Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Manual - de - Practicas - de - Quimi Analitica II PDF
Manual - de - Practicas - de - Quimi Analitica II PDF
de qumica analtica II
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Manual de prcticas de
qumica analtica II
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
UNIDAD IZTAPALAPA
Dr. Luis Mier y Tern Casanueva
Rector
Dr. Eduardo Carrillo Hoyo
Secretario
Dr. Jos Luis Arredondo Figueroa
Director de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud
Dr. Gerardo Saucedo
Jefe del Departamento de Biotecnologa
Ma. del Rosario Hoyos Alea
Jefa de la Seccin de Produccin Editorial
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Manual de prcticas de
qumica analtica II
guc i
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
ndice
Presentacin
Captulo 1. CROMATOGRAFA DE GASES
9
11
33
37
Bibliografa
40
43
63
74
Captulo 3. ESPECTROFOTOMETR A
75
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA
77
85
91
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
II. TURBIDIMETRA
95
97
Bibliografa
101
103
113
117
Bibliografa
125
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Presentacin
Los autores
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Captulo 1
CROMATOGRAFA DE GASES
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Introduccin
Este captulo tiene como objetivo mostrar al alumno los fundamentos prcticos
de la cromatografa de gases: cmo funciona un cromatgrafo con detector de
conductividad trmica y cmo se obtiene e interpreta el cromatograma, incluyendo una explicacin sobre los clculos para cuantificar muestras a partir
de compuestos puros.
La cromatografa de gases es la tcnica ms utilizada entre los mtodos
instrumentales de separacin, ya que identifica de manera sencilla y rpida el
nmero de componentes de una mezcla. El nico requisito para su implementacin es que las sustancias a separar sean estables a la temperatura necesaria para mantenerlas en estado gaseoso (Ewing, 1979).
Clasificacin de la cromatografa
Por sus caractersticas analticas la cromatografa puede ser:
a)
b)
Cromatografa gas slido (CGS), tambin conocida como cromatografa de adsorcin, en donde la fase estacionaria cuenta con un
material slido como el slice granular, la almina o el carbn. El soluto
se adsorbe en la superficie de las partculas slidas. Las separaciones se
llevan a cabo sobre adsorbentes, debido a que se crea un equilibrio
entre el adsorbente y las molculas de la fase mvil. Si las molculas de
un componente estn estrechamente ligadas al adsorbente, la sustancia
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Soluto absorbido en la
superficie de la fase
estacionaria
La tabla siguiente muestra algunos ejemplos de columnas capilares comerciales, utilizadas en cromatografa gas slido, mencionando su aplicacin
y la temperatura mxima de trabajo.
Aplicacin
HPSoM
200 C
Poraplot Q
250 C
Alcoholes voltiles en
agua,gases
Poraplot U
190C
Columna
HP Hewlett Packard
Columnas capilares, soporte; A12O3
14
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
b)
15
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
16
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
17
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Descripcin
Polaridad*
Temperatura
Iquido/C
Escualeno
Escualeno
20/100
Apienzon L
Apienzon L
50/300
SE-30
50/300
OV-1
50/300
UCW-982
II
0/300
DC-200
II
0/250
OV-101
II
0/350
SP-2100
II
0/350
SE-52 0 SE-54
fenilo al 5%
II
50/300
Dexsii 300
II
50/450
OV-17
II
0/375
OV-25
III
0/350
OV-210
3,3,3-trifluoropropilo al 50%
III
0/275
Carbowax20M
polietilen glicol
IV
60/225
Carbowax20M
TPA
IV
60/250
Carbowax1500
polietilen glicol
IV
40/200
SilariOC
IV
0/250
18
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
19
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
ct*
Nitrgeno
5.81
Helio
34.80
Argn
3.98
co2
13.52
Hidrgeno
41.60
Oxgeno
5.89
CO
5.63
Metano
7.21
Propano
3.58
n-Butano
3.22
tanol
3.50
Acetona
2.37
Cloroformo
1.58
Clculos en cromatografa
Con los datos de un cromatograma es posible realizar una serie de clculos
sencillos para conocer parmetros como la eficiencia de la columna, adems,
si aplicamos tcnicas de estndares se puede conocer tambin la concentracin
de muestras problema. A continuacin se desarrollan los clculos ms comunes
y tiles en cromatografa.
20
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
21
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
tr o vr
Respuesta
del.
Punto de inflexin
(parte ms
inclinada de la
curva)
detector
j
/
/
tiempo o volumen
t =0
inyeccin
b*h
A = rea
h = altura
b = longitud de la base
22
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
Clculo de la resolucin
Mide la separacin entre componentes. La figura 1.4 indica la manera de medir
los parmetros:
ECUACIN DE RESOLUCIN
-V
V
23
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Anlisis cuantitativo
Existen diversos mtodos para el clculo de concentraciones en un sistema
cromatogrfico. Los hay sencillos, pero poco confiables, pues no utilizan ninguna
sustancia de referencia, y los hay ms elaborados con un mayor grado de
confiabilidad. Estos mtodos son:
1.
2.
3.
4.
Normalizacin
Calibracin absoluta
Estndar interno
Estndar externo
Calibracin absoluta
Consiste en inyectar en la columna una cantidad conocida de sustancia pura
para medir el rea del pico resultante. Enseguida, bajo las mismas condiciones
de corrimiento cromatogrfico, se mide el rea del pico que resulte de la sustancia
en la mezcla desconocida.
Finalmente, estableciendo una proporcin, se puede encontrar la concentracin de la sustancia desconocida.
24
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
Estndar interno
Este mtodo se puede utilizar de dos formas, para calcular un factor de respuesta
o elaborando una curva estndar para encontrar la concentracin de una muestra
problema. El estndar o patrn interno es aquella sustancia que se inyecta
junto con la o las muestras problema en un cromatgrafo. Las condiciones que
esta sustancia debe cumplir son (Len, 1982):
No debe formar parte de la muestra que se desea analizar.
Tener similitud con los componentes del problema.
Proporcionar por s sola y junto con la muestra problema, picos bien resueltos
y de buena forma.
Eluir en un tiempo cercano al de los componentes del problema.
No debe reaccionar con los componentes de la muestra.
a)
[P]
\Ap
25
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
internos.
Estndar externo
Esta tcnica es menos complicada que el estndar interno, pero requiere de
mayor cuidado durante las separaciones cromatogrficas. Las curvas de
calibracin con patrones puros son elaboradas con base en varias concentraciones. Es importante cuidar que los volmenes de inyeccin sean los mismos
que para los compuestos de inters. Se construye una grfica de rea o altura,
en funcin de la concentracin, la cual puede estar en cualquier unidad de
masa/volumen, ya sea molaridad, % p/v, o tambin puede utilizarse el % p/p.
La concentracin del compuesto desconocido se interpola en el grfico, con
base en el dato de rea o altura del pico correspondiente (figura 1.6).
rea
o
altura
Concentracin
Figura 1.6 Curva para estndares externos.
26
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
11
27
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
2.
3.
Verifique que todos los controles estn apagados y siga las instrucciones,
en funcin de los parmetros a utilizar en cada una de las prcticas de
cromatografa de gases.
Abra la llave del tanque que contiene el gas acarreador y verifique que la
presin se encuentre entre 500 y 2 300 lb/in2, en caso de ser menor a
500 lb/in2, reprtelo al profesor.
La presin de entrada del gas al cromatgrafo debe ser de 30 lb/in2.
Mida la velocidad del flujo de salida de las columnas utilizando un
flujmetro de burbuja que tenga una disolucin de jabn al 3 %.
28
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
Marcas de
calibracin
Burbuja
_ Disolucin
jabonosa
PERA
4.
5.
6.
29
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
7.
8.
9.
a)
b)
c)
Para evitar que se queme el filamento del detector, verifique que el gas
acarreador fluya a travs del cromatgrafo, antes de encender el
detector.
Apagar la corriente del filamento, antes de abrir el sistema, para evitar
que ste se oxide.
La velocidad de flujo del gas portador debe permanecer constante.
30
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cromatografa de gases
Los alumnos deben cubrir totalmente las nueve prcticas de este manual.
Cada alumno debe elaborar una bitcora, en la cual, adems de anotar
todas las observaciones de la prctica en cuestin, realizar las siguientes
actividades:
Dibuj ar un diagrama de bloques de la prctica que se va a realizar.
Anotar las propiedades fsicas, qumicas y txicas de cada uno de los
reactivos mencionados en el protocolo de la prctica (investigados
previamente en la biblioteca).
Realizar los clculos necesarios para la preparacin de las disoluciones
mencionadas en la prctica, tomando como base 100 mi de disolucin.
3.
4.
5.
6.
7.
* Las normas de seguridad indicadas en esta parte fueron extradas del Instructivo sobre
elfuncionamiento interno y operativo para regular el uso de los servicios e instalaciones
de los laboratorios de docencia de la UAM, aprobado por el Consejo Acadmico en su
sesin 133.
31
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 1
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de gases Gow-Mac, modelo
69-350, para el anlisis cualitativo de mezclas y observar la diferencia de
separar una misma muestra en dos columnas de diferente polaridad.
33
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de gases
Medidor de fluj o de burbuj a
Cronmetro
Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi
5 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita
5 vasos de precipitados de 50 mi
5 pipetas volumtricas de 1 mi
Propipeta
n-pentano
Tetrahidrofurano
2-butanona
n-propanol
En la parte terica de este captulo se encuentran las instrucciones de operacin del cromatgrafo Gow-Mac, modelo 69-350 (p. 27).
Normas de seguridad
Maneje los disolventes con cuidado en un lugar ventilado, utilice
propipetas para hacer la mezcla. Asegrese de que no haya mecheros
prendidos y coloque letreros para indicar que est trabajando con
disolventes.
Cuando trabaje con el cromatgrafo, asegrese de que se encuentre
presente el profesor del laboratorio, quien le ayudar y brindar asesora
sobre el buen manejo del equipo.
Procedimiento
1.
34
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
130C
80 ml/min.
Tome en cuenta que el equipo requiere al menos de tres horas de calentamiento previo, con el fin de estabilizar la temperatura de la columna,
el flujo del gas acarreador y la corriente del detector, y para que todo
esto se refleje en una lnea base estable.
Verifique el flujo del gas en las dos columnas, utilice un medidor de
burbuja como se indica en la figura 1.8.
Trabaje primero con la columna de Carbowax. Fije el atenuador en 4 y
ponga a funcionar el graficador a una velocidad de 2.5 cm/min.
Con una jeringa de 50 fil, mida 3 \ de n-heptano y adicione otros 10 |Lil
de aire. Inyctelos en la columna y enjuague la jeringa.
Marque el punto de inyeccin en la carta, as como la informacin
relacionada con la muestra inyectada.
El primer pico que debe eluir es el pico de aire, seguido por el pico del
n-heptano.
Repita los pasos 5 y 6 con los otros tres componentes y, por ltimo,
inyecte la mezcla de los disolventes.
Baj o las mismas condiciones de trabaj o, repita todo el proceso utilizando
la columna DC-200. Cambie la polaridad del sistema para que los picos
salgan en el mismo sentido que con la columna polar.
35
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cuestionario
i.
2.
3.
Vr(ml)
21.5
Butanona
58.0
3-pentanona
Acetilcetona
a)
b)
145.0
400.0
36
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 2
Factor de respuesta en cromatografa de gases
Introduccin
El uso de estndares internos es necesario en el anlisis cuantitativo. La
sensibilidad de los detectores de conductividad trmica difiere de un compuesto
a otro, ya que depende de la conductividad trmica del analito. A menor
conductividad trmica, mayor es la respuesta para una cantidad dada de
compuesto. Por lo tanto, debe medirse unfactor de respuesta emprico para
cada sustancia que se somete a un anlisis cuantitativo. El factor de respuesta
F est definido por la relacin:
[P]
\ApJ
Objetivo
El alumno efectuar el anlisis de cromatografa de gases para conocer el
factor de respuesta con el n-heptano, empleando como estndar interno al
n-pentano.
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de gases
Medidor de fluj o de burbuj a
37
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cronmetro
Jeringa para cromatografa de gases de 50 mi
2 tubos de ensayo de 10 x 150 mm con tapn de baquelita
2 vasos de precipitados de 50 mi
2 pipetas volumtricas de 1 mi
Propipeta
n-pentano
n-butano
Normas de seguridad
Los compuestos a trabajar son muy voltiles y flamables, trabaje en un
rea ventilada y lejos de fuentes de calor. Tome en cuenta las reglas de
seguridad de la prctica 1.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
DC-200
Gas acarreador
Helio
60 ml/min.
Temperatura
90 C
Atenuacin
200 mA
Velocidad de la carta
2.5 cm/min.
38
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cuestionario
1.
2.
Esta tcnica para el clculo del factor se puede utilizar con otros
detectores como el de ionizacin de flama o el de captura de electrones?
3.
4.
39
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Bibliografa
Baugh, P. J. (editor). 1993. Gas Chromatography A Praetical Approach.
IRL Press, Gran Bretaa.
Bens, E. 1961. "Adsorption Characteristics of Some Gas-Liquid Chromatographic Supports."Anal Chem., 33:178, California.
Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa,
Mxico.
Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me
Graw Hill, Mxico.
Giddins, J. C. y R. A. Keller (eds.). 1965. Advances in Chromatography.
Vol. 1:199, USA.
Giddins, J. C. y R. A. Keller (eds.). 1971. Advances in Chromatography.
Vol. 4:333, USA.
Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Grupo Editorial
Iberoamrica, Mxico.
Meloan, C. F. y R. M. Kiser. 1973. Problemas y experimentos en anlisis
instrumental. Ed. Reverte, Mxico.
Miller, J. M. y R. L. Harmon. 1978. Elementary Theory ofGas Cromatography. Gow-Mac Instrument Co., USA.
Operator }s Manual Gas Chromatograph, Model 69-350.1989. Gow Mac
Instrument Co., USA.
Pecsok, R. L. 1981. Mtodos modernos de anlisis qumico. Ed. Limusa,
Mxico.
40
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Bibliografa
41
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Captulo 2
CROMATOGRAFA LQUIDA
DE ALTA RESOLUCIN
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Introduccin
Tiene una difusin mnima en la fase mvil, debido a la rapidez del anlisis.
No tiene efectos negativos por calor, ya que generalmente se realiza a
temperatura ambiente o ayudado por un calentador de columnas a
temperaturas menores de 100 C.
La muestra no se destruye, por lo que se puede recuperar para un uso
posterior.
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
medida en la fase estacionaria y que gracias a las altas presiones con las que se
mueve la fase mvil, se puede obtener una rpida separacin de los componentes
de una mezcla.
La cromatografa de lquidos se puede clasificar en cuatro tipos, dependiendo
de su uso:
Cromatografa de lquido-slido
En este caso, la separacin depende de la afinidad de la muestra hacia la fase
slida o lquida. Si la muestra es muy afn a la fase estacionaria (compuesta por
partculas slidas pequeas) el tiempo de retencin ser mayor. El solvente
utilizado se conoce como eluyente y tambin influye de manera importante en
la separacin: si la muestra es ms afn a la fase lquida, los tiempos de retencin
sern ms cortos. La tabla 2.1 muestra una lista de disolventes segn su
capacidad para eluir solutos.
La seleccin de la fase mvil influye directamente en la separacin de las
muestras. Los solventes pueden ser de naturaleza orgnica o acuosa. Existen
muchas caractersticas que debe tener una buena fase mvil, entre las ms
importantes se encuentran: no alterar la columna ni su naturaleza, disolver la
muestra, ser de baja viscosidad y, una vez terminada la separacin, debe permitir
la recuperacin del soluto de manera simple (Watty, 1989).
En la cromatografa lquido-slido existen dos subdivisiones que estn en
funcin de su conformacin: la fase normal y la fase inversa.
Para l^fase normal se requiere de una fase estacionaria polar, por lo tanto,
la fase mvil debe ser no polar. Los empaques que se pueden utilizar en fase
normal son diol, slica y amino, entre otros.
En \difase inversa se necesita un empaque no polar y una fase mvil polar. Los empaques ms comunes para la fase reversa son: ODS (C18), octyl,
dimetil, etc.
Otra variacin de este tipo de cromatografa se conoce como fase ligada
(bondedphase), que consiste en enlazar con el soporte de slica compuestos
que aumenten su carcter no polar (C2, C6, C8, Clg). En funcin del tamao de
la cadena de hidrocarburos que se haya unido, los tiempos de retencin de los
solutos que eluyan en estas columnas, tendern a aumentar, pues se retendrn
ms fuertemente.
46
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
cido actico
Acetona
Acetonitrilo
Benceno
N-butanol
Tetracloruro de carbono
Cloroformo
Ciclohexano
1,2-dicloroetano
Cloruro de metileno
Dimetil sulfxido
Dioxano
Acetato de etilo
Etanol
ndice de
polaridad
Longitud de
onda de corte nm
0.62
230
100
5.10
5.80
2.70
3.90
330
190
100
100
0.18
1.60
4.10
0.20
3.50
3.10
280
215
263
245
200
225
Solubilidad en
agua % p/p
7.81
0.08
0.815
0.01
0.81
7.20
4.80
4.40
6.20
235
268
215
260
210
Dietilter
Heptano
2.80
0.00
220
200
Hexano
0.00
200
0.001
Metanol
Pentano
N-propanol
Iso-propanol
5.10
0.00
100
0.004
4.00
3.90
205
200
210
210
Tetrahidrofurano
Tolueno
4.00
2.40
215
285
100
0.051
Tricloroetileno
1.00
9.00
2.50
273
200
290
0.11
100
0.018
Agua
Xileno
1.6
100
100
8.7
100
6.89
0.0003
100
100
47
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Aniones mviles
mantenidos cerca de
los cationes unidos
covalentemente a la
fase estacionaria
48
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Soporte
pH
Presin mx.
Slica
2a8
5 000 psi
Slica
2a8
5 000 psi
Slica
2a8
5 000 psi
TSKcatinica
Resina
2a12
200 psi
49
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Molculas grandes
son excluidas
Molculas
pequeas
penetran el gel
Rango PM
Aplicaciones
Styagel HR 0.5
0 a 1 000
Styagel HT 4
Styagel HMW7
PM intermedio
8
PM alto
Cromatografa de afinidad
Se basa en la interaccin especfica que existe entre un soluto de una mezcla y
un sitio activo presente en el gel de la fase estacionaria de la columna. Las
interacciones estn relacionadas ms con las caractersticas estructurales que
con la carga, tamao, solubilidad u otras propiedades que se aprovechan en
otros tipos de cromatografa. Ejemplos de aplicaciones son la relacin sustrato
enzima y la relacin antgeno anticuerpo (Day y Underwood, 1989).
Una mayor fuente de informacin sobre los mtodos cromatogrficos se
puede encontrar en los excelentes libros: Harris, 1992; Pecsok, 1981.
50
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Sistema de bombas
Este sistema es un componente importante del cromatgrafo de lquidos, el
cual requiere de una bomba de alta presin, comnmente de un mximo de
6 000 psi. La presin es necesaria para mover las partculas del soluto entre la
fase estacionaria de la columna. Una bomba para cromatografa de lquidos
debe tener un flujo continuo y libre de pulsaciones.
Existen dos tipos de sistemas de elucin: uno donde el disolvente no cambia
de composicin durante el proceso de aislamiento, conocido como elucin
socrtica, y otro que requiere de un gradiente para mejorar la separacin de
los componentes en una mezcla (elucin por gradiente).
Las bombas con pistones sincronizados son las ms empleadas en los sistemas
de HPLC. Un pistn siempre bombea disolvente, mientras el otro se llena. Este arreglo proporciona un flujo relativamente libre de pulsos o pulsaciones.
Pueden evitarse muchos problemas con las bombas si se cuidan los solventes
utilizados: no deben tener un pH muy bajo ni formar precipitados con facilidad.
En columnas convencionales de 5 mm de dimetro interno y con flujos entre
1 y 2 ml/min, pueden resultar presiones de 400 bar, dependiendo de la longitud
de la columna, el tamao de partcula y el disolvente.
El sistema de bombas debe de mantenerse en ptimas condiciones si se
quiere tener reproducibilidad en las corridas cromatogrficas.
51
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
52
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Pantalla digital para conocer la presin del sistema, la cual est dada en
libras por pulgada cuadrada (psi). El nmero que aparece en la pantalla
debe multiplicarse por 10, a fin de obtener la presin verdadera.
Botones que fij an la presin mnima y mxima de trabaj o durante el
proceso de separacin. Se recomienda establecer la presin baja en
cero psi y la mxima en 3 500 psi. El valor mximo depende del tipo de
columna a utilizar y de la viscosidad del disolvente o mezcla de ellos. Si
durante el proceso de separacin la presin del sistema rebasa estos
valores, el sistema de bombas se apaga automticamente.
Standby. Permite que el motor se apague y el sistema elctrico siga
funcionando.
Reset. Botn que reenciende las bombas y restablece elflujo y la presin
del sistema.
Led. Foco rojo que indica el apagado de las bombas y que el flujo del
sistema tiende a cero.
Control de fluj o. Consta de tres diales rotatorios individuales y permite
preseleccionar el flujo del sistema en ml/min. El flujo debe incrementarse
poco a poco (de dcima de mi en dcima de mi). Una lectura de 070
indica un flujo de 0.70 ml/min.
Vlvula de purga. Permite la purga hidrulica del sistema.
Botn de encendido o apagado.
53
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
6
7
54
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
4.
5.
6.
7.
8.
9.
55
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
10.
56
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
57
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
b)
c)
58
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
5.
6.
59
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
7.
8.
60
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Flujo
Flujo
Jeringuilla
Hacia la
columna
Unin
Alojamiento de
muestras
Exceso
de inyeccin
CARGAR
INYECTAR
61
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 3
Cuantificacin de una muestra problema de
anisaldehdo (mtodo del patrn interno)
Introduccin
El funcionamiento de un comatgrafo de alta resolucin empieza con el sistema
de bombas de alta presin, el cual impulsa el disolvente a travs de todo el
sistema. La muestra es inyectada por medio de una microj eringa, el volumen es
de unos cuantos microlitros para que la resolucin de los picos sea buena y la
separacin sea ms rpida. Una vez en la columna, se realiza la interaccin
soporte-soluto-disolvente, lo cual permite la separacin de los componentes
de la muestra. El detector est compuesto por una microcelda en forma de
"Z", a travs de la cual fluye la disolucin; es excelente para que los compuestos
no se mezclen y el flujo sea rpido. Por ltimo, en el integrador, la absorbancia es convertida en seal elctrica y as es reproducida como cromatograma.
En la cromatografa de lquidos de particin existen dos grupos de trabajo,
el ms frecuente se conoce como cromatografa de fase inversa, en ella la
fase estacionaria tiene un carcter no polar y se eluye con un disolvente polar.
El segundo grupo es la cromatografa de fase normal que utiliza un soporte
polar y un disolvente no polar. El sistema de elucin puede ser isocrtico o por
gradiente y el detector ms comn es el uv-visible, aunque tambin es utilizado
el de ndice de refraccin.
La cuantificacin de una muestra problema por medio de un estndar interno
se puede efectuar con la elaboracin de una curva estndar, la cual debe ser
hecha mnimo con tres puntos. En el laboratorio se debe tener especial cuidado
63
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Objetivo
El alumno aprender a utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin
para cuantificar una muestra problema de anisaldehdo, utilizando el mtodo
del patrn interno.
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin
Columna Spherisorb ODS C]810 mm
Filtros de tefln de 0.4 mm
Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC
5 frascos viales de 5 mi con tapa
2 pipetas volumtricas de 1 mi
Anisaldehdo
Acetonitrilo
Tolueno
Muestra problema con anisaldehdo
Normas de seguridad
Al preparar la mezcla acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno debe hacerlo
en la campana de extraccin.
Revise su bitcora para recordar que el acetonitrilo es venenoso y flamable, que debe evitar respirar sus vapores y que puede causar irritacin
en la piel.
64
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
10ODS10jim
Dimensiones
250 x 4.6 mm
Presin mxima
3 500 psi
Fase mvil
acetonitrilo/agua (50:50)
Flujo
0.8 ml/min
Corrida 1
Corrida 2
Corrida 3
Anisaldehdo
0.07 M
0.05 M
0.03 M
Tolueno
0.05 M
0.05 M
0.05 M
65
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
ALTURA S
ALTURA P
[SOLUTO S]
[SOLUTO P]
Cuestionario
1.
2.
66
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Corrida
Frmaco
Conc.
Altura
Conc.
Altura
Conc.
Altura
Anfetamina
0.6
30
1.2
60
1.8
98
Metanfetamina
0.6
38
0.6
38
0.6
38
67
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 4
Separacin y cuantificacin de una muestra de
antocianinas (mtodo del patrn externo)
Introduccin
La cromatografa de lquidos de alta resolucin ha tenido un gran auge en los
ltimos 20 aos, se ha utilizado como tcnica para separar, identificar y preparar
sustancias en muchas reas. Actualmente estos equipos se combinan con el
banco de memoria de una computadora, lo que ofrece una mayor facilidad en
la identificacin de compuestos.
Una aplicacin actualizada es la separacin e identificacin de antocianinas,
tanto en uvas como en vinos tintos. A pesar de tener el vino tantos aos de
historia, an no se conoce qu ocurre con sus compuestos durante el
aejamiento. El color es uno de los atributos ms importantes del vino y es
determinante en la evaluacin sensorial. En las uvas tintas est dado por el
contenido de antocianinas y en las uvas blancas por los flavonoles. Existen
en las uvas tintas 14 antocianinas, de las cuales cinco se encuentran en mayor proporcin: malvidina, petunidina, cianidina, peonidinay delfidina (Reyes
etal., 1992).
Las antocianinas son pigmentos de color rojo, azul y violeta. En condiciones
acidas, el color rojo predomina; en presencia del ion bisulfito (HSO~3 )
reaccionan y se decoloran, esta reaccin es reversible. El color de los vinos
tintos se debe principalmente a las antocianinas libres (estos compuestos tienden
a polimerizarse casi de manera inmediata desde que son estrujadas), y a
pigmentos polmeros formados durante el tiempo de afiejamiento del vino, por
condensacin de antocianinas con otros compuestos flavonoides y proba-
69
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
blemente aldehidos. El color de los vinos tintos depende del pH, el contenido
de SO2? de los pigmentos polimricos y los taninos.
El uso de equipos como el HPLC permite la separacin de las antocianinas
en vinos tintos y stas aparecen como picos discretos.
Objetivo
El alumno utilizar el cromatgrafo de lquidos de alta resolucin para separar
y cuantificar una muestra de antocianinas, utilizando el mtodo del patrn extemo.
Materiales y reactivos
Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin
Columna Spherisorb ODS Clg 10 mm
Filtros de tefln de 0.4 mm
Papel filtro WhatmanNo. 1
Jeringa de 50 mi, con aguja para HPLC
4 tubos de ensayo con tapa de rosca
Mortero con pistilo
Pipeta graduada de 10 mi
Clorhidrato de malvidinamonoglucsido
cido frmico
Acetonitrilo
Metanol
HC1 (concentrado)
Normas de seguridad
Cuide que al preparar las mezclas acetonitrilo agua y acetonitrilo tolueno
se haga en la campana de extraccin.
70
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
71
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
5.
Para elaborar la curva patrn con el clorhidrato de malvidin 3monoglucsido, se preparan cuatro diferentes concentraciones 25,50,
100 y 150 mg/1 en metanol con 1 ml/1 de HC1 concentrado. Se inyectan
en la columna por separado, los volmenes de inyeccin deben ser de
214,1. Ajuste la atenuacin para que los picos no rebasen la escala del
integrador.
Cuestionario
1.
Qu influencia pueden tener los siguientes cambios sobre el cromatograma obtenido en esta prctica?
a) Utilizar una columna C-8 en lugar de una C-18.
b) Disminuir el flujo de la fase mvil.
c) Hacer una elucin isocrtica (en lugar de una por gradiente) en condiciones de disminucin del flujo de la fase mvil.
2.
72
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
3.
4.
Qu otros sistemas de deteccin son de uso frecuente en los cromatgrafos de alta resolucin?
5.
73
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Bibliografa
Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa,
Mxico.
Dallas, C. y O. Laureano. 1994. "Effects of pH, Sulphur Dioxide, Alcohol
Content, Temperature and Storage Time on Colour Composition of a
YoungPortugueseRedTable Wine". J.Scl Food Agrie. 65:477-485.
Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me
Graw Hill, Mxico.
Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Grupo Editorial
Iberoamrica, Mxico.
Len, R. 1982. Libro bsico para cromatografa de lquidos. LDC/Milton
Roy, USA.
Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA.
Operator's Manual. 1993. SpeetroMonitor 3200 Variable Wavelength Detector. Thermo Separation Products, USA.
Operator'sManual. 1993. ConstaMetric 3200 Fluid Metering Pump. Thermo
Separation Products, USA.
Pecsok, R. L. y L. D. Shields. 1987. Mtodos modernos de anlisis qumico.
Ed. Limusa, Mxico.
Reyes-Dorantes, A., M. L. Escamilla-Hurtado y J. R. Verde-Calvo. 1992.
Enologa Vol I. Elaboracin de vinos de mesa. Universidad Autnoma
Metropolitana Iztapalapa, Mxico.
Watty, M. 1989. Qumica analtica. Ed. Alhambra Mexicana, Mxico.
74
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Captulo 3
ESPECTROFOTOMETRIA
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
I. VISIBLE ULTRAVIOLETA
Introduccin
Los usos analticos de la espectrofotometra en la zona del visible ultravioleta
son muchos y muy variados. El objeto de este captulo es hacer mencin de
algunas de estas aplicaciones, y que el alumno ponga en prctica los conocimientos adquiridos en la teora sobre la ley de Lambert y Beer.
Cuando un compuesto o ion capaz de absorber luz es colocado en una celda en un espectrofotmetro, cierta cantidad de luz monocromtica ser
absorbida por dicho compuesto y el resto saldr de la celda para ir a incidir sobre el fototubo que la detectar. Este comportamiento es aprovechado para
conocer la concentracin de los compuestos.
La transmitancia, T, de una disolucin se define como la fraccin de la intensidad o de la fuerza de la luz incidente, Po, que se transmite verdaderamente
a travs de la disolucin. En donde P es la intensidad de la luz que sale de la
muestra.
T =
Po
T = 100
\Po)
A = - logT = log
La ley de Beer (tambin conocida como la ley de Bouguer-Beer o de Lambert y Beer) establece que: a una longitud de onda dada, la absorbencia es
proporcional a la concentracin de la especie absorbente en una disolucin,
como lo indica la siguiente ecuacin.
A = zbc
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
78
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Espectrofotometra
Celdas
La celda es un depsito transparente especialmente diseado para contener la
disolucin de prueba o el disolvente de referencia (blanco) durante los estudios
espectrofotomtricos. Existen celdas o cubetas de diversos tamaos y formas
apropiadas para los diferentes tipos de espectros comerciales (figura 3.1). Las
celdas ms comunes para medir espectros en la regin del visible-ultravioleta
estn fabricadas con cuarzo y tienen un paso de luz de 1.0 cm. Las celdas de
vidrio ptico son apropiadas slo para mediciones en la regin del visible, ya
que absorben la radiacin ultravioleta.
Generalmente las celdas son cuadradas con dos lados esmerilados, pero las
hay cilindricas en forma de tubo de ensayo para ser utilizadas en el Spectronic
20. Tambin existen las celdas de flujo que permiten la circulacin continua
de una disolucin a travs de la cubeta. Son tiles para medir la absorbancia de
disoluciones que fluyen de una columna cromatogrfica. Tambin existen las
celdas trmicas con recirculacin de agua o algn lquido que fluye en una camisa para mantener el contenido de la celda a la temperatura deseada.
Las caractersticas de transmisin de las celdas en varias longitudes de onda
son funcin de los materiales de fabricacin. Por ejemplo, el vidrio pyrex transmite
en el intervalo de los 320 a los 2 500 nm. La figura 3.2 muestra las zonas de
absorcin de los materiales ms comnmente empleados en la fabricacin de
celdas. Se pueden utilizar vidrios o plsticos especiales en la regin del visible.
79
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Celda normal
con tapa
Celda
cuadrada
para flujo
constante
80
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Espectro fotometra
200
250
1. Spectrosil
2. Slice fundido
3. Cuarzo fundido
300
350
400 nm
4. Vitreosil grado IR
5. Vidrio ptico especial
6. Vidrio
Resulta conveniente contar con una marca en el lado donde incida la luz, de
manera que la celda pueda siempre ser orientada en la misma posicin para
permitir la reproducibilidad de los resultados.
81
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
1
3. Control de cero y de encendido
4. Portaceldas
82
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
1
3. Control de cero y de encendido
4. Portaceldas
82
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
5.
6.
7.
84
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 5
Introduccin
Para la cuantificacin de sustancias que pueden absorber la luz que las atraviesa,
las tcnicas espectrofotomtricas son confiables y de fcil manejo. Adems,
no slo sirven para calcular la cantidad de soluto presente en una disolucin,
sino tambin se pueden utilizar para identificar sustancias de manera cualitativa.
Cuando se realiza un proyecto de investigacin, se puede requerir el
desarrollo de un mtodo espectrofotomtrico para cuantificar algn soluto o
quizs el producto de una reaccin, que tengan la cualidad de absorber la luz.
Para conseguir esto se necesita:
a)
b)
c)
85
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Objetivo
El alumno aprender a utilizar un espectrofotmetro (Spectronic 20) y a
implementar una metodologa para la cuantificacin de compuestos que absorben
la luz en la regin del visible.
Materiales y reactivos
Espectrofotmetro Spectronic 20
2 celdas para el espectro
3 matraces aforados 100 mi
5 matraces volumtricos de 25 mi
3 vasos de precipitados de 100 mi
3 pipetas graduadas de 5 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Piseta con agua destilada
NH4Fe(SO4)2*12H2O
H2SO4 concentrado
1,10-fenantrolina
CH3COONa
86
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de
accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en
el captulo 1.
Para preparar soluciones diluidas de cido sulfrico es recomendable:
a) Enfriar el recipiente que contenga agua en un bao de hielo.
b) Agregar el cido al agua en porciones pequeas, dejando que ste
resbale por la pared del recipiente.
c) Agitar despus de cada adicin de cido regresando el recipiente al
bao de hielo.
Procedimiento
1.
87
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
88
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cuestionario
i.
2.
Cules son los cuidados que se deben tener con las celdas del espectrofotmetro?
3.
Cules son los factores que se deben tomar en cuenta para la determinacin espectrofotomtrica de iones inorgnicos por formacin de
complejos?
Una disolucin de permanganato de potasio 1.28x10"4 M tiene una
transmitancia de 0.5 a 525 nm, en una celda de 1.0 cm.
a) Qu absorbancia tiene esta disolucin?
b) Si la concentracin fuese el doble, cul sera la absorbancia y la
transmitancia?
c) Qu concentracin correspondera a una transmitancia de 0.75 en
esta celda?
El cobalto (II) forma fcilmente un complejo de color azul cuando
reacciona con el tiocianato. El procedimiento es el siguiente: se prepara
una disolucin de tres partes de acetona por una de disolucin acuosa al
50% de NH4SCN. Esta disolucin se agrega a un matraz que contiene
Co (II), el complejo resultante es de color azul intenso.
Se prepararon las siguientes disoluciones y se efectu la lectura a
620 nm:
Co, ppm
3.0
0.10
6.0
0.21
9.0
0.32
12.0
0.42
89
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
90
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 6
Determinacin por espectrofotometra de la
concentracin de cobalto y nquel en una mezcla
Introduccin
Frecuentemente es preciso analizar mezclas de dos o ms sustancias. A veces
es posible hacerlo a travs de determinaciones espectrofotomtricas simultneas,
en lugar de efectuar las separaciones fsicas o qumicas necesarias para analizar
los componentes puros por separado.
Se conocen varios mtodos para determinar las concentraciones de sistemas
con dos o ms compuestos, el ms conocido requiere de establecer los picos
de absorcin de cada componente y que cada uno de ellos se encuentre
prcticamente libre de absorciones de los otros compuestos, adems, se debe
considerar que las absorbancias de cada uno son aditivas. Existe otro mtodo
para sistemas en los cuales las curvas de absorcin se traslapan, de manera
que requieren un barrido de las dos longitudes de onda. En este caso de debe
utilizar la metodologa propuesta por Blanco et al. (1989), en la cual se establece
una correlacin lineal que permite con base en la pendiente y la ordenada al
origen conocer las concentraciones de mezclas binarias.
En esta prctica se utilizar el primer mtodo para casos en que las longitudes de onda de mxima absorbancia no se traslapan. En la determinacin de
la concentracin de dos (o ms) sustancias hay que tener cuidado, ya que los
pequeos errores experimentales se suman rpidamente. Un error en la lectura
de absorbancia en una longitud de onda puede disminuir la precisin en el resultado final.
91
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Objetivo
El alumno aplicar sus conocimientos sobre espectrofotometra para la
cuantificacin de una mezcla de dos compuestos.
Materiales y reactivos
Espectrofotmetro Spectronic 20
2 celdas para el espectro
2 matraces aforados 100 mi
2 matraces volumtricos de 25 mi
2 vasos de precipitados de 100 mi
2 pipetas graduadas de 5 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Piseta con agua destilada
Co(NO3)2 6 H2O
Ni(NO3)2 6H 2 O
Normas de seguridad
Tome en cuenta el apartado "Prevencin de accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en el captulo 1.
Procedimiento
1.
92
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
Cuestionario
1.
Qu diferencia existe entre la fuente de radiacin de los espectrofotmetros de la regin ultravioleta y los de la regin visible?
2.
93
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
GMP
260 nm
0.0154
280 nm
0.0025
260 nm
0.0117
280 nm
0.077
94
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Espectrofotometra
II. TURBIDIMETRIA
El mtodo turbidimtrico se fundamenta en el fenmeno de que la luz, al pasar
a travs de un medio con partculas dispersas, con un ndice de refraccin
diferente al del medio, disminuye su intensidad debido a la dispersin.
Instrumentalmente se detecta la intensidad de la luz transmitida por el medio, o
sea, la luz no dispersada. La turbidimetra es muy similar a la colorimetra, en
cuanto que ambas se basan en la medicin de la luz transmitida por un medio y
emplean aparatos similares.
La intensidad de la luz que se dispersa en cualquier ngulo es funcin de la
concentracin de las partculas dispersantes, de su tamao y forma, de la longitud
de onda y de la diferencia entre los ndices de refraccin de las partculas y el
medio. La dispersin total de un determinado nmero de partculas (suponiendo
que no haya interacciones de dispersin mltiple), est dada por la suma de las
dispersiones individuales, mientras que la absorbancia del sistema es
directamente proporcional a la concentracin de partculas (Willard, 1974).
Es importante tomar en cuenta que la relacin entre la intensidad de la luz
dispersa y la concentracin no es simple, por lo que este tipo de determinaciones
deben tener un carcter emprico. La luz no es realmente absorbida por la
disolucin, sino que se dispersa en todas direcciones y no llega al detector. La
absorcin aparente o turbidancia obedece a una ecuacin anloga a la ley de
Beer en un intervalo limitado de concentraciones.
= kbc
"A " es la absorbancia aparente o turbidancia (Ewing, 1978, utiliza la letra S
como smbolo de turbidancia)
Po es la potencia radiante del haz de luz incidente
P es la potencia del haz de luz emergente
k
es una constante
b
es el recorrido del haz de luz en la celda
c
es la concentracin de la disolucin
95
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
- rb
96
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 7
Cuantificacin turbidimtrica de sulfatos
Introduccin
La aplicacin de tcnicas turbidimtricas es amplia, aunque en los ltimos aos
ha sido desplazada por la aplicacin de otros mtodos instrumentales ms
sensibles. Actualmente an existen procedimientos en el rea de farmacia y alimentos que la siguen utilizando.
Por ejemplo, en la industria de vinos y tambin en la de aguardientes la
transparencia y brillantez son caractersticas importantes de la calidad de estos
productos. La presencia de materiales suspendidos, aun en cantidades tan
pequeas que resultan invisibles al embotellar, producirn un sedimento visible
y desagradable despus de cierto tiempo. La calidad de las aguas para procesos
industriales y la transparencia del agua para la alimentacin de calderas, son
otros ejemplos tpicos de aplicaciones comunes.
Hay tcnicas donde la turbidez en la muestra se desarrolla en condiciones
controladas. La reaccin de precipitacin debe efectuarse con rapidez y las
partculas formadas deben ser de baja solubilidad y de tamao pequeo. La
adicin de agentes tensoactivos o de coloides protectores es til, ya que favorece
el tamao de las partculas, promueve la nucleacin a expensas del crecimiento
de los cristales y aumenta lareproducibilidad de la tcnica.
Se pueden presentar problemas con la exactitud del mtodo, pues se
encuentra limitado por la falta de reproducibilidad de la forma fsica del
precipitado o, una vez formado, por la inestabilidad del mismo.
97
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Objetivo
El alumno utilizar una tcnica turbidimtricapara la cuantificacin de una muestra
problema de sulfates.
Materiales y reactivos
Espectrofotmetro Spectronic 20
2 celdas para el espectro
Matraz aforado de 500 mi
Matraz aforado de 200 mi
4 matraces aforados de 250 mi
4 matraces Erlenmeyer de 500 mi
2 vasos de precipitados de 100 mi
2 pipetas graduadas de 5 mi
Vidrio de reloj
Agitador de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Piseta con agua destilada
Na2SO4
NaCl
HC12M
BaCL
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de
accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en
el captulo 1.
Para preparar soluciones diluidas de cido clorhdrico es recomendable
hacerlo en la campana de extraccin.
98
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
Cuestionario
1.
Cul es la diferencia entre una determinacin turbidimtrica y una efectuada por nefelometra?
2.
3.
99
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
"A"
12
0.04
25
0.10
50
0.30
110
0.52
100
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Bibliografa
Bibliografa
Blanco, M. et al 1989. "A Simple Method for Spectrophotometric Determination of Two-Components with Overlapped Spectra". J. Chem. Educ.
66:178-180.
Bosh-Reig, F. etal 1991. "Development of the H-point Standar-Aditions
Method for Ultraviolet Visible Spectroscopic Kinetic Analysis of TwoComponents System". Anal Chem. 63:2424-2429.
Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa,
Mxico.
Cope, V. W. 1978. "Determination of the Performance Parameters of Spectrophotometer, and Advanced Analytical Experiment". J. Chem. Educ.
55:680-681.
Dean, J. A. 1989. Manual de qumica. Tomo IV: Espectroscopia. Me Graw
Hill, Mxico.
Espectrofotometra UV-visible. 1983. Servicios Centrales de Instrumentacin
y Laboratorios, S. A., Mxico.
Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me
Graw Hill, Mxico.
Garca, V. Y. M. 1988. Equilibrio qumico aplicado a la qumica analtica.
Ed. Diana, Mxico.
Hughes, H. A. et al 1952. "Suggested Nomenclature in Applied Spectroscopy". Anal Chem. 24: 1349-1354.
Koltoff, I. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The
Macmillan Company, USA.
101
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
102
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Captulo 4
MTODOS ELECTROQUMICOS
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Introduccin
2.
3.
4.
5.
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Celdas electroqumicas
Existen dos tipos de celdas: la galvnica y la electroltica. La primera es aquella
en que una reaccin de oxidorreduccin espontnea genera una corriente
elctrica (Harris, 1992). Si se suministra energa elctrica a una celda, con una
fuente de poder, entonces recibe el nombre de celda electroltica.
Electrodos de referencia
Un electrodo de referencia tiene un potencial conocido y constante, estn
constituidos por una hemicelda interna de referencia, que puede ser de plata,
cloruro de plata o de calomel (cada uno de ellos con su respectivo valor de
potencial estndar); tienen un electrlito de puente salino y un pequeo canal
en la punta del electrodo, a travs del cual fluye muy lentamente el electrlito,
permitiendo el contacto con los otros componentes de la celda.
Electrodos de calomel
Tienen un elemento no atacable, como el platino, el cual est en contacto con
mercurio, cloruro mercuroso (calomel) y con una disolucin neutra de cloruro
de potasio (de concentracin conocida) que se encuentra saturada con calomel.
106
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Mtodos electroqumicos
HgCUs)
2Hg(\) + 2CI-
107
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Ag (s) + Cl-
E = 0.222 V
E (saturado con KC1) = 0.197 V
108
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Mtodos electroqumicos
Unin
reemplazable
Electrodo de Ag
Proteccin de
la membrana
de vidrio
Membrana
d e vidrio
109
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
2.
3.
4.
110
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Mtodos electroqumicos
Cuidados
Cuando el electrodo no se usa se debe guardar en una disolucin acuosa, de
manera que la capa del gel hidratado no se seque. Si el electrodo ya est seco,
se reactiva sumergindolo en agua durante varias horas.
Los electrodos de vidrio se desgastan poco a poco, adems de ensuciarse
fcilmente con el mal uso, esto hace que la composicin del vidrio cambie,
provocando que la respuesta del electrodo se vuelva lenta o errnea; cuando
el problema ya es muy grave, ni siquiera se puede estandarizar. Si esto sucede
se recomienda un lavado con HC16 M y luego enjuagar con agua destilada.
Si el lavado no funciona, reporte el electrodo con su profesor o a la
Coordinacin de Laboratorios para que procedan a un lavado ms riguroso
con bifluoruro de amonio, NH4HF2, al 20 % p/p. Precaucin: este compuesto
provoca quemaduras en la piel y disuelve el vidrio, por lo que se debe preparar
en vaso de precipitados de plstico (Nalgen). El electrodo se sumerge en la
disolucin durante un minuto, disolviendo un poco de la membrana de vidrio y
exponiendo una superficie nueva. Enseguida se enjuaga el electrodo con
abundante agua destilada y se calibra nuevamente (Harris, 1992).
111
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 8
Determinacin potenciomtrica de
constantes de ionizacin
Introduccin
El mtodo potenciomtrico consiste en la medicin de la diferencia de potencial
entre el electrodo indicador y el electrodo de referencia, en diferentes intervalos,
durante el transcurso de una valoracin.
Un potencial de electrodo corresponde aun proceso de equilibrio y durante
su medicin no debe alterarse, porque de otro modo el potencial obtenido ser
incorrecto. Los dos tipos principales de electrodos usados en el trabajo
potenciomtrico son:
a)
b)
Objetivo
El alumno aprender la instalacin y el uso de una celda para la determinacin
potenciomtrica de las constantes de ionizacin.
113
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Referencia
Indicador
Calomel
Vidrio
Ag-AgCI
Vidrio
Red-ox orgnico
Ni
Pt
Red-ox inorgnico
Pt
Precipitacin, ion Ag
Hg 2 so 4
Ag
Calomel
Metal pesado
Materiales y reactivos
Potencimetro
Electrodo combinado de vidrio para medir pH
2 matraces aforados de 100 mi
4 vasos de precipitados de 100 mi
Pipeta volumtrica de 20 mi
Piseta con agua destilada
Vidrio de reloj
Esptula
Balanza analtica
Agitador de vidrio
Bureta de 50 mi
Soporte universal
Pinzas para bureta
Parrilla con agitacin magntica
Agitador magntico
cido tartrico
NaOH
Disolucin amortiguadora de pH 4 y 7
114
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de
accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en
el captulo 1.
Para el manejo del NaOH es necesario el uso de lentes de seguridad y
guantes de neopreno, nitrilo o vinilo. Siempre debe manejarse en la
campana y no deben utilizarse lentes de contacto al trabajar con este
compuesto. Recuerde que es irritante y corrosivo y que puede causar
dao al tracto respiratorio, piel y ojos.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
115
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cuestionario
1.
2.
3.
4.
116
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Prctica 9
Titulacin potenciomtrica del ferrocianuro con cerio
Introduccin
El curso de la reaccin de titulacin potenciomtrica se sigue, midiendo con un
potencimetro la concentracin de una o de varias especies. En esta prctica
se estudia la titulacin del Fe (II) con el Ce (IV), en donde la variacin de las
concentraciones durante la titulacin es la siguiente:
Fe2+
Ce4+
Fe3+ +
Ce3+
Inicio
Co
Agregado
XCo
A.P.E.
Co(l-X)
eCo
XCo
XCo
P.Eq.
sCo
eCo
Co
Co
D.P.E.
sCo
Co(X-l)
Co
Co
117
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
E=
2.
118
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
pH
/!
11
/i
/ |
'j
mi de disolucin valorante
mi de disolucin valorante
119
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
A 2 pH
A 2 ml
mi de disolucin valorante
Figura 4.5 Mtodo de la segunda derivada.
Objetivo
El alumno efectuar una titulacin potenciomtrica redox, para el estudio experimental de la curva de valoracin del ferrocianuro de potasio con nitrato
crico amoniacal.
120
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Materiales y reactivos
Potencimetro
Electrodo de vidrio para medir pH
Electrodo de referencia de calomel normal
3 matraces aforados de 100 mi
3 vasos de precipitados de 100 mi
Pipeta volumtrica de 20 mi
Piseta con agua destilada
Vidrio de reloj
Esptula
Balanza analtica
Agitador de vidrio
Bureta de 50 mi
Soporte universal
Pinzas para bureta
Parrilla con agitacin magntica
Agitador magntico
Ferrocianuro de potasio trihidratado
Nitrato crico amoniacal
HCl concentrado
Disolucin reguladora pH 4
Disolucin reguladora pH 7
Normas de seguridad
Tome en cuenta los puntos 2, 3 y 4 del apartado "Prevencin de
accidentes en el trabajo con sustancias qumicas", que se encuentra en
el captulo 1.
Para el manejo del HCl es necesario el uso de lentes de seguridad y de
guantes de neopreno. Siempre debe manej arse en la campana y no deben
utilizarse lentes de contacto al trabajar con este compuesto. Recuerde
que es irritante, corrosivo y que puede causar dao al tracto respiratorio,
piel y ojos.
121
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
Potencimetrro
Electrodo
indicador
Electrodo de
calomel saturado
122
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Cuestionario
1.
2.
Sn2++ Fe3+
123
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
V mi de Ce adicionado
E(v)
12.5
0.496
25.0
0.524
37.5
0.552
45.0
0.58
47.5
0.559
48.5
0.613
49.5
0.641
49.55
0.644
49.7
0.655
49.8
0.665
49.9
0.683
50
0.944
50.1
1.205
50.2
1.22
50.3
1.233
50.4
1.24
50.4
1.24
51
1.263
55
1.305
62.5
1.328
75
1.346
124
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Bibliografa
Bibliografa
Bates, R. G. 1973. Determination ofpH. Theory andPractice. Ed. Wiley
and Sons, USA.
Brewer, S. 1987. Solucin de problemas de qumica analtica. Ed. Limusa,.
Mxico.
Campbell, M. L. y B. A. Waite. 1990. "The Ka Vales of Water and the
Hydronium ion for Comparison with other Acids". J. Chem. Educ. Vol.
67, No. 5:386-388.
Ewing, G. W. 1979. Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Ed. Me
GrawHill, Mxico.
Garca, V. Y. M. 1988. Equilibrio qumico aplicado a la qumica analtica.
Ed. Diana, Mxico.
Harris, D. C. 1992. Anlisis qumico cuantitativo. Ed. Iberoamrica, Mxico.
Instrucciones de operacin del medidor depH Conductronic modelo 10.
1990. Conductronic, S.A., Mxico.
Instrucciones de operacin del medidor de pH Conductronic modelo 20.
1989. Conductronic, S.A., Mxico.
Koltoff, Y. M. y E. B. Sandel. 1969. Quantitative Chemical Analysis. The
Macmillan Company, USA.
Meites, L. (editor). 1963. HandbookofChemistry. Me Graw Hill, USA.
Meloan, C. F. y R. M. Kiser. 1973. Problemas y experimentos en anlisis
instrumental. Ed. Reverte, Mxico.
Nakagawa, K. 1990. "Amodified Graphical Method for Acid-base Equilibria". J. Chem. Educ, Vol. 67, No. 8: 673-676.
125
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
126
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com
Este manual va dirigido a todas las personas interesadas en conocer los principios y fundamentos
del anlisis instrumental.
Las tcnicas actuales de control de calidad se basan en gran parte en la cromatografa de gases.
La industria en general requiere de personal capacitado en el manejo de cromatgrafos no slo de
gases sino tambin de lquidos de alta resolucin.
En este manual se encontrarn los fundamentos de ambas tcnicas, as como prcticas para el uso del
anlisis cualitativo y cuantitativo en las cuales se manejan las tcnicas de uso comn en patrones internos y externos.
En cuanto al anlisis espectral, se lleva de la mano al lector para que pueda hacer un anlisis
completo, desde la seleccin de la longitud de onda de mxima absorcin hasta la cuantificacin de
una muestra problema.
En resumen, este libro puede ser utilizado por alumnos de cualquier licenciatura cuyos programas de
estudio manejen la cromatografa de gases y de lquidos, la potenciometra y la espectrofotometra.
Por su parte, los profesionales de la educacin encontrarn en l un apoyo para manejar estos temas
no slo en la parte prctica sino tambin en su parte terica, adems de contar con buenas y actualizadas referencias bibliogrficas.
N.E. 0726
$65.00
9 789706 543639
DERECHOS RESERVADOS 2004, Universidad Autnoma Metropolitana (Mxico). Prohibida la reproduccin de esta obra as como la distribucin y venta fuera del mbito de la UAM. E-libro Bibliomedia Bibliomedia@mail.com