Aspectos generales en Microbiologia clnica

Escuela de medicina: UMAR

Ilse Valderrama Heller, 2008

Definicin de microbiologa
Ciencia que estudia los seres vivos que no se pueden ver a simple vista
mikros (pequeo) bios (vida) logos (ciencia)

Esta definicin implica que su objeto de estudio est determinado por la metodologa:
Microscopio Tcnicas de cultivo puro en laboratorio etc.
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Tamao pequeo: consecuencias biolgicas

Tamao pequeo intercambio ms eficiente, permite mayor velocidad metablica La relacin S/V es muy alta Mayor contacto directo con el medio (reciben de modo inmediato las influencias ambientales) Gran tasa de entrada de nutrientes Altas tasas de crecimiento Gran tasa de salida de productos de desecho
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Ramas que estudia la microbiologa: facilitar su estudio

Bacteriologa Micologa
Hongos (unicelulares y filamentosos)

( bacterias y arqueobacterias)

Virologa ( parasito intracelular)

Virus, priones

Parasitologa
Protozoos (unicelulares) Metazoos (pluricelulares)
Helmintos (platelmintos y trematodos)

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DIVERSIDAD MICROBIANA

ACELULAR

VIRUS

PRIONES

TIPO CLULAR

PROCARIOTA

EUCARIOTA

BACTERIA

ARQUEA

HONGOS

PARASITOS

PROTOZOOS

METAZOOS
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BACTERIAS

VIRUS PROTOZOOS

Helmintos

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HONGOS

TIPOS CELULARES PROCARIONTE EUCARIONTE Protistas Hongos Plantas Animales

Bacterias Arquea

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Caracterstica Membrana nuclear ADN Cromosomas Divisin celular

Procariontes Ausente Desnudo y circular nico Fisin binaria Ausente. Los procesos bioqumicos equivalentes tienen lugar en la membrana citoplasmtica 70S (50S + 30S) De murena Ausentes Ausente Flagelos (s/9+2) Ilse Valderrama Heller, 2008

Eucariontes Presente con histonas Mltiples Mitosis o Meiosis Presentes (con ribosomas 70S) en clulas vegetales (con ribosomas 70S)

Mitocondria

Cloroplasto

Ribosoma
Pared celular Nuclolos Sistema de Endomebranas rganos de locomocin

80S (60S + 40S) De celulosa (vegetales) Presentes

Presente Cilios y flagelos (9+ 2)

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Clasificacin Organismos Vivos

La Teora de la Evolucin y la Teora Celular nos proveen las bases para comprender la interrelacin entre los seres vivos Sistema de Clasificacin Jerrquica de Whittaker (1969) distribuyendo a los seres vivos en cinco reinos:

Moneras Protistas Hongos Plantas Animales

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Clasificacin Organismos Vivos

Carl Woese (1980) construye un rbol filogentico a partir de los estudios del ARNr (cido ribonuclico ribosmico)

Analiz secuencia rRNA descubriendo

las del 16S, un

dominio entero de vida, las Archeas y sus resultados condujeron a una clasificacin tres dominios en

Se basa en el estudio de las diferencias en las secuencias de ARNr comunes a todos los seres vivos
De este tronco comn surgiran en la evolucin tres modelos de clulas y una clasificacin en 3 dominios:

Bacteria Archae Eucarya

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Clasificacin Organismos Vivos

En 1980 se vio la necesidad de modificar la clasificacin de los 5 reinos agregando un sexto que corresponde a las Arqueobacterias

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Los tres grandes dominios de la vida

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 rbol filogentico Universal establecido por Carl Woese y su discpulo Gary Olsen que muestra los tres Dominios
El termino "dominio" refiere a un nuevo taxn filogentico que incluye tres lneas primarias:
Archaea, Bacteria y Eucarya; y en lnea descendente siguen seis Reinos: I-Moneras, II-Arqueobacterias (obviamente separadas de Moneras), III-Protistas, IV-Hongos, V-Plantas, VI-Animales.

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La gran profundidad evolutiva de los microorganismos

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ARBOL FILOGENETICO UNIVERSAL

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Caractersticas diferenciales entre Bacteria, Archaea y Eukarya

B c ria A h e a te rc a a Pp o ao e tid glic n L id s p o R o ms ib so a tR A in ia o N ic d r I tro e e tR A n ns n N R A p lim ra N o e sa

S E l. e n ster 7S 0 F ilm orm e tion a in N o N o E l. e n ter 7S 0 M tionin e a S

E a a uc ry
N o E l. e n ster 8S 0 M tionin e a S

Ua n V arias T s re (4 sub ) (8 sub ) (12 su un un -12 un -14 b ) S n le e sib N o

R o m se sib a ib so a n le : N o S n le e sib T x a d t a o in if ric S n le e sib N o C ra fe ic l lo n n o K n m in a a ic a E stre to ic a p m in Ilse Valderrama Heller, 2008

Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya

Propiedad Bacteria Eucarya Membrana NO SI nuclear Organelos NO SI Tamao 70S 80S ribosoma Peptidoglicano SI NO en la pared Esteroles en NO SI membrana (hopanoides) Lpidos de Ester unidos Ester unido a Ilse Valderrama Heller, 2008 membrana a glicerol glicerol Archaea NO NO 70S

NO
SI Eter, ramificados

Estructura y fisiologa Bacteriana

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Estructura y funcin celular:

PROCARIOTA

BACTERIA

ARQUEA

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TAXONOMA
Rama de la biologa que se ocupa de Nombrar, Organizar y Mostrar Relaciones entre seres vivos Funciones: 1.Identificar y describir la unidad taxonmica bsica o especie 2.Visualizar la forma apropiada de catalogar esas unidades Tiene tres disciplinas de apoyo: LaClasificacin LaNomenclatura LaIdentificacin
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TAXONOMIA MICROBIANA IDENTIFICACIN Caractersticas importantes de un microorganismo

CLASIFICACION

NOMENCLATURA

REINO

Es rotular o nombrar unidades definidas por clasificacin

DIVISIN SISTEMA BINOMIAL CLASE Escherichia coli

GENOTIPICAS

FENOTIPICAS

ORDEN

FAMILIA

GENERO

ESPECIE

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Clasificacin POLIFSICA
Es la tendencia moderna. Consenso en la integracin de distintos tipos de caracteres:
Fenotpicos: - clsicos (morfologa, nutricin, etc) - marcadores quimiotaxonmicos - perfil de protenas totales y enzimas

Genotpicos: clsicos: % G+C hibridacin DNA-DNA nuevos: fingerprinting (ej. perfiles moleculares
por restriccin o amplificacin de ADN)

Filogenticos: basados en el gen del ARNr 16S

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Dominio Phylum Clase Orden Familia Genero Especie Bacteria Proteobacteria Gamma Proteobacteria Zymobacteria Enterobacteriales Enterobacteriaceae Escherichia Escherichia coli
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Treponema pallidum
Clasificacin cientfica

Reino
Philo Clase Orden Familia genero

Bacteria
Spirochaete Schizomycetes Spirochaetales Siprochaetaceae Treponema

especie
Nombre binomial Treponema pallidum

T.pallidum

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 Los agentes causales de enfermedades infecciosas humanas pertenecen a : Bacterias Hongos Parsitos : protozoos y metazoos virus

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Clasificacin de las Bacterias de importancia medica

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Las bacterias
son ms grandes y complejas que los virus (0.1 a 5 ms m de longitud). DNA y RNA, pero sin ncleo. Corresponde al dominio bacteria algunos requieren clula husped y son por lo tanto parsitos intracelulares estrictos (p.ej. Chlamydia, rickettsias, etc.). Aunque incluyen muchos tipos fisiolgicos distintos, y por lo tanto pueden vivir en cualquier tipo de ambiente, evidentemente a nosotros nos interesan las que pueden colonizar el cuerpo humano.
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TAMAO: clula eucariota versus clula procariota

Por lo general, ms pequeo que el de las clulas eucariticas Pero existen bacterias Gigantes (>0,5 mm) Enanas (<0,1 micra) Untamaotpico: 0,5 x 3 micras

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Tamao comparativo de bacterias, virus y cidos nucleicos

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Diversidad de procariotas: enfoque biomdico v/s virus

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Estructura de la clula bacteriana

Membrana citoplasmtica Pared celular Citoplasma o masa citoplasmtica Material nuclear E. accesorios
Cpsulas Flagelos Pili Esporas

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Morfologa bacteriana
ESFRICA O ELIPSOIDAL : COCOS Son ms resistentes a los cambios adversos del ambiente como la desecacin. CILNDRICA: BACILOS Pueden tomar ms fcilmente los nutrientes en solucin diluda ESPIRAL:
ESPIRILOS O ESPIROQUETA Se propagan rpidamente

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Bacilo nico Vibrio Diplobacilos

Estreptobacilos

Espirilo

Cocobacilos
Espiroqueta

Forma estrellada

Forma cuadrada

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Agrupamiento de las bacterias: a) cocos

Agrupamiento de las bacterias:b) bacilos

Diplobacilos

Estreptobacilos

cocobacilos

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ESTRUCTURA bacteriana
Las estructuras bacterianas las podemos

clasificar, por razones didcticas, en estructuras constantes o accesorias.

Las estructuras constantes son las estructuras esenciales para la vida de la bacteria e incluyen el citoplasma Cromosoma bacteriano la membrana celular y la pared celular.

estn presentes slo en algunas de ellas y aunque no son indispensables para la vida, otorgan extraordinarias ventajas adaptativas a las bacterias que las poseen.
Las estructuras accesorias: etc.

cpsula, flagelos , esporas , fimbrias,

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Citoplasma
Actividad qumica y biosinttica Protenas (enzimas, complejos enzimticos, estructurales) Ribosomas (70S: 55 protenas, rRNA 5S, 16S, 23S mRNA, tRNA Otras macromolculas, solutos, agua , nutrientes , etc No tienen citoesqueleto. Nucleoide bacteriano: ADN
haploide, Circular, nico

Material gentico extracromosomal :

plasmidios

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Inclusiones citoplasmticas
Algunas bacterias tienen estructuras internas Varian en cantidad y nmero Difieren en sus contenidos grnulos de almacenamiento polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs), glucogeno vesculas de gas flotacin Carboxisomas, clorosomas.

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 Grnulos de polihidroxibutirato (PHBs)

vesculas de gas flotacin

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Ribosomas 80S v/s 70 S

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ADN cromosomal: nucloide bacteriano

nico Monocatenario ADN Sin histonas Funciones celulares

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Plasmidios
ADN extracromosomal
Resistencia antibioticos Metales pesados, UV

Sntesis de pigmentos

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Membrana celular
Composicin qumica Funciones Transporte de sustancias Barrera de permeabilidad
En fottrofas: Estructuras intracitoplasmticas(fotosinte sis) Respiracin celular

Agentes reforzantes: esteroles Archaea, membranas adaptadas a condiciones extremas - teres de alcohol isoprenoide, algunas monocapas
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PARED CELULAR
soporte fsico de la clula la estructura ms externa cuando no existe cpsula. proteccin fsica a la bacteria y tambin la protege del shock osmtico, dada la hipertonicidad celular. algunos de sus elementos participan en la interaccin agente-hospedero, facilitando la adherencia a los tejidos protegiendo la bacteria de los mecanismos inespecficos de defensas o induciendo una respuesta inflamatoria. El componente bsico de la pared celular es el peptidoglicano o murena.
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Dos grupos de bacterias carecen de pared celular:

Mycoplasma que poseen solamente membrana celular las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de sintetizar su pared celular MET de Mycoplasma Resistente a la penicilina G

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Paredes de las eubacterias

Esto le da al peptidoglicano su estructura de red, determinando su resistencia. La unin entre los tetrapptidos de cadenas vecinas es inhibida por los antibiticos -lactmicos. Existen diferencias en la composicin y estructura de la pared celular entre las bacterias Gram (+) y Gram (-)
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Gram +

Bacteria

Gram-

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Estructura del Peptidoglicano

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Ejemplos de entrecruzamientos en el peptidoglucano

Directo (muchas Gram-negativas)

Puente pentaglicina (algunas Gram positivas Ilse Valderrama Heller, 2008

PARED EN GRAM +

El pptidoglicano en varias capas grosor (80 90%) Atraviesan el peptidoglicano polisacridos cidos, denominados cidos teicoicos. Los cidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato. Los poliglicerol fosfatos estn unidos a la membrana celular y se les denomina cidos lipoteicoicos los poliribitol fosfato o cidos teicoicos estn unidos al peptidoglicano

Funciones: Estabilizacin del peptidoglicn Adhesincelular(Adhesina) Le dan la carga negativa a la envoltura bacteriana

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PARED EN GRAM -

La membrana externa contiene numerosas protenas, siendo las porinas las ms abundantes. El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere. Se denominan as, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplsmico. Las porinas constituyen poros de difusin inespecficos que permiten el paso de sustancias hidroflicas y no mayores de 700 daltons (aminocidos o disacridos). Las porinas ms conocidas en E. coli son OmpC y OmpF.

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PARED EN GRAM -

El LPS es una molcula anfiptica que contiene tres regiones diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O. El lpido A, es un complejo de azcares, fosfatos, cidos grasos y forma una bicapa con los fosfolpidos de la membrana. Adems, es el responsable de la toxicidad del LPS. El core, es un oligosacrido de 4 a 5 azcares, algunos infrecuentes como las heptosas y un azcar de 8 carbonos, denominado ceto-deoxioctanoico (KDO) . usualmente especfico de especies El antgeno O, est formado por cadenas de 25 o ms unidades de azcares repetidas.
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Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008

GRAM +

GRAM -

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Bacterias de importancia medica que no pueden ser observadas con la tincin Gram

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Pared celular de Archaea

No contiene peptidoglicano Puede ser de
pseudopeptidoglicano (pseudomureina) tie G+ pseudomureina cubierta de proteina,tie G+ monocapa superficial de proteina o glicoproteina, sin pseudomureina (alg halfilos, alg.metanognicos y termoacidfilos) tie G-

Uniones tipo eter acidos grasos Existen Archaea sin pared

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caractersticas Membrana externa Pared celular Lipopolisacarido Endotoxina Acido teitoico Esporulacion

Gram + Gruesa Presente a menudo El algunas cepas

Gram + Delgada + + -

capsula
Lisozima Antibacteriana penicilina Producciom exotoxina

Presente a veces
Sensible Mas susceptible Algunas cepas
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Presente a veces
Resistente Mas resistente Algunas cepas

Sntesis de Peptidoglicano

Bactoprenol (C55 alcohol isoprenoide) -- carrier lipdico que transporta el disacrido-pentapeptido del citoplasma al periplasma y lo inserta en la pared celular en crecimiento La transpeptidacin, es inhibida por penicilina
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Transpeptidacin

Inhibido por la penicilina G.

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Componentes no esenciales
Capsula Pili sexual Flagelo Fimbria Esporas Plasmidos

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Glicocalix: Material externo a la pared celular Cpsulas - Material en la superficie celular Capas mucilaginosas - Material adherido, menos fuertemente Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+, G- y Archaea. Pueden constituir la pared Funciones Proteccin contra defensas del husped (fagocitosis) Proteccin contra desecacin Proteccin contra virus, toxinas Adhesin a superficies (clulas, objetos inanimados) formacin de biofilms. Protegen de protozoos , de ataques por agentes antimicrobianos,etc La mayora de las bacterias Gram (+) y Gram (-) sintetiza una cubierta de naturaleza polisacrida que las rodea. Los exopolisacridos son sintetizados en la membrana citoplasmtica, atraviesan la pared celular y se establecen afuera. Se clasifican de acuerdo a la relacin con la superficie exterior de la bacteria y a su grado de rigidez en cpsulas y glicoclix.

Cubiertas extracelulares

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Cpsulas: exopolisacaridos

Algunas bacterias segregan materiales mucosos: polisacridos, polipptidos y complejos de polisacridos y protenas (glucoclix) Cpsula: cuando el material est dispuesto de un modo compacto alrededor de la clula Capa mucosa: si el material es laxo, de modo que forma solo una capa difusa.

S pc c te o c s r t ou

E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s

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Evasin de una bacteria patgena capsulada del sistema complemento

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Fimbria, Pili, Flagelo

Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesin a superficies. Pelo sexual - unin a clula receptora durante la conjugacin. Flagelo - filamento proteico involucrado en la motilidad.

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FIMBRIAS
tambin llamadas pili, son microfibrillas parecidas a pelos, que rodean en nmero de 100-200 a algunas bacterias Gram (-). Miden 3-7 m de dimetro, por lo que se observan slo al microscopio electrnico. un protena estructural llamada pilina, que se dispone en cilindros rgidos responsables de la adherencia especfica de las bacterias a los tejidos del hospedero, explicando la especificidad de hospedero y de tejidos de las bacterias.

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CLASIFICACIN POR POSICIN DEL FLAGELO

A) Montrico

B) Anftrico

C) Loftrico

D) Pertrico
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Endosporas
Resistencia al calor, radiacin, desecacin. principalmente por los gneros Bacillus y Clostridium supervivencia en ambientes desfavorables DNA protegido por cido dipicolnico y protenas. Luego de la activacin por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinacin y el crecimiento La localizacin de la espora en la clula puede ser usada para la identificacin

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Caractersticas importantes de las esporas y sus implicaciones medicas.

Ilse Valderrama Heller, 2008

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Clulas Vegetativas-Endoesporas
Caracterstica
Contenido de Calcio Ac. dipiconlico Pequeas protenas solubles en cido Contenido de agua pH citoplasma Actividad enzimtica Metabolismo Resistencia: calor, radiacin, compuestos qumicos

Clula vegetativa
bajo ausente ausentes 80-90% 7 elevada elevado baja

Endoespora
alto presente presentes 10-25% 5.5-6 baja Bajo o ausente elevada

Sensibilidad lisozima

Sensible
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Resistente

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Muchas gracias por su atencin!

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