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Bio Qui Mica
Bio Qui Mica
Introduccin
TEMA 1
INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA
La bioqumica tiene como objetivo ms importante el estudio de la estructura, organizacin
y funciones de la materia viva desde el punto de vista molecular.
Segn los aspectos tratados, esta puede dividirse en 3 bloques:
1.- bioqumica estructural
2.- bioqumica metablica o metabolismo
3.- biologa molecular
La bioqumica estructural estudia la composicin, conformacin, configuracin y estructura
de las molculas de la materia viva, relacionndolas con su funcin bioqumica.
El metabolismo estudia las transformaciones, funciones y reacciones qumicas que sufren o
llevan a cabo las molculas de la materia viva.
La biologa molecular estudia la qumica de los procesos y molculas implicadas en la
transmisin y el almacenamiento de la informacin biolgica.
La bioqumica, fundamentalmente extrae conocimientos de biologa, qumica y gentica, y
usa tcnicas que ha importado de la fsica.
Origen de la bioqumica
El origen del trmino bioqumica se remonta a los comienzos del siglo XIX, cuando
imperaba una teora conocida como vitalismo que sostena que las sustancias existentes
en la materia viva eran cualitativamente diferentes de la materia no viva, y que no se
comportaban segn las leyes conocidas de la fsica y la qumica.
Esto se derrumb a raz de los trabajos de un bioqumico alemn (Whler en 1828), que
sintetiz en un laboratorio urea a partir de cianato amnico. Hasta entonces se pensaba que
solo se poda sintetizar en los animales, en el rin.
La corriente vitalista an persisti porque se crea que las reacciones de la materia viva solo
podan realizarse en clulas vivas. Segn el vitalismo, las reacciones biolgicas se
producan por una fuerza vital de naturaleza misteriosa pero no por procesos qumicos o
fsicos.
Se encargaron de echar esto abajo los hermanos Buchner en 1897, observando que
extractos de clulas de levaduras rotas y por lo tanto muertas, eran capaces de llevar a cabo
la fermentacin del azcar hasta etanol. Esto abri el camino al estudio de las reacciones y
procesos bioqumicos in vitro. A partir de aqu se avanz ms rpidamente en el
conocimiento de las diferentes rutas metablicas.
2
A finales del siglo XIX todava persistan cientficos vitalistas sosteniendo que la naturaleza
de la catlisis biolgica (las enzimas) y sus estructuras eran demasiado complejas para
describirlas en trminos qumicos.
Este ltimo postulado se derrumb en 1926, cuando Sumner fue capaz de cristalizar una
protena (ureasa purificada de la juda) demostrando que aunque las protenas tienen unas
estructuras grandes y complejas, es posible sintetizarlas como otro compuesto inorgnico
cualquiera y que sus estructuras pueden determinarse con los mtodos de la fsica y
qumica.
A partir de aqu, la contribucin ms importante consisti en establecer las estructuras
qumicas bsicas de las sustancias biolgicas, identificar las reacciones de cada ruta
metablica y localizar stas en el interior de la clula.
Esto es apoyado por el avance en las tcnicas de la biologa celular.
En la mitad del siglo XX se desarrolla la biologa molecular, aunque la idea de gen ya
haba sido propuesta en el siglo XIX por Mendel.
A mediados del siglo XX todava nadie haba aislado un gen ni se haba determinado su
composicin qumica. La mayora de los cientficos pensaban que los cidos nucleicos
tenan una funcin meramente estructural, y que tan solo las protenas eran lo
suficientemente complejas estructuralmente para ser portadoras de la informacin gentica.
En los aos 40 y 50 se demostr que esto era errneo, y que el ADN era el portador de la
informacin gentica.
Watson y Crick publicaron la estructura en doble hlice del ADN, as como todos lo
descubrimientos posteriores relacionados con los mecanismos de la transmisin de la
informacin biolgica.
Esto dio lugar a una nueva rama de la biologa, la biologa molecular.
La bioqumica tambin nutre de conocimientos a otras ramas de la biologa como la
biofsica, la nutricin, investigacin mdica o biotecnologa entre otros.
PROPIEDADES, ORIGEN Y EVOLUCIN DE LAS BIOMOLCULAS
Bioelementos o elementos biogenticos:
Casi todos los bioelementos se sitan en la primera mitad del sistema peridico. La
composicin en elementos de casi todos los seres vivos es bsicamente similar, aunque
constan de diferencias como el caso del yodo, que es imprescindible para los vertebrados
pero no para otros animales.
En el hombre se han identificado al menos 30 que son indispensables en proporciones muy
diversas. Segn su abundancia, se clasifican en 3 grandes grupos:
- Bioelementos primarios
- Secundarios
- Oligoelementos
Los bioelementos primarios son H, O, C, N. Son los ms abundantes en todo el
organismo. En el caso del hombre, el 99% del total.
3
Los bioelementos secundarios son Ca, P, K, S, Na, Cl, Mg, Fe. Son mucho menos
abundantes, pero tambin estn presentes en todos los organismos. En el cuerpo humano
constituyen el 0,7% del total de tomos.
Los oligoelementos son el grupo ms numeroso: Mn, I, Co, Cu, Zn, F, Mo, Se....
Aparecen tan solo en cantidades trazas, y la diferencia con los anteriores es que algunos no
son esenciales en todos los organismos.
La ausencia de estos bioelementos determina la aparicin de enfermedades.
La razn por la cual los primarios estn en mayor proporcin se debe a que son los
elementos ms pequeos del sistema peridico que pueden formar enlaces covalentes.
En el caso concreto del C, este presenta la caracterstica de que adems de formar enlaces
de este tipo con otros tomos de otros elementos, tambin puede formar enlaces covalentes
consigo mismo, dando lugar a cadenas de tomos de carbono que pueden tener ms de 100
tomos de C y que pueden ser lineales, ramificadas o cclicas.
Los enlaces pueden ser dobles, lo que da lugar a la aparicin de una gran variedad de
grupos funcionales.
Tambin los enlaces pueden ser triples, aunque son muy raros.
El silicio es un tomo que tambin puede formar cadenas consigo mismo, pero estos
enlaces se oxidan y se rompen por lo que en una atmsfera de
2
O como la nuestra, stos
son inestables.
Las funciones desempeadas por los bioelementos son muy variadas, y las agruparemos
en 3 tipos fundamentales: plsticas / estructurales, catalticas y osmticas.
Hay elementos que desempean funciones plsticas o estructurales ya que forman parte de
huesos, tejidos fibrosos, tegumentos, etc... Dentro de este grupo estn C, O, H, N, pero
tambin S, P, Ca.
En segundo lugar, muchos desempean funciones catalticas. Un ejemplo es el caso del Fe,
que participa en el transporte de oxgeno y electrones, o el caso del Zn que es cofactor de
muchas encimas, o el I, que forma parte de las hormonas tiroideas o el Co, que forma parte
de la vitamina
12
B .
En tercer lugar hay bioelementos con funciones osmticas. Destacan el Na, K, Cl, que en
forma inica intervienen en procesos como la distribucin del agua en compartimentos intra
y extracelulares en procesos como el mantenimiento de potenciales de membrana, as como
otros relacionados.
Del mismo modo que los bioelementos, definimos las biomolculas o principios
inmediatos como aquellas constituyentes de los seres vivos, que segn su naturaleza las
clasificamos en 2 grupos, inorgnicas y orgnicas.
Dentro de las inorgnicas, tenemos el O H
2
, gases como
2
O y
2
CO , sales inorgnicas
como aniones (como fosfato, bicarbonato) o como cationes (como el amonio).
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Dentro de las molculas orgnicas tenemos adems de glcidos, lpidos, protenas y cidos
nucleicos, otras amplias variedades de biomolculas que se conocen en conjunto como
metabolitos, intermediarios de etapas de rutas metablicas, como el piruvato, cido
ctrico, urea, etc.
Aunque existe una gran variedad segn los distintos tipos de clulas, el principal
componente celular siempre es el O H
2
, que representa el 75% aproximadamente. El 2
componente celular en abundancia son las protenas, con un 15%. El 10% restante se
reparte entre las dems biomolculas. Aproximadamente, un 2% de azcares, 3% de
lpidos, un 2% de ARN, un 0,5% de ADN, un 1,5% de metabolitos intermediarios y un 1 %
de sales. Hay ciertos grupos de clulas que se salen de esta generalidad debido a sus
funciones, como las clulas adiposas, que contienen un % mayor en lpidos, o las clulas
hepticas, con un % mayor en azcares. Estos porcentajes tambin pueden variar segn el
estado fisiolgico de la clula. Por ejemplo, si la clula se encuentra en mitosis, el % ser
mayor en cidos nucleicos, que si estuviese madura.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
composicin bioqumica
agua
proteinas
azcares
lpidos
ARN
ADN
metabolitos intermediarios
sales
Tipos de enlaces entre biomolculas
Intramoleculares: unen los tomos para formar la biomolcula. Pueden ser covalentes o
inicos.
Intermoleculares : las molculas interaccionan formando asociaciones supramoleculares
que pueden llegar a ser bastante complejas. Las fuerzas intermoleculares son ms dbiles
que las covalentes. Entre estas, tenemos las electrostticas, puentes de hidrgeno, fuerzas
de Van der Waals, interacciones hidrofbicas y polares.
Ejemplos tpicos de estas estructuras supramoleculares son los ribosomas, la cromatina, las
membranas...
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Modelos moleculares
Son modelos creados que usamos para representar la estructura en 3D de las biomolculas.
Esta la podemos representar por 3 tipos de modelos: espaciales, de esferas y varillas, y
esquelticos.
Los primeros son los ms realistas, ya que en ellos el tamao y configuracin de un tomo
en concreto viene determinado por las propiedades del enlace y por los radios de Van der
Waals.
Ejemplos de espacial
Los modelos de esferas y varillas son menos realistas ya que los tomos estn representados
por esferas ms pequeas de lo que les correspondera segn los radios de Van der Waals,
pero en ellas se aprecia ms fcilmente la disposicin de los enlaces, representados por las
varillas.
Ejemplos del modelo de representacin con esferas y varillas
Los esquelticos nos proporcionan la imagen ms simple ya que solo muestran la
disposicin molecular. Los tomos no estn indicados explcitamente sino que la
disposicin de estos se deducen en los sitios de unin de los enlaces y sus trminos. Estos
modelos se usan sobre todo para representar grandes molculas que pueden tener varios
miles de tomos.
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Los tomos de H solo se suelen representar en el primer tipo de modelos.
Adems de estos 3 modelos tambin se suelen utilizar representaciones esquemticas de
estructuras extensas como sucede con la clsica representacin del ADN como 2 cintas en
espiral o como sucede tambin en el caso de las protenas en sus modelos de cintas. Las
cintas representaran las regiones de la protena en hlice o , las flechas en lmina | , y los
cordones como estructuras enrolladas al azar.
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TEMA 2
EL AGUA EN LOS PROCESOS BIOLGICOS
Estudiaremos el O H
2
porque es la molcula ms abundante y porque la inmensa mayora
de las reacciones bioqumicas tienen lugar en un medio acuoso y obedecen a las leyes
fsico-qumicas de las disoluciones acuosas.
- En primer lugar, el O H
2
es lquida en un amplio rango de temperaturas (0-100C).
Esto permite que la vida pueda desarrollarse en condiciones climticas muy
dispares.
- Presenta una densidad mxima a 4C. En consecuencia, el hielo flota sobre el O H
2
lquida, actuando como aislante trmico, lo que permite que la gran masa de los
ocanos se mantenga lquida y por tanto, la vida de numerosos seres acuticos.
- Elevada constante dielctrica, que permite la disolucin de la mayora de las sales
minerales, ya que debilita las fuerzas electrostticas entre los iones.
- Es un dipolo, por lo tanto, sus molculas tienden a rodear a los iones aislndolos
unos de otros, facilitando la disolucin de las sales. se dice que estos iones quedan
solbatados. El O H
2
tambin solbata otras molculas polares no inicas como el
etanol.
- Elevado calor especfico, gracias a lo que los animales pueden ganar o perder
bastante calor con escasa modificacin de la temperatura corporal. Esto explica el
papel termorregulador corporal de la sangre.
- Elevado calor de vaporizacin. Esto quiere decir que un animal puede eliminar el
exceso de calor vaporizando cantidades de O H
2
relativamente pequeas a travs de
pulmones y piel, pudiendo mantener as la temperatura corporal por debajo de la
ambiente.
- Elevada tensin superficial. Sus molculas se ordenan de modo que la superficie
libre sea mnima. Las sustancias denominadas tensoactivas, como los detergentes,
son capaces de disminuir la tensin superficial del agua, lo que facilita la mezcla o
inclusin de las grasas en un medio acuoso. As es como actan las sales del
intestino delgado, que facilitan la disolucin de las grasas en este.
- Una disociacin en
OH y
+
H crtica para muchos procesos biolgicos. Las
clulas vivas tienen mecanismos bastante eficaces para controlar estas
concentraciones.
Muchas de estas propiedades se deben a que sus molculas se hayan enlazadas por fuerzas
intermoleculares que son especialmente, puentes de H y fuerzas de Van der Waals.
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Disoluciones acuosas
Una disolucin es una mezcla homognea de molculas diferentes (solutos) en un
disolvente. En bioqumica la gran mayora de las disoluciones son acuosas. Al disolverse en
agua, estos solutos modifican las propiedades del disolvente como el color, densidad...
Algunas de estas propiedades no dependen de la naturaleza del soluto, sino solo del nmero
de partculas disueltas y las denominamos propiedades coligativas de las disoluciones, que
son:
- descenso de la P de vapor
- descenso crioscpico, o de la temperatura de congelacin
- incremento de la temperatura de ebullicin
- P osmtica
Desde el punto de vista fisiolgico destaca la presin osmtica, porque las membranas
celulares actan como membranas semipermeables.
Ejemplo: los eritrocitos, que forman parte de la sangre. Si colocamos uno en agua destilada,
este estallar (se lisar) ya que en su interior hay una concentracin de soluto, y el agua
entrar en su interior hasta equilibrar las concentraciones interna y externa. Se calcula que
la presin a soportar por las paredes del eritrocito sera de 7,6 atmsferas.
Cuando forman parte de la sangre no se lisan porque este medio es isotnico respecto del
interior del glbulo rojo.
Para mantener constante la concentracin de solutos en el medio interno del organismo, hay
diversos mecanismos. Destacan la sed y la filtracin renal, reguladas por osmoreceptores
conectados con el sistema nervioso central.
Las disoluciones acuosas las diferenciamos en dos tipos: moleculares e inicas.
En las primeras, las molculas disueltas mantienen su integridad como en el caso de
azcares, protenas... En las inicas, las molculas disueltas se disocian en el disolvente en
dos o ms iones.
Que un disolucin sea una o otra repercute directamente en sus propiedades coligativas, ya
que dependen del nmero de partculas disueltas, y por tanto, como en una disolucin
inica, el nmero de iones es mayor que el de molculas disueltas, el efecto sobre las
propiedades coligativas ser mayor, mientras que en el caso de las disoluciones moleculares
ser mucho menor a causa de que las partculas son tantas como las molculas disueltas.
Un tercer tipo de disoluciones son las coloidales, que se caracterizan porque las partculas
del soluto superan un determinado tamao, (normalmente un dimetro mayor a 10 o una
masa superior a 10 kilodalton). Las disoluciones coloidales difieren de las disoluciones
verdaderas en algunas propiedades. Por ejemplo, se pueden precipitar por centrifugacin a
alta velocidad. La superficie de contacto de las molculas con el agua o interfase adquiere
una especial relevancia en este caso, y numerosas tcnicas analticas se basan en las
propiedades de estas interfases.
Biomolculas que dan lugar a coloides son los polisacridos, protenas y cidos nucleicos.
Estas macromolculas presentan ,en su interfase con el agua, grupos polares como el OH o
inicos como el carboxilo o el amino, que ordenan a su alrededor una gran cantidad de
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molculas de agua. Como estas macromolculas son de gran tamao, incluso las
disoluciones concentradas contienen un nmero pequeo de molculas, por lo tanto las
propiedades coligativas de las disoluciones coloidales son poco observables. Sin embargo,
la P osmtica s es importante, y presenta algunas peculiaridades en los siguientes casos:
- cuando el coloide es inico
- cuando el compartimento que contiene el coloide est limitado por una membrana
semipermeable
- cuando al otro lado de la membrana semipermeable existe un soluto inico difusible
En estos casos el coloide s origina una presin osmtica que se debe, por una parte, a la
presencia de las macromolculas coloidales, pero tambin a la existencia en este
compartimento de un exceso de partculas inicas difusibles que son atradas por el
coloide. A esta presin se le denomina presin coloidosmtica, debida a que el coloide
tiene carga y por lo tanto atrae a iones que son los que crean la P.
Esto sucede en biologa en muchos lugares como entre el plasma y el lquido intersticial,
separados por el endotelio del capilar.
Las molculas que se disocian decimos que son electrolitos y diferenciamos
- los electrolitos fuertes, cuando la disociacin es total,y
- los dbiles, cuando la disociacin es solo parcial
Equilibrios inicos
El agua es un electrolito dbil que se disocia en muy baja proporcin de la siguiente
manera:
+
+ OH H O H
2
. Solamente una molcula de cada
6
10 553 est disociada, y
esto presenta un gran inters en biologa.
| | | |
14
10
+
= = cte OH H . En agua pura, | | | |
7
10
+
= = OH H , es decir, que el agua pura
tiene un PH = 7.
Cualquier sustancia que haga variar una de las concentraciones de los iones har que la
concentracin del otro tipo inico se modifique de modo que el producto siga siendo
constante.
El inters fisiolgico del PH se refleja en varios aspectos. En primer lugar, el
funcionamiento armnico de muchos procesos del organismo requiere la actuacin
concertada de muchas encimas, y la accin cataltica de estas dependen del PH. Adems en
el interior de las clulas se producen gradientes locales de PH que se usan en el
almacenamiento de energa qumica en forma de ATP, como sucede por ejemplo entre la
mitocondria y el citosol.
Por otra parte, proceso como el intercambio de gases en los pulmones est regulado por
cambios muy suaves de PH en el interior del eritrocito.
En resumen, en bioqumica tendremos que tener en cuenta el tipo de disolucin que usemos
y el PH.
La mayora de los cidos y bases que tienen inters fisiolgicos son, al igual que el agua,
electrolitos dbiles y estn solo parcialmente disociados. Por ejemplo, el cido actico se va
10
a disociar segn esta ecuacin:
+
+ H Ac AcH . En el equilibrio, la constante de
equilibrio es:
| |
| | AcH
Ac
K
= . Igualmente sucede con otros cidos y bases dbiles.
Para los cidos y bases dbiles, K es muy baja y con lo que se trabaja es con el pK (-log K).
En la escala de pK los cidos dbiles tienen valores menores a 7 y las bases mayores a 7.
Cuando el cido se encuentra disociado al 50% la concentracin de la forma no disociada
es igual a la concentracin de la forma disociada y por lo tanto podemos decir que PH=pK
. Tambin podemos definir el pk como el PH al que el 50% del cido est disociado.
El pK de los cidos y bases dbiles se puede determinar mediante las curvas de titulacin.
Lo ms importante de las curvas es que muestran como un cido dbil y su anin pueden
actuar como tampones.
Un sistema tampn o amortiguador es usado por el organismo para protegerse de
variaciones bruscas de PH.
NOTA: adems de tampones o amortiguadores podemos encontrarnos con el trmino
ingls Buffers.
Estas disoluciones contienen en proporciones anlogas las formas disociada y no disociada
de un cido o base dbil, que conseguimos mezclando en proporciones adecuadas un cido
dbil y base fuerte, o base dbil y cido fuerte, de forma que lo que se origina es una
mezcla de un electrolito y una sal fuerte. Cualquier factor externo que tienda a variar la
concentracin de
+
H desplazar el equilibrio hasta que la nueva concentracin de
+
H sea
similar a la inicial. A efectos cualitativos, los sistemas tampn se rigen por la ecuacin de
Hndersson Hasselbach, que es
| |
| | cido
anin
pK PH log + = .
Las disoluciones reguladoras cumplen una serie de normas:
El PH de una reguladora no depende de las concentraciones absolutas de cido y base o sal
si no de la proporcin entre las formas disociada y no disociada, con lo que a una
disolucin tampn podemos aadir agua sin modificar su PH. Aunque no vara, lo que
ocurre es que las disoluciones ms concentradas tienen mayor capacidad de
tamponamiento. Adems la amortiguacin es mxima cuando el PH del medio coincide con
el pK del amortiguador. Si la diferencia entre el PH y el pK es mayor a 2 entonces no hay
capacidad amortiguadora.
Una base dbil actuar como tampn al aadir un cido fuerte siempre que al reaccionar
entre s quede algn exceso de base.
En el organismo tenemos una serie de amortiguadores fisiolgicos, de los cuales destacan
los fosfatos. En los tejidos el fosfato se haya combinado con azcares, lpidos o cidos
nucleicos. El cido fosfrico tiene 3 tomos de H disociables. Su disociacin es gradual y
cada uno de ellas posee un pK especfico. Pues bien, solo la disociacin del segundo protn
tiene inters fisiolgico ya que su pK es 6,86 , cercano al PH fisiolgico.
Otro importante es el sistema del bicarbonato, ya que el cido carbnico se haya en
equilibrio con el
2
CO y por tanto la concentracin de cido carbnico en sangre se
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modifica variando la ventilacin pulmonar. Por ltimo, el amortiguador ms importante
fisiolgicamente son las protenas, que contienen grupos funcionales que son cidos y bases
dbiles con una amplia gama de pKs, de manera que funcionan como buenos
amortiguadores casi a cualquier PH. Por su abundancia en la sangre y su papel en la
respiracin, la hemoglobina destaca como amortiguador entre las protenas. Su peculiaridad
ms importante en este sentido es que su pK vara segn est o no oxigenada, lo que le
confiere una capacidad amortiguadora adicional.
los aminocidos, constituyentes de protenas poseen un grupo carboxilo y otro amino.
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Metodologa bioqumica
TEMA 3
EL MATERIAL BIOLGICO. HOMOGENADO DE TEJIDOS
Aspectos generales de la metodologa bioqumica
En la investigacin bioqumica con frecuencia se necesita purificar un componente
particular de entre una mezcla compleja. Diferenciamos 2 separaciones, las analticas y las
separativas.
En las analticas el objetivo es identificar y estimar pequeas cantidades de los compuestos,
y generalmente no es necesario recuperar el compuesto despus del proceso de separacin .
Para determinar la presencia de un compuesto en una mezcla se compara su
comportamiento durante el proceso analtico con el de un compuesto conocido que se
denomina estndar o patrn, y que se somete exactamente al mismo tratamiento.
La determinacin cuantitativa del compuesto puede hacerse sin necesidad de purificacin
previa en algunos casos, en los que dicho componente posee una proporcin nica que lo
caracteriza, como sucede con los ensayos de actividad encimtica en extractos crudos o
clulas enteras.
En cuanto a las separativas, el objeto es distinto. Se trata de aislar y recuperar una gran
cantidad del compuesto en un grado de pureza para poder, con este compuesto aislado,
estudiar sus propiedades qumicas o biolgicas. Las separativas requieren una mayor
cantidad de material de partida que las analtica para garantizar un alto grado de
recuperacin del compuesto. Los mtodos utilizados poseen una resolucin menor que los
mtodos usados en las tcnicas analticas.
Usualmente los procesos de purificacin de una molcula en bioqumica comienzan con
tcnicas preparativas que nos dan una buena cantidad de material ya purificado. A
continuacin se sigue purificando hasta que alcancemos el grado de pureza deseado.
Normalmente a mayor pureza menor recuperacin.
El material biolgico usado en bioqumica
La experimentacin en bioqumica puede llevarse a cabo de dos modos fundamentales, in
vivo e in vitro.
El primer trmino se aplica a organismos multicelulares y utiliza plantas o animales enteros
o tambin parte de los animales en las cuales determinados rganos estn prefundidos con
nutrientes. La perfusin implica el bombeo de una disolucin isotnica cargada con
nutrientes, frmacos u hormonas a travs del rgano. Esta solucin asume el papel de la
circulacin normal, aportando nutrientes y eliminando sustancias de desecho.
Los animales se utilizan en investigacin fundamental as como en mdica, veterinaria y en
pruebas toxicolgicas. Los animales ms empleados son ratones, ratas y cobayas, debido a
su bajo precio y facilidad de manejo, pero tambin otros animales como conejos, muy
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empleados para preparar anticuerpos. Tambin son utilizados gatos, perros, monos, cerdos,
etc...
Estos animales deben mantenerse en pequeos grupos homogneos en lo relativo a edad,
sexo, estado fisiolgico... y controlados desde el punto de vista de nutricin, posibles
enfermedades...
Los resultados extrados con experimentos con animales deben ser sometidos a la
estadstica, realizando experimentos con ms animales.
Las plantas enteras se han necesitado en investigacin bsica para el estudio de procesos
como la fotosntesis, respiracin, asimilacin del nitrgeno... pero tambin para
investigacin aplicada en campos como loa patologa, polucin, tecnologa de los
alimentos...
Las plantas, segn las necesidades del experimento y especie, pueden obtenerse de
plantaciones de exterior o de invernadero. La utilizacin de estos ltimos tiene la ventaja de
que se controlan aspectos como la temperatura, humedad, iluminacin...
Los in vitro implican la incubacin del material biolgico en ambientes fsico qumicos
artificiales. Este trmino se aplica a preparaciones encimticas, rganos prefundidos pero
aislados del animal, microorganismos intactos y a partes escindidas de animales o plantas.
Tambin se usa en la experimentacin in vitro clulas desagregadas de tejidos animales por
tratamiento con encimas como la tripsina o colagenasa, que degradan la matriz
extracelular que mantiene los tejidos y rganos unidos.
En un rgano normalmente coexisten varios tipos de clulas. Para separar estos tipos se
usan dos mtodos fundamentalmente. Por una parte la centrifugacin que separa las clulas
en funcin de su tamao. Ms recientemente se desarrollaron los denominados
clasificadores de clulas activadas por fluorescencia, que consisten en que una suspensin
celular se trata con una anticuerpo marcado con fluorescencia (unido a un componente
fluorescente) que se dirige contra un antgeno de la superficie celular que est presente en
cantidades diferentes en los distintos tipos de clulas. A continuacin las clulas can
pasando en fila de una a una por un rayo lser y se van separando fsicamente de acuerdo
con la cantidad de fluorescencia que presenta cada una. Estos aparatos son capaces de
separar varios miles de clulas por segundo.
Adems, para la experimentacin in vitro tambin se pueden usar las clulas animales o
vegetales en cultivo. La ventaja de la utilizacin de los cultivos es que obtenemos
poblaciones homogneas y adems en condiciones controladas de manera que podemos
inducir o reprimir un determinado encima o ruta metablica.
En general, podemos decir que los mtodos de esta investigacin han permitido avanzar
ms rpido en los experimentos bioqumicos, aunque recibe una dura crtica ya que no
siempre sucede lo mismo cuando estas clulas estn en el laboratorio en cultivo que cuando
estn en vivo en el rgano.
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Tcnicas de homogenado de tejidos y fraccionamiento de orgnulos celulares
El primer paso en cualquier proceso analtico en el cual el contenido celular deba ser
liberado, consiste en la homogeneizacin de tejidos y la rotura de celular. Esto nos
proporciona una mezcla cruda que se puede utilizar como material de partida en procesos
analticos, o para la determinacin de actividades encimticas o estudios metablicos
cuando la incorporacin de un determinado metabolito por el tejido intacto sea difcil.
Tambin podemos usar otros tejidos homogeneizados para la separacin de los
componentes celulares (fraccionamiento celular), en experimentos de compartimentacin
metablica ( determinar en qu parte de la clula se produce un proceso o ruta metablica).
El material biolgico que se va a homogeneizar se debe seleccionar de modo que sea rico
en los orgnulos de inters, y adems muy activo en la va metablica que se va a estudiar.
Por ejemplo, si queremos estudiar la cadena respiratoria, seleccionaremos un tejido rico en
mitocondrias, como el hgado fresco. Si quisisemos aislar ncleos, tomaramos un trozo de
timo. Adems tenemos que tomar la precaucin especial de que la solucin en la que se
lleva a cabo la homogeneizacin debe ser isotnica (generalmente disoluciones de
sacarosa). El fraccionamiento celular se hace mediante centrifugacin diferencial ( a
diferentes velocidades y durante tiempos distintos), as es posible separar ncleos,
cloroplastos, lisosomas, mitocondrias, microsomas. El contenido del citosol permanece en
el sobrenadante de la ltima centrifugacin.
Muchas encimas y protenas son termolbiles (se desnaturalizan por accin de la
temperatura) por lo tanto estos procesos de homogeneizacin deben realizarse en fro
(generalmente a 4 C en cmaras fras).
Los mtodos empleados para la disyuncin de las clulas se basan fundamentalmente en
que en general, las clulas cultivadas son fciles de romper. Esto se consigue por choque
osmtico, ciclos de congelacin descongelacin, o por digestin con encimas (proteasas y
lipasas).
Otra manera de romper las clulas animales es el caso de disolventes orgnicos como el
tolueno . sin embargo, levaduras y clulas vegetales poseen un pared celular resistente y
dura que requiere que para romperla se combinen mtodos encimticos y mecnicos. Los
mtodos encimticos implican el tratamiento de las clulas vegetales con pectinasas y
celulasas. En el caso de levaduras su pared se rompe con la lisocima (mezcla de encimas).
Entre los mtodos fsicos tenemos:
- molido con mortero ( en presencia de un agente abrasivo como almina)
- agitacin en presencia de pequeas bolas de vidrio (es muy usado en levaduras, pero
en las plantas se pueden daar los orgnulos)
Tambin se utilizan homogeneizadores que son sistemas de extrusin o prensas ( la french
es la ms usada con levaduras).
Otra manera es la ruptura celular por ultrasonidos. Es muy empleada con bacterias y su
pared. Los ultrasonidos son eficaces pero presentan un inconveniente, la muestra se calienta
mucho, con lo que debemos actuar de manera espordica y enfriando la muestra entre
aplicacin y aplicacin.
El material biolgico lo conservamos con la tcnica del fro, que es la ms utilizada,
congelando la muestra en nitrgeno lquido, porque se considera que las reacciones
bioqumicas se detienen a 130 C, y el punto de ebullicin del nitrgeno es de -196 C,
15
con lo que nos asegura la baja temperatura requerida. Normalmente esta congelacin se
hace en presencia de un componente protector, que suele ser glicerol, que evita la
formacin intracelular de cristales de hielo como consecuencia de la congelacin rpida que
al descongelar provocara la lisis de las membranas celulares.
Precipitacin fraccionada y centrifugacin. Ultracentrifugacin.
La precipitacin fraccionada es una fase preparativa de la purificacin de protenas. Se
realiza con sales, comnmente sulfato amnico.
Se basa en que en soluciones salinas concentradas, unas protenas son ms solubles que
otras, y as podemos separar distintas fracciones proteicas.
El objetivo de la centrifugacin es acelerar la sedimentacin de sustancias qumicas,
clulas, partculas... creando campos gravitatorios artificiales mucho ms intensos que el
terrestre. Estos campos gravitatorios artificiales se consiguen haciendo girar la muestra a
gran velocidad en unos aparatos llamados centrfugas. Las centrfugas de uso habitual
alcanzan entre 3.000 G y 10.000 G , siendo 1G = aceleracin de la gravedad terrestre.
En cuanto a las ultracentrfugas, estas alcanzan 400.000 G debido a su mayor velocidad
de rotacin y a su actuacin en vaco.
En las centrifugaciones los tubos que contienen la muestra se colocan en una pieza que gira
y que se llama rotor.
Para la centrifugacin es esencial que el centro de gravedad del rotor coincida con el eje de
rotacin. Para ello, es imprescindible que los tubos con la muestra se coloquen equilibrados
en el rotor, situndolos simtricamente con pesos iguales.
Rotor de ngulo fijo.
Mediante la centrifugacin las partculas se separan en funcin de una caracterstica que es
el coeficiente de sedimentacin, simbolizado por S y sus unidades son los svedverg,
siendo 1 S =
13
10
=
Cromatografa HPLC
( High Performance Liquid Chromatography o Cromatografa lquida de alta eficacia):
Las cromatografas estudiadas hasta ahora eran lentas, ya que solo se aplicaba una presin
hidrosttica para que los lquidos se colasen por la columna. Por ello, la elucin suele tardar
varias horas. En este tiempo las molculas ms frgiles se pueden deteriorar. Otro problema
con que nos encontramos es que al ser un proceso lento, la muestra tiende a difundir
(esparcirse) a medida que baja a lo largo de la columna. Cuanto ms dure la separacin
peor ser la resolucin.
La HPCL resuelve estos problemas ya que usa unas presiones entre 5.000 y 10.000 psi para
hacer que los lquidos atraviesen ms rpidamente la columna, con lo que las separaciones
que tardaban horas se reducen a minutos y la resolucin es ms alta debido a que no hay
tanta difusin.
Para poder hacer esto fue necesario desarrollar resinas no compresibles con las que rellenar
la columna, y adems el cambio de columnas de vidrio por unas metlicas, ms resistentes
para soportar las presiones.
Este tipo de cromatografa HPLC tambin puede ser usado como cromatografa de
intercambio inico, de afinidad...
Cromatografa de gases:
Hasta ahora el eluyente era un lquido. Aqu es un gas. Esta cromatografa tiene lugar con la
columna rellenada de un slido inerte que est finamente dividido de materiales muy
diversos como tierra diatomeas, cromosol. Este material se empapa de un lquido no voltil
como un aceite de silicona que constituye la fase estacionaria.
El eluyente es un gas inerte como helio, argn o nitrgeno que se hace fluir a velocidad
constante a travs de la columna.
La muestra debe ser voltil ( para las molculas no voltiles como aminocidos, se hacen
reacciones qumicas que las transformen en derivados voltiles) que se introducen en la
20
columna disueltos con un disolvente orgnico que se evaporan al introducirlos a alta
temperatura por calentamiento.
Los productos voltiles se van separando a lo largo de la columna segn su reparto entre las
dos fases, la estacionaria y la mvil (gas o gas portador). Como la muestra se volatiliza a
alta temperatura, y es a la que se produce la operacin, las columnas estn metidas en un
horno.
Los productos se van cuantificando a la salida de la columna mediante detectores (muy
variados) que estn acoplados a registradores que nos van a dar un registro o
cromatograma en el que cada componente que hemos separado se va a corresponder con un
pico que sale cada cierto tiempo de retencin que nos permite identificar a qu molcula
corresponde cada tipo, siempre por comparacin de patrones conocidos.
El rea de cada pico nos permite cuantificar el compuesto que hay en la muestra. Esta es
una tcnica analtica, cuantificamos y cualificamos. No es una tcnica preparativa porque
recuperamos cantidades mnimas.
Electroforesis:
Son aquellas en las que aplicamos un campo elctrico a una solucin con molculas del
soluto con carga positiva. Estas se desplazan hacia el ctodo y las de carga negativa hacia el
nodo. A este desplazamiento se le denomina electroforesis.
La velocidad de las molculas en la electroforesis depende de 2 factores:
En primer lugar, guiando el movimiento est la fuerza producida por el campo sobre la
partcula que se corresponde por q donde q es la carga de la molcula en Culombios,
y es la carga del campo elctrico en m voltios . Pero resistiendo al movimiento est la
fuerza de friccin que ejerce el entorno sobre la partcula que es v F siendo v la
velocidad de la partcula y F su coeficiente de friccin, que depende del tamao y forma
de las partculas (molculas) de modo que las grandes o asimtricas presentan coeficientes
de friccin mayores que las pequeas.
Cuando se activa el campo elctrico, las molculas se aceleran hasta alcanzar una velocidad
en la que ambas fuerzas se igualan, siendo v F q =
A continuacin se mueve constantemente a esa velocidad. Esta igualdad tambin la
podemos expresar as:
= =
F
q
v
o movilidad electrofortica, y es la velocidad de
movimiento por unidad de fuerza de campo. Consecuentemente, la movilidad de una
molcula es la electroforesis, y depende de su carga y dimensiones moleculares.
Aunque la electroforesis se puede llevar a cabo en disolucin, normalmente se usa algn
soporte. Las dos ms corrientes son el papel y el gel.
La de papel se usa para separar molculas cargadas pequeas. Se hace que la tira de papel
de filtro se extienda humedecida en un tampn entre dos cmaras que son las que
contienen los dos electrodos. En el centro del papel se coloca una gota de la muestra a
analizar y se conecta el campo elctrico. Al cabo de una hora, cuando las molculas se han
separado, se seca el papel y se tie con un colorante que nos deja ver las molculas que
estamos separando. Cada molcula la identificamos como una mancha, y se habr
desplazado hacia el nodo o ctodo segn su carga, y una determinada distancia que
depende de su carga y dimensiones.
Al igual que en la cromatografa cada componente lo identificamos comparndolo con
factores conocidos.
21
Actualmente se usa ms la electroforesis en gel, que se emplea para separar protenas y
cidos nucleicos. Se coloca un gel que contenga la disolucin tampn adecuada entre dos
placas de cristal. Estos geles son lminas finas de tan solo uno milmetros de espesor. Los
geles suelen ser de poliacrilamida o agrarosa. La primera es para separar protenas y cidos
nucleicos de bajo peso molecular. La agarosa para separar cidos nucleicos de mayor
tamao. El gel se coloca entre los compartimentos que tienen los electrodos.
La muestra se aplica en la parte superior del gel, en los pocillos (hendiduras) y se le
aade glicerol y un colorante. El primero es para que la muestra sea densa y se quede en el
pocillo y no difunda por el tampn que hay en receptculo superior. El segundo (colorante)
nos sirve para seguir el proceso de la electroforesis. Cuando el colorante llega abajo,
desconectamos, y aqu se supone que las molculas ya estn separadas. Con esto realizado
retiramos el gel y lo teimos con un colorante que nos permita visualizar las molculas que
estamos separando, que las veremos como bandas estrechas.
Si la electroforesis se realiza en gel, la movilidad es menor de la que presentan las
molculas en disolucin por el efecto de tamizado molecular que ejerce el soporte, que es
ms fuerte cuanto ms concentrado est el gel.
Para molculas cuya carga es proporcional a su longitud, como el DNA, que presenta una
unidad de carga en cada residuo, presentan una movilidad libre casi independiente de su
tamao. Entonces, en la electroforesis en gel la movilidad de estas molculas viene
determinada por el efecto del tamizado molecular del gel.
As, mediante electroforesis en gel podemos separar las molculas casi exclusivamente por
su tamao.
Representamos el logaritmo del peso molecular frente a la distancia recorrida, y obtenemos
unos puntos que se ajustan a una lnea recta.
Tcnicas de Dilisis y Ultracentrifugacin
La dilisis y la ultracentrifugacin sirven para concentrar y purificar biopolmeros. Se
basan en la utilizacin de membranas semipermeables que permiten el paso de molculas
pequeas pero no de protenas o otras macromolculas.
La dilisis se usa normalmente para eliminar molculas pequeas contaminantes o para
cambiar las condiciones de una solucin tampn.
Habitualmente se coloca la muestra (disolucin de una protena, por ejemplo) en una bolsa
cerrada pero con las paredes de membranas semipermeables y se sumerge en un volumen
mayor de una disolucin tampn dentro de un recipiente. El tampn se somete a una
agitacin mediante un agitador magntico situado debajo de la muestra en la bolsa.
22
Las molculas pequeas contaminadoras saldrn de esta bolsa hacia la disolucin
tampn, y esta tender a reemplazar el lquido disolvente en el que tenemos la muestra. Si
reemplazamos el tampn varias veces, al final tendremos la protena disuelta en la
disolucin tampn exterior y habremos eliminado otras molculas pequeas que al
principio la acompaaban.
La ultracentrifugacin se utiliza para concentrar disoluciones de macromolculas. Tambin
se usan membranas semipermeables, pero se aplica presin para hacer salir el disolvente y
las molculas pequeas. Hay una gran diversidad de mtodos. El ms sencillo consta de un
recipiente con una membrana semipermeable al que se le aplica una presin con
2
N gas
como se indica en el dibujo:
La dilisis purifica, y la ultracentrifugacin concentra. Otra tcnica es la diafiltracin, una
combinacin de las anteriores, donde se concentra y se eliminan contaminantes al mismo
tiempo.
Primero se concentra la muestra por ultracentrifugacin y se le aade la disolucin tampn
(gran volumen) y la volvemos a concentrar hasta que queda un pequeo volumen, y as
sucesivas veces.
Tcnicas de Radiactividad
Los istopos radiactivos se empezaron a utilizar despus de la segunda guerra mundial, y
presentaron un gran avance ya que amplan en varios rdenes de magnitud la sensibilidad
con la que detectamos una especie qumica. Los anlisis tradicionales permiten detectar
molculas en cantidades mnimas de nanomoles (
9
10
moles).
Los compuestos marcados radiactivamente son los trazadores, ya que se pueden seguir
las transformaciones que sufren en presencia de un exceso de material no radiactivo.
En bioqumica se usan dos istopos, los radiactivos y los estables. En el caso del hidrgeno,
tenemos el tritio ( H
3
), radiactivo, y el deuterio ( H
2
), estable.
La utilidad de los istopos estables la resumimos en:
- incorporando un istopo estable aumentamos la densidad de un material, lo que
nos proporciona un mtodo fsico para separar los compuestos marcados de los no
marcados.
23
- Los compuestos marcados con istopos estables, en especial el C
13
, se usan mucho
en experimentos de resonancia magntica nuclear para el estudio de la estructura
molecular y de los mecanismos de reaccin.
- Como trazadores, cuando no se dispone de los radiactivos adecuados de ese
elemento, como es el caso del O
18
y N
15
, que no poseen radiactivos
De entre los istopos radiactivos, en bioqumica se usan los que emiten radiaciones | y ,
pero no con emisiones o . - Una | es un electrn emitido
- Una es una radiacin electromagntica (fotn con alta
energa)
Las emisiones se usan sobre todo en inmunologa ya que existen istopos del yodo que
son emisores y es fcil unir estos istopos a anticuerpos. Salvo esta excepcin, en
bioqumica, los ms usados son los emisores de radiaciones | .
La radiactividad es un proceso cintico de primer orden: el nmero de desintegraciones que
se producen en un determinado intervalo de tiempo depende solamente del nmero de
istopos radiactivos presentes.
Este fenmeno da lugar a la ley de desintegracin radiactiva que tiene esta expresin:
t
e N N
=
0
, donde: -
0
N es el nmero de tomos radiactivos en el t = 0
- N es en n de tomos que quedan en el tiempo t
- es la constante de desintegracin
La constante de desintegracin es caracterstica para cada istopo, y est relacionada con
otro parmetro que se emplea ms, que se llama hemivida o
2
1
T , que es el tiempo
requerido para que se desintegren la mitad de los ncleos de una muestra, y es igual a:
5 , 0
ln o
693 , 0
La hemivida es caracterstica de cada istopo.
La unidad bsica de desintegracin es el Curio (Ci). 1 Ci es la cantidad de radiactividad
equivalente a la que existe en un gramo de radio, es decir,
12
10 22 , 2 desintegraciones por
minuto. En bioqumica se trabaja con cantidades de microcurios ( Ci ).
Los detectores de radiactividad de que disponemos no presentan una eficacia del 100%, por
lo que la radiactividad se expresa en unas unidades relativas que son las cuentas por minuto
(c.p.m.), el nmero de desintegraciones que detecta el aparato en un minuto (menos que las
reales).
Por ejemplo, un contador de radiactividad con una eficacia del 50% para una muestra de
0,1 Ci nos dara un contage de
5
10 1 , 1 c.p.m.
Para medir la radiactividad disponemos de contadores GEIGER y de contadores de
centelleo, ms empleados.
24
Los contadores geiger se basan en el fenmeno de la ionizacin que producen las emisiones
radiactivas sobre un medio gaseoso. Estos se usan principalmente para saber, de modo
relativo, si hay o no radiactividad en una muestra, y para cuantificarla pero de modo no
muy aproximado.
Los contadores de centelmo nos ofrecen una mayor precisin. Se basan en los procesos de
excitacin. Aqu la muestra se disuelve o suspende en un disolvente orgnico que incluye
uno o dos compuestos fluorescentes. Una partcula | emitida por la muestra tiene una
elevada probabilidad de contactar con una molcula del disolvente. Al ocurrir esto, la
molcula del disolvente es excitada, haciendo que uno de sus electrones pase a un orbital de
energa superior. Cuando este electrn vuelve a su estado inicial se emite un fotn de luz.
Este fotn es absorbido por una molcula de flor que a su vez se excita.
La fluorescencia implica la absorcin de luz a una determinada energa seguida de la
emisin de luz a una energa inferior o longitud de onda mayor .
Un fotomultiplicador detecta este pequeo destelleo de luz y lo convierte en una seal
elctrica que, que es la que se cuenta.
Los istopos emisores | presentan un espectro electromagntico caracterstico cada uno.
Estas diferencias se usan en los contadores de centelleo lquido para cuantificar
simultneamente dos istopos de la misma muestra.
Las aplicaciones de los istopos radiactivos en bioqumica son muy variadas. Se incluyen el
estudio de rutas metablicas con trazadores, estudios de cintica encimtica con sustratos
marcados, y la autoradiografa, que se basa en la capacidad de las emisiones radiactivas
para impresionar placas fotogrficas. Esta tcnica combinada con la electroforesis nos
permite, por ejemplo, secuenciar el DNA o hacer estudios de la expresin de los genes,
entre muchas otras cosas.
Tcnicas espectroscpicas
Tanto protenas, como cidos nucleicos o hidratos de carbono, son molculas complejas
que pueden absorber radiacin en un amplio margen del espectro electromagntico. En la
regin infrarroja del espectro se estudia la conformacin de las molculas proteicas.
La regin visible se usa para la medida de la absorbancia de las soluciones coloreadas, y
esto es conocido como colorimetra.
En la zona visible la mayora de los biopolmeros no absorben luz. Aunque algunas
protenas se ven coloreadas, ello es debido a los grupos prostticos o iones, como el cobre
que forman parte del polipptido. El color rojo de la sangre se debe al grupo hemo de la
hemoglobina.
Para poder medir las protenas o cidos nucleicos por colorimetra, hay que transformarlos
en compuestos coloreados mediante reacciones qumicas especficas.
En la regin ultravioleta absorben luz los cidos nucleicos y las protenas, midindose
respectivamente a 260 y 280 nm. En realidad se mide en las cadenas laterales aromticas de
los aminocidos Phe, Tyr y Trp.
25
Las medidas se absorbancia de luz ultravioleta y visible se hacen en unos aparatos llamados
espectrofotmetros.
La muestra se coloca en una cubeta sobre la que incide una luz monocromtica (con una
sola longitud de onda) que se consigue con un monocromador. Parte de esta luz incidente
va a ser absorbida por la muestra y otra va a atravesarla.
La que la atraviesa es la luz i, y es detectada y registrada.
La absorbancia a la longitud de onda se define como el logaritmo del cociente entre Io
e I:
I
I
0
log y se relaciona con la concentracin mediante la ley de LAMBERT BEER
que dice que la absorbancia es igual a Epsilon por la concentracin y por el grosor de la
cubeta: l c A =
es el coeficiente de extincin, caracterstico para cada sustancia. Sus unidades dependen
de las unidades de la concentracin que se emplean ya que la absorbancia no tiene
unidades.
El grosor de la cubeta suele ser de un centmetro, por lo tanto si la concentracin la
expresamos como molaridad, las unidades de
seran
1 1
cm L M
Esta ley nos permite calcular concentraciones de una sustancia a partir de su absorbancia.
26
TEMA 6
HIDRATOS DE CARBONO, GLCIDOS
Concepto, clasificacin e importancia biolgica
Los carbohidratos, puramente, son aldehdos o cetonas con mltiples grupos hidroxilo
(polihidroxialdehdos o polihidroxiacetonas). Constituyen la mayor parte de la materia
orgnica de la tierra por sus variadas funciones, de entre las que destacamos:
- Actan como almacenes de energa, combustibles e intermediarios metablicos
- Forman parte de los cidos nucleicos ADN y ARN (desoxirribosa y ribosa)
- Son elementos estructurales en las paredes celulares de plantas y bacterias, y en el
exoesqueleto de artrpodos
- Desempean funciones importantes unidos a protenas y lpidos como la de
reconocimiento intercelular
La clasificacin ms sencilla depende del nmero de unidades de azcar de que consta. As
vamos a tener - las osas o monosacridos
- oligosacridos ( aprox. Entre 2 y 12 unidades )
- polisacridos ( ms de 13 )
A los oligosacridos y polisacridos se les llama tambin sidos , que pueden ser:
- holsidos (formados solo por monosacridos)
- hetersidos ( tamben por una fraccin no glucdica (glucagona))
Los monosacridos
Muchos de ellos tienen como frmula emprica ( )
n
O CH
2
, y por ello se les llam hidratos
de carbono. Los clasificaremos segn dos criterios:
- Segn el nmero de tomos de C ( triosas, tetrosas, pentosas, hexosas...)
- Segn su grupo funcional : - Aldehdo aldosas
- Cetona cetosas
Lo habitual es combinar los dos criterios, y as tenemos aldopentosas, cetotetrosas...
Los monosacridos ms sencillos tienen 3 tomos de C (aldotrioas y cetotrioas). En el caso
de las aldotriosas vamos a tener 2, debido a que la aldotriosa el el gliceraldehdo , y ste
posee un C asimtrico (C
*
) (el carbono 2). Distinguiremos el D-gliceraldehdo y el L-...
dependiendo de si el OH del C
*
est a la derecha o izquierda respectivamente.
CHO
|
H -C OH D-gliceraldehdo
|
CH2OH
27
Las formas D y L son enantimeros porque son estereoismeros pticos (son imgenes
especulaes uno con respecto al otro) y adems son no superponibles.
Si aadimos un nuevo tomo de C, en lugar de una aldotriosa tenemos una aldotetrosa. A
partir del D-gliceraldehdo tenemos 2 tetrosas, y a partir del L otras 2, ya que este nuevo
carbono aadido es asimtrico y por tanto podr presentarse con dos configuraciones
distintas, una con el OH hacia la derecha y otra hacia la izquierda.
Estas tetrosas formadas son la D-eritrosa y la D-treosa, que pertenecen a la serie D ya que
se forman a partir del D-gliceraldehdo, el cual tiene el OH a la derecha del carbono ms
alejado del grupo funcional (aldehdo).
La D-eritrosa y la D-treosa son entre s diastereoismeros porque no son imgenes
especulares.
Si aadimos un nuevo tomo de C, sta molcula tambin podr presentar las dos
conformaciones al ser aquel asimtrico.
La D-eritrosa nos dar lugar a dos pentosas, al igual que la D-treosa. Son importantes la D-
ribosa y la D-Xilosa.
Si seguimos este proceso de adicin de 1 C, obtendremos de cada aldopentosa 2
aldohexosas. Las ms importantes son la D-glucosa y la D-galactosa, que son epmeros
entre s ya que solo se diferencian en la configuracin de un C
*
, el
4
C , en el que la
glucosa tiene su OH a la derecha.
En general, cuando una molcula no contiene planos de simetra, el nmero de
estereoismeros posibles es
n
2 , siendo n el nmero de carbonos asimtricos.
En el caso de 1 hexosa, tenemos 4 C
*
, y por tanto
4
2 estereoismeros posibles, 8 de la
forma D y otros 8 de la forma L.
En el caso de las cetosas todo esto es diferente, aqu el nmero posible de estereoismeros
es menor ya que la cetosa ms pequea es la dihidroxiacetona, y esta n presenta carbonos
asimtricos y solo puede encontrarse con una nica conformacin, no como en el caso del
gliceraldehdo.
CH
2
OH
|
C = O Molcula de dihidroxiacetona
|
CH
2
OH
Aadiendo un C como hicimos anteriormente con la otra serie, obtenemos una cetotetrosa,
que es la eritrulosa.
Las cetosas de 4 C tienen el
3
C asimtrico, por lo que podr existir como 2
estereoismeros, la D-eritrulosa y la L-eritrulosa.
28
Como es una cetosa, su nombre termina en ulosa. La terminaciones de los aldehdos
esosa (eritrulosa).
Si a la D-eritrulosa le aadimos un tomo de C con su correspondiente OH, obtendremos
dos cetopentosas de la serie D, la D-ribulosa y la D-xilulosa. Sus configuraciones (D o L)
nos viene indicado (como antes) por el C ms alejado del grupo funcional. De todos estos,
es importante la D-fructosa.
Tanto las pentosas como las hexosas se pueden ciclar en anillos. En el caso de una
aldohexosa, como la glucosa, reaccionan el grupo carbonilo (
1
C ) y el grupo OH del
5
C ,
formando un hemiacetal intramolecular. Lo que resulta es un anillo de 6 eslabones,
llamdado piransico.
Una glucosa en esta forma cclica, tambin se llama glucopiranosa, y es la forma que
predomina de esta en disolucin.
Cuando una aldohexosa se cicla, aparece un nuevo C
*
, ya que el
1
C ,aunque en la forma
abierta no es asimtrico, al ciclarse se convierte en uno, y por tanto da lugar a que
aparezcan dos nuevos estereoismeros llamados anmeros.
Al
1
C se le denomina anomrico.
Estos dos nuevos anmeros se les llama o y |, que se van a diferenciar en que en la
proyeccin de Haworth el anmero o presenta el OH del
1
C hacia abajo, mientras que el
anmero | hacia arriba.
Los anillos, realmente forman un plano, y los sustituyentes de los carbonos (en los vrtices
del anillo) se sitan hacia arriba y hacia abajo de este. Por ejemplo, en el caso de la glucosa,
cuando el OH est hacia abajo tenemos la o -D-glucopiranosa, y si est hacia arriba,
entonces la | -D-glucopiranosa.
En el caso de las cetosas como la D-fructosa, la reaccin se produce entre el grupo ceto del
2
C y el OH del
5
C . El enlace de este caso es un hemicetal intramolecular, y da lugar a un
anillo de 5 elementos, que se denomina furansico. En este caso tambin cuando se cicla
la fructosa ( o cualquier cetosa) aparece un nuevo C
*
anomrico que en este caso es el
2
C , y que posee sus respectivos enmeros o y |.
La fructosa tambin puede formar un anillo piransico (de 6 lados), formando un
hemiacetal intramolecular entre los carbonos 2 y 6, teniendo un anillo como el de la
glucosa. De echo, la forma piransica es la que predomina de forma libre, pero cuando est
unida a algn sustituyente predomina la furansica.
En disoluciones acuosas los monosacridos presentan la denominada mutarrotacin, que,
por ejemplo, en el caso de la glucosa se produce la interconversin de la o -D-
glucopiranosa y la |-D-glucopiranosa a travs de la forma de cadena abierta en disolucin,
29
con lo que se alcanza un equilibrio en el cual tenemos del anmero o y 2 del |,
representando la forma de cadena abierta menos del 1%.
La mutarrotacin se detect midiendo el poder rotatorio de disoluciones acuosas de
monosacridos, en las cuales este cambia con el paso del tiempo.
Aunque las proyecciones de Haworth son en un plano, en realidad estas molculas no son
planas, sino que adoptan dos tipos de conformacin, la de silla y la de bote.
Los sustituyentes de los carbonos van a ser de 2 tipos, axiales y ecuatoriales. Los axiales
son perpendiculares al plano central del anillo, y los ecuatoriales son paralelos a este.
Cuando los sustituyentes axiales son grupos distintos del H, se estorban estricamente , y
por tanto, de estas dos conformaciones, la ms estable es la que tenga ms hidrgenos en
posicin axial.
En el caso de la |-D-glucopiranosa, la conformacin ms estable es la de silla, en la que
todos los sustituyentes estn ocupados por H.
Los anillos furansicos tampoco son planos. Aqu la conformacin adoptada se denomina
de sobre ya que tienen forma de sobre con la solapa abierta. 4 tomos del anillo son
coplanares, y el 5 se situa en otro plano, formando la solapa.
Tomando como ejemplo la |-D-ribosa, el tomo que se aleja puede ser el
3
C o el
2
C ,
llamndose respectivamente
3
C -endo y
2
C -endo.
La ribosa que forma parte del RNA se encuentra en la conformacin
3
C -endo, mientras
que la dexosirribosa del DNA en la
2
C -endo.
Estos anillos furansicos son ms flexibles que los piransicos, y pueden convertirse uno
en otro con mayor facilidad. Esto les da ms preferencia para formar parte de los cidos
nucleicos, frente a las aldohexosas.
Determinacin del enlace oxdico
Esta consiste en averiguar, en un monosacrido, cuales son los tomos implicados en enlace
oxdico. Para ello se emplean dos mtodos fundamentales.
El primero consiste en el tratamiento del monosacrido con un cido peridico, que rompe
los enlaces C-C de las cadenas de los monosacridos, pero no cuando estos participan en el
puente oxdico.
30
En los monosacridos hay alcoholes (OH) primarios y secundarios. Por tratamiento con
peridico, a partir de los primarios obtenemos aldehdo frmico, y a partir de los
secundarios cido frmico.
Existe otro mtodo que puede usarse complementariamente, que es la metilacin del
monosacrido. Los OH se pueden metilar por tratamiento de yoduro de metilo en presencia
de plata o con sulfuro de metilo en medio alcalino. As se nos metilan todos los OH excepto
los del puente oxdico.
Si despus de la metilacin realizamos una hidrlisis cida suave con HCl diluido,
eliminamos el grupo metilo del C anomrico pero no los otros. A continuacin
identificamos este compuesto por cromatografa, y en funcin de los carbonos metilados
sabremos donde estaba el puente oxdico.
31
TEMA 7
PROPIEDADES Y DERIVADOS DE LOS MONOSACRIDOS
Propiedades fsicas y qumicas de los monosacridos
Los monosacridos son - blancos y cristalinos,
- solubles en O H
2
pero no en disolventes orgnicos,
- tienen sabor dulce ,
- presentan poder reductor, debido al grupo carbonilo (en el
caso de las cetosas esto solo se manifiesta en medio
alcalino).
- presentan isomera ptica por sus carbonos asimtricos.
Los monosacridos se pueden identificar porque no absorben la luz ultravioleta, pero en la
infrarroja presentan un espectro caracterstico.
Se pueden identificar en luz visible por colorimetra, pero hay que transformarlos en
compuestos coloreados previamente.
Tambin se pueden identificar por cromatografa.
Reacciones y derivados de los monosacridos
Oxidacin de los monosacridos:
Puede producirse de diversas formas segn cual sea el agente oxidante. Usando, por
ejemplo, la oxidacin suave de una aldosa en presencia del in
+ 2
Cu y en medio alcalino,
obtenemos el cido aldnico. El reactivo de Fehling es el usado para la oxidacin.
Como consecuencia de la oxidacin se forma O Cu
2
de color rojo que nos permite
identificar si hay o no un monosacrido reductor.
Otro tipo de derivados por oxidacin son los cidos urnicos, que se forman por
oxidacin suave en el grupo alcohol primario ( OH CH
2
) , que est en el
6
C en la glucosa.
Se oxida a un grupo cido, y el cido correspondiente es el glucurnico (en el caso de la
glucosa). Los cidos urnicos no se encuentran en estado libre.
En los cidos aldricos se oxidan los dos tomos de C con alcoholes primarios. Es una
oxidacin enrgica, y afecta al C del grupo carbonilo y al del OH primario.
El de la glucosa se denomina cido glucrico o sacrico.
Conjuntamente con los cidos aldricos y aldnicos aparecen uno compuestos que
qumicamente son lactonas que se forman mediante una reaccin de esterificacin
intermolecular con liberacin de una molcula de agua. Por tanto, reacciona el grupo cido
del
1
C con uno de los grupos alcohlicos de la aldosa.
Aparecen la o o la gluconolactona, dependiendo de que OH acta, llamndose los
carbonos de despus del
1
C , o , | , y o respectivamente.
32
Los cidos aldnicos estn en equilibrio con las lactonas en disolucin.
Las lactonas son compuestos importantes porque actan como intermediarios del
metabolismo. Adems, destaca una por su importancia biolgica, que es la vitamina C o
cido ascrbico, que se forma a partir de la glucosa, y es una -lactona de configuracin
L y dextrgira.
Formacin de hetersidos mediante enlaces glicosdicos
Los hetersidos se forman por unin de molculas de un monosacrido con otras
molculas. La unin se forma entre el C anomrico de un monosacrido y un heterotomo
de la otra molcula, llamndose a esta unin enlace glicosdico.
Segn cual sea el heterotomo diferenciamos los:
- O-hetersidos, en los que el heterotomo es el oxgeno, y el enlace es O-glicosdico.
- S-hetersidos, azufre S-glicosdico.
- N-hetersidos, nitrgeno N-glicosdico.
Los O-hetersidos (tambin llamados O-glucsidos) se forman por condensacin del
monosacrido con un hidroxilo alcohlico o fenlico que aportan el O. En esta unin
tambin se libera una molcula de O H
2
.
o o | glucosa o o | metilglucsido
aunque los glucsidos pueden ser o o | , no se interconvierten mediante mutarrotacin en
disolucin y por eso se emplean para determinar si los monosacridos son o o | .
Si este OH aporta otro monosacrido se forma un disacrido unido por un enlace O-
glicosdico.
Los S-hetersidos se forman por combinacin las aldosas con molculas que llevan un
grupo tilo (SH). Se forman mercaptales.
Solo las aldosas dan esta reaccin, no las cetosas, que reaccionan en su estructura lineal.
Los N-hetersidos se forman por condensacin del monosacrido con un grupo aminado.
Por ejemplo, los nuclesidos son N-hetersidos.
Adems, hay dos derivados amino de los azcares que tienen importancia biolgica al
aparecer en muchos polisacridos. Uno de ellos es la glucosamina, en la que se sustituye el
OH del
2
C por un grupo amino. En la glucosamina aparece en ocasiones acetilado el grupo
amino (N-acetil-glucosamina). Esto pasa igual con la galactosa.
NOTA: La glucosamina y la galactosamina no son N-hetersidos, ya que no interviene el C
anomrico en su formacin.
Otros derivados de los azcares son los steres fosfato, que se forman por combinacin del
cido ortofosfrico con cualquiera de los grupos OH del monosacrido (anomrico u otro
cualquiera).
33
Si el carbono que reacciona es el anomrico, hablamos de los cidos osil-fosfricos.
En el caso de la glucosa, el cido D-glucosil-1-fosfrico es la glucosa-1-fosfato.
Existen monosacridos importantes unidos a varios grupos fosfato. Diferenciaremos si
estos fosfatos estn sobre el mismo C o sobre otros. Por ejemplo, la fructosa 1,6 difosfato
( que se recomienda llamar fructosa 1,6 bisfosfato ) posee 2 fosfatos sobre 2 tomos de C
distintos.
Las molculas de cido fosfrico pueden unirse unas con otras, y este conjunto a un C del
monosacrido. En este caso el prefijo sera di,tri... como en el caso del ATP
Otros derivados importantes en biologa son los desoxiazcares, en los que se pierde un
grupo OH . Por ejemplo, en la 2-desoxirribosa tenemos 1 H en lugar de un OH (en la
ribosa). La desoxirribosa forma parte del ADN.
Otros derivados importantes en biologa son los alditoles o azcares-alcoholes, que son
derivados por reduccin del grupo carbonilo (aldehdo o cetona) de los monosacridos.
Los ms importantes de la naturaleza son el D-manitol y el D-sorbitol.
Por ejemplo, de la glucosa obtenemos el sorbitol (o glucitol).
De las cetosas generamos un nuevo C
*
, y as, por reduccin de la D-fructosa, el OH que
aparece, si est a la derecha, es el D-sorbitol, y si est a la izquierda, el D-manitol. Estos
dos son empmeros.
Reacciones para identificar monosacridos
En medio alcalino, los monosacridos sufren 2 reacciones:
- Interconversin aldosa cetosa (epimerizacin)
- Deshidratacin
La deshidratacin se produce por accin de los cidos y adems en un medio cido fuerte.
A partir de los OH se van liberando O H
2
y se forma un compuesto cclico llamado
furfural. 1 hexosa hidroximetil-furfural
Tanto uno como otro se condensan con fenoles o compuestos nitrogenados cclicos, para
dar lugar a compuestos coloreados.
Por tanto, estas reacciones se usan para la identificacin de los monosacridos.
La reaccin de Molish consiste en la combinacin de o -naftol con los monosacridos
dando un compuesto de color violeta indicativo de la presencia de aquellos.
34
TEMA 8
OLIGOSACRIDOS
Los oligosacridos se forman por la unin de monosacridos mediante enlaces O-
glicosdicos. Por tanto, uno de los C que participan en el enlace debe ser anomrico.
Aunque los oligosacridos contienen entre 2 y 12 monosacridos aproximadamente, los
ms importantes y abundantes son los disacridos (2 monosacridos).
Clasificacin e importancia biolgica. Oligosacridos ms importantes
Los disacridos se nombran y clasifican en funcin de su carcter reductor. Hay disacridos
reductores y no reductores. Esto depende de su grupo carbonilo, que es el que le confiere
dicho poder reductor. Los oligosacridos en los que los dos grupos carbonilo participan en
el enlace no presentan poder reductor, debido a que no queda libre ningn grupo carbonilo
en la molcula. En los disacridos que solo intervenga un grupo carbonilo se dar poder
reductor al quedar uno libre.
Los oligosacridos se nombran en funcin de su carcter reductor, de los monosacridos
que lo formen, y de sus enlaces.
Por ejemplo, la maltosa, deriva de la unin de 2 D-glucosas (Glc). Una Glc reacciona con
su carbono anomrico y la otra reacciona con el OH de su
4
C . La maltosa, por todo esto, se
nombrara as: o -D-glucopiranosil (14) | -D-glucopiranosa (nomenclatura IUPAC)
La terminacin osa nos indica que es reductor.
Hay otra nomenclatura abreviada en la que los monosacridos se designan por 3 letras, y
nuestro ejemplo quedara de la forma: Glc (1o 4) Glc (reductor).
Un disacrido no reductor es la sacarosa, formada por la unin de 1 Glc + 1 Fru
(fructosa). En el enlace glicosdico intervienen los dos carbonos anomricos. Exactamente
la unin sera de:
o -D-glucosa (con OH hacia abajo) + | -D-fructosa
Normalmente la | -D-fructosa se dibuja dada la vuelta para facilitar la representacin del
enlace.
Esta molcula se nombrara as : o -D-glucopiranosil (12) | -D-fructofuransido, y
abreviadamente: Glc (1o 2 | ) Fru.
Hasta ahora hemos visto enlaces o , que forman un vrtice hacia abajo, en el que el O
forma su punta. En los | el O hace el vrtice hacia arriba.
Los ms importantes son la celobiosa (de la celulosa) y la lactosa.
La celobiosa es la | -D-glucopiranosil (14) | -D-glucopiranosa o Glc (1 | 4) Glc.
35
La lactosa, presente en la leche, se forma por unin entre una D-galactosa y una D-glucosa,
y se nombra | -D-galactopiranosil (14) | -D-glucopiranosa o Gal (1 | 4) Glc.
Para nombrar oligosacridos mayores la regla sera la misma. Normalmente el orden es
empezando de izquierda a derecha desde el extremo no reductor hasta el reductor (con el C
anomrico libre).
Con relacin a los trisacridos, existen pocos importantes en biologa. Destaca la
rafinosa, presente en la remolacha, que resulta de la unin de 1galactosa + 1 sacarosa.
Gal (1o 6) Glc (1o 2 | ) Fru
sacarosa
rafinosa
Dentro de los oligosacridos vamos a ver tambin las oligosacarinas, que actan como
hormonas vegetales.
La primera que se descubri es un heptaglucsido, 7 glucosas unidas mediante 5 uniones
(16) y 2 uniones (13) de la siguiente manera:
las uniones (13) son puntos de ramificacin que son crticos, en el sentido de que si se
modifican (cambiando su posicin en la cadena), se altera su actividad biolgica.
Identificacin y anlisis estructural
Para realizar el anlisis estructural de los oligosacridos se usan reacciones que hemos visto
para los monosacridos.
- En primer lugar se analiza si es reductor o no reductor, usando la raccin de
Fehling.
- En segundo lugar se hidrolizan e identifican lo monosacridos que lo forman por
cromatografa
- Para saber el carcter o o | del enlace glicosdico se hidroliza con encimas
especficas de estos o bien se observa la mutarrotacin de los productos de
hidrlisis. Si el enlace es o el poder rotatorio va disminuyendo con el tiempo.
36
Para determinar los carbonos que estn en el enlace glicosdico, en primer lugar reducimos
el grupo carbonilo hasta un alcohol con boro-hidruro de sodio, un agente reductor
(
4
NaBH ). Al reducirse tambin se rompe el puente oxdico.
A continuacin el derivado reductor se metila a fondo (todos los OH que se puedan metilar)
y a continuacin se hidroliza.
Solo quedan sin metilar los grupos hidroxilo implicados en el enlace glicosdico.
Los derivados metilados se identifican por cromatografa.
Por ltimo, la estructura se confirma por oxidacin con periodato y anlisis de los
fragmentos resultantes.
Por ejemplo: Averigua la estructura de un disacrido que:
- es positivo en la reaccin de Fehling
- por hidrlisis y cromatografa se sabe que est formado solo por Glc
- por metilacin exhaustiva, seguida de hidrlisis en medio cido obtenemos 2,3,4,6-
tetrametil-glucosa y 3,4,6-trimetil-glucosa
Como da positivo en la reaccin de Fehling, posee un carbono anomrico libre y es
reductor
la nica posibilidad de formacin del enlace glicosdico es (12) ya que los dems no
estn en condiciones de formar enlace.
Determinantes antignicos de los grupos sanguneos
Son un grupo de oligosacridos que estn unidos a la superficie de los glbulos blancos
mediante protenas de membrana o a travs de lpidos. Quedan expuestos, y en algunos
casos inducen la formacin de anticuerpos y en otros no.
Las personas podemos producir anticuerpos frente a los oligosacridos de los tipos A y B,
pero no frente a los 0.
La diferencia entre los A y B, y el 0 est solo en una unidad de monosacrido
complementario. El esqueleto bsico es comn.
37
TEMA 9
POLISACRIDOS
Concepto y clasificacin
Los polisacridos estn formados por la unin de ms de 12 monosacridos por enlaces O-
glicosdicos. Se suelen clasificar como:
- homopolisacridos: formados por el mismo monosacrido
- heteropolisacridos: por varios tipos de monosacridos diferentes
Otra clasificacin es la de polisacridos
- simples : formados por monosacridos simples (Glc,Gal...)
- derivados: por derivados de monosacridos (acetilados, azcares cidos...)
Glucanos ms abundantes
La celulosa es la molcula de origen natural ms abundante que existe en la naturaleza.
Esto se debe a que la celulosa forma parte de las paredes celulares de los vegetales, y estos
forman una gran biomasa. Su funcin es pues, estructural.
Vista al microscopio electrnico, la celulosa est formada por fibras que estn, a su vez,
formadas por un conjunto de cadenas de glucosa no ramificadas y dispuestas en paralelo
unas a otras.
Todas las unidades son | -D-Glc unidas por enlaces glicosdicos | (14). Es un
homopolisacrido simple. La unidad repetitiva es el disacrido celobiosa.
La celulosa se organiza en cadenas lineales, y estas en fibras, por el establecimiento de
puentes de H.
Dentro de la propia cadena de celulosa se pueden establecer puentes de H que mantienen
esta estructura lineal, pero tambin entre cadenas paralelas de celulosa.
Esta estructura es ideal para su funcin biolgica. Su elevada capacidad de formar puentes
de H le da firmeza y es responsable de la insolubilidad en agua de este polisacrido.
En las paredes celulares de las plantas, estas fibras de celulosa se refuerzan por la presencia
de otras sustancias que actan a modo de cemento, como son la hemicelulosa, pectina,
y lignina.
La hemicelulosa es un polisacrido formado por D-xilosa. La pectina est formada por el
cido D-galacturnico, y la lignina es una sustancia ms compleja (polifenlica).
Todas ellas contribuyen a la rigidez de la pared.
La celulosa no puede ser digerida por los animales superiores excepto en el caso de los
rumiantes. Adems de estos ltimos, tambin pueden aprovecharla diversos
microorganismos, insectos, caracoles... A todos ellos se les denomina celulolticos.
38
La quitina es otro polisacrido relacionado con la celulosa. Est formada por la unin de
molculas de N-acetil-glucosamina, unidas por enlaces | (14).
Al igual que suceda con la celulosa, como los enlaces son | (14), para que el enlace
glicosdico se pueda formar, una molcula tiene que estar invertida con respecto a la otra.
La unidad repetida en este caso es el disacrido quitobiosa.
Como en la celulosa, en la quitina se pueden formar puentes de H, y por tanto es un
polisacrido que tambin cumple una funcin estructural. Es el principal componente del
exoesqueleto de artrpodos y tambin de las paredes celulares de microorganismos como
levaduras y hongos.
Polisacridos con funcin de almacenamiento
El almidn es un polisacrido que est presente en los vegetales de modo exclusivo. Est
formado por la unin de molculas de glucosa (o -D-Glc), y nos lo encontramos en forma
de grnulos citoplasmticos o tambin dentro de los plastos de los vegetales.
Los enlaces pueden ser de 2 tipos porque el almidn est formado por 2 componentes, la
amilosa y la amilopectina.
En la amilosa, los enlaces son todos o (14), mientras que en la amilopectina, son tambin
o (14), pero a intervalos regulares nos encontramos con enlaces o (16). Es decir, la
amilosa est formada por cadenas lineales, y la amilopectina por cadenas ramificadas, de
modo que cada enlace o (16) representa un punto de ramificacin.
La estructura es estos dos componentes es la siguiente:
La amilosa es helicoidal, debido al establecimiento de puentes de H. En las cadenas de
amilosa tambin se establecen puentes, pero de modo diferente a los de la glucosa.
La estructura secundaria de la amilopectina no se conoce con tanto detalle. Posee forma
arborescente debida a las ramificaciones.
Cada molcula de celulosa presenta un extremo reductor y uno no reductor. Esto mismo
pasa con la amilosa.
39
En el caso de la amilopectina, una molcula tiene un nico extremo reductor pero muchos
no reductores, debido a sus ramificaciones (tantos como ellas).
Otro polisacrido que tambin est relacionado funcional y estructuralmente con la
amilopectina es el glucgeno, polisacrido de reserva del medio animal. Se encuentra en el
hgado y en el msculo.
Su estructura es similar a la de la amilopectina, pero este est ms ramificado. Los enlaces
son o (16), y se sitan cada 8 unidades de glucosa en el glucgeno, y en la amilopectina
cada 25 30. Ambos son digeribles por los animales superiores (con encimas amilasa).
Mucopolisacridos cidos o glicosaminoglicanos
Son importantes en el reino animal, y ms en los vertebrados. La caractersticas generales
de este tipo de polisacridos son que:
estn formados por aminoazcares, normalmente por N-acetil-glucosamina y N-acetil-
calactosamina, y de aqu sus nombres.
Suelen poseer grupos cargados negativamente (carbonato, sulfato).
No suelen existir en estado libre, sino asociados a protenas, formando los proteoglicanos, o
tambin a asociaciones de lpidos y protenas.
Dentro de estos glicosaminoglicanos vamos a estudiar la estructura de tres
fundamentalmente:
El cido hialurnico lo encontramos en el tejido conectivo (en la sustancia basalque
rellena los espacios extracelulares de ste), en el lquido senovial, humor vtreo y cordn
umbilical.
Se trata de un polmero lineal no ramificado. La estructura que se repite es un disacrido
formado por la unin del cido D-glucurnico y de la N-acetil-glucosamina, mediante
enlaces | (13). Cada disacrido se une al siguiente por enlaces | (14). Estos dos
enlaces se alternan en la cadena.
Presentan una gran viscosidad, debida a la presencia de estos grupos cidos COOH que a
PH fisiolgico presentan carga negativa, estn ionizados(
COO ), lo que favorece una
hidratacin excesiva, y la formacin de puentes de H intercatenarios.
Otros dos glicosaminoglicanos tambin asociados con el tejido conectivo son el sulfato de
condroitina o condroitn sulfato y el queratn sulfato. En ambos, el ptatrn de enlaces
glicosdicos es alternante | (13), | (14) como en el caso del c. hialurnico.
En su composicin intervienen N-acil-azcares y tambin llevan grupos cargados
negativamente, pudiendo aparecer grupos sulfato ahora (
3 2
OSO CH ). En el caso del
condroitn , el disacrido est formado por el c. D-Glucurnico y por la N-acetil-D-
galactosamina. Aqu la N-acetil-gal est sulfatada en el
6
C .
La longitud de la cadena del sulfato de condroitina puede variar entre 15 y 150 unidades de
disacrido, y la extensin de la cadena, as como el grado de sulfatacin dependen de la
40
edad del tejido y de algunas condiciones patolgicas. En el caso del sulfato de queratn, el
disacrido repetido est formado por la galactosa y la N-acetil-galactosamina, que se unen
por enlaces | (14) y | (13) el intermediario. La galactosamina tambin est
sulfatadoa en el
6
C . Aqu, a diferencia, interviene la galactosa simple, y no tenemos grupos
carboxilato.
Aqu la longitud de cadena oscila entre 10 y 50 unidades de disacrido y es menor que la
del sulfato de condroitina.
En resumen: cido hialurnico grupos carboxilato
Base comn Heparn sulfato grupos carboxilato y sulfato
Queratn sulfato grupos sulfato
Otro tipo de mucopolisacridos cidos forman las paredes de las bacterias, y son un
entramado estructural que rodea completamente a la clula.
Es una estructura continua (como una bolsa), constituda por cadenas de polisacridos lagas
y paralelas que estn unidas entre s transversalmente a ciertos intervalos por cadenas
laterales que son pptidos cortos.
Los polisacridos estn formados por la unin de la N-acetil-D-glucosamina y el cido N-
acetil-murmico mediante enlaces | (14). El componente cido es un monosacrido
complejo que lleva un radical en el
3
C , lugar donde va unida la cadena lateral polipeptdica
corta que hace de unin d entre polisacridos.
El pptido suele ser un tetrapptido cuya composicin vara entre las especies bacterianas.
A esta estructura continua que rodea a la clula se le denomina pptidoglucano o
murena. Hay algunos antibiticos como la penicilina, cuya accin consiste en inhibir una
de las mltiples etapas de la sntesis encimtica de los peptidoglucanos.
Enlaces azcares protenas
Los dos ms importantes que suelen aparecer en las protenas son:
- N-acetil glucosamina + cadena proteica: la unin se establece por el grupo amino de
la asparagina y se llama una N-GLICOSILACIN.
- Otro tipo de enlace es un O-glicosdico con la treonina o serina. O-
GLICOSILACIN.
EJERCICIOS:
1.- Una muestra de 75 mg de celulosa se hidroliz en medio cido. En el hidrolizado se
encontraron 75 mg de glucosa. cul es la pureza de la muestra de celulosa?
Como la unin Glc-Glc es un enlace glucosdico, se gana una molcula de O H
2
en cada
hidrlisis de 2 molculas, y su peso hay que descontarlo.
El peso molecular de la glucosa es 180.
41
El peso de las glucosas unidas por enlace glicosdico es 180 18(peso del O H
2
)
180 18 = 162.
Entonces, la relacin de prdida de masa ser de 1 , 1
162
180
= , que a su vez es el peso que
aumentamos al hidrolizar, ya que al romper los enlaces les aportamos la molcula de agua
que haban perdido al formarse el mismo.
Lo mximo que podramos tener sera 75 + 1,1 , que sera el 100%
75 + 1,1 100%
75 x% x = 90,9%
2.- Por metilacin exhaustiva de 32,4 gr de amilopectina seguida de hidrolizacin cida se
obtienen 10 moles de 2,3,4,6 tetrametil-glucosa.
Cules son los otros productos (derivados metilados) que espera obtener?
Cunto de cada uno?
Qu tanto % de residuos de glucosa estn unidos por enlaces (16)?
Si el peso molecular de la amilopectina es de
6
10 12 , Cuntas ramificaciones posee una
molcula de amilopectina?
Amilopectina = glucosas con enlace (14) + ramificaciones peridicas con es.(16)
Hay cuatro tipos de Glc distintas: - La del C anomrico libre (una en cada molcula de
amilopectina)
- Las unidas por e(14) (de la cadena principal)
- las que forman los puntos de ramificacin, con
es.(16)
- las de los extremos no reductores (OH del
4
C libre).
La 2,3,4,6 tetrametil-glucosa corresponder a la del extremo no reductor, pues est unida
a la cadena por el
1
C y tiene libres los C 2,3,4 y 6.
Por cada extremo no reductor tenemos una ramificacin y podemos considerar que hay
igual cantidad de puntos de ramificacin que extremos no reductores. Estos puntos de
ramificacin tienen libres los C 2 y 3, y por tanto obtendremos 2,3 dimetil-glucosa.
Las glucosas de las cadenas tienen libres los C 2,3 y 6 y nos darn 2,3,6 trimetil-glucosa.
Nos queda la glucosa del extremo reductor, que nos dar 2,3,6 trimetil-glucosa, y no del 1,
porque se elimina en la hidrlisis cida.
Para calcular que % de cada uno haremos lo siguiente: como tenemos un total de 32,4gr
de amilopectina,
moles
mol
moles
mol gr
gr
200
1
1000
. 162
4 , 32
=
42
como los extremos no reductores hemos visto que nos daran 2,3,4,6 tetrametil-glc y hemos
obtenido 10 moles ,
200 100% x = 5% de extremos no reductores, y
10 x% consecuentemete lo mismo de puntos
de ramificacin.
Partiendo de esto, y sabiendo que el nmero de glucosas que tenemos es
74074
162
000 . 000 . 12
= , el 5% de estas es 3700 ramificaciones por molcula de amilopectina.
Tambin hay otro 5 % de extremos.
El % de enlaces (14) es el otro 90% .
43
TEMA 10
LPIDOS : CIDOS GRASOS
Con el trmino lpido nos referimos a una sustancia de origen natural, insoluble en agua,
pero s en solventes orgnicos apolares como cloroformo o ter, que se caracteriza por una
gran diversidad tanto estructural como fucional.
En cuanto a las funciones, destacamos que :
-
- Son componentes de membranas.
- Actan como formas de almacenamiento de C y energa.
- Son precursores de otras sustancias importantes en biologa.
- Actan como aislantes para choques mecnicos, trmicos o elctricos.
- Constituyen recubrimientos protectores que impiden infecciones y prdidas o
entradas excesivas de agua.
- Algunos son hormonas o vitaminas.
Clasificacin
Son un grupo compuesto por una gran cantidad de biomolculas, y hay muchas
clasificaciones. Seguiremos la siguiente:
- simples
lpidos - compuestos
- derivados
los lpidos simples estn formados por steres de cidos grasos y un alcohol nicamente.
Dentro de estos, segn cual sea el alcohol y los cidos grasos, tendremos acilgliceroles o
ceras.
Los lpidos compuestos adems tienen steres formados por otro tipo de compuestos. Los
subdividimos en fosfolpidos (con c. fosfrico), y glucolpidos (cerebrsidos y
ganglisidos) .
Los fosfolpidos se subdividen en fosfoacilgliceroles (su alcohol = glicerol) y en
esfingolpidos.
Adems, hay un tercer grupo, los derivados, que no se pueden incluir en los anteriores. En
la composicin de stos no intervienen cidos grasos, aunque algunos derivan in vivo de
ellos.
- acilgliceroles
- Simples - ceras
- fosfolpidos (fosfoacilgliceroles y esfingolpidos)
- Compuestos
Lpidos - Derivados - glucolpidos (cerebrsidos y ganglisidos
44
lpidos simples: sus cidos grasos son cidos carboxlicos alifticos de cadena larga
(se llaman cidos grasos por estar en las grasas). Como caractersticas generales de los ms
abundantes en la naturaleza podemos decir que:
- la mayora son cidos monocarboxlicos (1 COOH)
- las cadenas de hidrocarburos suelen ser lineales, no ramificadas y con un nmero
par de tomos de C, que oscila entre 12 y 20
Con frecuencia aparecen dobles enlaces (llamados insaturaciones). La insaturacin es
frecuente a partir de los 16 tomos de C. Los dobles enlaces de los cidos grasos suelen
tener la configuracin CIS, y pueden presentarse varios la misma molcula. Cuando esto
ocurre, los dobles enlaces nunca estn seguidos, sino separados por un solo grupo metileno.
La larga cadena hidrocarbonada es apolar, pero la molcula del cido graso contiene un
grupo polar, el COOH, y por tanto adquiere polaridad en conjunto. De echo, los cidos
grasos son cidos dbiles cuyos valores de pK estn situados en 4,5 por trmino medio.
Esto quiere decir que a pH fisiolgico, se encuentran en forma aninica (
COO ), con lo
que es muy hidrfilo, mientras que las colas hidrocarbonatadas son hidrfobas.
Por tanto, los cidos grasos se comportan como molculas anfipticas tpicas, que, al
intentar disolverlas en agua, tienden a formar monocapas en la interfase aire-agua con los
grupos