Recomendaciones para la calibracin de material volumtrico en el laboratorio clnico*

Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular (SEQC) Comit Cientfico Comisin de Metrologa Documento E. Fase 3. Versin 2 Preparado por: R. Ruz Morer

ndice
0 Introduccin 1 Objeto y campo de aplicacin 2 Normas para consulta 3 Definiciones 4 Requisitos metrolgicos: criterios de aceptacin 5 Procedimiento 5.1 Patrones 5.2 Condiciones ambientales 5.3 Procedimiento de calibracin 5.4 Clculo del error sistemtico y de la incertidumbre de medida 5.5 Frecuencia de calibracin 6 Aplicaciones 7 Bibliografa Anexo 1. Clculo de la incertidumbre

1 Objeto y campo de aplicacin

La presente recomendacin describe un procedimiento gravimtrico para la calibracin de pipetas y dispensadores mecnicos, de volmenes superiores a 0,05 mL 2.

2 Normas para consulta

Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos accionados mediante pistn. Parte 1: Terminologa, requisitos generales y recomendaciones de uso. UNE-EN-ISO 8655-1: 2002. Madrid: AENOR; 2002. Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos accionados mediante pistn. Parte 2: Pipetas tipo pistn. UNE-ENISO 8655-2: 2002. Madrid: AENOR; 2002. Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos accionados mediante pistn. Parte 5: Dispensadores. UNE-EN-ISO 8655-5: 2002. Madrid: AENOR; 2002. Asociacin Espaola de Normalizacin. Aparatos volumtricos accionados mediante pistn. Parte 6: Mtodos gravimtricos para la determinacin del error de medicin. UNE-EN-ISO 8655-6: 2002. Madrid: AENOR; 2002. Asociacin Espaola de Normalizacin. Laboratorios Clnicos. Requisitos particulares relativos a la calidad y la competencia. UNE-EN-ISO 15189: 2003. Madrid: AENOR; 2003. Asociacin Espaola de Normalizacin. Sistemas de gestin de la calidad. Requisitos. UNE-EN-ISO 9001:2000. Madrid:AENOR; 2000. Centro Espaol de Metrologa. Vocabulario internacional de trminos fundamentales y generales de metrologa (VIM). Madrid: Ministerio de Obras Pblicas, Transportes y Medio Ambiente; 1994.

0 Introduccin
Las pipetas que se utilizan para la dispensacin de volmenes que pudieran afectar, directa o indirectamente, la calidad de los resultados generados en el laboratorio, deberan estar apropiadamente calibradas. Segn las normas para la gestin de la calidad ISO 15189 e ISO 9001, los laboratorios clnicos deben establecer una programacin que controle y demuestre peridicamente que sus instrumentos de medida se encuentran calibrados y mantener documentos que describan los procedimientos de calibracin y los criterios de aceptacin, as como informes que contengan datos de las calibraciones efectuadas.

Este documento se public en su primera versin en Quim Clin 2006; 25:104-110, con varios errores que se explicaban en una fe de erratas posteriormente publicada en Quim Clin 2007; 26:85. Esta segunda versin difiere de la primera nicamente en que se han corregido los errores mencionados.
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Composicin de la Comisin: J. Batista Castellv, F. Canalias Reverter, FJ. Gella Toms, B. Gonzlez de la Presa, R. Ruz Morer, M. Snchez Manrique (Presidenta)

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 Entidad Nacional de Acreditacin. Expresin de la incertidumbre de medida en las calibraciones. CEA-ENAC-LC/02 (Rev.1). Madrid: ENAC; 1998 Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular. Comit Cientfico. Comisin de Metrologa. Recomendaciones para la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre de las medidas de masa en el laboratorio clnico. Barcelona: Quim. Cln. 2004; 23: 35-39.

3.7. Intervalo de medida

Mdulo de la diferencia entre dos lmites de un rango nominal (VIM)

3.8. Patrn
Medida materializada, instrumento de medida, material de referencia o sistema de medida destinado a definir, conservar o reproducir una unidad o uno o varios valores de una magnitud para que sirvan de referencia (VIM).

3 Definiciones
3.1. Calibracin
Conjunto de operaciones que establecen, en condiciones especificadas, la relacin entre los valores de una magnitud indicados por un instrumento de medida o un sistema de medida, o los valores representados por una medida materializada o por un material de referencia, y los valores correspondientes de esa magnitud realizados por patrones (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es el conjunto de operaciones que establecen la relacin entre el volumen dispensado y el volumen nominal o seleccionado correspondiente del aparato (ISO).

3.9. Rango de indicacin

Conjunto de valores limitado por las indicaciones extremas (VIM).

3.10. Resolucin
La menor diferencia de indicacin de un dispositivo visualizador que puede percibirse de forma significativa (VIM).

3.11. Trazabilidad
Propiedad del resultado de una medicin o de un patrn tal que pueda relacionarse con referencias determinadas, generalmente a patrones nacionales o internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo todas las incertidumbres determinadas (VIM).

3.2. Error mximo permitido (de un instrumento de medida)

Valor extremo de un error permitido por especificaciones, reglamentos, etc., para un instrumento de medida dado (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es el valor extremo superior o inferior permitido para la desviacin del volumen dispensado a partir del volumen nominal o el volumen seleccionado de un aparato volumtrico accionado mediante pistn (ISO).

3.12. Valor nominal

Valor redondeado o aproximado de una caracterstica de un instrumento de medida que sirve de gua para su utilizacin (VIM).

4. Requisitos metrolgicos: criterios de aceptacin

El error mximo de medida de volumen permitido (EMP) en el laboratorio clnico depende sustancialmente del objeto de la medicin. De forma general pueden establecerse las siguientes categoras: A. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una magnitud de un patrn/calibrador o relacionadas con un proceso de calibracin. Por ejemplo, en la reconstitucin de un calibrador liofilizado. B. Mediciones de volumen que pueden afectar al valor de una magnitud de un material de control o relacionadas con procesos de control/verificacin. Por ejemplo, en la reconstitucin de un control liofilizado C. Mediciones de volumen que pueden afectar el valor de una magnitud de una muestra. Por ejemplo, en procedimientos de medida manuales o dilucin de una muestra para su reproceso D. Otras mediciones de volumen. Por ejemplo, en la preparacin de disoluciones de reactivos. Teniendo en cuenta el estado actual de la tecnologa de los instrumentos para la dispensacin de volumen utilizables en los laboratorios clnicos, se recomiendan los requisitos para el error mximo permitido de las mediciones de volumen que se muestran en la siguiente tabla. Estos valores deben considerarse como una aproximacin razonable y aplicable a muchas situaciones del laboratorio clnico. No obstante, determinadas circunstancias pueden exigir requisitos ms o menos estrictos que los aqu recomendados.

3.3. Error sistemtico

Media que resultara de un nmero infinito de medidas del mismo mensurando realizadas bajo condiciones de repetibilidad menos un valor verdadero del mensurando (VIM).
NOTA: En el caso de material volumtrico, es la diferencia entre el volumen dispensado y el volumen nominal o volumen seleccionado de un aparato volumtrico accionado mediante pistn (ISO).

3.4. Exactitud (de un instrumento de medida)

Aptitud de un instrumento de medida para dar respuestas prximas a un valor verdadero (VIM).

3.5. Imprecisin
Coeficiente de variacin de un conjunto de resultados obtenidos al medir repetidamente un mensurando con un mismo procedimiento de medida.

3.6. Incertidumbre de medida

Parmetro, asociado al resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que podran razonablemente ser atribuidos al mensurando (VIM).
2

Para volmenes inferiores a 0,05 mL, la evaporacin durante el proceso de calibracin debe ser compensada por clculo o tomar medidas adicionales para evitarla.

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Recomendaciones para la calibracin de material volumtrico

categora A B C D

EMP (%) 1 2 3 5

5.4. Clculo del error sistemtico y de la incertidumbre de medida

a) Los clculos se realizan individualmente para cada uno de los puntos de calibracin4. b) Calcular el valor medio (vm) y la desviacin tpica (si) de cada serie de 10 medidas. c) Calcular el error sistemtico relativo (ESrel), expresado en %, restando el valor nominal (vn) de la media obtenida para dicho volumen, y dividiendo posteriormente por el valor nominal.

Para cada pipeta o dispensador del laboratorio deben establecerse las medidas que con dicho instrumento se efectan y asignarle como error mximo permitido el ms estricto de las categoras de medida que se realizan con el mismo. El error mximo permitido se utilizar como criterio de aceptacin de las calibraciones.

5. Procedimiento
5.1. Patrones
Para la calibracin de las pipetas debe utilizarse como patrn una balanza previamente calibrada y de resolucin adecuada para el volumen de la pipeta a calibrar. La balanza puede ser calibrada por el propio laboratorio clnico3 o por una empresa externa, en cuyo caso la calibracin debe acompaarse de un certificado de calibracin expedido por un laboratorio acreditado o un instituto nacional de metrologa, debiendo constar en dicho certificado la trazabilidad al patrn nacional, la incertidumbre expandida y el factor (o probabilidad) de cobertura que se ha utilizado en el clculo de la incertidumbre expandida.

d) Calcular la incertidumbre relativa combinada expandida para una probabilidad de cobertura de aproximadamente el 95% (Urel), expresada en %:

En el ANEXO-1 se detalla el origen de los trminos de esta ecuacin. e) Evaluar los resultados. La suma del valor absoluto de ESrel con la U rel debe ser inferior o igual al error mximo permitido. Estas condiciones son aplicables a todos los puntos de calibracin.

5.5. Frecuencia de calibracin

Se recomienda calibrar las pipetas y dispensadores cada 3 meses. Tambin deberan calibrarse siempre que exista alguna sospecha de funcionamiento incorrecto o de haber sido sometidas a algn trato inadecuado u otra situacin que pueda comprometer su funcionamiento.

5.2. Condiciones ambientales

Deben evitarse situaciones ambientales extremas, procurando que la calibracin se realice bajo condiciones similares a las de uso de la pipeta. Evitar las corrientes de aire y reducir en lo posible la duracin de la ejecucin de las medidas u otras condiciones que pudieran favorecer la evaporacin.

6. Aplicaciones
El proceso de calibracin de las pipetas y dispensadores permite obtener evidencia objetiva de que, cuando se utiliza el instrumento para efectuar dispensaciones de volumen, no se cometen errores inadmisibles, esto es, superiores el error mximo permitido. Es posible que, en el caso de las pipetas de volumen variable, se obtengan resultados insatisfactorios en alguno de los puntos de calibracin (por ejemplo en el volumen de valor ms bajo). Esto no cuestiona todas las mediciones que se efectuaron con anterioridad con la misma pipeta, sino tan slo aqullas cercanas al punto de calibracin para el que se obtuvieron resultados anmalos. La pipeta puede utilizarse restringiendo su intervalo de medida o variando el error mximo permitido en funcin de la escala de medida.

5.3. Procedimiento de calibracin

Cuando la pipeta es de volumen variable, seleccionar para la calibracin el volumen mnimo, el volumen mximo y un volumen intermedio, y para cada uno de ellos proceder como sigue: a) Antes de realizar la calibracin debe llevarse a cabo una inspeccin visual de la balanza, comprobar que est adecuadamente calibrada y llevar a cabo su limpieza, si es oportuno. b) Colocar el recipiente de pesada en el plato de la balanza, pesarlo y anotar el valor de la tara (que se tendr en cuenta para seleccionar la incertidumbre expandida correspondiente al punto de calibracin de la balanza ms cercano a la masa total que se mide). Realizar un ajuste a 0 de la tara. c) Dispensar el volumen de agua destilada correspondiente al volumen nominal de la pipeta en el recipiente y anotar el valor de la pesada. d) Repetir el apartado c 10 veces consecutivas.

7. Bibliografa
Dybkaer R. Vocabulary for use in measurement procedures and description of reference materials inlaboratory medicine. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997; 35:141-173.

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Ver documento "Recomendaciones para la calibracin de balanzas y para la estimacin de la incertidumbre de masa en el laboratorio clnico.

La Comisin de Metrologa de la SEQC ha preparado una hoja de clculo apropiada para estos fines y que puede ser obtenida en el sitio de la Comisin de Metrologa de la web de la Sociedad

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Anexo 1. Clculo de la incertidumbre

Las medidas realizadas con la pipeta, tienen las siguientes fuentes de incertidumbre (u): a) Incertidumbre debida a la medida (ui). Los errores aleatorios de dispensacin originan imprecisin en las medidas. Este componente de la incertidumbre puede ser calculado a partir de la desviacin tpica de las medidas repetidas (si). ui = si b) Incertidumbre debida a la resolucin (ur). La resolucin (r) de la pipeta ocasiona errores aleatorios de redondeo. La amplitud de la distribucin de los posibles errores es igual a la resolucin y, en ese intervalo, cualquier valor tiene las mismas probabilidades de producirse (distribucin rectangular o uniforme). En este tipo de distribucin, la desviacin tpica (sr) es igual a la amplitud de la distribucin dividida por la raz cuadrada de 12.

ms cercano a la masa total que se mide (incluyendo recipiente)5, generalmente para el 95% de confianza, y el valor del factor de cobertura empleado (habitualmente kp = 2)

d) Otros componentes de la incertidumbre, como el ocasionado por la presin del aire y la densidad del agua, pueden ser ignorados por su escasa relevancia en las aplicaciones habituales del laboratorio clnico. La incertidumbre combinada tpica (uc) puede calcularse a partir de la suma de cuadrados de las incertidumbres de cada componente:

y la incertidumbre combinada expandida (Uc) para el intervalo de confianza de aproximadamente el 95% resulta de multiplicar la anterior por el factor de cobertura 2.

(En las pipetas de volumen fijo, el valor de resolucin es 0). c) Incertidumbre debida al patrn (up). Se calcula a partir de los datos que proporciona el certificado de calibracin de la balanza: la incertidumbre expandida (Up) del punto de calibracin de la balanza

Finalmente, la incertidumbre relativa combinada expandida (Urel) resulta de dividir la incertidumbre absoluta combinada expandida por el valor medio medido de cada punto de calibracin (vm)6 y, multiplicndola por 100, se expresa en porcentaje.

Urel

En caso de disponer nicamente del valor de la incertidumbre relativa y expandida (Urel) respecto al punto de calibracin de la balanza requerido, calcular Up mediante: Up = valor masa x Urel/100.
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Teniendo en cuenta el tamao habitual del EMP, se ha considerado despreciable la diferencia entre volumen medido y el valor nominal.

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