UNIVERSIDAD DE CONCEPCION CELULAR

FAC. DE CIENCIAS BIOLOGICAS DEPTO. DE BIOLOGA

Trabajo Prctico N 5 CICLO CELULAR.I.- INTRODUCCION.

Desde 1858 cuando Rodolfo Virchow dijo su famosa frase Omnis cellula e cellula (toda clula deriva de otra clula) los procesos que conducen a la divisin celular han acaparado el inters de los bilogos. Sabemos en la actualidad que toda clula se forma a partir de otra clula, la cual al dividirse da origen a dos clulas hijas. Aparentemente este proceso parece ser muy simple, pero en realidad se trata de una actividad muy compleja que comprende una serie de fenmenos perfectamente equilibrados y regulados en el mbito molecular, cuya secuencia no puede ser modificada sin provocar alteraciones graves para la viabilidad celular En la actualidad se trabaja intensamente en la comprensin de los mecanismos de control que regulan la divisin celular, lo cual a su vez permitir comprender la causa de muchas modificaciones de la funcin normal de las clulas, entre ellas el cncer, que es el resultado alteracin de estos mecanismos regulatorios lo que trae como consecuencia una multiplicacin incontrolada que conducen a la formacin de tumores. Una clula que se origina por divisin, pasa por periodos de crecimiento, se desarrolla y puede, a su vez, reproducirse. Al conjunto de procesos que tienen lugar entre una divisin celular a otra, se le ha dado el nombre de Ciclo Celular. La principal caracterstica de este proceso, como su nombre lo indica es su naturaleza cclica, pudiendo repetirse muchas veces dependiendo del tipo de tejido. El estudio clsico de la divisin celular estableci la existencia de dos grandes etapas durante el ciclo: a) Divisin celular propiamente tal o Mitosis, que se caracteriza por una expresin citolgica muy clara, la divisin nuclear o carioquinesis, a la cual sigue una divisin del citoplasma o citoquinesis. b) Una etapa en la cual la clula no presenta cambios mortolgicos aparentes o bien visibles, comprende el lapso de tiempo que media entre dos divisiones celulares sucesivas a esta etapa se le denomin Interfase.

An cuando la mitosis constituye la etapa ms espectacular desde el punto de vista morfolgico, la interfase presenta una mayor complejidad durante ella tiene lugar la duplicacin de la mayor parte de los componentes celulares. Por ejemplo la duplicacin o replicacin del ADN ocurre en un periodo intermedio de la interfase. Desde el punto de vista funcional se distinguen cuatro fases en el Ciclo Celular: G1, S, G2 y M cada una de las cuales se caracteriza por presentar sus propios eventos morfolgicos y bioqumicos. Las etapas G1, S y G2 corresponden a la Interfase y M a la Mitosis. El smbolo G proviene del trmino ingls gap que significa intervalo y S usa como abreviatura para Sntesis, referido principalmente la sntesis o replicacin del ADN

Duracin del Ciclo Celular.La duracin relativa para que se realice cada una de las etapas del Ciclo Celular, se encuentra en relacin directa con el nmero de clulas que pueden observarse en cada etapa en un momento determinado. De esta manera si el nmero de clulas que aparece en una etapa es alto, indica que proporcionalmente el tiempo que se requiere para la completacin de dicha etapa, es mayor que aquellas etapas. que presentan un nmero menor de clulas. Estos valores pueden ser cuantificados, de tal manera que es posible calcular lo que se ha llamado el Indice Mittico que indica el porcentaje de clulas que en un determinado momento se encuentran en divisin. Lo mismo puede aplicarse para el clculo del Indice de Fase. que es porcentaje de clulas que en un determinado momento se encuentran en cualquiera de las etapas de la mitosis. Por diferencia es posible obtener el tiempo de duracin de la interfase. La duracin total del Ciclo Celular vara en los diferentes tejidos de acuerdo con su actividad proliferativa. En tejidos de activa proliferacin, generalmente el ciclo es corto, en cambio en aquellos tejidos diferenciados

puede llegar a ser muy largo, incluso las clulas pueden detenerse indefinidamente en una etapa, especificamente Con tcnicas ms refinadas se ha calculado incluso la duracin de los distintos perodos de la interfase, es decir G1, S y G2. A continuacin se inserta una Tabla en la cual se seala la duracin de las distintas etapas del ciclo en diferentes tejidos:

TABLA N1 Duracin del Ciclo en distintos tipos de clulas TIPO DE CLULAS

Epitelio Intestinal de Ratn Meristema Radicular Clulas Osteoprogenitoras Fibroblastos en Cultivo Clulas cultivo de mamfero en 1 hora 5 horas 7 horas 3 horas

Mitosis
1 hora 2-6 horas 3 horas 0,5-2 horas

G1
9 horas 5 -15 horas 25 horas 6 horas

S
7 horas 10-30 horas 8 horas 8 horas

G2
1-5 horas 3-9 horas 2,5-3 horas 5 horas

II.- OBJETIVOS.

TABLA N2

Observar y reconocer clulas en diferentes etapas de la mitosis y en interfase. Calcular el Indice Mittico (IM) de tejido meristemtico apical de raz de cebolla. Calcular el Indice de Fase de cada una de las etapas de la mitosis

III.- DESARROLLO DEL_PRACTICO

MATERIAL E INSTRUMENTAL A UTILIZAR: MATERIALES SUMINISTRADOS AL ALUMNO Microscopio ptico compuesto Preparaciones de cromosomas de mamferos. Preparacin de aplastado de raz de cebolla Video Los cromosomas del Hombre MATERIALES QUE EL ALUMNO DEBE TRAER Hojas blancas tamao oficio Lpiz de grafito Lpices de colores (Caja de 6) Goma de borrar Pao para el aseo del microscopio Se aconseja el uso de calculadora

IV.- ACTIVIDADES.La mitosis e un complejo proceso de divisin nuclear que asegura que cada una de las dos clulas hijas una copia complementaria del material

gentico el cual es idntico al de la clula madre. En una clula en reposo divisional, el material gentico est rodeado por la envoltura nuclear, y los cromosomas no son visibles con el microscopio de luz. Antes de que ocurra la divisin el ADN del material nuclear debe duplicarse (fase S del ciclo) la cual es acompaada de una duplicacin de los cromosomas. La puesta en marcha de la mitosis se reconoce por la aparicin de cromosomas teidos como finos filamentos dentro del ncleo. An cuando la mitosis es un proceso continuo, convencionalmente se divide en cuatro etapas: Profase, Metafase , Anafase y Telofase

Ejercicio N 1.Observacin de mitosis en clulas animales en cultivo Se le entregar un portaobjetos con de clulas de sanguneas de ratn y humanas obtenidas de cultivos, muchas de las cuales estaban en etapa de proliferacin. Estas clulas fueron preparadas con la tcnica de goteo Recorra la preparacin con aumento mediano para ubicar algunas de las etapas Las mas caractersticas son las placas metafsicas en las cuales es posible identificar y contar los cromosomas. Para esto use aumento mayor Tincin: Giemsa.

Ejercicio N 2.Observacin de mitosis en tejido vegetal.Usted recibir una preparacin de aplastado de meristema apical de raz de cebolla (Allium cepa). Los meristemas son tejidos que se encuentran en una activa proliferacin celular All le ser posible encontrar clulas en interfase y en las diferentes etapas de la mitosis. Recorra la preparacin con mucho cuidado y preste atencin a las caractersticas de las clulas en las diferentes fases, hasta que pueda identificarlas claramente. Dibuje con aumento mayor. Tincion: Tcnica de Feulgen -Fast Green. Las figuras que se insertan a continuacin le permitirn ubicarse.

Profase Metafase Anafase Telofase Interfase

PROFASE: Se caracteriza por una condensacin de los cromosomas y disgregacin de la envoltura nuclear. Las subunidades de los cromosomas duplicados (cromtidas hermanas) se encuentran unidas por los centrmeros. Al final de esta etapa, los microtbulos del huso comienzan a irradiar desde los centrmeros

METAFASE: Se completa la formacin de los microtbulos huso y los cromosomas se mueven hacia el centro de la clula y se alinean en el plano ecuatorial de ella.

ANAFASE: Las cromtidas hermanas se separan constituyendo dos cromosomas independientes (cromosomas hijos) a medida que se divide el centrmero. El progresivo acortamiento de los microtbulos del huso junto con otros mecanismos que estos llevan a cabo determinan que los cromosomas se muevan en direcciones opuestas hacia los polos de la clula. Al final de la Anafase, los cromosomas permanecen en dos grupos cerca de los polos opuestos del huso.

TELOFASE: Durante la Telofase alrededor de cada grupo de cromosomas hijos se forma una envoltura nuclear , los cromosomas se desenrollan y se hacen menos distinguibles , tambin se forman los nuclolos . La nueva placa celular, que dar origen a la pared celular que separe a las clulas hijas se expande centrfugamente

La Citoquinesis (divisin del citoplasma) se inicia en el centro del plano ecuatorial con la formacin del fragmoplasto. En estos movimiento participan tanto los microtbulos como los microfilamentos del citoesqueleto.

INTERFASE: Despus que se completa la citoquinesis las dos clulas hijas entran nuevamente en interfase en la etapa G1 del ciclo iniciando una nueva divisin celular o bien elongndose antes de entrar en etapa de diferenciacin

Ejercicio N 3.Calculo del Indice Mittico.-

En la misma preparacin anterior una vez que usted aprendi a identificar cada una de las etapas, cuente aproximadamente un total de 500 clulas, anotando en qu etapa del ciclo se encuentra cada una de ellas. Calcule el Indice Mittico de acuerdo con la siguiente frmula:

Nde clulas en Mitosis IM:__________________________ x100 N total de clulas

Sus datos sern anotados en el pizarrn junto con los de sus compaeros. Ud. Antelos en las tablas que se encuentran al final del trabajo prctico.

Ejercicio N 4.Clculo del Indice de Fases. Utilizando los mismos datos> calcule ahora el Indice por Fases. Esto se hace conociendo el nmero de clulas que se encuentran en cada una de las fases de la mitosis. Profase (P), Metafase (M), Anafase (A) y Telofase (T) y el nmero total de clulas que estn en mitosis. Por ejemplo, el Indice de Profase ser: Nde clulas en Profase IM:__________________________ Total de clulas en mitosis

x 100

En el tejido que se est observando, existe una relacin directa entre la frecuencia de clulas en una fase del ciclo y su duracin relativa. Un I.M. = 15 significa que si todo el ciclo dura 100, la mitosis dura un 15% y la interfase un 85%. Lo mismo puede ser aplicado a las diferentes etapas de la mitosis. Si se supone que la mitosis dura 100, un Indice P = 40 significa que la duracin de la Profase es el 40% del tiempo que dura la mitosis.

Tomando como base que la duracin del Ciclo en el tejido meristemtico es de 16 horas. Calcule el tiempo aproximado en horas y minutos que demora cada estado. Suponiendo que el ciclo celular es una circunferencia a partir de los datos obtenidos divdala en segmentos que correspondan a interlase y mitosis y dentro de esta ltima seale los segmentos correspondientes a cada una de las fases

V.- CUESTIONARIO.Sobre la base del anlisis de los datos obtenidos responda lo siguiente: 1) Por qu tiene mas valor determinar el tiempo de secuencias a partir de los datos de todo el curso que a partir de los datos individuales? 2) Cul de las etapas es la ms corta?. 3) Est esto de acuerdo con lo que usted sabe son los hechos cromosmicos caractersticos de este estado?. Por qu? 4) Cul de las etapas es la de ms larga duracin?. Se ajusta con la informacin que usted tiene de hechos que ocurren en este estado?. Por qu?

TABLA N3
Recuento Individual de clulas ETAPA N de Clulas % de Clulas Indice de Fase Tiempo de fase Indice Mittico

INTERFASE PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE TOTAL

TABLA N4 Recuento Total de Clulas

ETAPA N de Clulas % de Clulas Indice de Fase Tiempo de fase Indice Mittico

INTERFASE PROFASE METAFASE ANAFASE TELOFASE TOTAL