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AREA MICROBIOLOGIA
UROCULTIVO
EL urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario. La combinacin de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infeccin urinaria. UTILIDAD CLINICA: 1. Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como: dolor y sensacin de calor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar. 2. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre sntomas de infeccin. 3. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algn problema al beb. RECOLECCION DE LA MUESTRA PARA CULTIVO: PRINCIPIO GENERALES:

La muestra ideal es la primera de la maana debido a que la cuenta bacteriana es mayor. Se requiere de 3 a 5 ml de orina reciente en un recipiente estril, tambin se puede obtener mediante una sonda uretral, suprapubica o permanencia.

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las muestras para urocultivos no se toman de bolsas recolectoras de orina que forman parte del sistema de drenaje a travs de una sonda. Se lleva la orina al laboratorio y se examina lo mas pronto posible, de no ser asi, la orina se puede refrigerar hasta 2hrs antes de someterla a cultivo. En caso que el diagnostico sea de citomeglavirus, debern mantenerse a temperatura ambiental, ya que la refrigeracin destruye a los virus. Para estlabecer bacteriuriua, se toman 2 muestras sucesivas del chorro medio. Las muestras se deben de obtener antes de un tratamiento con antibiticos. el personal de salud instruye al paciente respecto de la tcnica adecuada para recolectar la muestra. La muestra de orina se cubre y el recipiente se rotula y se incluye lo siguiente informacin: Ficha de identificacin, Nombre del medico, Diagnostico probable, Mtodo de recoleccin, Hora en que se obtuvo la muestra, Administracin de lquidos forzados o intravenosos, Administracin de sustancias quimioterapeuticas especificas. TECNICAS PARA OBTENER UNA MUESTRA LIMPIA DE ORINA O DEL CHORRO MEDIO

Toma de Muestras en Mujeres: La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente: a) jabn desinfectante b) agua hervida o agua estril c) gasa estril o un pao acabado de lavar d) el recipiente para tomar la muestra. Proceda primero a lavarse las manos y luego sintese en el inodoro, lo ms hacia atrs que pueda. Separe los labios genitales con una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona genital con el jabn desinfectante. Enjuague con abundante agua estril y luego seque bien con gasa estril o con un pao limpio. Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SLO EN EL MOMENTO DE LA MICCIN y sin tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar la poceta y recoja en el frasco, slo la muestra del chorro del medio es decir, no debe recoger ni la primera, ni la ltima parte del chorro de orina.

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Tape muy bien el frasco y rotlelo con su nombre. Trigalo al Laboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con hielo, cuidando de que no se bote el contenido. Toma de Muestra en hombres: La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa. Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente: a) jabn desinfectante b) agua hervida o agua estril a temperatura ambiente c) gasa estril o un pao acabado de lavar d) el recipiente para tomar la muestra.

Lavarse con jabn desinfectante primero las manos y luego la cabeza del pene empezando por la abertura uretral y contine en direccin a usted, como muestra la ilustracin,previa retraccin del prepucio, si no est circuncidado.

Luego enjuagar bien con agua estril o previamente hervida (a temperatura ambiente) y secar con gasa estril. Destape el frasco recolector slo en el momento de la miccin y sin tocar con los dedos su parte interna, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. Comience a orinar en la poceta y recoja en el

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frasco slo la muestra del chorro del medio, es decir, no debe recoger ni la primera ni la ltima parte del chorro de orina. Tapar bien el frasco, rotularlo con su nombre y traerlo al laboratorio lo ms pronto posible, en un recipiente con hielo y cuidando de que no se bote. El examen microbiolgico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. ste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo. A. Examen cuantitativo Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminacin, se realiza de la siguiente manera:

Se homogeneiza la muestra mediante agitacin. Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100.

Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vaca un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45. Mediante rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra.

Mtodo de Kass

Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.

Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total. Mtodo del asa calibrada. Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa de

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platino calibrada (4 mm. de dimetro). Despus de incubar las siembras a 37 durante 24 a 48 horas, se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada de platino contiene 0.01 ml. de orina. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:

No hubo desarrollo microbiano. Menos de 10 000 colonias por ml. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Ms de 100 000 colonias por ml.

Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con ms de 100 000 colonias por ml., la probabilidad de infeccin es de 80%, cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml, ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstruccin uretral, infecciones crnicas e infecciones por cocos grampositivos. b. Examen cualitativo El estudio cualitativo, que conduce a la identificacin del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, agar-CLED, agar de Levine o MacConkey. Es recomendable el medio CLED, porque favorece el desarrollo de bacterias patgenas urinarias y permite la identificacin de los microorganismos contaminados. Su contenido en cistena y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan, por una parte, el reconocimiento de colonias de bacterias y, por otra, inhiben el carcter invasor de las colonias de Proteus. As se facilita la identificacin de estafilococos, bacilos difteromorfos, lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. La identificacin final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioqumicas y caractersticas serolgicas. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de reinfeccin. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aeruginosa) y del antibitico. ste ltimo se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma cepa.

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* Mtodos rpidos de diagnstico.

Existen varios procedimientos prcticos y econmicos para el diagnstico rpido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. Son tiles para investigar grandes grupos de personas. Estos mtodos pueden ser microscpicos, qumicos o de microcultivo. La coloracin de un frotis de orina no centrifugada mediante el mtodo de Gram constituye un ndice prctico para diferenciar entre infeccin y contaminacin urinarias. En efecto, la observacin de un bacilo gramnegativo por campo microscpico puede realizarse cuando la muestra contiene ms de 100 000 bacterias por ml. Sin embargo, la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este mtodo, provoca resultados falsos negativos. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o ms bacterias gramnegativas por campo microscpico de sedimento urinario, aunque dicho nmero permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. Los procedimientos qumicos estn basados en propiedades enzimticas de las bacterias, que se pueden poner de manifiesto en la orina. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa, reduccin de nitratos, reduccin de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. Estos mtodos, aunque rpidos y econmicos, tienen el inconveniente de ser indirectos, basarse en propiedades metablicas de las bacterias y no en su desarrollo y observacin, y producir muchos falsos negativos.

Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un Escherichia Coli en cultivo puro, con un recuento superior a 100.000 UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000). SIGNIFICADO CLINICO:

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Los siguientes microorganisamos en titulacin suficiente se consideran patgenos:

Escherichia coli, Enterococcos, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella, Enterobacter, algunas especie de Serratia, Mycobacterium tuberculosis, Especies de Proteus, Pseudomona aeruginosa, Estreptococco hemolitico genralmente del gurpo B, Candida albicans y otras levaduras.

INTERFERENCIAS: Pacientes que esten recibiendo liquidos forzados, la orina esta tan diluida que la cuenta de los colonias disminuye por debajo de los 105/mililitro. La contaminacion bacteriana puede provenir de: vello perianal, bacterias localizadas debajo del prepucio,bacterias de las secreciones vaginales, dela vulva o de laporcion distal de la uretra, bacterias provenbientyes de las manos , pies o ropa.

FUENTES: 1. Balcells, G., A., La clnica y el laboratorio, 18 Edicin, Editorial Masson, Mxico, 2001. 2. Fiscbach, T.F., Manual de pruebas diagnosticas, 5 Edicin, 1997, Editorial MCgrawhill Interamericana, Mxico. 3. Treseler, M.K., Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico, 1 Edicin traducida de la 3 edicin en ingles, 1999, Editorial El Manual Moderno, Mxico. 4. http://www.paraqueestesbien.com/analisis/analisis_70.html 5. http://www.lebbyac.com/manual/instrucciones/urocultivo.html 6. http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/urocultivo.html 7. http://html.rincondelvago.com/urocultivo.html 8. www.zambon.es/.../03mujer/atlas/fichas/7177.htm