CUANTIFICACIN DE CN (SEMILLAS Y FORRAJES)

DOMNGUEZ VILLA FRANCISCO XAVIER GAMA BRAMBILA RODRIGO ANTONIO VARGAS NERI LUCERO DEL CARMEN MEDINA HERNANDEZ JONATHAN Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Departamento de Ciencias Biolgicas y de la Salud, Seccin de Bioqumica y Farmacologa Humana Laboratorio de Toxicologa e Higiene Pblica, . ABSTRACT Cyanide is one of the most toxic compounds in nature. The molecular structure of this compound consists in a carbon atom triple-bonded to nitrogen. It has great affinity to form bonds with divalent metal ions such as iron (III) ion found in hemoglobin becoming this toxic agent even more dangerous. Cyanide intoxication leads in intracellular hypoxia by binding with the cytochrome oxidase a3, interrupting the oxidative phosphorylation that is essential for life. Because of this, it is important to determinate the presence of cyanide in some materials or foods we use or eat in order to prevent acute cyanide intoxications In nature we can find cyanide inside of some seeds of forages making people prone to be intoxicated. This study is a semiquantitative determination of cyanide in seeds of peach, plum, lime, apple, mango and avocado by means of Gignard reactive paper. Besides, a distillation of hydrocyanic acid in yucca and sorghum was performed. Results show the approximate quantity of cyanide in the seeds of the different fruits used and also that in yucca and sorghum. RESUMEN

El cianuro es uno de los compuestos ms txicos en la naturaleza. La estructura molecular de este compuesto consiste en un tomo de carbono unido a nitrgeno mediante un enlace triple. ste tiene gran afinidad por los iones metlicos, tal como el ion hierro (III) presente en la hemoglobina, hacindose un agente txico aun ms peligroso. La intoxicacin por cianuro produce hipoxia intracelular al unirse con la citocromo oxidasa a3, interrumpiendo la fosforilacin oxidativa, la cual es esencial para la vida. Por ello es importante determinar la presencia de cianuro en algunos materiales o alimentos de uso o ingesta comunes para prevenir intoxicaciones agudas por cianuro. En la naturaleza el cianuro puede ser encontrado en semillas y forrajes haciendo a la gente susceptible a intoxicaciones. Este estudio es una cuantificacin semicuantitativa de cianuro en semillas de durazno, ciruela, limn, manzana, mango y aguacate por medio de la tira reactiva de Gignard. Adems se realiz una destilacin de cido cianhdrico de la yuca y el sorgo. Los resultados muestran una cantidad aproximada del cianuro en las semillas de las diferentes frutas utilizadas y de la yuca y el sorgo. Objetivos Identificar las fuentes naturales de exposicin a cianuro, adems del riesgo individual que puede presentar una intoxicacin por cianuros. Analizar el fundamento de las tcnicas de identificacin y cuantificacin de cianuro en muestras de diferentes semillas.
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Aplicar las tcnicas para la identificacin y cuantificacin de cianuros en el laboratorio

En el SNC la sustancia gris, el hipocampo, el cuerpo estriado y la sustancia negra, son comnmente afectados; esta distribucin de los efectos del cianuro est asociada con la anoxia histotxica. El cianuro tambin puede lesionar la sustancia blanca, particularmente el cuerpo calloso. El cianuro causa hipotensin por los defectos sobre el corazn. El in cianuro estimula directamente los quimiorreceptores del cuerpo carotdeo y de los cuerpos articos, produciendo hipernea. Las alteraciones cardacas son evidenciables despus, puesto que el corazn persiste ms tiempo en sus funciones que el sistema respiratorio.

Introduccin El acido cianhdrico es un liquido voltil, incoloro con olor caracterstico a almendras amargas. Las causas de intoxicacin con los cianuros son muy variadas debido al extendido uso que se les ha dado. Se han utilizado como elemento en ajusticiamiento, en la industria se usa en metalurgia, joyera, cianuracion a nivel industrial de metales. En el rea mdica y biolgica se usa con frecuencia, lo cual facilita la disponibilidad de este elemento y la ocurrencia no solo de accidentes, si no tambin de suicidios. En vegetales se encuentra formando compuestos cianogenticos en gran variedad de plantas, las cuales pueden causar intoxicaciones mortales, especialmente en nios. Vegetales como las almendras, el ceibo de agua, las cerezas, el durazno, el laurel, el lino, la yuca, el casabe y plantas hornamentales como la hortensia, contienen glucsidos cianognicos (amigdalina), que les confiere el olor caracterstico y que son causa de intoxicacin cianhdrica. La dosis letal esta entre 150 y 200 miligramos, dosis total pura en adulto. La inhalacin de 0.3mg/L produce la muerte. El control de la contaminacin en aquellas personas que laboran con cianuro puede hacerse midiendo las cifras de tiocianatos en plasma o en orina: y y Tiocianatos en plasma Tiocianatos en orina creatinina <0.6mg/100ml <2.5mg/gramo de

Desarrollo experimental Para realizar la prueba de identificacin de cianuros se realizaron dos pruebas; una cualitativa, fundamentada en una reaccin con picratos, y otra cuantitativa, por el mtodo de titulacin alcalina. a) Mtodo cualitativa para deteccin de cianuros: Se realizo una solucin patrn a partir de 120mg de KCN aforados a 100ml, posteriormente se tomo una alcuota de 20ml, y se aforo a 100ml (240ppm de KCN equivalentes a 100ppm de HCN). Una vez realizada la curva con la solucin patrn, se pesaron 2g de muestra seca, se maceraron y posteriormente se colocaron en un frasco con 10 ml de agua. Se introdujo en el frasco una tira reactiva de Guignard evitando tocar las paredes, y se coloco en un bao mara durante 5minutos a 35.

Una de las caractersticas que nos permiten entender la alta toxicidad del cianuro, es el hecho de que los complejos (cianuro + metales) son solubles en agua y de esta forma se pueden <<movilizar>> metales txicos para los eres vivo (Cd, Cr, Pb, Hg, As). El cianuro tiene gran afinidad por el hierro frrico (Fe+++); mediante este mecanismo intoxica la citocromo a3, originando asi un bloqueo de oxigenacin de los tejidos, es decir, que produce una anoxia-anxica por intoxicacin histotxica.

b) Mtodo de titulacin alcalina para deteccin de HCN. Se pulverizaron 10 a 20g de muestra y se colocaron en un matraz con 200ml de agua dejando reposar por 14 horas. Posteriormente se realizo un destilado y se recibi en un vaso pp con 20ml de agua con 0.5g NaOH, hasta un volumen de 150ml. Se aforo a 250ml con agua destilada, y se tomaron 2 alcuotas de 100 cada una; se adicionaron respectivamente 8ml de NH4OH 6N, y 2ml de KI 5%. Finalmente se titulo con AgNO3 0.02N hasta la aparicin de turbidez verde lechosa.

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Resultados Tabla 01) Resultados de la identificacin de HCN en las semillas de diferentes frutas por medio de la tira reactiva de Grignard
Equipo Muestra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Limn Ciruela Durazno Ciruela Pasa Manzana Mamey Poma rosa Durazno Aguacate Aguacate <10 <10 <10 50 30 10 <10 10 <10 <10 Peso muestra (g) 2 0.091 2 2 2 2 2 2 2 2

Mecanismo de reaccin

Tabla 02). Resultados de la valoracin alcalina de acuerdo al tipo de materia prima utilizada

Clculo de la cantidad de cianuro en la muestra EQUIPO MUESTRA X DE VOLMEN GASTADO (mL) 0.65 1 0.3 0.3 0.8 0.4 0.3 0.35 1.1.5 1.5 VOLUMEN DEL DESTILADO (mL) 176 150 150 158 175 160 150 150 155 150 Mg de HCN Nuestra cantidad de muestra pesada fueron 20.2 g de Yuca, la cual despus del destilado se aforo a 250 ml Se tomaron 2 alcuotas de 100 ml a las cuales se adicion 8ml de NH4OH 6N y 2ml de KI al 5% Alicuota 1 Se gastaron 1.0 ml de la solucin de AgNO3 0.02N 1.04ml de AgNO3 ( 0.02N) = 1.08 mg de HCN 1.0ml de AgNO3 (0.02N) = X X=1.038 mg de HCN mg de HCN en la muestra = 2.595 mg

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Sorgo Yuca Sorgo Sorgo Sorgo Sorgo Sorgo Sorgo Yuca Sorgo

0.675 1.0384 0.3115 0.3115 0.8307 0.4153 0.3115 0.3634 1.1942 1.5576



Alicuota 2 Se gastaron 1.0 ml de la solucin de AgNO3 0.02N 1.04 ml de AgNO3 ( 0.02N) = 1.08 mg de HCN Pgina 3

1.0 ml de AgNO3 (0.02N) =

X
ON

OH NO ON 2HCN medio alcalino NC

OH NHOH

X= 1.038 mg de HCN mg de HCN en la muestra = 2.595 mg



=
NO cido pcrico

+
CN NO isopurpurina

Las cantidades obtenidas 2.595mg HCN en la muestra Muestra 20.2 g 0.0202 Kg 2.595 mg HCN ------ 0.0202 Kg muestra X -----1 Kg muestra = 128.4653 ppm de HCN

Anlisis de resultados Esta practica se utilizo yuca con la finalidad de

identificar la presencia de cianuro para lo cual empleamos una un mtodo volumtrico donde el cianuro se encuentra como glucsido ciangeno, en el caso de la yuca este glucsido ciangeno es la limarina cuya estructura qumica corresponde a

El HCN al entrar en contacto con el cido pcrico presenta una coloracin roja debido a la formacin de isopurpurina en presencia de un grupo alcalino. El color se desarrolla a una temperatura de 37C y puede permanecer sin alteracin durante 2 meses. La sensibilidad del mtodo es de 1g de HCN en 100 ml de agua. Las semillas contienen glucsido cristalino llamado amigdalina que forma cido cianhdrico y es venenoso, se libera el cianuro por hidrlisis enzimtica debido a la presencia de la beta glucosidasa. Las tiras reactivas de Guignard consiste en tiras de papel filtro humedecidas en una solucin de cido pcrico al

del cual es liberado el cianuro por autolisis al momento de pulverizar la muestra y dejarla reposar Debido a la volatilidad del HCN es necesario conectar a un aparato de destilacin que burbujee en una solucin con NaOH, en el cual se estabiliza el in cianuro HCN + NaOH CN- + H2O + OHY se procede a valorar las alcuotas con nitrato de plata y yoduro de potasio como indicador 2CN + Ag
2+ -

1% y carbonato de sodio al 10%. La prueba es positiva si la tira cambia de color amarillo a color naranja o rojo ladrillo.1 Con respecto a nuestras muestras analizadas todas dieron positivo, pues si presentaron la coloracin determinada, de tal forma que todas las muestras contienen HCN En esta prueba podemos observar que la cantidad de HCN es mayor en las semillas de ciruela pasa y de manzana, en comparacin con las otras clases de semillas. Como se puede observar la cantidad de cianuro es baja, por lo que la ingestin de estos frutos no representa un riesgo para la salud en un corto plazo, ya que para alcanzar la dosis letal esta entre 150 y 200 miligramos, dosis total pura en adulto. La inhalacin de 0.3mg/L produce la muerte as pues como lo vemos en los resultados las cantidades de CN no son tan elevadas Pgina 4

Ag(CN)2

I- + Ag+ AgI(Amarillo) El yoduro reacciona con el exceso de plata cuando no hay ms cianuro disponible, lo que da como resultado yoduro de plata color amarillo que indica el fin de la valoracin. El mtodo de Guignard aprovecha una reaccin sensible y especfica

como para provocar la muerte de una persona, a hora bien la ingesta continua de estas semillas pudiera resultar en una intoxicacin crnica con los daos que esto conlleva Conclusiones y Se identificaron las fuentes naturales de exposicin a cianuro, adems, se evalu el riesgo individual que puede presentar una intoxicacin por cianuros, de manera accidental en la mayora de los casos. Se analiz el fundamento de las tcnicas utilizadas en la identificacin y cuantificacin de cianuro en muestras de diferentes semillas. Se aplicaron las tcnicas ms comunes para la identificacin y cuantificacin de cianuros en el laboratorio

Referencias: GOVANTES Betes, Jesus; Govantes Esteso, Carlos. "Manual Normon". 7 edicin. Laboratorios Normon S.A., Madrid, 1999. pag 624-625, 683 Casarett y Doull "Fundamentos de Toxicologa" editorial McGraw-Hill Interamericana, Madrid, Espaa 2005 paf 274-281

Crdoba Daro, 2006, Toxicologa, 5 edicin, El manual moderno, Bogot, pp. 366-369

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