumentaria de proteccin. (Medida 18, tabla 4)

S, ropa de trabajo

Cambiarse
completamente

d) Deber dotarse al personal de instalaciones de descontaminacin y lavado.

e) Los trabajadores debern ducharse antes de abandonar la

zona controlada. (Medida 17, tabla 4)

No

Facultativo

f) Los efluentes de fregaderos y duchas debern recogerse e

inactivarse antes de su liberacin. (Medida 22, tabla 4)

No

Facultativo

g) La zona controlada deber ventilarse adecuadamente para

reducir al mnimo la contaminacin atmosfrica. (Medida 10,
tabla 4)

Facultativo

Facultativo

h) En la zona controlada deber mantenerse una presin del

aire negativa respecto a la atmsfera. (Medida 11, tabla 4)

No

Facultativo

i) Se deber tratar con filtros HEPA el aire de entrada y salida

de la zona controlada. (Medida 12, tabla 4)

No

Facultativo

j) Deber disearse la zona controlada para impedir la fuga del

contenido del sistema cerrado. (Medida 6, tabla 4)

No

Facultativo

k) Se deber poder precintar la zona controlada para su fumigacin. (Medida 7, tabla 4)

No

Facultativo

l) Tratamiento de efluentes antes de su vertido final. (Medida

23, tabla 4)

Inactivados mediante medios de eficacia

probada

Inactivados mediante medios fsicos o

qumicos de eficacia
probada

Inactivados mediante medios fsicos o

qumicos de eficacia
probada

Tabla 3. Anexo V del Real Decreto 664/1997, Indicaciones relativas a las medidas de contencin y a los niveles de contencin para procesos
industriales

7
Notas Tcnicas de Prevencin

Especificaciones

Grado de confinamiento
1

1. Los organismos viables deben mantenerse en un

sistema que separe el proceso del entorno (sistema
cerrado). (Medida 1, tabla 3)

Opcional

Exigida

Exigida

Exigida

2. Control de los gases de escape del sistema cerrado. (Medida 2, tabla 3)

No exigida

Exigida, minimizando la liberacin

Exigida, evitando
la liberacin

Exigida, evitando
la liberacin

3. Control de aerosoles durante la toma de muestras,

la introduccin del material en un sistema cerrado o
la transferencia de material a otro sistema cerrado.
(Medida 3, tabla 3)

Opcional

Exigida, minimizando la liberacin

Exigida, evitando
la liberacin

Exigida, evitando
la liberacin

4. Inactivacin del lquido de cultivo en masa antes

de extraerlo del sistema cerrado. (Medida 4, tabla 3)

Opcional

Exigida con medios

validados

Exigida con medios validados

Exigida con
medios validados

5. Sistemas de cierre diseados para minimizar o

evitar la liberacin. (Medida 5, tabla 3)

Ningn requisito
especfico

Minimizar
la liberacin

Evitar
la liberacin

Evitar
la liberacin

6. Zona controlada con capacidad para contener el

vertido de todo el contenido del sistema cerrado.
(Medida 6 j, tabla 3)

Opcional

Opcional

Exigida

Exigida

7. Zona controlada hermtica para fumigacin. (Medida 6 k, tabla 3)

No exigida

Opcional

Opcional

Exigida

No exigida

No exigida

Opcional

Exigida

9. Superficies resistentes a cidos, lcalis, disolventes, desinfectantes y agentes de descontaminacin

y de fcil limpieza.

Exigida
(mesa, si la hay)

Exigida
(mesa, si la hay)

Exigida
(mesa, si la hay, y
suelo)

Exigida
mesa, suelo,
techo y paredes)

10. Medidas especficas para ventilar adecuadamente la zona controlada y de ese modo minimizar la
contaminacin atmosfrica. (Medida 6 g, tabla 3)

Opcional

Opcional

Opcional

Exigida

11. Zona controlada con presin negativa respecto a

la presin circundante. (Medida 6 h, tabla 3)

No exigida

No exigida

Opcional

Exigida

12. Tratamiento del aire de salida y entrada de la

zona, filtrado con filtros HEPA. (Medida 6 i, tabla 3)

No exigida

No exigida

Exigida
(aire de salida,
facultativa para el
aire de entrada)

Exigida
(aire de entrada y
de salida)

13. Sistemas cerrados situados en una zona controlada. (Medida 6, tabla 3)

No exigida

Opcional

Exigida

Exigida

14. Acceso restringido exclusivamente al personal

autorizado. (Medida 6 b, tabla 3)

No exigida

Exigida

Exigida

Exigida

15. Obligacin de indicar el peligro biolgico. (Medida 6 a, tabla 3)

No exigida

Exigida

Exigida

Exigida

17. El personal deber ducharse antes de abandonar

la zona controlada. (Medida 6 e, tabla 3)

No exigida

No exigida

Opcional

Exigida

18. Indumentaria de proteccin para el personal.

(Medida 6 c, tabla 3)

Exigida
(indumentaria de
trabajo)

Exigida
(indumentaria de
trabajo)

Exigida

Cambio completo
de indumentaria
antes de entrar y
de salir

22. Inactivacin de los OMG en los efluentes de

lavabos, desages y duchas o efluentes similares.
(Medida 6 f, tabla 3)

No exigida

No exigida

Opcional

Exigida

23. Inactivacin de los OMG en el material contaminado y en los residuos, incluidos los OMG presentes en el efluente de trabajo antes del vertido final.
(Medida 6 l, tabla 3)

Opcional

Exigida, con medios

validados

Exigida, con medios validados

Exigida, con medios validados

Disposiciones generales

Equipo
8. Entrada a travs de esclusa.

Normas de trabajo

Residuos

Tabla 4. Organismos Modificados Genticamente. Cuadro II Medidas de confinamiento y otras medidas de proteccin para otras
actividades. Del Anexo II del Real Decreto 178/2004

8
Notas Tcnicas de Prevencin

BIBLIOGRAFA CONSULTADA
MINISTERIO DE TRABAJO Y ASUNTOS SOCIALES.
Real Decreto 664/1997, de 12 de mayo, sobre la proteccin de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la
exposicin a agentes biolgicos durante el trabajo.
INSTITUTO NACIONAL DE SEGURIDAD E HIGIENE EN EL TRABAJO
Gua tcnica para la evaluacin y prevencin de los riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos.
MINISTERIO DE LA PRESIDENCIA
Real Decreto 178/2004, por el que se aprueba el Reglamento general para el desarrollo y ejecucin de la Ley 9/2003, de
25 de abril, por la que se establece el rgimen jurdico de la utilizacin confinada, liberacin voluntaria y comercializacin
de organismos modificados genticamente.
HEALTH AND SAFETY EXECUTIVE
The large-scale contained use of biological agents.
HSE books http://books.hse.gov.uk/hse/public/saleproduct.jsf?catalogueCode=9780717615445
WAITES, M. J., MORGAN, N. L., ROCKEY, J. S. and HIGTON, G.
Industrial Microbiology: An Introduction.
London. Wiley-Blackwell 1 edition 2001.

Prohibida la reproduccin total o parcial. Reservados todos los derechos

FD-2938