Prueba Composicin Indicadores

Reactivos de
lectura
Fundamento Interpretacin
Tincin de
Gram
Agua esteril
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-acetona
Saranina
-----------------------
-
-----------------
--------
La membrana de las bacterias contiene
p!ptidoglicano" Cuando se adiciona el cristal violeta #
lugol orman un comple$o cristal violeta-#odo" La
dierencia %ue se observa en la resistencia a la
decoloracin& se debe a %ue la membrana e'terna de
las Gram negativas es soluble en solventes org(nicos&
como por e$emplo la me)cla de alcohol*acetona" La
capa de peptidoglicano %ue posee es demasiado
delgada como para poder retener el comple$o de
cristal violeta-#odo %ue se orm previamente& # por
lo tanto este comple$o se escapa& perdi!ndose la
coloracin a)ul-viol(cea" Pero por el contrario& las
Gram positivas& al poseer una pared celular m(s
resistente # con ma#or proporcin de
peptidoglicanos& no son susceptibles a la accin del
solvente org(nico& sino %ue este act+a deshidratando
los poros cerr(ndolos& lo %ue impide %ue pueda
escaparse el comple$o cristal violeta*#odo& #
manteniendo la coloracin a)ul-viol(cea"
Gram positivas,
-oradas a a)ules
Gram negativas,
Ro$as a rosas
.'idasa
/iscos con
0&0&0&0-tetrametil
-p-enilendiamina
-----------------------
-----------------
------
Se basa en la produccin bacteriana de una en)ima
o'idasa intracelular& esta reaccin de o'idasa se debe
a un sistema de citocromo o'idasa %ue activa la
o'idacin del citocromo reducido por el o'igeno
molecular %ue a su ve)& act+a como un receptor de
electrones en la parte terminal del sistema de
transerencia de electrones"
Reaccin %u1mica, Los colorantes de p-enilendiamina
son aminas arom(ticas primarias derivados& diamino
del benceno& el citocromo o'idasa no reacciona
directamente con el reactivo enilendiamina pero
o'ida al citocromo C %ue a su ve) o'ida al reactivo& la
enilendiamina es metilada # cuantos mas grupos
metilados se introducen en el radical amino el color es
mas a)ul" Si se introducen tres grupos enilos en lugar
del metilo el color es aun m(s oscuro"
Positivo, coloracin a)ul marino
0egativo, sin cambio de coloracin
Catalasa
Per'ido de
hidrogeno 234
-----------------------
-----------------
-------
La catalasa actua como una en)ima esencial de
deensa biolgica contra la to'isidad del o'igeno" La
catalasa es una en)ima %ue descompone al per'ido
Positivo, eervescencia burbu$eo
0egativo, sin cambios
de hidrgeno en o'1geno # agua
.*F
5o'idacion*er
mentacion6
-edio b(sico de
7ugh Leison
Peptona
0aCl
Fosato de potasio
7idratos de
carbono
Agar
Agua destilada
A)ul de
bromotimol
Ph,
verde a 8&3
amarillo a 9&3
a)ul a 8&9
-----------------
------
Se basa en la determinacin del metabolismo
o'idativo o ermentativo de un hidrato de carbono"
Son necesarios dos tubos del medio para la prueba" :l
medio du un tipo se e'pone al aire # el otro se cubre
con aceite mineral o paraina l1%uido" Las bacterias
o'idativas producen acido solo en el tubo abierto
e'puesto al o'igeno atmos!rico; los microorganismos
ermentadores producen (cidos en ambos tubos; as
bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio #
permanecen con un p7 alcalino"
. * F
Amarillo*amarillo, ermentativo
acultativo
Amarillo*verde, o'idativo
<erde*amarillo, ermentador e'tricto
A)ul*a)ul, no ermentador 5usa
peptonas6
Gota
suspendida
Agua esteril -----------------------
-----------------
----------
Algunas bacterias son mviles por presentar lagelo&
los lagelos son encontrados principalmente en las
ormas bacilares # pueden presentarse en n+mero #
posiciones variadas" La base de esta prueba es
determinar si la bacteria es mvil o inmvil"
Positivo, -ovimiento de un lado a otro
del campo
0egativo, sin movimiento o movimiento
gausuano
=iA
5agar de
hierro de
=inger6
:'tracto de carne
Peptona
Glucosa
Citrato !rrico
amnico
Lactosa
Cloruro sdico
Tiosulato sdico
:'tracto de
levadura
Ro$o de enol
Ph,
9&> amarillo
>&? ro$o
-----------------
------
:n este medio se observa si la bacteria es capa) de
ermentar glucosa # lactosa& si es as1 los carbohidratos
orman (cidos %ue hacen %ue vire el indicador del
medio& adem(s si tiene produccin de acido sul+rico;
el tiosulato es un intermediario %ue reduce el suluro
a 7@S en el metabolismo de la bacteria& el tiosulato
rempla)a al sulato como uente de a)ure" :l 7@S
reacciona con el citrato de amonio errico&
produciendo un precipitado insoluble negro"
Tambi!n sirve para ver la produccin de gas& cual%uier
gas %ue produ)ca la bacteria"
Gas,
Positivo, cuarteado o botado el agar
0egativo, sin cambios
7@S,
Positivo, coloracin negra
0egativo, sin cambio
Fermentacin de la sacarosa,
Pico *lauta,
Acido*acido ermentador
Acido*alcalino no ermentador
Alcalino*alcalino no sacarolitico
TSI
5hierro triple
a)ucar6
:stracto de carne
Polipeptona
Cloruro de sodio
lactosa
Glucosa
Sacarosa
Sulato de hierro
Amonio
Tiosulato de sodio
Agar
Ro$o de enol
Ph,
9&> amarillo
>&? ro$o
-----------------
------
-edio empleado para la dierenciacin de la
ermentacin de glucosa& lactosa& sacarosa # la
produccin de (cido sulh1drico" :l tiosulato de sodio
es el sustrato necesario para la produccin de (cido
sulh1drico& el sulato de hierro # amonio& es la uente
de iones Fe2A & los cuales se combinan con el (cido
sulh1drico # producen suluro de hierro& de color
negro" Ro$o de enol es el indicador de p7& el cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico" Por
ermentacin de a)+cares& se producen (cidos& %ue se
Positivo para ermentacin, ro$o
0egativo, amarillo
Gas,
Positivo, cuarteado o botado el agar
0egativo, sin cambios
7@S,
Positivo, coloracin negra
0egativo, sin cambio
detectan por medio del indicador ro$o de enol& el cual
vira al color amarillo en medio (cido" :l tiosulato de
sodio se reduce a suluro de hidrgeno el %ue
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando
el t1pico suluro de hierro de color negro
Brea 5Stuart6
Fosato
monopotasico
Fosato disodico
:'tracto de
levadura
Brea
Agua desioni)ada
Ro$o de enol
Ph,
9&> amarillo
>&? ro$o
-----------------
------
/etermina la capacidad de un organismo de
desdoblar la urea ormando dos mol!culas de
amoniaco por la accin de la en)ima ureasa
produciendo un cambio de color ro$o en el medio" La
hidrolisis de la urea es catali)ada por la ureasa para
dar dos mol!culas de amoniaco" La ureasa es una
en)ima microbiana vinculada con la descomposicin
de los compuestos org(nicos"
Positivo, ro$o rosado intenso en el pico
de lauta
0egativo, amarillo
Brea
5Cristensen6
Peptona
0aCl
Fosato
monopotasico
Glucosa
Brea
Agar
agua destilada
Ro$o de enol
Ph,
9&> amarillo
>&? ro$o
-----------------
------
/etermina la capacidad de un organismo de
desdoblar la urea ormando dos mol!culas de
amoniaco por la accin de la en)ima ureasa
produciendo un cambio de color ro$o en el medio" La
hidrolisis de la urea es catali)ada por la ureasa para
dar dos mol!culas de amoniaco" La ureasa es una
importante en)ima microbiana vinculada con la
descomposicin de los compuestos org(nicos"
Positivo, ro$o rosado intenso en el pico
de lauta
0egativo, amarillo
Citratos
Sulato de
magnesio
Fosato
monob(sico
Fosato dipotasico
Citrato de sodio
0aCl
Agar
Agua desioni)ada
A)ul de
bromotimol
Ph,
verde a 8&3
amarillo a 9&3
a)ul a 8&9
-----------------
------
Se usa para determinar si el organismo es capa) de
utili)ar el citrato como +nica uente de carbono #
compuesto amoniacales como +nica uente de
nitrgeno
-edio sin inocular, color verde
Positivo, a)ul de Prusia oscuro
0egativo, sin cambios
-alonatos
:stearato de
levadura
Sulato de amonio
Fosato di pot(sico
Fosato
monopotasico
0a/l
-alonato de sodio
Glucosa
A)ul de
bromotimol
Ph,
verde a 8&3
amarillo a 9&3
a)ul a 8&9
-----------------
------
:l malonato es un inhibidor en)im(tico" :l (cido
malnico se une a la en)ima& #a %ue el (cido
malnico # el (cido succ1nico son estructuralmente
mu# parecidos # ocupa los sitios activos; as1& la en)ima
no puede combinarse con su sustrato& # blo%uea la
accin del acido succ1nico es necesario la activacin
de la en)ima-sustrato para la activacin del sustrato&
para ormar el (cido um(rico" :l (cido succ1nico es el
causante de la inhibicin de la succ1nico
-edio sin inocular, color verde
Positivo, a)ul de Prusia oscuro
0egativo, sin cambios
Agua desioni)ada
deshidrogenasa %ue interrumpe el ciclo de =rebs a
menos %ue el microorganismo pueda utili)ar al
malonato como +nica uente de carbono"
-I.
5motilidad
indol ortinina6
/e'trosa
:stracto de
levadura
Peptona
Tripteina
Clorhidrato de
L-ornitina
Agar
Aceite mineral
purpura de
bromocresol
Ph,
9&2 purpura
C&@ amarillo
9&> purpura
reactivo de
=ovacDs o de
:rlich
cultivo semislido& altamente nutritivo debido a la
presencia de e'tracto de levadura& peptona #
tripte1na" Adem(s& la tripte1na aporta grandes
cantidades de triptoano& sustrato de la en)ima
triptoanasa& para la reali)acin de la prueba del indol"
La de'trosa es el hidrato de carbono ermentable& la
ornitina es el sustrato para la deteccin de la en)ima
ornitina decarbo'ilasa& el p+rpura de bromocresol es
el indicador de p7& %ue en medio alcalino es de color
p+rpura # en medio (cido es amarillo"
Por su composicin& es posible detectar 2 reacciones
en un mismo tubo, movilidad& presencia de ornitina
decarbo'ilasa e indol
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del
medio o por crecimiento %ue diunde mas all( de la
l1nea de inoculacin" La reaccin positiva a la ornitina
est( dada por un color p+rpura del medio" /ebido a la
ermentacin de la glucosa se reduce el p7
produciendo una condicin (cida # originando %ue el
indicador de p7 p+rpura de bromocresol vire al
amarillo"
La presencia de acide)& otorga condiciones ptimas
para la actividad de la en)ima ornitina decarbo'ilasa&
la cual decarbo'ila la ornitina presente" Por
decarbo'ilacin& se alcalini)a el medio& con el
consecuente vira$e del indicador hacia el color
p+rpura" :l indol& es producido a partir del triptoano
por los microorganismos %ue contienen la en)ima
triptoanasa" :l desarrollo de un color ro$o luego de
agregar unas gotas de reactivo de =ovacDs o de :rlich&
indica un resultado positivo
-ovilidad,
-Resultado positivo, presencia de
turbide) o crecimiento mas all( de la
l1nea de siembra" Resultado negativo,
crecimiento solamente en la l1nea de
siembra"
@-.rnitina decarbo'ilasa, -Resultado
positivo, color p+rpura" E
Resultado negativo, color amarillo" A
veces se puede desarrollar un color
viol(ceo en la supericie del medio"
2-Prueba del indol,
La prueba de indol se reali)a una ve)
%ue se ha determinado la movilidad # la
prueba de ornitina" Resultado positivo,
color ro$o al agregar el reactivo
revelador"
Resultado negativo, el color del reactivo
revelador permanece incoloro-
amarillento
Arginina 5Ar6
Peptona
:'tracto de carne
Fosato de pirido'al
Glucosa
purpura de
bromocresol
Ph,
9&2 purpura
-----------------
------
La L-arginina sure una descarbo'ilaciin para
producir agmatina" La agmantina se degrada por dos
v1as& la accin de la en)ima agmantasa rompe la
mol!cula en dos compuestos, putresina # urea" Si la
Positivo, color purpura turbio-amarillo-
purpura apagado
0egativo, sin cambios
Agua desioni)ada
Acaeite mineral
C&@ amarillo
9&> purpura
en)ima ureasa esta presente& la urea es cataboli)ada
ormando dos mol!culas de amoniaco # C.@"
LIA
5agar lisina6
Peptona de gelatina
:'tracto de
Glucosa
Levadura
Citrato de hierro #
Amonio
Tiosulato de
sodio
Agar
Purpura de
bromocresol
Ph,
9&2 purpura
C&@ amarillo
9&> purpura
-----------------
------
:n el medio de cultivo& la peptona # el e'tracto de
levadura aportan los nutrientes para el desarrollo
bacteriano" La glucosa es el hidrato de carbono
ermentable& # la lisina es el sustrato utili)ado para
detectar la presencia de las en)imas decarbo'ilasa #
deaminasa" :l citrato de hierro # amonio& # el
tiosulato de sodio& son los indicadores de la
produccin de (cido sulh1drico" :l purpura de
bromocresol& es el indicador de p7& el cual es de color
amarillo a p7 igual o menor a C"@& # de color violeta a
p7 igual o ma#or a 9">"
Por decarbo'ilacin de la lisina& se produce la amina
cadaverina& %ue alcalini)a el medio # esto produce el
vira$e del indicador al color violeta" La decarbo'ilacin
de la lisina& tiene lugar en medio (cido& por lo %ue es
necesario %ue la glucosa sea previamente
ermentada"
Los microorganismos %ue no producen lisina
decarbo'ilasa& pero %ue son ermentadores de la
glucosa& producen un vira$e de la totalidad del medio
de cultivo al amarillo& pero a las @? hs de incubacin
se observa el pico de color violeta debido al consumo
de las peptonas& # el ondo amarillo"
La produccin de suluro de hidrgeno& se visuali)a
por el ennegrecimiento del medio debido a la
ormacin de suluro de hierro"
Las cepas de los g!neros Proteus& Providencia #
algunas cepas de -organella& desaminan la lisina&
esto produce un (cido ala-ceto-carbnico& el cual&
con la sal de hierro # ba$o la inluencia del o'1geno
orma un color ro$i)o en la supericie del medio"
/escarbo'ilacion de la lisina
Positivo, color purpura turbio-amarillo-
purpura apagado
0egativo, sin cambios
7@S,
Positivo, coloracin negra
0egativo, sin cambio
SI-
5acido
sulhidrico&
indol&
motilidad6
Tripteina
Peptona
Sulato de amonio #
hierro
Tiosulato de sodio
Agar
-----------------------
reactivo de
=ovacDs o de
:rlich
:l triptano es un amino(cido constitu#ente de
muchas peptonas& # particularmente de la tripte1na&
%ue puede ser o'idado por algunas bacterias para
ormar indol"
:n el proceso interviene un con$unto de en)imas
llamadas triptoanasa" :l indol producido se combina
con el aldehido del reactivo de =ovac s o de :rlich&
7@S,
Positivo, coloracin negra
0egativo, sin cambio
-ovilidad,
-Resultado positivo, presencia de
turbide) o crecimiento mas all( de la
para originar un compuesto de color ro$o" Las cepas
mviles pueden apreciarse en este medio& por la
turbide) %ue producen alrededor de la puncin de
siembra& mientras %ue a%uellas cepas productoras de
sulh1drico se distinguen por la ormacin de un
precipitado negro de suluro de hierro a partir del
tiosulato siempre %ue el medio se mantenga a un p7
ma#or a 8"@
l1nea de siembra" Resultado negativo,
crecimiento solamente en la l1nea de
siembra"
Indol
Positivo; anillo color ro$o en la
supericie
0egativo, sin cambio
Gelatina
Gelatina nutriente
Carbono activado
Agua corriente
-----------------------
-----------------
------
La ma#or1a de los pol1meros son demasiado grandes
para ser transportados dentro de las c!lulas" Las
bacterias e'cretan en)imas e'tracelulares %ue
hidroli)an esos pol1meros transportando al interior de
la c!lula en monmeros %ue les sirven para crecer"
La produccin de proteasas es evaluada por
incorporacin de una prote1na 5gelatina o case1na6 en
un medio slido en placa" La placa se inunda con (cido
%ue precipita la proteina no hidroli)ada"
Positivo ha# licueaccin
0egativo medio solido
0itratos
5reduccin de
nitritos6
Peptona
e'tracto de carne
nitrato de potasio
agua destilada
-----------------------
alanalilami
na # (cido
sulan1lico
)inc
Algunas bacteris pueden usar nitratos como aceptor
inal de e- en la respiracin" el nitrato puede ser
reducido a nitrito o en un paso m(s a gases 5'idos de
nitrgeno6"
Las bacterias se inoculan en medios conteniendo
nitrato pot(sico" :l nitrito procedente de la reduccin
de c!lulas puede detectarse aFadiendo
alanalilamina # (cido sulan1lico produciendose un
color ro$o" Se puede saber si el nitrato puede haberse
reducido a m(s %ue a nitritos produciendose gas" Si al
aFadir )inc en polvo no ha# color ro$o es %ue no ha#
nitrato por%ue se ha reducido a gas 5desnitriicacin6
Positivo al agregar alanalilamina #
(cido sulan1lico
Positivo Ro$o
0egativo, sin cambio
Al agregar )inc
Positivo, sin cambio
0egativo, color ro$o
7idrlisis
del hipurato
Inusin de carne
de cora)n
Case1na
Peptona de
levadura
0aCl
7ipurato de sodio
Agua destilada
-----------------------
0inhidrina
Cloruro
!rrico
:n el medio de prueba se usa una sal de hipurato %ue
orma ben)oato de sodio # lisinato de sodio por
hidrolisis" Los productos inales del (cido hipurico&
(cido ben)oico # lisina son insolubles en agua; sus
sales son solubles" La hipuricasa produce hidrolisis en
la unin peptidica del acido hip+rico" La hidrlisis del
hipurato es detectada detectando cual%uier producto
inal& el acido ben)oico en el medio agregando una
solucin de cloruro !rrico acidiicada #a %ue es
Positiva, Precipitado %ue perdure por
m(s de G3 minutos
0egativo sin cambios o %ue el
precipitado desapare)ca
sensible al m!todo # la lisina es detectada por el
m!todo de ninhidrina
-R-<P,
5Ro$o de
metilo #
<oges-
ProsHauer6
Polipeptona
/igerido
pancre(tico de
case1na
/e'trosa
Fosato de potasio
Agua destilada
-----------------------
-R, Ro$o de
enol
<P, =.7
ala-natol

La glucosa puede ser metaboli)ada por los
microorganismos& a trav!s de distintas v1as
metablicas" Seg+n la v1a utili)ada& se originar(n
productos inales (cidos 5(cido l(ctico& (cido ac!tico&
(cido rmico6& o productos inales neutros 5acetil
metil carbinol& acatoina6"
-R, :S una prueba cualitativa basada en el uso de
indicador ro$o de metilo %ue nos indica por %ue v1a
metablica se ermento la glucosa" La coloracin ro$a
nos indica %ue la glucosa es metaboli)ada v1a (cidos
mi'tos"
<P, Se basa en la deteccin de acetoina un producto
inal neutro derivado de la glucosa" :n la prueba el
primer reactivo de lectura agregado es el catali)ador
I"natol %ue act+a como un intensiicador de color& lo
%ue aumenta la especiicidad de la reaccin& el
I"natol se combina con el producto de la reaccin del
diacetilo # con el compuesto de tipo guanidina
presente en la peptona& el =.7 el ?34 a#uda a los
absorcin de C.@& estos dos reactivos a#uda a la
reaccin para %ue produ)ca el diacetilo %ue es una
sustancia reactante activa" La prueba de <P esta
basada en la reaccin de diacetilo # el n+cleo de
guanidina a%u1 presente en la argunina"
:s necesario un grupo amino libre disponibleen la
mol!cula de guanidina proveniente de la arginina en
la peptona para el desarrollo de color" Cundo se
me)clan en proporciones correctas diacetilo peptona
# I"natol& se desarrolla de manera casi instant(nea
una coloracin ro$a en la supericie del medio"
-R,
Positivo,
0egativo, sin cambios
<P,
Positivo, anillo ro$o en la supericie %ue
aparesca # persista en G3 minutos
0egativo, sin cambios o desaparece el
anillo en el transcurso de G3 minutos
Fermentacin
de
carbohidratos
generalmente
Caldo b(sico
PeptonaJJJJ""G3g
carbohidrato al G4
:'tracto de carneGg
Ro$o de enol
Ph,
9&> amarillo
>&? ro$o
-----------------
------
La ermentacin es un proceso metablico& las
bacterias %ue ermentan hidratos de carbono son por
lo general anaerobios acultativos" Por medio del
proceso de ermentacin de un hirato de carbono es
-edio sin inocular, naran$a ro$i)o
Positivo, amarillo
son,
salicina
manitol
maltosa"
0aClJJJJJJ""""Cg
Agua destiladaJ""GL
degradada # descompuesto en dos mol!culas de
carbono triosas %ue son nuevamente degradadas" Los
productos inales var1an con cada especie bacteriana&
del carbohidrato # del sistema en)im(tico de la
especie"
0egativo, sin cambios o ro$o
7idrlisis de
Kilis :sculina
Peptona de case1na
Peptona de carne
:'tracto de
levadura
:sculina
.'gall 5bilis6
0aCl
Citrato de hierro #
amonio
Citrato de sodio
A)ida sdica
Agar
Agua deshioni)ada
-----------------------
-----------------
------
Los acetales se hidroli)an con acilidad por la accin
de los (cidos la base de la prueba de la esculina es la
hidrlisis en la ligadura L de la esculina a esculetina&
por una L-glucosidasa constitutiva la cual libera una
mol!cula de glucosa
La esculetina reacciona con una sal de hierro 2 para
ormar un comple$o enolico de color castaFo oscuro
o negro" :l citrato !rrico # de amonio es incorporado
al medio de bilis # esculina de 3"3C4 como indicador
de hidrlisis de la esculina # produce la ormacin de
esculetina& la hidrlisis se produce en @ pasos,
a6 Crecer en presencia de una concentracin
particular de bilis"
b6 Producir esculinasa para hidroli)ar la
esculina"
Positivo, Presipitado negro
0egativa, sin cambios
Factor CA-P
5son las siglas
de los
descubridores
de dicho
actor6
Agar sangre,
-----------------------
-----------------
------
Bna prote1na denominada actor = %ue interactua
con la L-hemolisina& producida secretada por
Staphylococos aerus& produce aumento sinergico de la
hemolisis& # se ve una )ona en orma de punta de
leha & donde se observa una ma#or hemolisis cerca
de la unin de las dos estrias de desarrollo"
Positiva, punta de lecha
0egativo, no ha# sinergismo
Antibiograma
/iscos con,
Kacitracina
<ancomisina
.pto%uina
Penicilina
AmiHasina
Cloraenicol
-edio de cultivo,
-uller 7inton
-----------------
------
.bservar la resistencia a los antibiticos de la cepas&
observando si ha# o no crecimiento bacteriano al
rededor de los discos"
Sensible, halo de inhibicin de acuerdo
con el antibitico"
Resistente, sin halo o halo menor de
acuerdo al antibiotico"
Coagulasa
Plasma de humano
o de cone$o
-----------------------
-----------------
------
/etectan ambas coagulasas la libre # la ligada siendo
la +nica distincin entre ambas la antig!nica" La
coagulasa libre e'tra celular reacciona con una
sustancia libre en el plasma 5actor del suero6&
denominado tambi!n actor de reaccin de la
coagulasa 5CRF6& una sustancia termoestable similar a
Positivo, ormacin de un coagulo
0egativo, sin cambios
la trombina" :l CFR es en activador& una mol!cula
derivada o modiicada de la trombina" La coagulasa
libre e'tracelular reacciona con el CRF ormando un
comple$o" :ste comple$o act+a de manera indirecta
para convertir el ibringeno en ibrina& durante la
coagulacin se liberan p!ptidos similares a partir del
ibringeno # del comple$o coagulasa-CRF& la
dierencia principal es %ue el CRF %ue reacciona con
la coagulasa no re%uiere iones de calcio para ormar el
coagulo # es inestable a la heparina"
Agar TCKS
5tiosulato
citrato bilis
sacarosa6
Extracto de
Levadura
Sacarosa
Peptona de Casena
Cloruro de Sodio
Peptona de Carne
Tiosulfato de Sodio
Citrato de Sodio
Bilis disecada
Colato de Sodio
Citrato de Hierro
Agar Bacteriolgico
Azul de Timol
Azul de
Bromotimol !P"
#$% verde$ &$%
amarillo$ #$& azul'
-----------------
------
:l Agar TCKS& por las iniciales de Tiosulato-Citrato-
Kilis-Sacarosa& es preparado de acuerdo con la
rmula de =oba#ashi # col" siendo una modiicacin
del medio de 0aHanishi" :n el Agar TCKS crecen todas
las especies de <ibrio patgenas para el humano
e'cepto <" hollisae" Las muestras pueden ser de
materiales tanto cl1nicos como no cl1nicos" :l Agar
TCKS es altamente selectivo para las especies de
<ibrio debido a sus componentes nutricionales # a la
alta concentracin de sales # es ampliamente utili)ado
en placa para el primoaislamiento" :ste medio $unto
en el Agua Peptonada Alcalina es utili)ado para el
aislamiento de <"cholerae # otras especies a partir de
muestras ecales"
:n este mediio el e'tracto de levadura # las peptonas
proporcionan la uente de nitrgeno& vitaminas #
amino(cidos" :l citrato de sodio& el tiosulato de sodio
# la bilis act+an como agentes inhibidores de
microorganismos Gram positivos # coliormes dando
alcalinidad al medio" La sacarosa es el carbohidrato
ermentable" :l cloruro de sodio promueve el
crecimiento" :l tiosulato de sodio es la uente de
suluro # el citrato de hierro es un indicador para
detectar la produccin de 7@S" :l a)ul de timol # de
bromotimol act+a como indicadores de p7" :l agar
bacteriolgico es agregado como agente
solidiicante"
(espu)s de *+ a ,- "oras de incu.acin$
la sacarosa es fermentada por los vi.rios
/ue dan colonias de tama0o mediano$
lisas$ opacas$ de color amarillo
1vulnifucus no fermenta la sacarosa
presentando una coloracin verde
Agar -C
5-ac ConHe#6
Peptona
Pluripeptona
Ro$o neutro
-----------------
------
:n el medio de cultivo& las peptonas& aportan los
nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano& la
MicroorganismosColonias
Escherichia coli Rojas con halo turbio
Lactosa
-e)cla de sales
biliares
Cloruro de sodio
Agar
Ro$o neutro
Cristal violeta
lactosa es el hidrato de carbono ermentable& # la
me)cla de sales biliares # el cristal violeta son los
agentes selectivos %ue inhiben el desarrollo de gran
parte de la lora Gram positiva"
Por ermentacin de la lactosa& disminu#e el p7
alrededor de la colonia" :sto produce un vira$e del
color del indicador de p7 5ro$o neutro6& la absorcin
en las colonias& # la precipitacin de las sales biliares"
Los microorganismos no ermentadores de lactosa
producen colonias incoloras"
Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes
Shigella flexneri Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas
Agar <K
5<erde
brillante6
Plurepetona
:'tracto de
levadura
Cloruro de sodio
Lactosa
Sacarosa
Ro$o de enol
<erde brillante
agar
Ro$o de enol
-----------------
------
:n el medio de cultivo& la pluripeptona # el e'tracto de
levadura& constitu#en la uente de nitrgeno&
vitaminas # minerales" La lactosa # la sacarosa son los
hidratos de carbono ermentables& el ro$o enol es el
indicador de p7& %ue vira al amarillo cuando ha#
produccin de (cido a partir de la ermentacin de
a)+cares& el cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico& # el verde brillante act+a como agente
selectivo
Microorganismos
Caractersticas de
las colonias
Escherichia coli A!!
"#$""
Amarillo%&erdosas
sobre fondo
amarillento
Salmonella
enteritidis A!!
'()*+
Rosas, blancas o
transparentes
sobre fondo rojo
Salmonella typhi
!recimiento
inhibido
Salmonella
typhimurium A!!
',)"-
Rosas, blancas o
transparentes
sobre fondo rojo
Shigella flexneri.
A!! '")""
!recimiento
inhibido
Staphylococcus
aureus A!! "#$"(
!recimiento
inhibido
Agar SS
5Sanmonela-
Shigella6
Pluripeptona
e'tracto de carne
lactosa
me)cla de sales
biliares
citrato de sodio
agar
verde brillante
ro$o neutro
Ro$o neutro
-----------------
------
:s un medio de cultivo selectivo # dierencial"
La selectividad& esta dada por la sales biliares # el
verde brillante& %ue inhiben el desarrollo de bacterias
Gram positivas& de la ma#or1a de los coliormes # el
desarrollo invasor del Proteus spp"
:s dierencial debido a la ermentacin de la lactosa& #
a la ormacin de (cido sulh1drico a partir del
tiosulato de sodio"
Los pocos microorganismos ermentadores de lactosa
capaces de desarrollar& acidiican el medio haciendo
virar al ro$o el indicador de p7& obteni!ndose colonias
rosadas o ro$as sobre un ondo ro$i)o"
Salmonella& Shigella # otros microorganismos no
ermentadores de lactosa& crecen bien en el medio de
cultivo& # producen colonias transparentes"
Microorganismo
s
Caractersticas
de las colonias
Salmonella
t#phimurium
ATCC G?3@>
Transparente
s& centro
negro
Shigella
le'neri
Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus
mirabilis ATCC
?238G
Transparente
s& centro
negro
:scherichia coli
ATCC @CM@@
Rosadas a
ro$as
La produccin de (cido sulh1drico se evidencia como
colonias con centro negro debido a la ormacin de
suluro de hierro
=lebsiella
pneumoniae
ATCC 833932
Rosadas
cremosas #
mucosas
Agar NL/
5Nilosa& lisina&
deso'icolato6
Nilosa
L-lisina
Lactosa
Sacarosa
0aCl
:'tracto de
lavadura
/eso'icolato de
sodio
Tiosulato de sodio
Citrato !rrico
amonio
Ro$o de enol
-----------------
------
NL/ Agar es un medio selectivo # de dierenciacin"
Contiene e'tracto de levadura como uente de
nutrientes # vitaminas" Btili)a el deso'icolato de sodio
como agente selectivo #& por consiguiente& inhibe los
microorganismos gram positivos" La 'ilosa se
incorpora en el medio dado %ue la ermentan
pr(cticamente todos los ent!ricos& e'cepto Shigella& #
esta propiedad hace posible la dierenciacin de dicha
especie" La lisina se inclu#e para permitir la
dierenciacin del grupo Salmonella de los organismos
no patgenos& dado %ue& sin lisina& Salmonella
ermentar1a r(pidamente la 'ilosa # no se distinguir1a
de las especies no patgenas" Cuando la Salmonella
agota el suministro de 'ilosa& la lisina es atacada por la
en)ima lisina descarbo'ilasa& lo %ue genera un cambio
a un p7 alcalino %ue imita la reaccin de Shigella" Para
evitar el cambio similar en los organismos coliormes
positivos a la lisina& se aFaden lactosa # sacarosa para
producir (cido en e'cesoG"
Para aumentar la capacidad de dierenciacin de la
rmula& se inclu#e un sistema indicador de 7@S&
ormado por tiosulato sdico # citrato !rrico
amnico& para la visuali)acin del (cido sulh1drico
producido& lo %ue origina la ormacin de colonias con
centros de color negro" Los organismos no patgenos
no productores de 7@S no descarbo'ilan la lisina; por
tanto& la reaccin (cida producida por dichos
organismos evita el oscurecimiento de las colonias& lo
%ue sucede slo con p7 alcalino o neutro
Cepas Resultados del
crecimiento
Salmonella
yphimurium
!recimiento de
bueno a
excelente/
colonias rojas con
centros de color
negro
Salmonella
Abony
!recimiento de
bueno a
excelente/
colonias rojas con
centros de color
negro
Shigella
flexneri
!recimiento de
bueno a
excelente/
colonias rojas
Shigella
sonnei
!recimiento de
bueno a
excelente/
colonias rojas
Enterococcus
faecalis
Inhibici0n de
parcial a completa
Escherichia
coli
Inhibici0n de
parcial a
completa/ colonias
de amarillas a rojo
amarillentas
Proteus
mirabilis
!recimiento/
colonias de color
rojo carmes1 con
centros negros,
proliferaci0n
inhibida
Agar :-K
5:osina asul
Peptona
Lactosa
A)ulde metileno
-----------------
------
La dierenciacin entre organismos capaces de utili)ar
la lactosa #*o sacarosa& # a%uellos %ue son incapaces
Microorganismos Tipo de Colonia
Escherichia coli
2erdosas con brillo
met3lico y centro
negro a4ulado
Klebsiella
pneumoniae
5ucosas, rosa
p6rpura, confluentes
de metileno6
Sacarosa
Fosato dipotasico
Agar
eosina
de hacerlo& est( dada por los indicadores eosina # a)ul
de metileno; !stos e$ercen un eecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas" -uchas cepas de
:scherichia coli # Citrobacter spp" presentan un
caracter1stico brillo met(lico" Las cepas %ue utili)an la
lactosa poseen centro oscuro con perieria a)ulada o
rosada& mientras %ue las %ue no lo hacen son
incoloras" :ste medio permite el crecimiento de
Candida spp" como colonias rosadas # puntiormes; la
siembra en proundidad permite el desarrollo de
clamidosporas en C" albicans" :nterococcus spp" crece
en este medio como colonias puntiormes #
transparentes& mientras %ue Acinetobacter spp" #
otras bacterias o'idativas pueden dar colonias de
color a)ul lavanda; esto puede ocurrir aun%ue las
cepas no sean capaces de acidiicar a partir de lactosa
al 3"C4 # ello se debe a la incorporacin de a)ul de
metileno a sus membranas" :n este medio se obtiene
adem(s& un buen desarrollo de especies de
Salmonella # Shigella"
Proteus mirabilis Incoloras
Enterococcus
faecalis
Incoloras, pe7ue8as,
puntiformes
Shigella flexneri Incoloras
Salmonella
typhimurium
Incoloras
Agar AST
5agar so#a
trpticaseina6
Peptona de Casena
Peptona de So2a
Cloruro de Sodio
Agar Bacteriolgico
-----------------------
-----------------
------
:n este medio las peptonas proveen la uente de
nitrgeno # minirales" :l a)+car de la Peptona de So#a
provee la uente de carbohidratos" :l Cloruro de Sodio
tiene su uncin en el balance osmtico # el Agar es
incorporado como agente solidiicante"
crecimiento
Agar AS
5agar sangre6
Inusin de musculo
de cora)n
Peptona
0acl
Agar
Sangre de carnero
-----------------------
-----------------
------
La inusin de m+sculo de cora)n # la peptona&
otorgan al medio un alto valor nutritivo& %ue permite
el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos& a+n de a%uellos nutricionalmente
e'igentes" :l cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico"
:l agregado de sangre al medio de cultivo& en
concentracin inal de C-G3 4& aporta nutrientes para
el crecimiento bacteriano& # permite detectar
hemlisis"
7emolisis I
7emolisis L
7emolisis
Agar
cetrimida
Peptona de gelatina
Cloruro de
magnesio
Sulato de potasio
-----------------------
-----------------
------
La rmula de este medio est( desarrollada para
avorecer la seleccin de P" aeruginosa # estimular la
ormacin de pigmentos" :s !ste un medio mu#
seme$ante al =ing A& en el cual el cloruro de magnesio
Microorganismos Crecimiento
Pseudomonas
aeruginosa
9ueno % excelente
Escherichia coli Inhibido
Agar
cetrimida
# el sulato de potasio promueven la ormacin de
piocianina& pioverdina # piomelanina de P" aeruginosa"
La cetrimida es un detergente catinico %ue act+a
como agente inhibidor& libera el nitrgeno # el soro
de las c!lulas de casi toda la lora acompaFante&
aun%ue inhibe tambi!n algunas especies de
Pseudomonas"
Staphylococcus
aureus
Inhibido
Kibliogra1a,
-ac FA//I0; @332; OPruebas bio%u1micas para la identiicacin de bacterias de inter!s biolgicoP ; tercera edicin; editorial -:/ICA
PA0A-:RICA0A, -ontevideo& Brugua#; p >C3"
=.0:-A0; @332; Odiagnostico microbiolgicoP %uinta edicin& editorial -:/ICA PA0A-:RICA0A& -adrid& :spaFa& p G9MG
0.TA, LAS PRB:KAS KI.QBI-ICAS TI:0:0 -BC7AS <ARIA0T:S : I0T:RPR:TACI.0:S :SP:CIAL:S :0 ALGB0.S CAS.S& AQBI S.L. S:
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