INFLAMACIÓN EN PECES

Primeros estadios de la inflamación

-Reconocimiento del patógeno por las células de la zona

-Liberación de mediadores (quimiocinas, citocinas proinflamatorias,
histamina, prostaglandinas..)
-Activación del complemento y liberación de moléculas inflamatorias
Campos-Sánchez et al., 2020.https://doi.org/10.1111/jfd.13310
Inflamación

-Liberación de citocinas proinflamatorias (TNF, IL1, IL6), quimiocinas

-Liberación de prostaglandinas
-Vasodilatación, permeabilidad vascular
-Reclutamiento de leucocitos al lugar de la infección
-Reparación del tejido dañado
 INFLAMACIÓN EN PECES

Primeros estadios de la inflamación

-Migración de neutrófilos
-Liberación de plasma, por incremento de la permeabilidad de los vasos sang.
 INFLAMACIÓN EN PECES

-Migración de monocitos/macrófagos (M1)

 INFLAMACIÓN EN PECES

Regulación de la inflamación

-Macrófagos M2
-Liberación de citocinas reguladoras
 INFLAMACIÓN EN PECES

Resolución de la

-Macrófagos M2
-Liberación de citocinas antiinflamatorias y de reparación de tejido
INMUNIDAD FRENTE A PATÓGENOS. BACTERIAS

Fagocitos:
-Receptores de reconocimiento de patrones
-Producción de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno
-Liberación de enzimas lisosómicos/gránulos (ej de
neutrófilos que tienen otros contenidos a parte los
lisosomas)
-Complemento
-Anticuerpos (peuden activar los fagocitos porque tienen R
tanto para Ac como para complemento)
-Granulomas = tipo de reacción en las que el fagocito rodea
el pato y forma un aespecie de capsula donde esta el pato y
empiden que salgan de ese sitio. Pueden participar linfo,
macro y

Componentes humorales:

-Complemento (inf. V. anguillarum = complemento se

ingrementa su activadad con esta infección): mas relevante
Pathology showing infection with M. marinum DL240490 in
sea bass (Dicentrarchus labrax) from an outbreak of mycobacterial
disease in the Red Sea. (A) Severe splenomegaly and granulomatous
spleen and kidney. (B) Massive load of acid-fast bacilli (Ziehl-Neelsen
staining) within a splenic granuloma (total magnification, 100)

INFECTION AND IMMUNITY , Nov. 2006, p. 6037–6045

 INMUNIDAD FRENTE A PATÓGENOS. BACTERIAS

Los leucocitos de peces responden a ADN de V. anguillarum, flagelina

lipopolisacárido bacteriano y muramil dipéptido
Respuesta en macrófagos de trucha incubados PGN o LPS,
estimada utilizando un microarray de cDNA

Boltaña et al. Dev Comp Immunol. 2011,

35(12):1195-203.
Distintas cepas de
Aeromonas salmonicida poseen
diferencias en la activación
del complemento de salmón.
En este caso, la cepa patógena (423)
induce una menor
activación del complemento
que la cepa no patógena (004).
Una menor activación del
complemento implica una menor
actividad quimiotáctica
 INMUNIDAD FRENTE A PATÓGENOS. BACTERIAS
Complemento. Actividad microbicida
Strains Survival indexa CFIc MICd

Eel
Eel serumb Live cells Dead cells
mucus
Fresh ACPI CCPI I ACH50 CH50 ACH50 CH50 Trf. Lisoz. PolB PLys

0.0010
E109 0f 35 ± 6e ± 0.000 39 ± 8e ND ND ND ND ND ND ND ND ND
2f

CECT4 6.0 ± 0. 4.8 ± 0. 6.3 ± 0. 5.0 ± 0.

50 ± 8 48 ± 7 52 ± 9 47 ± 6 45 ± 7 20 200 5 × 103 150
999 5 3 8 4

0.0030
0.14 ± 5.9 ± 0. 5.1 ± 0. 6.1 ± 0. 5.1 ± 0.
CT218 ± 0.000 37 ± 6e 38 ± 5e 46 ± 9 20 10f 1 × 102f 50
0.003 f
8 3 7 3
4f

CT227 51 ± 8 50 ± 8 51 ± 8 50 ± 8 46 ± 9 ND ND ND ND 20 200 5 × 103 150

6.3 ± 0. 5.2 ± 0. 6.5 ± 0. 5.1 ± 0.

CT201 53 ± 7 50 ± 6 54 ± 8 49 ± 8 47 ± 8 20 200 5 × 103 150
7 2 6 2

Actividad del complemento frente a Vibrio vulnificus

Valiente et al. (2008). Fish & Shellfish Immunology 24: 134-141

Nº de bacterias vivas en macrófagos de pez gato incubados con E. ictaluri
incubadas con suero normal y suero de peces vacunados

Russo et al. Fish and Shellfish Immunology 2009 26(3):543-52.

INMUNIDAD FRENTE A BACTERIAS

Fagocitos
Complemento
Lisozima
Anticuerpos específicos
Péptidos antimicrobianos
lectinas
 INMUNIDAD FRENTE A PATÓGENOS. VIRUS

Los leucocitos de peces presentan receptores en su superficie e internamente

que reconocen ARN vírico y producen interferon de tipo I
Tras el reconocimiento del ARN viral por receptores celulares se activan
unas vías de señalización interna que provocan la liberación de interferones
 Virus

Interferones tipo I

• Moléculas MHC1
• Proteína Mx
• Proteína quinasa R
• Viperina
• Células NK
 INMUNIDAD FRENTE A PATÓGENOS. VIRUS
Proteína MX ensambladas (Nature, doi: 10.1038/nature 08972):
trabajos que se ve como varian los niveles segun las infecc por
virus

La proteína MX interfiere con la replicación viral

Producción de IFN y proteínas MX en peces y en líneas celulares de peces después
la estimulación con virus o con poli I:C.
La producción de IFN y de MX se produce muy rápido: 24-48 h.
Poly I:C (polyinosinic:polycytidylic acid)
 INMUNIDAD FRENTE
A PARÁSITOS
Enteromyxum scophthalmi e
inflamación intestinal
Hace unos años muchas
factorias han tenido que cerrar
porque habia mucho de este
parasito. Esta en el intestino,
entra en el epitelio y casi no da
R inflam y si la da es super
limitada.
El para empieza proliferar
(Flecha foto 2) en el epitelio int
y acaba llenando todo el
epitelio = destruye cel, pocos
inicialemtne pero leugo poco a
poco las bacrterias llegan y
proliferana ahi. Peces
adelgazan. La inflam no se
debe mucho al para sino que
para la muerte celular y la
infeccion 2º de las bacterias
 INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
Philasterides dicentrarchi en el pericardio de rodaballo,
donde causa serios daños
 INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
El caso de Philasterides dicentrarchi
110 a
(a,b)
b
100
Fresh Heat-inactivated c
120 90 (a,c)
80
100 (b,c)

Viability (%)
70
80
* 60
Viability (%)

(b,c)
50
60
* 40
40 * 30
(b,c)
20
20 (b,c)
10
0 0
Control Infected Vaccinated Ascitis 10+40 10+30 10+20 10+10 10+0 0+50
Serum+ purified antibodies ( l)

Piazzon MC, Leiro J, Lamas J. (2013). Fish immunity to

scuticociliate parasites. Dev Comp Immunol. 41:248-56.

El complemento juega un papel clave en la defensa frente a este parásito.

Las células del sist. inmunitario no parecen tener un papel relevante.
 INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS
El caso de Ichthyophthirius multifiliis

Celular:
- Las células citotóxicas inespecíficas pueden incrementar la resistencia del
pez gato a este patógeno

Humoral
-El suero de trucha no inmune puede inmovilizar y lisar este ciliado, posiblemente por
la acción del complemento
-IgT.
- En algunas especies de peces se ha demostrado que los anticuerpos pueden
unirse a antígenos i (antígenos de inmovilización), induciendo protección.
Parásitos intraintestinales. Intracelulares y extracelulares
Sitjà-Bobadilla y col. Dev. Comp. Immunol. 2016 Nov;64:187-201
INMUNIDAD FRENTE A PARÁSITOS

Complemento

Células y factores celulares

Anticuerpos específicos
INMUNIZACIÓN
 VACUNAS PARA PECES

- Microorganismos inactivados/muertos
- Microorganismos vivos atenuados
- Vacunas de subunidades
- Vac. ácidos nucleicos
- ADN
- ARN
Vacunación en peces. Métodos. Ma et al. (2019)
 INMUNIZACIÓN. Influencia de la temperatura

Niveles de anticuerpos en el suero de pez gato inmunizados a distintas

temperaturas, con temperatura fija o sometiéndolos a ciclos de temperatura,
cambiando 5 ºC por día.

Treatments Day 14 after vac Day 21 after vac

Non vaccinated Ich 0 0
Vaccinated 15 0a 0a
Vaccinated 20 103.3 26.7
Vaccinated 25 2133 10250
Vaccinated 30 2186 7380
Vaccinated 15-25 0 0
Vaccinated 20-25 333 13663
Vaccinated 20-30 2996 20486

Martins et al. Fish and Shellfish Immunol 2011;31(6):774-80.

 INMUNIZACIÓN. Influencia de la temperatura

IgM total 12-18ºC

1.800

1.600

1.400

1.200

1.000

0.800

0.600

0.400

0.200

0.000 1/24000 1/48000 1/96000 1/192000 1/384000 1/768000

PBS 12 PBS 18 ANT 12 ANT 18 MON 12 MON 18 VAC 12 VAC 18

IgM en rodaballos vacunados a 12 oC y a 18 oC

 INMUNIZACIÓN
Las vacunas administradas por inyección necesitan un adyuvante
para que induzcan una protección duradera

Niveles de anticuerpos en el suero de rodaballo inyectados

con PBS, adyuvante, antígeno y ant. y adyuvante
 INMUNIZACIÓN
Son necesarias al menos dos dosis para obtener una buena respuesta

Swan et al. (2008). Journal of Fish Diseases 31 383-393.

Serum antibody responses in rainbow trout immunized via an intraperitoneal (i.p.) or
peranal route (p.a.) with fluorescein isothiocyanate conjugated to keyhole limpet
haemocyanin (FITC/KLH) with or without Freund's complete adjuvant (FCA) or
with phosphate buffered saline (PBS) with or without FCA. □, PBS i.p.; △, PBS p.a.; ,
PBS + FCA i.p.; , FITC/KLH i.p.; •, FITC/KLH p.a.; ◆, FITC/KLH + FCA i.p.
Primary and booster immunizations (+) were administered at weeks 0 and 4.
 INMUNIZACIÓN

Mucus antibody responses in rainbow trout immunized via an intraperitoneal (i.p.) or

peranal route (p.a.) with fluorescein isothiocyanate conjugated to keyhole limpet
haemocyanin (FITC/KLH) with or without Freund's complete adjuvant (FCA) or
with phosphate buffered saline (PBS) with or without FCA. □, PBS i.p.; △, PBS p.a.; ,
PBS + FCA i.p.; , FITC/KLH i.p.; •, FITC/KLH p.a.; ◆, FITC/KLH + FCA i.p.
Primary and booster immunizations (+) were administered at weeks 0 and 4.
 INMUNIZACIÓN

Antibody production in leucocytes isolated from spleen and blood from rainbow trout
immunized 6 and 10 weeks previously via an intraperitoneal (i.p.) or peranal route (p.a.),
after incubation for 9 days in culture.
 INMUNIZACIÓN

Antibody production in skin, intestine and gill from rainbow trout

immunized 6 and 10 weeks previously via an intraperitoneal (i.p.) or peranal route (p.a.),
after incubation for 48h in culture.
Niveles de Igm en suero tras la inmunización
oral, intramuscular (IM) o intraperitoneal (IN)
IgM o IgT??

Las IgT son más escasas

en la mucosas pero se
regulan más tras la
vacunación por inmersión

-Falta de herramientas para

evaluar los niveles de Igs,
especialmente de IgT
Duración de la respuesta inmunitaria (niveles de anticuerpos en suero)
INMUNIZACIÓN. TOLERANCIA INMUNOLÓGICA

Carpas alimentadas con LPS, …., e inoculadas con V. anguillarum

 INMUNIZACIÓN

Aspectos a tener en cuenta durante la inmunización

- La temperatura tiene mucha influencia en la respuesta inmunitaria generada por la inmunización.

- Una inmunización a temperaturas bajas puede que no genere respuesta inmunitaria
- La vía i.p. es el método que induce una mayor respuesta de IgM pero no de IgT
- La IgT es más escasa en el moco que la IgM pero se regula más tras la vacunación por baño
- Para cada caso es necesario establecer el método y la temperatura
- Es necesario establecer la dosis óptima de antígeno. Dosis muy bajas de Ag pueden no ser
suficientes para inducir estimulación de la respuesta inmunitaria
- La inmunización en peces con el S.I. inmaduro puede inducir tolerancia
-Dosis muy altas de Ag pueden provocar tolerancia inmunológica
-Dosis repetidas y espaciadas inducen mejor respuesta que dosis únicas.
-Sería necesario evaluar los niveles de Igs (IgM e IgT) en suero y en el moco tras la vacunación
 ADYUVANTES
(Aumentan la respuesta frente al antígeno)

- Incrementan la respuesta innata

- Este efecto inicial sobre la respuesta innata acaba

teniendo un efecto estimulador sobre la inmunidad
adquirida.

- La naturaleza del antígeno y del adyuvante acaban

teniendo efectos sobre la inmunidad adquirida mediada
por células (Th1) o sobre la inmunidad humoral (Th2/17)
Respuestas Th1 y Th2
 ADYUVANTES
(Aumentan la respuesta frente al antígeno)

- Oleosos: aceites minerales/vegetales (Montanide™ ISA)

- Sales de aluminio
- Liposomas
- Microesferas (quitosano)
- ISCOMS
- CpGs
- Citocinas
- Flagelina
 ADYUVANTES
(Aumentan la respuesta frente al antígeno)
Aceites minerales/no minerales
Retrasan la liberación del antígeno
Provoca respuesta inflamatoria
Incrementa la captación por macrófagos
Problemas: induce granulomas y adherencias internas
Sales de sulfato alumínico potasico
Retrasa la liberación del antígenos
Incrementa la fagocitosis
Provoca reacción inflamatoria
Genera respuestas Th2
Problemas: induce granulomas
 ADYUVANTES

Microesferas

Agonistas de receptores Toll

Liposomas
MICROESFERAS hechas a base de quitosano
 INMUNIZACIÓN
Entrada de antígenos inmunización vía i.p.
 INMUNIZACIÓN
Entrada de antígenos inmunización vía i.p.
Daños. Los adyuvantes pueden causar daños
importantes en el sitio de la inyección
Daños
Daños
TRANSFERENCIA DE INMUNIDAD MATERNA

Fish & Shellfish Immunology 27 (2009) 89–99

TRANSFERENCIA DE INMUNIDAD MATERNA
Fish Antibody/Ig found in References
1 Esox lucius Egg [108]
2 Pleuronectes plstessa Egg [94]
3 Poecilia reticulata Fry [110]
4 Salmo gairdneri Egg [95]
5 Oreochromis aureus Egg, fry [91], [96] and [97]
6 Oncorhynchus keta Egg [98]
7 Oncorhynchus mykiss Egg [99]
8 Ictalurus punctatus Egg [109]
9 Oncorhynchus kisutch Egg [111]
Oocytes, fertilized egg,
10 Pagrus major [100]
larvae
11 Salmo salar Egg, alevin, fry [105]
Oreochromis
12 Larvae [102]
mossambicus
13 Dicentrarchus labrax Larvae [101] and [104]
14 Cyprinus carpio Egg, fry [93]
15 Sparus aurata Egg [103]

Detección de Ig maternas en peces de distintas especies.

Se cree que la duración de las Igs en los huevos/larvas es de unos días

Fish & Shellfish Immunology 27 (2009) 89–99

Niveles de anticuerpos en huevos de pez cebra procedentes de reproductores
que habían sido inmunizados con ovoalbúmina trinitrofenilada (TNP-OVA). Puede
Observarse que existen niveles elevados de anticuerpos en esos huevos (TNP-OVA).
Wang et al., (2012). Molecular Immunology 51, 332-336.
Niveles de anticuerpos en el suero de reproductores y en el huevo. Existe una
correlación entre los niveles de anticuerpos en los reproductores y
los presentes en el huevo.
Wang et al., (2012). Molecular Immunology 51, 332-336.
Mortalidad en embriones de 9 días infectados experimentalmente con A. hydrophila.
Los embriones procedían de reproductores control y previamente inmunizados
frente a A. hydrophila.
Wang et al., (2012). Molecular Immunology 51, 332-336.
 TRANSFERENCIA DE INMUNIDAD MATERNA

Además de la transferencia de Igs

también se transfieren factores del complemento,
lisozima, lectinas, etc.

Mingming et al. (2014). The effect of vaccinating turbot broodstocks

on the maternal immunity transfer to offspring immunity. Fish
Shellfish Immunol 39: 114-124.
Throughout the study, it was concluded that vaccinating broodstocks
could strength the maternal transfer of immune factors in gene and
protein level, and the gene expression level during hatching was also
enhanced at the early stage of development.