FLUJUOGRAMA DEL PROCESO: DIAGRAMA DE FLUJO PARA LA ELECTROFORESIS

Diagrama de flujo Electroforesis

Aadir 30ml de solucion amortiguadora (TAE)1X

Calentar hasta que se disuelva la agarosa

Dejar que el gel solidifique

Vaciar la agarosa (sin burbujas)

Dejar enfriar hasta 50 C

Aadir TAE 1X hasta cubrir aproximadamente 0,5 com sobre el gel. Poner el gel dentro de la camara de correr la alectroforesis. Prender el el quipo con un voltaje alrededor de 100 v

Cargar 10 ul de muestra

Conectar el equipo (+ y -).

Correr la electroforesis hasta que la muestra se haya movido.

MATERIALES- EQUIPOS - REACTIVOS Materiales Pipetas de 2-20uL y de 20-200uL Peines para las bandejas Bandeja para la preparacin del gel Fuente de poder Probetas, tubos de ensayo y microtubos Guantes de ltex Guantes para calor Cofia Mascarilla Parafilm METODOLOGA: Con la micropipeta se toma una medida de 25 uL de Buffer TBE 1X. Colocamos esta medida en la muestra con el inculo de E.coli en el tubo de ensayo, luego procedemos a etiquetar. En la cmara de flujo laminar tomamos una pequea muestra de la cepa, con el asa previamente esterilizada. Esta muestra la colocamos en un microtubo, y este microtubo lo colocamos en el termociclador, donde se realiza la extraccin de ADN por calor. Este proceso ocurri durante 9 minutos a 95 C. Luego se procede a realizar el gel agarosa. Preparacin del gel agarosa a 0,8 % p/v o Se pesa un gramo de agarosa en la balanza analtica. o Se coloca la agarosa pesada en un vaso de precipitacin junto con 125 mL de buffer TBE 1X o Se procede a calentar en el microondas hasta que se disuelva. o Luego hay que agitar para que se enfri. o Una vez enfriado se procede a agregar 2,5 uL de sybersafe o Se agita para que se mezcle completamente pero evitando que se formen burbujas. o Procedemos a colocar el gel en la bandeja, llenando el tanque de la cmara de eletroforesis con buffer TBE 1X hasta cubrir el gel. o Se deja enfriar hasta que se solidifique. Equipos Cmara de eletroforesis Cmara de flujo laminar Termociclador Microondas Transluminador Balanza analtica Reactivos Sybersafe Agarosa grado molecular TBE 1X Agua Destilada Inculo de E.coli Buffer (blue orange)

Preparacin de la muestra o Se coloca 3 uL de Buffer Blue Orange, pues este le da peso a a la muestra para que salga dentro del positivo. o Primero se coloca los 3 uL de buffer blue orange a lo largo de los puntos que posea el parafilm. o Luego se coloca 10 uL de cada muestra encima del buffer blue orange colocados en el parafilm. o Luego tomamos la muestra y la colocamos en el posillo hasta el fondo liberando su contenido lentamente. o Se procede a conectar los electrodos de la cmara a la fuente de poder, por una hora a 100 volt.