MICROSCOPIA

Dr. José Fuentes Rivera S.

Doctor en Medicina
Profesor Principal Facultad Medicina UNMSM
 Términos que describen las características ópticas del
microscopio
AUMENTO: relación entre el tamaño a simple vista y el tamaño observado con el microscopio (es el
número de veces que se ve el tamaño de un objeto por encima de su valor real). En el microscopio
compuesto se calcula multiplicando el aumento individual del objetivo por el aumento individual del ocular.
Se expresa mediante un número seguido del signo “por” (x).
CONTRASTE: diferencia en la absorción de luz entre el objeto estudiado y el medio que lo rodea. Puede
aumentarse mediante procedimientos de tinción.
PODER DE RESOLUCIÓN: capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy
cercanos. Determina la máxima amplificación útil del microscopio. Depende de la longitud de onda (L) y de
la apertura numérica (AN): cuanto menor es L y/o mayor la AN, mayor es la resolución. La resolución
máxima de un microscopio óptico es de 200 nm.
d = (0,5 x L) / AN
APERTURA NUMÉRICA: capacidad de la lente para juntar los rayos de luz proyectados hacia ella.
Determina la eficacia del condensador y del objetivo. La AN depende del índice de refracción del medio
que hay entre la muestra y la lente (IR), y del seno de la mitad del ángulo del cono de luz que penetra en
la lente (sen α).
AN = IR x senα
Si se rellena el espacio existente entre la muestra y el objetivo no con aire, sino con una sustancia de
mayor IR (p.e. aceite), se consigue que la mayor parte de los rayos perdidos por los fenómenos ópticos
ocasionados en el condensador y en el portaobjetos, se refracten y penetren en el objetivo, con lo que se
incrementa la resolución del microscopio.
PROFUNDIDAD DE CAMPO: espesor de la preparación enfocada en cualquier momento. Será mayor
cuanto menor sea el aumento.
ÁREA DEL CAMPO: es el diámetro de la parte de la preparación que se está viendo. Será mayor cuando
menor sea el aumento
 PODER RESOLUTIVO (P.r)
• ES LA CAPACIDAD DEL INSTRUMENTO PARA
DAR INMAGENES DISTINTAS DE PUNTOS
SITUADOS MUY CERCA UNO DEL OTRO EN
EL OBJETO ,DEPENDE DE LA LONGITUD DE
ONDA (L ) Y DE LA APERTURA NUMERICA
DE LA LENTE OBJETIVO (A.N :n sen alfa)
• Limite de resolución : 0.61L/AN
• n : índice de refracción.
• P.r:luz blanca :2,500 A:0.25 u AN: es limitada ,para
incrementar utilizar L . Menores.(luz infrarroja 8000
A)
 Interferencia
Thomas Young descubrió este principio de interferencia cerca de 1800. El
espesor de la película es típicamente del orden de la magnitud de la longitud
de onda de la luz. Las películas delgadas depositadas en los componentes
ópticos tales como los lentes de las cámaras pueden reducir la reflección y
mejorar la intensidad de la luz transmitida. Los cubrimientos delgados en
ventanas pueden mejorar la reflectividad para la radiación infrarroja mientras
tiene menos efecto en la radiación visible. De esta manera es posible reducir
el efecto de calor de la luz de sol en un edificio.Las fuentes coherentes son
aquellas que emiten ondas de luz de la misma longitud de onda o frecuencia
las cuales son siempre están en fase la una con la otra o tienen una
diferencia de fase constante. Las dos fuentes coherentes pueden producir el
fenómeno de interferencia.
Los colores que nosotros observamos cuando la luz de sol cae en una
burbuja de jabón, un poco de aceite o en el pavimento húmedo, o un colibrí
rojizo son causados por la interferencia de las ondas de luz reflejadas desde
el frente hacia atrás de las superficies de las películas transparentes finas.
Esto se da porque dos haces de ondas que llegan al mismo plano sumarán
sus efectos si llegan en fase o contrarrestarán sus efectos si llegan
desfasados. Su efecto combinado es obtenido sumando algebraicamente los
desplazamientos en el punto hacia las fuentes individualmente. Esto es
conocido como el principio de superposición.
 Luz e iluminación
La fuerza de una lámpara o cualquier otra fuente de luz está expresado por una
cantidad llamada su intensidad luminosa. Ésta magnitud está medida en unidades de
intensidad luminosa o "standard candle", una unidad que va luego del uso del ordinario
"wax candle" o vela de cera como fuente de luz. La candela se aproxima. En las
lámparas de potencia normal en la actualidad, la comparación se hace con filamentos
estandarizados que se mantienen en laboratorios de pruebas como el Bureau of
Standards. Una lámpara de filamentos de un tamaño moderado tiene una intensidad
de cerca de una candela para cada vatio. Por ejemplo la intendidad de una lámpara de
60 vatios está muy cerca de las 60 candelas.. La luz de una pequeña fuente puede ser
bastante útil para dispersarse en la superficie de lugar esférico que está expandiéndose
constantemente, algo muy parecido al sonido que se expande bajo condiciones
similares. Una candidad dada de luz se dispersará en una área cada vez más grande
mientras se aleja de la fuente. Esta área incrementa como el cuadrado de la distancia,
así que la cantidad dada de radiación de energía se dispersará cuatro veces el área,
que es dos veces la distancia, si es 25 veces el área de 5 veces la distancia, etc. Como
resultado la iluminación o energía que cae en cada uniad de área variara inversmente
como el cuadrado de la distancia de la fuente. La iluminación de cualquier superficie se
mantiene perpendicular a los rayos de luz. Esto también depende de la fuerza de la
fuente, así que la relación completa está dada por:
E=C/d2
E es la iluminación debida a una pequeña fuente de intensidad C colocada a una
distancia de de la superficie en cuestion.
Nota: Si C está medido en cadelas y d en pies, E está expresado en pies-candela.
La unidad correspodiente en el sistema métrico es llamado el metro candela. El ojo es
muy sensible que puede ser estimulado por una diezmillonésima pie-candela,
equivalente a la iluminación producida por una sola candela a 20 millas.
Reflexión de la luz: es la desviación que experimentan los rayos
luminosos al incidir sobre una superficie pulimentada.
Refracción de la luz: consiste en el cambio de dirección experimentado
por los rayos lumínicos al pasar de uno a otro medio de propagación.
Esto es debido a que la velocidad de la luz es diferente en cada medio
material.
Isaac Newton experimentó con la dispersión de la luz del Sol y obtuvo
un espectro con lo que evidenció que se trataba de una luz policromática.
Comprobó que al hacer girar velozmente un disco dividido en siete
sectores, cada uno de ellos pintado con un color del espectro de la luz
blanca, se tenía la impresión ocular de que era blanco. La explicación de
este fenómeno estriba en que las sensaciones percibidas por la retina
persisten en ella durante cierto tiempo; así sucede, pues, con los colores
del disco, que al persistir se superponen y dan lugar al blanco.
La óptica se desarrolló a partir del siglo XVII. En 1608, Hans
Lippershey (1570-1619) construyó la primera lente, que perfeccionaron
Galileo, Kepler y Huygens.
 INDICE DE REFRACCION
La ley de Snell la podemos enunciar diciendo que el cociente de los
senos de los ángulos de incidencia y de refracción, respectivamente, es
igual a una constante característica del medio, n, a la que llamamos
índice de refracción. Esto se puede representar por:

donde 1 es el ángulo de incidencia y 2 es el ángulo de refracción,

respectivamente, que se miden con respecto a una línea imaginaria
perpendicular a la superficie como se muestra en la figura 3. Estos
índices de refracción son unas constantes, que tienen valores
característicos para diferentes materiales, como se muestra en el
cuadro 2. En general, el índice de refracción es tanto mayor cuanto
más denso sea el material.
 Índices de refracción de algunos materiales
transparentes
Material Índice de refracción
Vacío 1.0000
Aire 1.0003
Agua 1.33
Cuarzo fundido 1.46
Acrílico 1.49
Crown borosilicato 1.51
Crown ordinario 1.52
Bálsamo de Canadá 1.53
Flint ligero 1.57
Crown de bario
1.62
denso
Flint extra denso 1.72
Diamante 2.42
 Espejos Planos

Los espejos son superficies muy

pulimentadas, con una capacidad reflectora del
95% o superior de la intensidad de la luz
incidente.
Consideremos un rayo de luz que se refracta
desde un medio de índice n a otro hipotético de
índice de refracción –n. Aplicando la ley de
Snell:
n sen i = -n sen r
De donde se deduce que: i = -r
Un ángulo de refracción negativo equivale a
una inversión en el sentido del rayo. En un espejo plano las posiciones x y x´ de un objeto y
su imagen están relacionadas: x = x´

La imagen es virtual, pues se forma con las

prolongaciones de los rayos.
 EL MICROSCOPIO
Antonie van Leeuwenhoek (1632-1703) en 1674, en Holanda, se enteró
de que los objetos cercanos vistos a través de una lente convergente se
observaban de mayor tamaño. Incitado por la curiosidad aprendió a tallar
las pequeñas lentes que necesitaba. Queriendo observar los objetos cada
vez de mayor tamaño, hizo las lentes cada vez más pequeñas y de
distancia focal más corta, construyendo así el primer microscopio
simple. Con este instrumento Leeuwenhoek trabajó casi todo el resto de
su vida, y con él descubrió los primeros microorganismos. Cualquier
aficionado puede ahora construir un microscopio simple con
amplificación cercana a cien, montando sobre una rondana pequeña una
lentecilla, que se puede obtener rompiendo un foco miniatura de los
llamados de gota, que se usan en las lámparas de mano. Después, se
coloca la lente lo más cerca posible del ojo, y el objeto a observar del
otro lado de la lente, también muy cerca de ella, a la distancia en que se
observe lo más claro y definido posible. Con un microscopio tan sencillo
como éste es posible observar objetos muy pequeños, como las células
de la cebolla.
Un progreso inmenso en la construcción del microscopio compuesto se
logró gracias a J.J. Lister, un comerciante de vinos, que en 1830 inventó
el objetivo acromático y aplanático. A partir de entonces se olvidó el
microscopio simple, y el compuesto se volvió una herramienta
indispensable en los laboratorios.
El microscopio. Un microscopio es un sistema de lentes que produce una imagen virtual aumentada de un
apequeño objeto. El microscopio más simple es una lente convergente, la lupa. El objeto se coloca entre la
lente y el foco, de modo que la imagen es virtual y está a una distancia que es la distancia mínima de visón
nítida, alrededor de 25 cm.

El microscopio compuesto consiste en dos lentes convergentes de pequeña distancia focal, llamadas
objetivo y ocular. La distancia focal del objetivo f, es mucho menos que la distancia focal f´ del ocular. El
objeto AB se coloca a una distancia del objetivo ligeramente mayor que f. El objetivo forma una primera
imagen a´b´ que hace de objeto para el ocular. La imagen a´b´ debe estar a una distancia del ocular
ligeramente menor que f´. La imagen final ab es virtual, invertida y mucho mayor que el objeto. El objeto AB
se coloca de tal manera que ab está a una distancia del ocular igual a la distancia mínima de visión nítida,
alrededor de 25 cm. Esta condición se realiza mediante el enfoque que consiste en mover todo el
 Célula de Pisum, Traq ueidas del leño de Pinus
coloración: safranina-fast-green Coloración: safranina
 Microscopios Ópticos
- M. Simple: el microscopio más simple es una lente convergente, la lupa (o microscopio
estereoscópico). El objeto se coloca entre la lente y el foco, de modo que la imagen es virtual y está a
una distancia que es la distancia mínima de visón nítida, alrededor de 25 cm. Consta de una base, en la
que se sitúa la pletina, y de la que emerge una columna que soporta las lentes y el mando de enfoque.
Sólo sirve para exámenes superficiales (disección de animales, observación de colonias, detección de
quistes de parásitos,…). Se consigue un número de aumentos entre 4 y 60.
- M. Campo luminoso u óptico compuesto:imágenes oscuras frente al campo luminoso. Permite el
estudio de las estructuras internas de la muestra, para lo cual ésta debe ser dispuesta en una fina capa
que puede ser atravesada por la luz.
- M. Campo oscuro: fondo oscuro sobre el que se ven los objetos intensamente iluminados.
Permite ver el contorno de las bacterias y su movilidad
Permite ver los microorganismos sin teñir
Permite ver el Treponema pallidum, bacteria espiroqueta de la sífilis.
Consta de un condensador especial que debe estar muy cercano a la preparación y que lanza sobre la
muestra un cono hueco de luz. Con esto se logra que, solamente los rayos que chocan con las
estructuras sometidas a estudio y son reflejados hacia arriba, puedan ser visualizados a través del
objetivo.
- M. Contraste de fases: produce variaciones de luminosidad de forma que sean visibles las distintas
partes de una muestra. Para ver parásitos y bacterias en cortes histológicos, y para objetos
transparentes y no coloreados (sedimento urinario).
Consta de un dispositivo, situado dentro o debajo del condensador, que produce diferencias de longitud
de onda en los distintos rayos.
 M. Fluorescencia: la fluorescencia es la propiedad que tienen ciertas
sustancias de emitir, cuando son iluminadas por una radiación de L corta, otra
radiación de L más larga.

Consta de una fuente de luz muy potente y un filtro de excitación que sólo deja
pasar la radiación UV deseada. Ésta, tras interaccionar con la muestra, es de
nuevo filtrada, dejando pasar solamente la luz fluorescente hacia los oculares.
La principal aplicación es en inmunofluorescencia, es decir, reacciones de
antígenos con anticuerpos.

o Fuente de luz: la L va desde la luz ultravioleta hasta los infrarrojos.

o Filtro de excitación: delimita la banda de excitación, generalmente
ultravioleta.
o Muestra: fluorescente por sí misma (microscopia primaria) o marcada con
fluorocromos (microscopia secundaria).
o Filtro de barrera: deja pasar sólo la fluorescencia.
El microscopio de luz ultravioleta utiliza una L entre 180 – 400 nm
o Ventaja:
-tiene mayor PR.
-o Inconvenientes:
- lentes de cuarzo más caras.
- imagen invisible al ojo humano, hay que utilizar fotografías, fluorescencias o
cualquier otra técnica de foto-emisión.
TIPOS DE MICROSCOPIO.

Microscopio de campo oscuro.

- Este tipo de microscopio tiene un condensador parabólico.

- Los rayos que provienen de la fuente luminosa, se desvían y atraviesan el
objeto de
estudio en forma tangencial.
- Nos permite ver partículas o sustancias sin colorantes.
- Nos da un brillo y por el brillo denotamos la forma del tejido.

Microscopio de polarización.

Diferencia: en lugar del condensador está el prisma de nicol. Detrás del objetivo
está el analizador, por este tipo de prisma la luz se vuelve en luz plana.
Polarización es el paso de un rayo de luz a través de una sustancia y se divide,
produce dos rayos a partir de uno, ocurre en sustancias cuyos átomos tienen un
ordenamiento periódico.
Este microscopio tiene dos componentes uno polarizador y otro analizador, están
colocados de manera tal que sus ejes principales sean perpendiculares.
 Microscopio de contraste de fase

La microscopía ha hecho continuos progresos

hasta la fecha, pero uno de los progresos más
espectaculares en este campo es el del
microscopio de contraste de fase, inventado
por Fritz Zernike en 1938, y gracias al cual le
fue otorgado el premio Nobel de Física en
1953. Con este microscopio es posible
observar microorganismos transparentes, sin
necesidad de teñirlos, lo que es imposible con
el microscopio ordinario.
Microscopía en contraste de fase:
se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y
oscuras de las células sin colorear. Es ideal para espécimenes delgados, o
células aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono
hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el
microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de
visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce
la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la
longitud de onda. Este tipo de iluminación provoca variaciones minúsculas en
el índice de refracción de un espécimen transparente, haciéndolo visible.
Este tipo de microscopio es muy útil a la hora de examinar tejidos vivos, por
lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina

Phase contrast image of cultured epithelial cells using a 20X objective.

Microscopio de contraste de fases.

- Exagera la diferencia de fases, lo que es normal y atenuado (variación de

tonalidades).
- No necesitamos darle color a la célula. Se puede estudiar al natural. Tiene otro tipo
de
condensador (condensador de hendidura).
- Los cuerpos no teñidos son difíciles de observar, si son transparentes toda su
superficie
tiene la misma densidad óptica.
- Para observar en vivo imágenes de cuerpos transparentes se usa este microscopio.
- La luz pasa por un cuerpo transparente con diferentes índices de refracción,
disminuye la
velocidad y cambia de dirección.
- El sistema óptico permite encontrar estas fases, difiere del microscopio común

Microscopio de interferencia.

- El manejo es similar al anterior (juega con contraste de faces). Diferencias: nos da

imágenes de alto relieve y de tono naranja y verde. Se usa más para estudiar
partículas.

Microscopio de rayos ultravioletas.

- La lente que es de vidrio es sustituido por lentes de cuarzo y la iluminación se

produce
por unas lámparas de mercurio.
El microscopio en campo oscuro

utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco

concentrado sobre el espécimen. El campo de visión
del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de
luz y sólo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por
ello las porciones claras del espécimen aparecen
como un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se
están analizando aparecen como una luz brillante
sobre el fondo. Esta forma de iluminación se utiliza
para analizar elementos biológicos transparentes y sin
manchas, invisibles con iluminación normal.
Microscopía diferencial de contraste de
interferencia (DIC).
Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes
combinadas aparecen como si la célula estuviera proyectando
sombras hacia un lado. Fue diseñado para observar relieves
de especimenes muy difíciles de manejar, es muy utilizado en
los tratamientos de fertilización in-vitro actuales. DIC se usa
cuando el espécimen es muy grueso para usar contraste de
fases

Células epiteliales 200X

 Microscopía de fluorescencia:
una sustancia natural en las células o un colorante fluorescente aplicado al
corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía
absorbida como rayas luminosos: esto se conoce como fluorescencia. La luz
fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera
directamente del colorante.

Células epiteliales , triple coloración: núcleo (azul), microtubulos

(verdes), actina (rejo). 200X (izq.) y 1000X (der.).
 Microscopía óptica aplicada

Los microscopios ópticos modernos combinan varias lentes simples y

espejos en un alineamiento aproiado, para producir imágenes claras y
detalladas a un aumento relativamente alto. Desde el comienzo del
Smithsonian Institution, la microscopía óptica ha desempeñado un rol
prominente en la descripción, análisis e identificación de objetos de
colecciones de museos como así también materiales de contextos
etnográficos y/o arqueológicos. La microscopía óptica provee
información única acerca de la estructura y el estado de preservación de
los objetos y de la identificación de sus componentes materiales. Los
análisis son realizados de manera no-destructiva, cuando es posible, o
mediante la toma de muestras muy pequeñas, cuando la única opción son
los medios destructivos. El énfasis del Laboratorio de Microscopía Óptica
del MCI es responder a preguntas arqueológicas y pertinentes a las
colecciones usando microscopía óptica y análisis de imagen digital
 Dispersión de energía fluorescente por rayos X

Es una herramienta analítica no intrusiva que se usa para determinar la

composición de los elementos químicos de un objeto. Resulta especialmente
útil para el análisis de compuestos inorgánicos, como aleaciones de metales,
vidrio, cerámica y pigmentos.
Funcionamiento
Se apunta una columna de rayos X sobre un sitio en la "superficie" de un
objeto, causando que los elemento químicos que componen el material
emitan radiaciones "fluorescentes" características. La medición de esta
radiación fluorescente permite la identificación y determinación de los
elementos presentes en el objeto.
Espectroscopica de radiación infrarroja por transformada de Fourier

Es una herramienta analítica que produce un espectro que es como la

"huella dactilar" de los diferentes componentes químicos presentes en un
objeto. Resulta muy útil para el análisis de materiales orgánicos tales como
barnices, adhesivos y aglutinantes. Cuando se ensambla un microscopio, el
tamaño de la muestra se reduce drásticamente.

Funcionamiento
Al exponer una muestra a la región infrarroja del espectro electromagnético,
la manera en que ésta absorbe dicha radiación es característuca de la
estructura molecular de la muestra. La identificación se logra por
comparación del espectro de longitud de ondas absorbidas en el infrerrojo
con el espectro de compuestos conocido
Espectrometría de Masas con Plasma de Acoplamiento Inductivo
La Espectrometría de Masas con Plasma de Acoplamiento Inductivo es una
técnica para análisis elemental con un límite de detección en el rango de
partes por billón. ICP-MS provee información cualitativa y cuantitativa junto
con composición isotópica. Sus aplicaciones incluyen análisis de rocas,
suelo, sedimento, agua, aire, tejidos vegetales y animales. Permite el
examen rápido de hasta 72 elementos en menos de 5 minutos por muestra.
Funcionamiento
Se obtiene un plasma de gas argón haciendo fluir una corriente de argón
hacia una antorcha con un flujo de corriente de alta frecuencia en una bobina
de inducción con campos magnéticos oscilantes. El plasma posee una
temperatura superior a los 10.000 K. Se introduce una muestra líquida en el
sistema en forma de aerosol mediante un nebulizador. Una vez que la
muestra alcanza el plasma, los iones de la muestra son excitados y
revertidos espontáneamente a un estado de energía menor emitiendo un
fotón de energía. Para propósitos cuantitativos, se asume que la energía
emitida es proporcional a la concentración de iones.
Cromatografía Líquida

La Cromatografía Líquida es usada para separar, detectar y cuantificar los

componentes químicos individuales de una mezcla.

Funcionamiento
Se inyecta la mezcla tipicamente al tope de una columna rellena con partículas
sólidas de un medio que actúa como fase estacionaria. Luego se pasan líquidos
que cambian regularmente en la proporción de fase acuosa a fase orgánica a
través de la columna, y la mezcla de componentes es separada en virtud de su
capacidad para adherirse diferencialmente a la fase estacionaria. Aquellos
componentes que se adhieren debilmente abandonan la columna en primer
lugar, aquéllos retenidos más fuertemente salen después. Una vez separados,
los componentes pasan a través de un detector para su cuantificación
Difracción de los Rayos X

Es una herramienta analítica que permite la identificación "inequívoca"

de pigmentos inorgánicos en forma cristalina en muestras muy
pequeñas.
Funcionamiento
Los rayos X son difractados (dispersados) o reflectados de una manera
determinada según la estructura cristalina del material. Los ángulos y la
intensidad de las difracciones y reflexiones se registran e interpretan por
comparación con datos de referencia.
 MICROSCOPIO ELECTRONICO
Ernst Ruska inventó el microscopio electrónico en la década de los
años treinta, con el que se lograron amplificaciones formidables.
Con el microscopio óptico la mayor amplificación que se logra es
del orden de 1000 X, mientras que con el electrónico se han
alcanzado amplificaciones mayores a los 100 000 X. Otro avance
espectacular reciente en este campo es un perfeccionamiento
substancial del microscopio electrónico, en Suiza, por Gerd Binning
y Heinrich Rohrer. Con este nuevo instrumento, llamado
microscopio electrónico de barrido con efecto túnel, se ha podido
por primera vez observar átomos individuales, aunque con poco
detalle. Ruska compartió el premio Nobel con Binning y Rohrer en
1986.
 Microscopio electrónico.

- Está formado por un cátodo que tiene un filamento de Tungsteno

el cual es estimulado por el ánodo con voltaje (60000 a 100000
voltios).
- Una vez estimulado el filamento, con el voltaje se libera electrones
que son enviados al vacío y luego concentrado por imanes, pasan
el tejido a estudiar y luego son recuperados en una pantalla.
- Un flujo de electrones puede ser desviado por un campo
magnético.

- Estos cambios permiten observar a mayor magnificación en

una pantalla fluorescente o en una placa fotográfica.

Microscopio de barrido confocal.

- Tiene partes de un microscopio óptico, ultravioleta y un vidrio con

rayos láser.
 MICROSCOPIO ELECTRONICO
•Microscopia Confocal y de fluorescencia: propia para la observación de imágenes topográficas con carácter
tridimensional de sus estructuras en diferentes tipos de muestras.
•Microscopia electrónica de Barrido y micro análisis de rayos X: Explora las superficies de las muestras realizando
un paneo sobre la misma y capturando la radiación reflejada la cual se codifica en datos computacionales con la idea de
reconstruir la imagen del espécimen.
•Microscopia electrónica de Fuerza Atómica: Una aguja de punta muy fina casi a nivel atómico explora la superficie de
la muestra generando entre ambas un campo electro-magnético. El campo sufre variaciones correspondientes a las
variaciones de rugosidad de la superficie muestreada. Las variaciones electromagnéticas ocasionadas generan una
información de corriente eléctrica que debidamente tratada reconstruye la imagen de la superficie observada.
•Microscopia electrónica de Efecto Tunel: Conserva el mismo principio que el microscopio de fuerza atómica salvo que
la intensidad del campo es mayor y realiza exploraciones bajo la superficie.
•Microscopia electrónica de transmisión: A diferencia de los anteriores microscopios, este no explora superficies , por
el contrario el haz de electrones incidente atraviesa la muestra o espécimen observado y la sombra de detalles finos o
ultra-estructura es capturada en una pantalla fosforescente con propiedades de emisión de luz, ubicada en la parte
inferior de la columna. El tener una adecuada preparación de la muestra da lugar a una excelente definición de imagen.
Son múltiples las facetas el las que interviene este tipo de microscopio. Así, en control de calidad señalamientos
morfológicos, conformación de agregados, técnicas forenses, determinación de estratos en restauración y diferenciación
histológica entre otros