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CRDITOS
Lic. Mara Guadalupe de Guzmn
COORDINACIN
Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez
ASESORA TCNICA
Dra. Carla Mara Schnenberg
DIAGRAMACIN Y DISEO
Julio Adalberto Castillo
U/S Coatepeque
U/S El Congo
U/S El Palmar
U.S Texistepeque
SIBASI Ahuachapn
U/S Ahuachapn
U/S Apaneca
U/S Ataco
U/S Atiquizaya
U/S El Refugio
U/S Guaymango
U/S La Hachadura
U/S. Tacuba
SIBASI Sonsonate
U/S Acajutla
U/S Armenia
U/S Izalco
U/S Sonzacate
U/S Juayua
PRESENTACIN
Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un instrumento que contenga la secuencia de los pasos necesarios, que aseguren la correcta ejecucin de todos los procedimientos tcnicos de cada uno de los Laboratorios, y de esta manera contribuir al ordenamiento y
estandarizacin de los mismos.
Por lo anterior, este Despacho Ministerial pone a disposicin de todos los profesionales
involucrados en los procesos descritos, el presente documento denominado: Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin.
Los contenidos de esta publicacin deben incorporarse en las actividades diarias de los
Laboratorios Clnicos de los establecimientos del Primer Nivel de Atencin, a fin de garantizar la
emisin de resultados confiables, comparables y oportunos, que colaboren a mejorar la condicin
de salud de la poblacin.
NDICE
1. INTRODUCCIN
2.0 OBJETIVOS....................................................................................................................... 1
2.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................... 1
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ...................................................................................... 1
3. BIOSEGURIDAD ................................................................................................................. 2
4. CONTROL DE CALIDAD .................................................................................................... 4
4.1. CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA ............................................................ 5
4.2. CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS .............................................................. 5
4.3. CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA ...................................................... 6
4.4. CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA .......................................................... 6
4.5. CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA ........................................................... 6
4.6. CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGA ....................................................... 7
5. COPROLOGA..................................................................................................................... 8
5.1. EXAMEN FSICO DE HECES ................................................................................... 9
5.2. EXAMEN MICROSCPICO DE HECES .................................................................... 11
5.3. PRUEBA DE AZUL DE METILENO ............................................................................ 14
5.4. COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA LA INVESTIGACIN `
DE COCCIDIOS ................................................................................................................ 17
6. URIANLISIS ...................................................................................................................... 20
6.1. TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA .................................................... 21
6.2. EXAMEN FSICO DE ORINA ..................................................................................... 22
6.3. EXAMEN QUMICO DE ORINA ................................................................................. 24
6.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO ...................................... 27
7. QUMICA CLNICA ............................................................................................................. 30
7.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE QUMICA
CLNICA ............................................................................................................................ 31
7.2. GLUCOSA SANGUNEA ............................................................................................ 34
7.3. COLESTEROL ........................................................................................................... 37
7.4. TRIGLICRIDOS ....................................................................................................... 40
7.5. CIDO RICO ........................................................................................................... 43
8. HEMATOLOGA .................................................................................................................. 46
8.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES
HEMATOLGICOS
.............................................................................................................. 47
8.2. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES
HEMATOLGICOS ............................................................................................................ 49
52
55
58
61
63
66
69
72
74
76
78
80
82
84
9. INMUNOLOGA ...................................................................................................................
85
86
89
93
96
99
108
109
111
114
1. INTRODUCCIN
El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su contenido
sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas actividades diarias. Su contenido esta
dividido en ocho apartados: en el primero estn contenidos los aspectos ms importantes de
bioseguridad en el Laboratorio; en el segundo se describe el control de calidad que debe llevarse
en los diferentes anlisis; y en los seis apartados siguientes se detallan los procedimientos que se
realizan en las diferentes reas, en el siguiente orden: Coprologa, Urianlisis, Qumica Clnica,
Hematologa, Inmunologa y Microbiologa bsica.
Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de
los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en los Laboratorios Clnicos del Ministerio
de Salud.
2. OBJETIVOS
- Ordenar todos los procedimientos tcnicos de los Laboratorios Clnicos del Primer Nivel
de Atencin, en un solo documento apropiado para responder a las necesidades de este
nivel.
- Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las
actividades de laboratorio.
3. BIOSEGURIDAD
Todas las personas que trabajan en un laboratorio deben conocer los riesgos potenciales a los
que se exponen y ser versados en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular materiales
infecciosos en forma segura.
Cuando ocurre un accidente es fundamental que se haga un anlisis de sus causas y se adopten
medidas correctivas para evitar su repeticin.
4. CONTROL DE CALIDAD
La calidad se obtiene y se mejora a lo largo de todo el proceso por lo que el control de calidad debe
ejercerse en las tres fases del proceso: la fase pre-analtica, analtica y post-analtica.
La mayora de las tcnicas analticas cuantitativas implican diversas operaciones que estn sujetas
a cierto grado de imprecisin y cierta posibilidad de error. El objetivo del control de calidad radica
en asegurar que los productos finales, es decir los valores analticos que son producidos por un
laboratorio clnico, sean suficientemente fiables y adecuados a la finalidad que persiguen. Este
objetivo se cumple a medida que todo el personal del laboratorio sea consciente de las causas de
las imprecisiones analticas y de las tcnicas disponibles para su deteccin, correccin y control.
Entre las principales variables que pueden evitar imprecisiones podemos citar:
- Forma adecuada de obtencin de las muestras.
- Calidad y estabilidad de los reactivos analticos.
- Preparacin y capacitacin del personal tcnico.
- Limpieza, mantenimiento y uso adecuado de las pipetas automticas.
- Manuales para el usuario y mantenimiento de los equipos a utilizar.
- Transferencia de los resultados sin prdidas, ni alteraciones, para la elaboracin de los
informes.
Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo
de inmunologa que les enve el Nivel Central cada ao.
5. COPROLOGA
- Frascos sucios.
- Contaminacin de las heces con orina.
Valores de referencia:
- COLOR: Caf.
- CONSISTENCIA: Pastosa a blanda.
- PRESENCIA DE MUCUS: No debe observarse.
- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos.
5.1.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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5.2.4. EQUIPO:
- Microscopio
5.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina porta objeto
- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.
- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presencia
de estos).
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Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural
y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.
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Valores de referencia:
PARSITOS: No se deben observar.
LEUCOCITOS: No se deben observar.
ERITROCITOS: No se deben observar.
RESTOS ALIMENTICIOS: de escasos a moderados.
LEVADURAS: No se deben observar.
RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.
5.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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5.3.4. EQUIPO:
- Contador diferencial de clulas.
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- Microscopio.
- Mechero.
5.3.5. PROCEDIMIENTO
- Filtrar el colorante antes de utilizar.
- Identificar el portaobjeto a utilizar.
- Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lmina.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma
horizontal.
- Cubrir la lmina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.
- Eliminar el azl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo
hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en
que no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Observar al microscopio con objetivo de inmersin 100x.
- Contar 100 clulas blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de los
mononucleares.
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Polimorfonucleares
Mononucleares
Interpretacin:
Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen
bacteriano.
Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.
5.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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17
5.4.4. EQUIPO:
- Mechero.
- Microscopio.
5.4.5. PROCEDIMIENTO
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Identificar la lmina en el extremo esmerilado.
- Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de la
lmina (No ejercer presin para hacer e extendido).
- Dejar secar el extendido a temperatura ambiente.
- Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en forma
horizontal.
- Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada por 20 minutos.
- Eliminar la fucsina tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo hacia
delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que no
hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Decolorar con alcohol cido por 2 minutos.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.
- Cubrir la preparacin con azul de metileno por 1 minuto.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo 40x en busca de estructuras
semejantes a los ooquistes del coccidio. (Anexo 2)
- Identificar con el objetivo de inmersin 100x.
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5.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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6. URIANLISIS
20
6.1.3. MATERIALES:
Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL limpio y seco.
6.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Limpiar cuidadosamente los genitales.
- Descartar el inicio y el final de la miccin; recolectar la orina de la porcin intermedia. (En
el caso de la mujer separar los labios genitales).
- Destapar y depositar la muestra de orina en un frasco plstico, transparente, limpio, de
boca ancha con tapn de rosca y capacidad de 30 a 40 mL.
- Tapar el frasco inmediatamente.
6.1.6. RESPONSABLE:
Paciente con instrucciones previas proporcionadas por el personal de laboratorio.
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6.2.3. MATERIALES:
- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL.
- Bolsa peditrica recolectora de orina.
- Papel toalla.
- Marcador de vidrio.
- Guantes descartables.
6.2.4. PROCEDIMIENTO:
- Verificar que el frasco est bien identificado y completamente tapado.
- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Observar color y aspecto.
- Anotar lo observado.
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6.2.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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6.3.4. PROCEDIMIENTO:
- Identificar el tubo cnico.
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Verter la orina en el tubo cnico.
- Introducir la tira reactiva en la orina.
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente.
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura.
- Anotar los resultados.
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importancia
Valores de referencia:
pH: de 5 a 6.
DENSIDAD: de 1.005 a 1.010 .
LEUCOCITOS: 0 Leucocitos por l .
NITRITOS: Negativo.
PROTENA: 0 mg por dL.
GLUCOSA: 0 mg por dL .
CUERPOS CETNICOS: Negativo.
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6.3.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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6.4.3. MATERIALES:
- Tubos cnicos de 15 mL .
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Marcador para vidrio.
- Gradillas para tubos.
- Guantes descartables.
6.4.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Macrocentrfuga.
- Microscopio.
6.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar durante 5 minutos a 2,500 rpm .
- Descartar el liquido sobrenadante.
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano.
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto.
- Observar la preparacin con el objetivo 10x para lograr una visin general del sedimento.
(Anexo 3)
27
Tiempo transcurrido
microscpica.
desde
la
toma
de
la
muestra
hasta
la
observacin
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Valores de referencia
CLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS: Escasas a moderadas.
CLULAS EPITELIALES REDONDAS: No deben observarse.
GLBULOS ROJOS: No deben observarse.
LEUCOCITOS: .0-5 por campo.
CILINDROS: No deben observarse.
FILAMENTOS MUCOIDES: No deben observarse.
CRISTALES: Podran observarse oxalatos, uratos y fosfatos amorfos de escasa a moderada
cantidad.
LEVADURAS: No deben observarse.
PARSITOS: No deben observarse.
BACTERIAS: Escasas o no presentes.
6.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7. QUMICA CLNICA
30
7.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 - 10 mL. con aguja 21 X 1 o sistema
vaco.
de extraccin al
- Torundas de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Gradilla para tubos.
- Guantes descartables.
7.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando
sangra debe contar con suficiente iluminacin.
etlico al 70% de
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- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm por 10 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.
- Verificar nuevamente la identificacin del paciente.
32
7.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7.2.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora.
34
7.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA
10 L
----------
----------
----------
ESTANDAR
----------
10 L
----------
----------
MUESTRA
----------
----------
10 L
----------
SUERO CONTROL
----------
----------
----------
10 L
REACTIVO
1000 L
1000 L
1000 L
1000 L
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
acuerdo al equipo utilizado.
35
Lectura de muestra
Concentracin=
x 100 (mg/dL)
Factor de calibracin=
Glucosa en mg/dL=
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar inserto incluido en el Set a
utilizar) .
Si la concentracin de glucosa en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+2 con
agua destilada y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por 3.
Valor de referencia:
60 -115 mg/dL
7.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista
36
7.3 COLESTEROL
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA COLESTEROL CON
FACTOR ACLARANTE DE LPIDOS
7.3.1. PRINCIPIO:
El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. En presencia de un
indicador el cual desarrolla el color de acuerdo a la concentracin del colesterol presente en la
muestra.
7.3.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara. con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora con termmetro.
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7.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA
10 L
----------
----------
----------
ESTANDAR
----------
10 L
----------
----------
MUESTRA
----------
----------
10 L
----------
SUERO CONTROL
----------
----------
----------
10 L
REACTIVO
1000 L
1000 L
1000 L
1000 L
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
- acuerdo al equipo utilizado.
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Lectura de muestra
Concentracin=
x 200 (mg/dL)
Colesterol en mg/dL=
La prueba es lineal hasta la concentracin de 750 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin del colesterol en la muestra es superior a estos limites diluir la muestra 1+2 con
solucin fisiolgica y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por 3.
Valor de referencia:
Hasta 200 mg/dL
7.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7.4 TRIGLICRIDOS
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA
TRIGLICRIDOS ACLARANTES DE LPIDOS
7.4.1. PRINCIPIO:
El triglicrido se determina despus de la hidrlisis enzimtica con lipasa. En presencia de un
indicador que desarrolla color de acuerdo a la concentracin del triglicrido presente en la
muestra.
7.4.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara. con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
40
7.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar ,muestra y control normal.
AGUA DESTILADA
ESTANDAR
MUESTRA
SUERO CONTROL
REACTIVO
BLANCO
10 L
---------------------------1000 L
ESTANDAR
---------10 L
------------------1000 L
MUESTRA
------------------10 L
---------1000 L
CONTROL
---------------------------10 L
1000 L
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
acuerdo al equipo utilizado.
41
Lectura de muestra
Concentracin=
x 200 (mg/dL)
Triglicridos en mg/dL=
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin de triglicridos en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+4 con
solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por 5.
Valor de referencia:
Sospechosos > 150 mg/dL.
Elevado > 200 mg/dL.
7.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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7.5.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara. con termmetro.
- Reloj marcador.
43
- Centrfuga.
- Refrigeradora con termmetro.
7.5.5. PROCEDIMIENTO
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabri cante en el cual
estar indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.
AGUA DESTILADA
ESTANDAR
MUESTRA
SUERO CONTROL
REACTIVO
BLANCO
20 L
---------------------------1000 L
ESTANDAR
---------20 L
------------------1000 L
MUESTRA
------------------20 L
---------1000 L
CONTROL
---------------------------20 L
1000 L
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
acuerdo al equipo utilizado.
44
Clculo:
Lectura de muestra
Concentracin=
Lectura del estndar
Se puede calcular usando factor de calibracin:
Valor de referencia:
Hombre:
Mujer:
7.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
45
8. HEMATOLOGA
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8.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.
8.1.3. MATERIALES:
- Torunda de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Capilares heparinizados.
- Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada.
- Lancetas desechables.
- Lminas esmeriladas.
- Guantes descartables.
8.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.
- Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigacin
sangunea.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70%.
- Con lanceta desechable efectuar la puncin limpia y rpida de 2 a 3mm. de profundidad.
- Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodn seco.
- Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.
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8.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.2.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Torundas de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Lminas esmeriladas.
- Torniquete.
- Tubos con anticoagulante 12 x 75 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Gradilla.
- Guantes decartables.
8.2.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo y la lmina adecuadamente.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se
le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de
sangra debe contar con suficiente iluminacin.
49
50
8.2.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
51
8.3.1. PROPSITO:
Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de
la sangre.
8.3.4. PROCEDIMIENTO:
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua.
- Identificar la lmina adecuadamente en el extremo del portaobjeto (parte esmerilada).
- Colocar en el portaobjeto una pequea gota de sangre de 2 mm de dimetro a una
distancia de 2 a 3 mm del extremo del portaobjeto y hacer rpidamente el extendido.
(Anexo 6)
52
- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre conviene realizar
cuando menos dos frotis).
- Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia atrs para
que haga contacto con la gota, que debe extenderse rpidamente.
- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo. (Anexo 6).
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Colocar la preparacin de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no necesita
fijacin previa pues el metanol del Wright fija la preparacin).
- Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo
necesario segn la maduracin del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright, mezclar con
una perilla de hule con suavidad para asegurar una mezcla uniforme, aparecer una
pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5 minutos o el tiempo necesario segn la
maduracin del Wright.
- Lavar la lmina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn
alcohol, para eliminar todos los restos de colorante.
impregnada con
- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en una rejilla
para portaobjeto.
53
8.3.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
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8.4.3. MATERIALES:
- Frotis de sangre coloreado.
- Aceite de inmersin.
- Papel limpia lente.
- Guantes descartables.
8.4.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
- Contmetro diferencial manual.
8.4.5. PROCEDIMIENTO:
- La observacin inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del nmero de
clulas, la distribucin de las mismas y la calidad de la tincin.
- Seleccionar las reas a observar con objetivo de inmersin 100x buscando una distribucin
homognea de las clulas.
- Realizar el recuento diferencial identificando las caractersticas y grado de desarrollo de
las clulas; estos se reportan en porcentajes para lo cual tiene que contarse un mnimo
de 100 leucocitos estos pueden convertirse en nmero de clulas por mm (nmero
absoluto).
- Observar en los eritrocitos: el tamao, la forma, la reaccin de coloracin, las inclusiones
intracitoplasmticas y la presencia del ncleo (eritroblastos).
55
Valores de referencia:
LEUCOCITOS
ADULTOS
NEUTRFILOS SEGMENTADOS
20 45 %
60 70 %
NEUTRFILOS EN BANDA
04%
26%
LINFOCITOS
40 60 %
15 40 %
EOSINFILOS
15%
14%
BASFILOS
01%
01%
MONOCITOS
28%
28%
Las cifras de Leucocitos tambin pueden expresarse en valores absolutos, aplicando la siguiente
formula:
Glbulos Blancos.
N:
Neutrfilos.
L:
Linfocitos.
B:
Basfilos.
M:
Monocitos.
E.
Eosinfilos.
56
Esto nos dar como resultado el valor absoluto de leucocitos por milmetro cbico, donde la suma
es igual al recuento del total de los leucocitos.
8.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
57
8.5.3. MATERIALES:
- Aceite de inmersin.
- Papel limpia lente.
8.5.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
8.5.5. PROCEDIMIENTO:
Cada tcnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el
recuento diferencial. Debe formar el hbito de verificar los puntos siguientes.
ERITROCITOS:
- Tamao: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variacin en tamao se
reduce al trmino de anisocitosis.
- Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos,
equinocitos etc. El grado de variacin en forma se reduce al trmino de poiquilocitosis.
- Concentracin de hemoglobina: Grado importante de hipocroma, e hipercroma
aparente, observar el aumento aparente o evidente de la proporcin de glbulos rojos
policromticos.
- Otros hallazgos anormales: La policromatofilia (basfilia difusa), punteado basfilo, anillo
de Cabot, cuerpos de Howell-Joly, etritroblastos, las clulas parasitadas y la formacin de
Rouleaux.
58
LEUCOCITOS:
- Observar la madurez de los leucocitos, el nmero promedio, anormalidades morfolgicas,
signos de malignidad, la variante de leucocitos que predominan.
- Comparar el recuento de leucocitos por milmetro cbico con lo observado en el frotis.
PLAQUETAS:
- Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho
plaquetas por cien glbulos rojos). La disminucin de las plaquetas en un frotis puede
deberse a la manera de realizarlo, pero su falta o su disminucin considerable, en un frotis
bien hecho pueden hacer sospechar de trombocitopenia. Debe observarse si las plaquetas
que se encuentran parecen normales o existen muchas formas gigantes (macroplaquetas)
o notablemente pequeas.
- Comparar el recuento de plaquetas por milmetro cbico con lo observado en el frotis.
59
LNEA BLANCA:
- Madurez de los leucocitos.
- Variante de leucocitos que predomina.
- Alteraciones encontradas en los leucocitos.
LNEA PLAQUETARIA:
- Cantidad.
- Tamao: macro o micro plaquetas.
Valores de referencia:
Eritrocitos normocrmicos.
Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades.
Plaquetas distribucin y tamao normal, comparar los observado en recuento con mm .
8.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
60
8.6. HEMATOCRITO
8.6.1. PROPSITO:
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre como
una fraccin del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no anemia.
8.6.3. MATERIALES:
- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados.
- Plastilina.
- Lector de hematocrito.
8.6.4. EQUIPO:
- Micro centrfuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.
8.6.5. PROCEDIMIENTO:
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante accin capilar, ya sea por una puncin que
hace que la sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos capilares
deben estar llenos en dos terceras partes.
- El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo.
- Colocar el capilar sellado en una centrfuga para el micro hematocrito, con el extremo
abierto hacia el centro de la microcentrfuga.
- Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos.
- Despus de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco
del plasma con el final de la marca de la tabla y el fondo del empacado de eritrocitos que
coincidan con el inicio de la marca de la tabla.
- Leer siempre en la direccin de la numeracin ascendente cuantos mL de empacados de
eritrocitos tiene la muestra.
61
Valores de referencia:
Hombre:
42%-51%
Mujer:
38%-42%
Nios:
33%-38%
Recin nacidos:
Hasta 55%
RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
62
8.7. HEMOGLOBINA
MTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA
8.7.1. PROPSITO:
Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este mtodo consiste en efectuar una dilucin
exacta de sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la
hemoglobina en cianametahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solucin patrn
de cianametahemoglobina de concentracin exacta y estable.
8.7.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Mezclador mecnico (opcional).
63
Reloj marcador.
8.7.5. PROCEDIMIENTO:
- Hacer una serie de tres tubos con el estndar de hemoglobina para calcular el factor de
calibracin.
- Colocar al primer tubo 5 mL de estndar puro.
- Colocar al segundo tubo 2.5 mL de estndar puro.
- Colocar al tercer tubo 1 mL de estndar puro.
- Llevar al volumen de 5 mL con cianametahemoglobina el segundo y tercer tubo.
- Mezclar y dejar reposar 10 minutos.
- Leerlos en espectrofotmetro a 540 nm y anotar la densidad ptica de los tubos.
- Obtener la concentracin de cada tubo en gramos por decilitros.
- Dividir la concentracin de cada tubo entre la densidad ptica.
- Sumar los 3 factores y sacar un promedio.
- Este ser el factor de calibracin por el cual se multiplicarn las densidades pticas de las
muestras. (Anexo 7)
- La preparacin de la cianametahemoglobina estar sujeto a las indicaciones del fabricante
del reactivo.
- Medir exactamente 5 mL solucin de cianametahemoglobina en un tubo de 13x100 mm.
- Con pipeta automtica colocar 20 microlitos de sangre.
- Mezclar bien y dejar reposar por 10 minutos.
- Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotmetro a 540 nm.
64
- Coagulacin de la muestra.
- Sangre hiperlipmica (afecta el color)
- Numero alto de glbulos blancos por mm. cbico.
- Calibracin incorrecta.
- Reactivo expuesto a la luz.
14.0-17.0 gr/dL
Mujer:
12.5-15.0 gr/dL
Nios:
11.0-13.0 gr/dL
Recin nacidos:
Hasta 18 gr/dL
8.7.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
65
8.8.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Agitador.
66
67
Clculos:
- Cuando la dilucin es 1:20 el numero de leucocitos contados en las dos reas primarias
opuestas de la cmara se multiplica x 100 = N de leucocitos/mm, y se multiplicar por
50 si se cuentan 4 rea primarias.
- Cuando la dilucin es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, ser 50 si se
cuentan dos reas primarias opuestas y ser 25 si se cuentan 4 reas primarias.
- Cuando la dilucin es 1:200 y se cuenta toda el rea central, el factor ser 2,000.
Cuando en una frmula diferencial se obtienen ms de 10 eritroblastos por 100 clulas
blancas contadas, se har la siguiente correccin, debido a que el lquido de dilucin de
los leucocitos no destruye el ncleo de los eritroblastos y cuando se efecta el recuento se
cuenta como si fueran leucocitos.
Correccin
= N leucocitos verdaderos
Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180 clulas
nucleadas, luego de 180 clulas Nucleadas 80 son eritroblastos, en el nmero de leucocitos
contados se obtendr una cantidad X de eritroblastos.
Valores de referencia:
Adultos:
5,000-10,000 x mm
Nios:
5,000-12,000 x mm
Recin nacidos:
10,000-30,000 x mm
8.8.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
68
8.9.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Reloj marcador.
69
70
Valores de referencia:
150,000-450,000/mm
8.9.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
71
8.10.4. EQUIPO:
- Contmetro.
- Microscopio.
8.10.5. PROCEDIMIENTO:
- Colocar la lmina coloreada en la platina del microscopio.
- Observar con el objetivo 40x.
- Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina coloreada.
- Observar con el objetivo 100x.
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos
deben contener aproximadamente 100 glbulos rojos).
72
Estimado de plaquetas mm =
8.10.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
73
8.11.2. MUESTRA:
Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
8.11.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Bao de Mara o estufa a 37 C.
- Contmetro manual.
8.11.5. PROCEDIMIENTO:
- Verter un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo
12x75 mm.
- Mezclar bien e incubar a 37C o a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar.
- Leer al microscopio con objetivo de inmersin.
74
Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos
observados.
% Reticulocitos =
10
Valores de referencia:
Adultos:
0.5% - 1.5%
Recin nacidos:
2.5% - 6.5%
8.11.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
75
8.12.3. MATERIALES:
- Agujas Wintrobe.
- Tubos Wintrobe.
- Soporte para tubos de sedimentacin.
- Guantes descartables.
8.12.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
8.12.5. PROCEDIMIENTO:
- Mezclar la muestra de sangre.
- Llenar un tubo de Wintrobe hasta la seal cero, introduciendo cuidadosamente la aguja de
Wintrobe adaptada a una jeringa, conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuidar de
que no formen burbujas.
- Colocar en el soporte, en posicin perfectamente vertical durante 1 hora.
- A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numrico en mm, midiendo la distancia
que hay entre el punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del
sedimento de glbulos rojos; los mm, ledos corresponden a la velocidad de sedimentacin
por hora.
76
Toda eritrosedimentacin con hematocrito menor de 40%, se corregir usando la tabla de correccin
de la manera siguiente:
- Llevar valores de hematocrito y sedimentacin a la tabla de correccin.
- Tome el punto dnde se interceptan ambos, este punto caer sobre una de las lneas
curvas de dicha tabla, la que deber seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de
intercepcin con la lnea negra mas gruesa, que corresponde al valor de hematocrito de
40%.
- Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentacin corregida, este valor es el que
se deber reportar.
Hombres:
0-15 mm/h
0-7 mm/h
Nios:
0-20 mm/h
Recin nacidos:
0-2 mm/h
8.12.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
77
8.13.2. MUESTRA:
Sangre capilar del dedo o del lbulo de la oreja.
8.13.3. MATERIALES:
- Lanceta descartable estril.
- Papel filtro.
- Torundas de algodn humedecidas con alcohol.
- Guantes descartables.
8.13.4. EQUIPO:
- Cronmetro.
8.13.5. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
- Puncionar el dedo ndice a modo que corte transversalmente la direccin de las huellas
digitales, o el lbulo de la oreja.
- Secar con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangramiento.
- Realizar el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel.
- Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.
78
8.13.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
79
8.14.2. MUESTRA:
Sangre venosa.
8.14.3. MATERIALES:
- Jeringas descartables.
- Tubos 12x75mm.
- Torundas de algodn.
- Gradillas para tubos.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torniquete.
- Guantes descartables.
8.14.4. EQUIPO:
- Bao de Mara a 37C.
- Reloj marcador.
- Termmetro.
8.14.5. PROCEDIMIENTOS:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
80
Valores de referencia:
5-10 minutos.
8.14.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
81
8.15.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Microscopio.
- Reloj marcador.
82
8.15.5. PROCEDIMIENTO:
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
- Extraer 5 10 mL de sangre venosa. Dejar que la sangre se coagule y que el cogulo
se retraiga espontneamente (si se toma sin anticoagulante); o centrifugar la sangre con
anticoagulante.
- Decantar el suero o plasma as obtenido a un tubo de centrfuga.
- Centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos, para separa los glbulos rojos.
- Centrifugar sobrenadante a 3000 rpm por 1 minuto.
- Observar el sedimento entre porta y cubreobjeto con objetivo 10x y 40x, buscando formas
mviles.
- Siempre que una prueba resulte positiva hacer lmina (gota gruesa o frotis) coloreada por
Giemsa o Wright para enviar a control de calidad al Laboratorio Central.
- Es aconsejable examinar de 3 a 4 preparaciones para mayor sensibilidad del examen.
- Si en la preparacin se obtiene un resultado negativo, repetir el examen por segunda vez,
si esta resultara negativa nuevamente se realizar una tercera prueba, este muestreo
se realizar con intervalos de 5 das.
8.15.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
83
84
9. INMUNOLOGA
85
9.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Torundas de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Gradilla para tubos.
- Guantes descartables.
9.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de
sangra debe contar con suficiente iluminacin.
- Seleccionar la vena apropiada para la puncin.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol
adentro hacia fuera.
86
etlico al 70% de
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm po 10 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.
- Verificar nuevamente la identificacin del paciente.
87
anlisis qumico a
- Separacin inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
- Centrifugacin inadecuada de la muestra.
9.1.6. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
88
89
9.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Rotador serolgico de 100 rpm.
- Macrocentrfuga.
- Micropipeta automtica regulable.
9.2.5. PROCEDIMIENTO:
Prueba cualitativa:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Identificar los sueros y crculos de la tarjeta o lmina de reaccin.
- Depositar en cada crculo de la tarjeta lmina, 50 uL. de los sueros en estudio y
controles positivo y negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el
volumen sea exacto.
- Extender el suero sobre la superficie del crculo con el extremo opuesto del dispensador.
- Homogenizar el antgeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero.
- Colocar la tarjeta en el rotador serolgico y cubrirla con la cmara hmeda.
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba cualitativa que presente aglutinacin se debe hacer prueba semicuantitativa.
Prueba semicuantitativa:
- En cinco crculos poner con el dispensador una gota (50 L) de solucin salina 0.85 %, no
extender.
- Depositar con el dispensador en el primer crculo 50 L de suero, mezclar aspirando
y expeliendo 3 a 6 veces, evitando la formacin de burbujas.
90
- A partir de esta mezcla que constituye la dilucin 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en
base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L; descartar los 50
L de la ltima dilucin. (Anexo 5)
Crculos
Diluciones
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
- Extender las gotas por la superficie del crculo, utilizando un mezclador e iniciando por la
dilucin ms alta.
- Colocar en cada crculo una gota (16 L) de antgeno bien homogenizado, no agitar
violentamente.
- Colocar las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba que de una reaccin de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.
Prueba cuantitativa:
- En un tubo colocar 1.5 mL de solucin salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituye
una dilucin 1:16)
- A partir de la dilucin 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando
sucesivamente de un crculo a otro 50 L. (Anexo 5)
91
Crculos
10
Diluciones
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512
la periferia del
9.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
92
9.3.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Pipeta automtica de volumen variable.
- Reloj marcador.
93
9.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Llevar a temperatura ambiente las tiras reactivas a utilizar.
- Preparar el protocolo de trabajo.
- Cortar la lnea de puntos de la bolsa para retirar las tiras reactivas.
- Retirar el plstico de proteccin de cada tira.
- Identificar las tiras reactivas a utilizar.
- Dispensar 50 L de suero con una pipeta automtica sobre la superficie absorbente.
(sealada con una flecha)
- Esperar un mnimo de 15 minutos y un mximo de 60 minutos.
- Leer el resultado.
- Observar el rea de reaccin.
94
INDETERMINADO:
Presenta barra tenue en la ventana del rea de reaccin del paciente y barra roja en la
ventana del control.
NO REACTIVO A LA FECHA:
Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana
del resultado del paciente.
REACCIN NO VLIDA:
No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta
prueba debe repetirse.
No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero s en la ventana del paciente,
esta prueba debe repetirse.
9.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
95
96
9.4.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
- Pipetas automticas.
- Rotador serolgico.
9.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Prueba cualitativa:
- Mezclar las suspensiones cuidadosamente antes de su uso.
- Colocar una gota de muestra en los 6 crculos y una gota de cada control positivo y
negativo en su respectivo crculo.
- Colocar sobre cada muestra o control una gota de reactivo.
- Mezclar con palillos descartables por separado y esparcir el lquido sobre el rea completa
de cada crculo.
- Colocar la lmina en un rotador a 100 rpm durante 1 minuto.
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin.
Prueba semicuantitativa:
- En caso de obtener resultados positivos hacer determinacin semicuantitativa en lmina:
- Colocar en seis tubos 100 L. de solucin salina 0.85% y adicionar en el primer tubo 100
L de muestra.
- Hacer diluciones seriadas en base a 2 en los siguientes tubos, de modo de obtener las
siguientes diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y 1:64.
- Continuar el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada
dilucin como muestra.
97
9.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
98
9.5.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
99
- Pipetas automticas.
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
9.5.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar previamente los tubos.
- Depositar 2-3 gotas de sangre en un tubo.
- Realizar 3 veces el lavado de clulas de la siguiente manera:
a) Agregar 1 mL de solucin salina 0.85%.
b) Mezclar y llenar con solucin salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
c) Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm .
d) Descartar toda la solucin salina quedando en el fondo un paquete de glbulos
rojos.
- Preparar una suspensin al 5%, colocando una gota de los glbulos rojos lavados y 19
gotas de solucin salina y mezclar.
- Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar
una gota de glbulos rojos al 5%.
- Depositar los antisueros respectivos:
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm .
- Leer la presencia o ausencia de aglutinacin agitando suavemente los tubos.
100
Grupo B:
Grupo O:
Grupo AB:
9.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
101
9.6.4. EQUIPO:
- Bao de Mara.
- Centrfuga.
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
9.6.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar dos tubos
- En el tubo 1: colocar una gota de suero anti D y agregar una gota de suspensin de
eritrocitos al 5% a estudiar.
102
- Mezclar suavemente.
- En el tubo 2 (control): colocar una gota de albmina bovina y agregar
suspensin de eritrocitos al 5% a estudiar.
una gota de
- Mezclar suavemente.
- Centrifugar ambos tubos a 3400 rpm por 15 segundos.
- Desprender suavemente el botn de clulas del fondo del tubo.
- Observar presencia o ausencia de aglutinacin frente a la luz de una lmpara.
- Si no se observa aglutinacin se incuban los tubos a 37C por 15 minutos.
- Lavar los glbulos rojos de ambos tubos cuatro veces llenndolos con solucin salina al
0.85%.
- Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm cada vez y descartar la solucin despus de cada
lavada.
- Agregar a cada tubo 2 gotas de suero Coombs.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm.
- Leer frente a la luz de una lmpara y buscar aglutinacin tratando de desprender suavemente
el botn de clulas.
- Observar aglutinacin.
103
9.6.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
104
9.7.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Rotador serolgico.
105
- Lmpara de luz.
- Reloj marcador.
9.7.5. PROCEDIMIENTO:
- La muestras de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras.
- Identificar correctamente lmina o tarjeta.
- Sobre cada crculo de lmina o tarjeta depositar 100 L de muestras a analizar e incluir
un control Positivo y un negativo por cada
tiraje.
- Homogenizar suavemente el reactivo de Ltex antes de usar.
- Depositar una gota de reactivo de Ltex sobre cada una de las muestras y los controles.
- Mezclar con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensin por
toda la superficie interior del crculo
- Emplear un dispensador distinto para cada muestra.
- Colocar la tarjeta o lmina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos.
- Examinar macroscpicamente bajo una fuente de luz la presencia o ausencia de aglutinacin
inmediatamente despus de retirar del agitador.
106
9.7.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
107
10. MICROBIOLOGA
BSICA
108
10.1.4. EQUIPO:
Mechero.
10.1.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina porta objeto.
- Extender en el centro de una lmina portaobjeto una porcin de la muestra con asa o
aplicador de madera en forma de capa fina, trazando una espiral del centro a la periferia.
- Dejar secar completamente al aire libre.
- Fijar al calor.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero, tres veces en forma
horizontal con la muestra hacia arriba.
109
- Dejar enfriar.
- Aplicar coloracin que corresponda, segn agente a investigar.
10.1.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
110
10.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Microscopio.
111
10.2.5. PROCEDIMIENTO:
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Colocar los frotis a colorear en la bandeja o soporte de coloracin.
- Cubrir el frotis completamente con Cristal Violeta, durante un
minuto.
Gramnegativa falsa
- Tiempo insuficiente con Lugol.
- Tiempo prolongado con alcohol Acetona o lavado incompleto.
112
Violeta.
10.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
113
10.3.4. EQUIPO:
- Microscopio.
10.3.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Colocar una gota en el portaobjeto y cubrir con laminilla cubre objeto, con el cuidado de
no formar burbujas de aire.
- Examinar toda la preparacin al fresco en el microscopio con objetivo 10x.
114
10.3.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
115
10.4.4. EQUIPO:
- Microscopio.
116
10.4.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los
procedimientos de: Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram de
este manual, pginas 109 112.
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de Lactobacilos,
mobiluncos, o gardnerella.
- Reportar lo observado.
10.4.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
117
10.5.4. EQUIPO:
- Microscopio.
118
10.5.5. PROCEDIMIENTO:
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Tomar la muestra aplicando una ligera presin en el pene de atrs hacia delante de
manera que salga una gota de pus por el meato, la cual ser recibida en una lmina
portaobjeto.
- Cuando la muestra es demasiada espesa, agregar una gota de solucin salina estril
0.85%.
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los
procedimientos de: Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram de
este manual, pginas 109 112.
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de
Diplococos gramnegativos de forma arrionadas, tanto intracelulares (leucocitos) como
extracelulares.
- Prestar especial atencin a las orillas del frotis donde los elementos se extienden en una
capa ms delgada, son ms fciles de reconocer y la tincin es menos concentrada.
- Reportar lo observado.
DIPLOCOCOS
GRAMNEGATIVOS
EN
LA
PRESENTE
10.5.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
119
120
ste manual ser revisado y actualizado al menos cada 5 aos, o antes cuando sea
necesario un cambio en las metodologas. La revisin estar a cargo de un equipo
tcnico multidisciplinario, el cual enriquecer con nuevos aportes e integrar los conocimientos y
experiencias en el rea.
121
anticuerpo especfico que se hace visible mediante el ltex o partculas de carbn o eritrocitos.
Anticoagulante: Sustancia que demora o suprime la coagulacin de la sangre.
Antgeno: Cualquier sustancia inmunizante que habiendo sido inoculado en un organismo de
persona o animal, ocasiona la produccin y liberacin de anticuerpos especficos.
Asepsia: Mtodo de prevenir las infecciones mediante la destruccin de los agentes infectivos.
Basofilia: Consiste en un incremento del valor normal de los basfilos.
Bioseguridad: Es el conjunto de lineamientos y regulaciones para prevenir, eliminar o reducir
cualquier riesgo potencial en las personas, la comunidad y el medio ambiente.
Calibracin: Establecer con exactitud la correspondencia entre las indicaciones de un instrumento
de medida y los valores de la magnitud que se mide con l.
Cardiolipina: Extracto alcohlico de corazn de buey.
Clulas epiteliales: Clulas superficiales que protegen las cavidades internas y la superficie externa
del cuerpo.
Cbalos: Pequea bolas de heces resecas.
Cilindros urinarios: Aglomerados de protenas de estructura tubular que se forman durante las
enfermedades de los tbulos renales, pueden contener en su matriz eritrocitos, otras clulas y
depsitos de sustancias qumicas.
Coagulacin: Proceso de formacin de la sangre en una masa gelatinosa.
Cogulo: La conversin del fibringeno en una red de molculas de fibrina polimerizada, que
transforma la sangre en una masa gelatinosa.
Codocito: Glbulo rojo que presenta condensacin en el centro.
Concentracin: Es la relacin entre la cantidad de soluto y la cantidad de solvente o solucin.
Cristales urinarios: Formas geomtricas de diferentes sustancias qumicas que se cristalizan en la
orina dependiendo del pH de esta.
Densidad ptica: Cantidad de luz absorbida por una sustancia que puede ser medida por un
espectrofotmetro.
122
123
Hidrlisis: Adicin de agua a una sustancia, con descomposicin de esta en otras ms sencillas.
Hifa: Hongo de estructura larga filamentosa en forma de tubo.
Hiperlipmica: Aumento de la concentracin de lpidos en sangre.
Imprecisin: Mediciones que siendo realizadas en las mismas condiciones dan diferentes
resultados.
Inoculacin: Introduccin de microorganismos, material infecciosos, etc. en un ser vivo o en
cultivos.
Linfocitos: Clulas mononucleadas; con ncleo nico que sirven de defensa, se dividen en Linfocitos
B y Linfocitos T.
Litro: Volumen ocupado por la masa de un kilogramo de agua pura a 4 C.
Longitud de onda: Distancia entre una cresta a otra en el espectro de luz.
Megalocito: Glbulo rojo con tamao mayor de lo normal (15 a 22 micras).
Micelio: Masa de hifas.
Monocito: clula del sistema retculo-endotelial presente en la sangre normal con carcter
fagoctico.
Mononucleares: Leucocito que posee un solo ncleo simple, como el linfocito y el monocito.
Morfologa bacteriana: Forma de los microorganismos.
Neutrfilo: Tipo de leucocito caracterizado por citoplasma granuloso que se tie fcilmente con los
colorantes cidos o bsicos.
Neutropenia: Disminucin del nmero absoluto de neutrfilos por debajo de los valores normales.
Oncosfera: Parte interna del huevo de Taenia la cual contiene el embrin.
Ooquiste: Quiste que contiene el huevo o cigote.
Plaquetas: elementos formes mas pequeos de la sangre, actan en la hemostasia y el mantenimiento
de la integridad vascular, participan en el proceso de coagulacin.
Plaquetopenia: disminucin del nmero de plaquetas por debajo del valor normal.
Plasma: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre con anticoagulante
del paquete globular, contiene fibringeno y componentes de la coagulacin neutralizados.
Polimorfonucleares: Son leucocitos granulocitos segmentados y se dividen en neutrfilos, eosinfilos
y basfilos.
124
Procedimiento: Serie de pasos en forma cronolgica, por los cuales se logra un resultado
deseado.
Pseudohifas: Hongo de tipo de levadura que presenta una extensin tubular de protoplasma que
difiere de las hifas porque continan con la clula madre.
Quiste: Forma resistente de los protozoos los cuales se rodean de una membrana dura e
impermeable.
Reaccin colorimtrica: Reaccin qumica que tiene como producto final un compuesto de color.
Reaccin enzimtica: Reaccin qumica que tiene por catalizador una enzima.
Reticulocitos: Glbulos rojos juveniles con restos de acido ribonucleico y ribosomas.
Riesgo: Posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud, puede ser causado por
accidente, enfermedades u otros.
Rouleaux: Glbulo rojo que se aglomeran como pilas de monedas.
Secrecin: Sustancia que se vierten al exterior de una clula.
Suero: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre sin anticoagulante
del paquete globular.
Tipocroma: Glbulo rojo con un halo mayor en el centro que lo normal (baja de hemoglobina).
Trofozoto: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
Trombocitopenia: disminucin del nmero de plaquetas circulantes.
Valores de referencia: Valores considerados normales.
125
13. ABREVIATURAS
126
14. Anexos
127
Preparacin:
- Pesar 10 gr de yodo en cristales.
- Pesar 20 gr de yoduro de potasio.
- Mezclar y disolver poco a poco con agua destilada.
- Completar a 1 litro con agua destilada.
- Guardar en garrafa color mbar con nombre y fecha de
preparacin.
Este colorante hace resaltar algunas estructuras, como los ncleos de
los protozoarios y da una coloracin caf a los huevos y larvas de los
metazoarios.
128
Trofozoito de E. hartmanni.
Izquierda: tincin tricrmica.
Derecha: hematoxilina-hierro.
129
130
Los huevos de Ancylostoma presentes en las heces presentan una tpica forma de tonel con
una fina cubierta hialina; miden 60-75 um por 36-40 um. Por lo general, se encuentran en la fase
cuatro o de ocho clulas en las heces frescas o en una fase ms avanzada de divisin en las que
han permanecido a la temperatura ambiente durante algn tiempo, incluso durante horas.
131
132
Oxalato de Calcio
Cilindro
133
Anexo 4 Mediciones.
Sistema mtrico decimal: El sistema mtrico decimal, con el cual usted puede estar familiarizado, es
un sistema decimal que tiene relaciones numricas simples entre sus unidades.
Unidades del sistema mtrico: El sistema mtrico incluye medidas de longitud, capacidad y masa. La
unidad bsica de la longitud es el metro (m), de la capacidad es el litro (L) y de la masa el kilogramo
(Kg). Prefijos latinos son usados para identificar valores mltiples descendentes, ejemplo: deci
(0.1), centi (0.01), etc. Prefijos griegos son usados para identificar valores mltiples ascendentes,
ejemplo: deca (10), hecto (100), etc.
Prefijos comunes:
PREFIJO SMBOLO
Tera
T
Giga
G
Mega
M
Kilo
K
Hecto
H
Deca
da
Deci
D
centi
C
Mili
M
micro
nano
N
Pico
P
femto
F
Atto
A
134
FACTOR
10 12
10 9
10 6
10 3
10 2
10 1
10 -1
10 -2
10 -3
10 -6
10 -9
10 -12
10 -15
10 -18
Longitud:
10 milmetros (mm)
100 centmetros
1000 metros
1 centmetro (cm.)
1 metro (m)
1 kilmetro (Km.)
Capacidad:
1000 mililitros
1000 litros
1 litro
1 kilolitro (Kl.)
Masa:
1000 miligramos
1000 gramos
1 gramo (gr.)
1 kilogramo (Kg)
135
Anexo 5 - Diluciones
como agua, la cual no contiene nada de soluto, a una solucin. Las diluciones
generalmente se expresan como una unidad de la solucin original en un nmero total
de unidades de solucin final. As, una dilucin 1:10, se hace tomando una unidad de la
solucin concentrada que ser diluida a un volumen total de 10 unidades. Esto produce
una solucin que tiene una concentracin igual a 1/10 de la concentracin original.
Aunque las diluciones generalmente se escriben 1:10, 1:50, etc. quiz sera mas fcil
entender si las diluciones se expresaran como fracciones, tal como 1/10, 1/25, etc.
Para calcular la concentracin de solucin diluida, se multiplica la dilucin por la
concentracin de la solucin original.
Ejemplo: Una solucin al 10% se diluye 1: 5, la concentracin de la solucin resultante es
igual a 10% x 1/5 = 2% .
Cualquier expresin de dilucin se puede tratar como una simple fraccin, y el numerador
y el denominador pueden ser multiplicados por un nmero. Ejemplo: si 500 mL de una
dilucin 1:5 de una solucin cualquiera se tiene que preparar, el razonamiento matemtico
es como sigue: 1/1 x 1/5 = 1/5
Grandes diluciones que pueden ser muy difciles de llevar a cabo en una sola operacin
se pueden realizar haciendo ms de una dilucin.
Por ejemplo: no se puede utilizar ms de 10 litros de diluyente para hacer una dilucin de
1:10,000, as como ocupar un frasco volumtrico de 10 litros, o el reducir la cantidad de
solucin concentrada en una fraccin de mL, puede introducir un gran error en la dilucin.
La mejor alternativa es la de usar una serie de dos o mas diluciones. Cualquier nmero de
diluciones diferentes puede usarse, el nico requisito es que cuando estas se multiplican
136
137
Extensor
138
FACTOR =
Standard
Lectura
La dilucin de la sangre es 1/251 por que se toman 0.02 ml de sangre en 5 mL de solucin diluyente
o sea que hay 0.02 ml de sangre en 5.02 de solucin.
0.02 mL de sangre ---------------- 5.02 sangre en solucin diluyente
1mL ---------------- X
X=
1 mL X 5.02 mL
0.02
g%
5.2208
2.6106
1.0441
----
Factor
0.071
0.079
0.074
-------
139
2)
5.2208 = 2.6104 g%
2
3)
5.2208 = 1.044 g%
5
Estndares
1.
2.
3.
puro
2.5 ml
1.0 ml
Lectura
73
33
14
Concentracin g%
5.2208
2.6104
1.0441
140
Factor
0.071
0.079
0.074
Adicionar 0,1 mL
de solucin diluyente
141
INFECCIOSAS
- Mononucleosis infecciosa.
- Hepatitis infecciosa.
- Sarampin.
- Varicela.
- Ricketsia.
- Tifus.
- Micoplasma.
- Neumona primaria atpica.
- Bacterias.
- Lepra.
- Fiebre escarlatina.
- Tuberculosis (avanzada).
- Neumona neumoccica.
- Protozoos.
- Tripanosomiasis.
NO INFECCIOSAS
- Lupus eritematoso.
- Artritis reumatoidea.
- Embarazo.
- Narcoadiccin.
142
REACTIVO
RESPONSABLE:___________________
FECHA DE VENC.:____________
TCNICA:_________________________
LOTE:_______________________
FECHA DE REALIZACIN:___________
MARCA:_____________________
143
144
15. BIBLIOGRAFA
Angel G. y Angel M. Interpretacin clnica de laboratorios, quinta edicin, Colombia, 1996.
Botero, D. y Restrepo, M. Parasitosis humanas, Tercera Edicin, Medelln Colombia, 1998.
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parsitos intestinales del hombre. Tcnica No. 37, Lima, Per 2003.
Kahleen Morrison Treseler. Laboratorio Clnico y pruebas de diagnstico, manual modernos, primera
edicin, Mxico, 1998.
Lynch, M. J. Mtodos de Laboratorio, Segunda Edicin, Ao 1988.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Coproparasitologa, primera edicin, El Salvador,
ao 1995.
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por Microscopa Directa, Segunda Edicin, El Salvador, 2005.
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2000.
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VIH, Primera Edicin, El Salvador, 2005.
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segunda edicin, ao 1983.
Ruiz Torres. Diccionario de Trminos Mdicos, Sptima Edicin, Ao 1992.
Tood Sanford & Savid Sohn. El Laboratorio en el diagnostico clnico, primera edicin, 2006.
145