CORTISOL y

CORTICOTROPI
NA
Leonardo Orellana
Mishelle Pulla

Bioquimica Clinica II
Dra. Reina Macero
01
CORTISOL
 SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
Hormona Catabólica

En el músculo estimula la proteólisis El cortisol tiene un importante efecto

Estimula la gluconeogénesis y
e inhibe la captación de aminoácidos
disminuye el uso periférico de
y la síntesis de proteínas. Estimula la
glucosa, por lo que ejerce un a
lipolisis en el tejido adiposo e
acción hipoglucémica.
incrementa la circulación de ácidos
grasos.
sobre el sistem a inm unitario, pues
es antiinflamatorio e
inmunosupresor.
Acción mineralocorticoide e influye
en el equilibrio hidroelectrolítico y
en la presión sanguínea.
RITMO CIRCADIANO DEL CORTISOL
EN SANGRE
● Las concentraciones plasmáticas
de ACTH y cortisol siguen un ritmo circadiano en condición es
normales de vigilia y sueño.
● Las concentraciones plasmáticas de ACTH y cortisol son
máximas a las 6 -8 h de la mañana (2 ,2 -1 2 pmol/L y 1 3 8 -6 9
0 nmol/L, respectivamente).
● Van disminuyendo progresivamente a lo largo del día y son
mínimas a las 20h y durante la noche (inferior 4,4 pmol/L y a
138 nmol/L, respectivamente)
● estrés físico o emocional, la fiebre, las alteraciones
nutricionales, la depresión, la ansiedad o el uso de
medicamentos.
 PRINCIPIO DEL MÉTODO

Inmunoensayo enzimático competitivo

01 Los reactivos esenciales necesarios para un inmunoensayo enzimático
incluyen anticuerpos, conjugados enzima-antígeno y antígeno nativo. Al
mezclar un anticuerpo biotinilado, un conjugado enzima-antígeno y un
suero que contiene el antígeno nativo, se produce una reacción de
competencia entre el antígeno nativo y el conjugado enzima-antígeno
por un número limitado de sitios de unión del anticuerpo. La interacción
se ilustra con la siguiente ecuación.
 PROCEDIMIENTO

1. Colocar 25 ul de muestra en cada pocillo

2. Colocar 50 ul de enzima Cortisol y agitar por 20-30 seg.
3. Colocar 50 ul de reactivo biotin cortisol. Agitar. Cubrir e incubar por 60 min
4. Decantar el contenido de los pocillos y realizar 3 lavados con 350 ul de wash
5. Colocar 100 ul de sustrato en cada pocillo sin agitar
6. Incubar por 15 min en la oscuridad
7. Colocar 50 ul de solución de parada y leer a 450 nm dentro de los primeros de 30 min
VALORES DE
REFERENCIA
01
CORTICOTRO
PINA
 Significación Clínica
La función de la ACTH es
regular los niveles de hormonas
esteroides que se liberan desde las
glándulas suprarrenales, incluidos
el cortisol, la aldosterona y los
precursores de andrógenos
Un aumento de los niveles de
ACTH que conduce a una
producción excesiva de cortisol
(hipercortisolismo),
también conocido como
síndrome de Cushing
El hipopituitarismo
Presenta niveles reducidos de
ACTH provocando insuficiencia
suprarrenocortical.
La enfermedad de Addison, se
puede diagnosticar cuando los
niveles de ACTH son altos, pero la
glándula suprarrenal no produce
suficiente cortisol
 Principio del Método
Inmunoensayo tipo sándwich
Los reactivos esenciales necesarios para un ensayo de equilibrio tipo sándwich incluyen
anticuerpos de alta afinidad y especificidad. En este procedimiento, el calibrador, el control o
la muestra del paciente se agrega a los pocillos recubiertos con anticuerpo anti-ACTH.
La ACTH de la muestra se une al anti-ACTH (PoAb) en los pocillos. Posteriormente se añade
a los pocillos una enzima (TMB) marcada con anti-ACTH. La ACTH de la muestra forma un
sándwich entre los dos anticuerpos. El exceso de enzima y muestra se elimina mediante un
paso de lavado. La interacción se ilustra mediante la siguiente ecuación:

La intensidad del color amarillo es directamente proporcional a la concentración de ACTH en la

muestra.
 1. Pipetear 0,050 ml (50 μl) del calibrador de referencia de suero, control o muestra
apropiados en el pocillo asignado.
2. Pipetear 0,050 ml (50 μl) de la enzima ACTH en cada pocillo.Es muy importante
dispensar todos los reactivos cerca del fondo del pocillo recubierto.

PROCEDIMIE 3.
4.
Agitar la microplaca suavemente durante 20 a 30 segundos
Incubar durante 60 minutos (1 hora) a temperatura ambiente.

NTO 5.
6.
Desechar el contenido de la microplaca mediante decantación o aspiración.
Agregue 350 μl de tampón de lavado, decante (golpee y seque) o aspire. Repita
dos veces adicionales para un total de tres lavados.
7. Agregue 0,100 ml (100 μl) de reactivo de sustrato a todos los pocillos. NO
AGITE LA PLACA DESPUÉS DE AÑADIR EL SUSTRATO
8. Incubar a temperatura ambiente durante veinte (20) minutos.
9. Agregue 50 μl de solución de parada a cada pocillo y mezcle suavemente durante
15 a 20 segundos.
10. Lea la absorbancia en cada pocillo a 450 nm (longitud de onda 630 nm) en un
lector de microplacas.
11. Los resultados deben leerse dentro de los 15 min posteriores a la adición de la
solución de parada.
Cálculo de los resultados

Valores Referenciales

7,2 – 63,3 pg/ml.

Gracias
Por su
Atención