UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN

FACULTAD DE QUMICA

MTODOS, PTICOS, ELECTROQUMICOS Y CROMATOGRFICOS

ANLSIS DE PARACETAMOL, CIDO ACETILSALICLICO Y CAFENA

EN TABLETAS.

INTEGRANTES:

Ayil Tuz Edgar Gregorio

Chan Balan Reyna Guadalupe

Chan Chal Laureano de Jess

Palma Chim Mara del Socorro

Tun Gonzlez lvaro Manuel

SALN: Audio 1
PROFESORAS: M. en C. Durcy V. Ruiz Ciau
M. en C. Ligia Alcocer Can

Fecha de entrega: lunes 17 de mayo de 2010

NDICE

OBJETIVOS.2

INTRODUCCIN.2

MATERIALES Y MTODOS...4

PROCEDIMIENTO.......4

JUSTIFICACIN...6

REFERENCIAS9

OBJETIVOS
Proponer un mtodo viable para la separacin y determinacin cuantitativa
de aspirina, cafena y cido acetilsaliclico que son constituyentes usuales en
algunos analgsicos.
INTRODUCCIN
Para el tratamiento de la migraa suelen administrarse tabletas compuestas
de cido acetilsaliclico (AAS), paracetamol, y cafena con un contenido de
250 mg, 200 mg y 25 mg respectivamente.
El paracetamol es un analgsico antipirtico no narctico con accin
selectiva en el sistema nervioso central sin bloqueo cortical, cuya absorcin
se lleva a cabo en el tubo digestivo, alcanzando las concentraciones
plasmticas mximas entre 15 minutos y 2 horas despus de su
administracin

oral,

aproximadamente

de

90

95%

se

conjuga

primariamente con el cido gluconrico y se elimina por excrecin urinaria a

travs de metabolitos. Slo 3% se elimina sin cambios. Su efecto teraputico
se prolonga hasta seis horas sin producir irritacin gstrica a dosis
teraputicas.
Por otro lado, la cafena es un alcaloide que funciona como un estimulante
cardiovascular y del sistema nervioso central (SNC), y es un adyuvante del
analgsico. La cafena se distribuye ampliamente en el organismo con un
volumen de distribucin aparente de 0.55 L/kg, se une a protenas
plasmticas en 35% aproximadamente.
La aspirina o cido acetil saliclico es el NSAID (frmaco antiinflamatorio no
esteroidal) de uso ms extendido. Funciona bloqueando las enzimas
cicloooxigenasas (COX) que realizan

las sntesis corporal

de las

prostaglandinas y previene la formacin de tromboxano A2, disminuyendo la

agregacin plaquetaria. Las dosis ms altas de cido acetilsaliclico no

tienen un efecto beneficioso mayor, pero parecen asociarse a una mayor

incidencia de efectos secundarios (hemorragia gastrointestinal, ulceracin
gstrica). Con dosis bajas de AAS, todo el efecto antitrombtico tarda 2 das
en manifestarse, mientras que con dosis estndar el efecto aparece en
horas.
La cromatografa lquida de alta resolucin, HPLC (de High-Performance
Liquid Chromatography) es un proceso de migracin diferencial en el cual los
componentes de una mezcla son transportados por una fase mvil lquida y
posteriormente los componentes son retenidos selectivamente por una fase
estacionaria. Existen cuatro tipos principales de cromatografa de lquidos en
columna: cromatografa de reparto (lquido-lquido), cromatografa de
adsorcin (slido-slido), de intercambio inico y de excusin molecular. Se
pueden distinguir dos tipos de cromatografa de reparto en funcin de las
polaridades relativas de las fases mvil y estacionaria, la cromatografa de
fase normal y de fase inversa. En la primera, la fase estacionaria es muy o
moderadamente polar y la fase mvil no polar. En cromatografa de fase
inversa, la polaridad es inversa. Por lo tanto, en cromatografa de fase
normal, el componente menos polar es el primero que

se detecta; al

aumentar la polaridad de la fase mvil disminuye el tiempo de elucin. En

cambio, en el mtodo de fase inversa, el componente ms polar

es el

primero que se eluye y al aumentar la polaridad de la fase mvil aumenta el

tiempo de elucin.
Como se ha mencionado, la cromatografa de fase inversa utiliza un
empaque enlazado hidrofbico, usualmente con un grupo funcional
octadecilo (C-18) u octilo (C-8) y una fase mvil polar, frecuentemente una
fase mvil parcial o totalmente acuosa. Se estima que ms de las tres
cuartas partes de las separaciones por cromatografa de lquidos de alta
resolucin se realizan habitualmente en fase inversa. Los grupos
hidrocarbonados de cadena larga de estos empaquetados de columna, se
alinean paralelamente entre s y perpendicularmente a la superficie de la

partcula (analito), originando una capa de hidrocarburos no polares, como

un cepillo.
MATERIALES Y MTODOS
Equipo: Para realizar el anlisis cuantitativo y cualitativo de la muestra se
utiliza un cromatgrafo de lquidos adicionado con una bomba de alta
presin con dos pistones, una vlvula de inyeccin con un bucle de 20L,
detector UV fijado a 280 nm. Filtros de membrana de nylon 0.45 m de
dimetro de poro y jeringuilla. Los datos cromatogrficos son procesados a
travs de una interfase por un ordenador que contiene un programa de
integracin.
Fase estacionaria: Columna cromatogrfica C18 de 16 cm de longitud,
4.0mm de dimetro interno y 5 m de tamao de partcula.
Fase mvil: Anlisis por gradiente con una velocidad de flujo de 1.5 ml/min.
Disolventes: etanol/nitrometano/dioxano 80:10:10 (v/v/v), 15:75:10 (v/v/v) y
10:20:70 (v/v/v) respectivamente.

PROCEDIMIENTO
Preparacin de patrones para determinar el tiempo de retencin de cada
compuesto.
Disolucin patrn de paracetamol de 100 ppm (0.1g L -1): pesar 0.1g de
paracetamol, disolver en la fase mvil y transferir la disolucin obtenida a un
matraz de 100 mL. Aforar a ese volumen con ms de la fase mvil.
Disolucin patrn de cido acetilsaliclico de 100 ppm (0.1g.L -1): pesar 0.1g
de cido acetilsaliclico, disolver con la fase mvil, transferir la disolucin

obtenida a un matraz de 100 mL. Aforar a ese volumen con ms de la fase

mvil.
Disolucin patrn de cafena de 100 ppm (1gL -1) pesar 0.1g de cafena,
disolver y aforar a 100 mL con la fase mvil.
Preparacin de patrn de cuantificacin, disolucin multicomponente.
Se preparar una nica disolucin en la que se encuentren concentraciones
de: paracetamol 100 ppm, cido acetilsaliclico 300 ppm, y cafena 50 ppm.
Para ello pesan 100 mg de paracetamol, 300 mg de cido acetilsaliclico y 50
mg de cafena, se disuelve con la fase mvil y la disolucin obtenida se
transfiere a un matraz de 100 mL. Aadir a este patrn cido benzoico, que
se emplea como patrn interno, y poder recalcular las concentraciones de
cada sustancia patrn. Se emplearan 50mg de cido benzoco para 100 mL.
Todo ello se enrasara a 100 mL con la fase mvil.
A partir de este primer patrn se preparar un segundo y tercero mediante
dilucin, obtenindose disoluciones estndar 50 y 25 ppm de paracetamol,
25 y 12 ppm de cafena y 150 y 75 ppm de Acido acetilsaliclico.
Para ello se toman 5 mL de la primera disolucin patrn y se afora a 10 mL.
A partir de esta segundo se prepara un tercero operando de igual manera.
Se toman 5 mL de la segunda disolucin patrn y se enrasa a 10 mL,
siempre empleando fase mvil.
Preparacin de la muestra
Se pesan 3 o 4 comprimidos y se calcula el peso medio de un comprimido.
Se trituran en un mortero y se pesa con una presicin de 0.1 mg una
muestra de aproximadamente 0.1g. Se introduce la muestra en un vaso de
100 mL, se disuelve en fase mvil, se filtra si fuera necesario y se transvasa
cuantitativamente a un matraz aforado de 100 mL donde se enrasa con la
fase mvil. A partir de esta disolucin se debe preparar otra mas diluidas
que se inyectara en el cromatgrafo, para ello ser necesario conocer la
cantidad aproximada de cada compuesto por comprimido (indicado en el

prospecto del medicamento). Una vez conocida se diluir de tal manera que
la concertacin quede entre el primer y el segundo patrn. La disolucin se
hace en fase mvil.
Anlisis de la muestra
Antes de inyectar cualquier componente es necesario acondicionar la
columna cromatogrfica, para lo cual se hace circular la fase mvil por el
sistema aproximadamente durante 15 minutos.
A continuacin se filtra una cierta cantidad de las disoluciones patrn a
travs de una membrana de nylon de 0.45 m de poro, utilizando como
sistema de filtracin una jeringuilla. Se inyectan los patrones en el
cromatgrafo y se determina el tiempo de retencin correspondiente a cada
sustancia. Posteriormente inyectar los patrones de distintas concentraciones
para obtener las rectas de calibrado correspondientes.
Finalmente se filtra una pequea cantidad de la muestra a travs de la
membrana, se inyecta y se identifican los picos a travs de los tiempos de
retencin identificados previamente.

JUSTIFICACIN
Se eligi la cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) porque se
utiliza de forma sistemtica con una preparacin de muestra muy sencilla en
el anlisis de frmacos en lquidos biolgicos y en el anlisis de
formulaciones farmacuticas. Existen dos modalidades: de particin en fase
normal o en fase inversa. Si el frmaco no es hidrosoluble, se utiliza la
cromatografa de particin de fase inversa con una fase mvil polar como
metanol, acetonitrilo o mezclas acuosas. Si es polar se utiliza la
cromatografa de particin en fase normal, con una fase mvil relativamente
no polar. La fase inversa permite variar ms parmetros. Si el frmaco es
inico (por tanto hidrosoluble) se utiliza la cromatografa de intercambio

inico con fase mvil polar, y si tiene un peso molecular superior a 2000, se
utiliza la cromatografa de exclusin molecular y una fase mvil polar.
Los sistemas de inyeccin son variados y pueden ser automticos. En
cuanto a los detectores ms populares, aparte del ndice de refraccin, que
resulta poco sensible, se encuentran los de absorcin UV, que son los ms
adecuados para frmacos o sus derivados que poseen grupos cromforos
con gran absorcin. stos pueden ser de longitud de onda fija (ms
sensibles y estables) o variable. Por otro lado, los detectores de
fluorescencia permiten determinar menores concentraciones, pero requieren
que los frmacos posean fluorescencia natural o se deriven con los reactivos
adecuados. Por ltimo, los detectores electroqumicos, cuando pueden
aplicarse, son muy sensibles.
En fase reversa las columnas de uso ms extendido son las compuestas de
partculas de slice fijas a cadenas de C18 (C 18H37); los componentes eluyen
de forma decreciente respecto a su polaridad, una disminucin de la
polaridad de la fase mvil disminuye el tiempo de elucin. La elucin se
produce por la interaccin del compuesto entre la fase mvil y la fase
estacionaria.
La HPLC en fase reversa se emplea para separar mezclas de polaridad
media o alta; en este anlisis los compuestos a separar poseen polaridad
intermedia; el AAS es capaz de formar puentes de hidrgeno por lo tanto es
un compuesto polar al igual que en su estructura cuenta con varios tomos
muy electronegativos como es el caso del oxgeno (figura 1.); la molcula de
paracetamol puede formar un puente de hidrgeno ya que cuenta con una
tomo de hidrgeno (figura 2.) y por otra parte la molcula de cafena en su
estructura tiene un anillo aromtico con nitrgenos (base prica)(figura 3.)
disminuyendo su polaridad comparada con la del AAS y del paracetamol.

Figura 1. AAS

Figura 2. Paracetamol

Figura 3. Cafena

Fase Mvil: Etanol/Dioxano/Nitrometano.

Para la eleccin de la fase mvil se tendr que tomar en cuenta que
compuestos se desean separar, tomando como factor importante la
polaridad de los compuestos para la correcta eleccin de los disolventes y
sus respectivas proporciones.
En este caso los compuestos a separar van de un compuesto polar (AAS)
hasta uno con polaridad muy baja (cafena) en consecuencia la eleccin de
la fase mvil tendr que tener ciertas caractersticas; para la optimizacin del
anlisis la elucin por gradiente sera la ms adecuada.
Para el anlisis por gradiente se consider que dentro del rango de los
primeros 3 minutos se eluiran etanol (80%), nitrometano (10%), dioxano
(10%) para la separacin del AAS, prosiguiendo con la separacin del
paracetamol con etanol (15%), nitrometano (75%) y dioxano (10%) y para la
separacin de la cafena se utiliz etanol (10%), nitrometano (20%) y
dioxano (70%), estas proporciones fueron tomadas de acuerdo al orden de
polaridad de los compuestos y de acuerdo al orden que eluirn.
Para la fase mvil utilizada en este anlisis se eligi la elucin por gradiente,
la cual involucra el cambio de la composicin de la fase mvil en forma
escalonada o continua conforme la elucin procede.
Se eligi este tipo de elucin con preferencia sobre la elucin isocrtica
porque esta ltima no puede separar una mezcla compleja con resolucin
adecuada en un tiempo razonable y con buena detectibilidad. Esto se debe a
que la fase mvil se mantiene sin cambio durante todo el tiempo necesario
para que los componentes de la muestra eluyan de la columna.

Adems en la elucin por gradiente frente a la isocrtica se puede alcanzar

un aumento potencial del doble o ms de la sensibilidad, aun con muestras
que no requieren de elucin por gradiente. La elucin por gradiente
proporciona anchos de las bandas ms parecidos y separaciones globales
ms rpidas.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Compedio esencial de qumica farmacutica., Andrejus Korolkovas et al.,
pp. 182.
2. Famacologa integrada., Curtis M.J. et al., pp. 168.
3. Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J. Fundamentos de qumica analtica.
4 ed. Editorial Revert S. A.; Espaa, 1997; pp. 715, 716.
4. Willard, H. H.; Merrit, L. L.; Dean, J. A.; Settle, F. A. Mtodos
instrumentales de anlisis. Grupo editorial Iberoamrica. Mxico, 1994; pp.
576, 577, 616.

10