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UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS EXACTAS E INGENIERIAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA
PROBLEMARIO DE CROMATOGRAFIA
ELABORADO POR LOS PROFESORES: RAQUEL TREVIO ORTIZ. MARIA TERESA GARCIA MARTINEZ. BERNARDO GUDIO GUZMAN ELEAZAR DELGADO CHAVEZ ROSALIA PALACIOS JUAREZ.
FEBRERO 2010
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Problema 2. Una mezcla de dos compuestos (A y B) migra desde el origen, generando dos manchas con las siguientes caractersticas (distancia de migracin desde el origen x y dimetro de la mancha w). xA = 49 mm wA = 2.0 mm xB = 33 mm wB = 2.5 mm El frente de la fase mvil fue de 61 mm, desde el inicio. Clcule los valores de Rf para los compuestos A y B. Problema 3. Una mezcla de dos compuestos (A y B) migra desde el origen, generando dos manchas con las siguientes caractersticas (distancia de migracin x y dimetro de la mancha w). xA = 27 mm xB = 33 mm wA = 2.0 mm wB = 2.5 mm
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a.Indique en el registro, a cuales picos corresponden los compuestos A, B, y C. b.Cul debera ser el orden de elucin de estos compuestos si se examinaran por columna de HPLC utilizando los mismos tipos de fases mvil y estacionaria? c.Cul debera ser el orden de elucin de estos compuestos si se examinaran por columna de HPLC conteniendo una fase de tipo RP-18, con una mezcla binaria de acetonitrilo:metanol (80:20) como eluente? d.Calcule Rf y HETP para el compuesto que migra mas rpidamente sobre la placa
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se aplic a la placa de gel de slice cromatogrfica, 10 l de las soluciones A y B de la preparacin de referencia y 10 l de la preparacin de la muestra. Se dej correr la fase mvil hasta 12 cm arriba de la lnea de aplicacin. Al retirar la cromatoplaca de la cmara, se marc el frente de la fase mvil, se sec con aire seco, localizando las bandas por observacin bajo luz ultravioleta de onda corta, rociando con la solucin reveladora y obtuvimos lo siguiente:
a) Determinar la identidad de trimetoprima y Sulfametozaxol en cada producto segn su Rf. b) Identificar los compuestos relacionados de cada producto: NOTA: Cualquier mancha obtenida con la preparacin de la muestra diferente de la mancha principal, con valores Rf de aproximadamente de 0.6 a 0.7, corresponderan a las impurezas de Sulfametoxazol. De 0.8 a 0.9 a las impurezas de trimetoprima y las que sean inferiores a 0.5 se consideran excipientes. c) De acuerdo a lo obtenido segn criterios de a) y b), cual sera el mejor producto(*)? (Collins) Problema 6. Con un CG y una columna de relleno de 40 cm se obtuvieron los siguientes datos: Compuesto Aire Metilciclohexano Metilciclohexeno Tolueno tR [min] 1.9 10.0 10.9 13.4 W1/2 [min] 0.76 0.82 1.06
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Suponiendo que los compuestos de la tabla son los nicos contaminantes del aire de la muestra y adems que el detector presenta igual sensibilidad para todos los componentes analizados, Cul es la composicin porcentual de los contaminantes?
Problema 17. La buprenorfina es un derivado de la tebana que produce efectos tpicos de agonistas opioides mu de larga duracin y potentes efectos antagonistas. Una enfermera prepar 5 mL de solucin de buprenorfina y procedi a administrar 3 mL a un paciente que pesa 81 kg. Los 2 mililitros restantes fueron guardados en refrigeracin para utilizarlos al da siguiente. Sin embargo, el paciente muri a las pocas horas, y ahora la enfermera enfrenta cargos legales por negligencia mdica. Para resolver este delicado asunto, se prepar un estndar pesando 11.8 mg de estndar de clorhidrato de buprenorfina puro, exactamente pesado y transferido a un matraz volumetrico de 25 mL, se aadieron 20 mL de fase mvil, se disolvi y se llev a volumen con fase mvil. Luego se tom 3.0 mL de esta solucin y se llev a 100 mL con fase mvil. Los 2 mL de la solucin preparada por la enfermera se pasaron a un matraz volumetrico de 50 mL y se llevaron a volumen con fase mvil. Se inyect por separado 20L de la preparacin del estndar y de la preparacin de la muestra al cromatgrafo HPLC. Para la solucin estndar se obtuvo un rea de 60325 UA para el pico de buprenorfina.
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Problema 20. Para realizar un anlisis de drogas, se parte de 3mL de orina, se somete a una extraccin en fase slida, se eluye con un disolvente orgnico, se lleva a sequedad y finalmente se redisuelve en 0.5 mL de metanol y se aade dionina hasta una concentracin final de 10mg/L. Se inyecta 1 L de esta disolucin en un cromatgrafo de gases con detector de nitrgeno-fsforo. Los datos obtenidos se encuentran en la tabla de muestras. Se hace un calibrado preparando una mezcla de estndares de cocana, cafena y su patrn interno dionna. Se inyecta 1 L en el cromatgrafo de gases y se obtienen los resultados que se muestran en la tabla de calibrado. Los promedios de las recuperaciones obtenidas son 82% para cafena y 92% para cocana. Calcular la concentracin en mg/L y los mg por 100mL de estas drogas en la orina. (muestras) Compuesto rea Cafena 1736698 Cocana 435122 Dionina 1578336
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Problema 21. Se obtuvieron los siguientes datos por cromatografa de gases con una columna cromatogrfica de 1.25 m tr, min w, min Concentracin, mg/L rea Aire 0.395 isopropilamina 4.59 0.365 1.0 20240 n-propilamina 4.91 0.382 2.5 40530 Calcular: a) El factor de capacidad o retencin para cada amina b) El factor de selectividad c) El nmero de platos y la altura de plato para la n-propilamina d) La resolucin entre las dos aminas e) La longitud de la columna necesaria para conseguir una resolucin de 1.5 y el tiempo necesario para que se eluya la n-propilamina suponiendo la misma velocidad lineal de flujo f) Si se utiliza isopropilamina como patrn interno en una concentracin de 1 mg/L y en un cromatograma de una muestra se obtienen reas de 23220 para la isopropilamina y de 35421 para la n-propilamina, cul ser la concentracin de n-propilamina en dicha muestra? Problema 22. El Xileno comercial es una mezcla de 3 ismeros y pueden separarse por medio de cromatografa de gases. Al estudiar una serie de estndares, los datos obtenidos fueron los siguientes: Ismero rea/L o-Xileno 2400 m-Xileno 2600 p-Xileno 2300 Al inyectar 0.5 L de una muestra problema, se reportaron los siguientes resultados: Concentracin Ismero rea (%) o-Xileno 540 m-Xileno 450 p-Xileno 240 Cul es el % en volumen respecto a cada ismero en la muestra problema de solvente? Problema 23. Se quiere comparar el contenido de licopeno en tomates frescos y en polvo de tomate. A un HPLC con detector uv/Vis, se inyectan 20 uL de un standar de 50 ug/mL, y se genera un pico correspondiente al licopeno de 7,587 UA. Por separado, se pesan 1.000 gr de cada muestra (de slidos obtenidos del tomate fresco y de polvo de tomate), y cada una se transfiere a un tubo de
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Reporte el contenido de licopeno de cada muestra expresado como ug/g de muestra. Problema 24. Para medir serotonina (5-hidroxitriptamina) por el mtodo del patrn interno, a una alcuota de 1.0 mL de una disolucin de concentracin desconocida se le aade 1 mL de una disolucin que contiene 30 ng de N-metil-serotonina (patrn interno). Esta mezcla se trata adecuadamente para eliminar interferencias y se inyectan 10 L de la muestra, obtenindose un rea de 2573832 para la serotonina y de 171981 para la N-metilserotonina. Cuando se inyect un volumen equivalente de una mezcla que contena 5 ng de serotonina y 5 ng de N-metil-serotonina se obtuvieron reas de 3088598 y 3095672 respectivamente. Calcular la cantidad de serotonina en ng en la muestra original. Problema 25. Una muestra de 350 g de concreto contaminado por un derrame de aceite de transformador de la Calzada Independencia se trae a Ciencias Qumicas para analizar el contenido de Bifenilos Policlorados (BPCS, ascareles) ya que son compuestos sumamente txicos y se desea saber el impacto ambiental. Al llegar al CUCEI, la muestra se tritura cuidadosamente y se somete a extraccin con solventes adecuados. Al extracto se le agregan 6 g de 1, 2-dicloropropano y se aforan a 100 mL. Despus se toman 10 mL y se aforan a 100mL. Por ltimo se toman 5 mL y se aforan a 250 mL. Se inyectan 20 L al cromatgrafo y se obtienen los siguientes resultados: Componente BPCs 1, 2-dicloropropano Concentracin ( g/kg) Desconocida (ver adicin) rea 12157 86532
Por otro lado, se prepara una mezcla estndar y se inyectan 20mL al cromatgrafo, obtenindose los siguientes resultados: Componente BPCs 1, 2-dicloropropano Concentracin ( g) 48 133 g/Kg. Concreto rea 365463 465461
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Si la presentacin de diclofenaco sdico inyectable es de 25mg/mL, Cunto fue el % que se obtuvo durante el estudio a los diferentes tiempos de muestreo?
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Problema 31. Para conocer el contenido de hesperidina en aguacate de la variedad Hass se realiz un anlisis por HPLC. Para ello, se pesaron 15 mg pulpa seca de aguacate de la variedad Hass y se adicionaron 100 L de una solucin de 250 g/mL de catequina como sustancia de referencia; se complet el volumen a 2 mL; de esta solucin, se tomaron 200 L, y se ajust el volumen a 500 L, para despus inyectar al HPLC, producindose reas de 513 y 1985 para catequina y hesperidina, respectivamente; aparte, se prepar un estndar pesando 7 mg de catequina y 5 mg de hesperidina, se afor a 100 mL con metanol:acetonitrilo, y sta solucin se diluy 20 veces. Despus de inyectar al HPLC, se reportaron reas de 1351 y 1002 para catequina y hesperidina, respectivamente Cuntos miligramos de hesperidina estn presentes en un kilogramo de pulpa seca en esa variedad de aguacate? Problema 32. La determinacin de herbicidas e insecticidas clorados en alimentos, agua potable, suelo, etc. pueden ser determinados empleando cromatografa de gases con un detector de captura de electrones. El 4,4-DDT fue determinado en una muestra de 5.0 gr del suelo de una granja donde se empleo el insecticida, la muestra se coloca dentro de un extractor y se reflujarn 50 ml de hexano para extraer el plaguicida durante 1 hr. A 1.0 mL del extracto se le aade 1.0 ml de una solucin de Adrin (0.001 g/ml), de esta solucin se inyecta 1.0 L en el cromatgrafo y las reas resultantes para cada insecticida fueron de: 4, 4'-DDT= 13454 y Adrin= 2335682. Una mezcla estndar comercial que contiene 100 pg/ml de Adrin y 400 pg/ml de4,4'-DDT fue inyectada en el mismo cromatgrafo empleando las mismas condiciones que para la extraccin, para esta solucin se reporta una rea de 1273 para el Aldrin y 23455 para el 4,4'-DDT. Calcule la concentracin del DDT en la muestra de suelo (en pg/gr de suelo) Problema 33. Al analizar un licor por cromatografa de gases se obtuvieron los siguientes datos: N de estndar 1 2 3 4 Muestra Conc. De metanol (% vol) 0.01 0.05 0.08 0.10 Por investigar rea de unidades arbitrarias 235 1173 1884 2360 824 Las condiciones de medicin se conservaron constantes (Temperaturas, sensibilidad del detector, flujo del gas acarreador, etc.) Es importante considerar que el volumen de los estndares fue constante y bien medido, pero en la muestra fue inyectado el doble del volumen usual. Cul es la concentracin de metanol en el licor problema en % vol? Problema 34. Para calcular el factor de respuesta en un anlisis cromatogrfico, se realizaron tres determinaciones con cantidades diferentes de un analito A y de un estndar interno (EI), obtenindose los siguientes resultados:
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Una vez establecido dicho factor de respuesta, se analiz por triplicado una muestra que contiene el analito A y se aadieron 0.1000 mg/l del estndar interno a cada una de las alcuotas, obtenindose los siguientes datos: Muestra rea de A, u.a. 4 21010 5 21315 6 21240 Calcular la concentracin de A en mg/L. rea de EI, u.a. 11201 11500 11425
Problema 35. Para determinar la cafena de un caf instantneo, se procede de la siguiente forma: se pesan 0.8265 g del producto y se disuelven en 50 mL. Una alcuota de 5 mL se mezclan con 5mL de una solucin de acetato de plomo, se deja reposar 5 minutos y se filtra. Se inyecta al HPLC. Despus se prepara un estndar de cafena de 55 ppm y se inyecta en la misma cantidad, se obtiene: Muestra Estndar Caf instantneo Concentracin [ppm] 55 desconocida rea pico cafena 32525 8626
qu cantidad de cafena en mg/g de caf instantneo contiene el producto? Problema 36. Una solucin de corticosteroide es til en tratamientos de tumores qusticos, artritis reumatoidea o en artritis gotosa aguda entre otros. Al estudiar una muestra procesada paraconocer su concentracin de sus activos, Acetato de Metilprednisolona y Clorhidrato de Lidocana, se procede por la tcnica de cromatografa de lquidos usando Prednisona como sustancia de referencia. Al realizar la experimentacin y optimizar las condiciones, se obtiene la siguiente informacin: Muestra estndar Pico Compuesto 1 2 3 Acetato de Metilprednisolona Clorhidrato de Lidocana Prednisona
Para la solucin de referencia se pesaron 159.0mg pasndolos en un matraz de 25mL llevando al aforo con cloroformo. Luego, para la preparacin de la muestra, se agito el frasco hasta homogeneizar su contenido. En un matraz volumtrico de 25 ml, se transfiere 1.0 ml de muestra, 10 ml de solucin de referencia, diluyendo con cloroformo a volumen. Con una pipeta pasteur se retira la capa superior y de la capa inferior, se pasan 2.0 ml a un recipiente adecuado, se agregan 15 ml
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Problema 39. Para determinar el contenido de glibenclamida (frmaco empleado en pacientes diabticos para controlar los niveles de glucosa en sangre) en una muestra plasmtica. Un estndar con 200 ng/mL de glibenclamida gener un pico de 5180 unidades de rea al ser inyectado en un HPLC con deteccin UV. Para examinar la muestra se mide 1 mL de plasma y se extrae con 3 mL de cloroformo, se evapora a sequedad y se reconstituye con 250 L de fase mvil. Al inyectar un volumen igual al del estndar, se obtuvieron los datos siguientes: Compuesto Glibenclamida Unidades de rea 7444
calcule el contenido de glibenclamida en la muestra reportando en g/mL de plasma. Problema 40. a) Sabiendo que, a un caudal de 1 ml/min, el pico cromatogrfico de la serotonina presenta un tiempo de retencin de 4.2 min y una anchura a media altura de 30 s, calcule el factor de capacidad, el nmero de platos y la altura equivalente de plato terico para una columna de 10 cm de longitud y 1.8 mL de volumen muerto b) Para medir serotonina (5-hidroxitriptamina) por el mtodo del patrn interno, a una alcuota de 1.0 mL de una disolucin de concentracin desconocida se le aade 1 mL de una disolucin que contiene 30 ng de N-metil-serotonina (patrn interno). Esta mezcla se trata adecuadamente para eliminar interferencias y se inyectan 10 L de la muestra, obtenindose un rea de 2573832 para la serotonina y de 1719818 para la N-metilserotonina. Cuando se inyect un volumen equivalente de una mezcla que contena 5 ng de serotonina y 5 ng de N-metil-serotonina se obtuvieron reas de 30885982 y 30956727 respectivamente. Calcular la cantidad de serotonina en ng en la muestra original
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Problema 2. RfA = 49/61 = 0.8032; RfB = 33/61 = 0.5409 Problema 3. a) b) c) RfA = 0.45; RfB = 0.55; NA = 2916; NB = 2788; AEPTA = 0.0206; AEPTB = 0.0215; Rs = 2.67 = 1.2222
Problema 4. a) El primer pico a la izquierda corresponde al compuesto C, el segundo a B y el de la derecha es A. b) El orden de elucin seria: A, B, C. c) El orden de elucin debera ser: C, B, A. d) RfA = 3.2/6.1 cm = 0.5246; AEPTA = 0.0093 cm/etapa
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Valor de Rf de Referencia 0.574 (calculado) 0.777 (calculado) 0.6 0.7 0.8 0.9 < 0.5
Problema 6. Compuesto Metilciclohexano Metilciclohexeno Tolueno PROMEDIO Problema 7. a) = 1.656; Rs = 1.235 b) 172.18 cm Problema 8. Parmetro calculado tR (min) VR (mL) W (min) 1 0.666 2.0 0.146 Valor de k 2 5 0.999 2.0 3.0 6.0 0.219 0.438 10 3.66 11.0 0.804 N 960.87 980.66 886.93 942.82 AEPT
0.0424
Problema 9. Analito propoxur carbaryl 1-naftol methiocarb k 0.536 3.929 5.554 5.875 Rs 6.726 3.165 0.456 N 3448 Estn resueltos? Si Si No
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Problema 11. Analito Heptanoato de metilo Octanoato de metilo k 3.07 5.04 W (seg) 4.38 6.50 Rs 5.33 Si se resuelven hasta lnea base tM (seg) 14.73
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