Espectroscopía de

Absorción
En los métodos de absorción la base
de información es la magnitud del
poder radiante proveniente de una
fuente externa que es absorbido por
la especie analizada.
Aquí la absorción de radiación por la
especie, va acompañada por la
excitación del analito.
 Espectroscopía de Absorción

Es el fenómeno que ocurre cuando una

radiación electromagnética interactúa
con la materia traspasando parte de su
energía a los átomos o moléculas
presentes en la materia que pasan de
un estado energético menor a estados
de mayor energía, o estados excitados.
 Ejercicio

¿en cuántos kJ/mol aumenta la

energía de OZ cuando absorbe
radiación UV de longitud de onda de
147 nm?
 Desarrollo
E = h c / l
2.998 x 10 m/s8
= (6,626 x 10-34 Js) --------------------
(147 nm) (10-9 m/nm)

– = 1.35 x 10-18 J/molécula

– = (1.35 x 10-18 J/molécula) (6.022 x 1023 moléculas/ mol)
– = 814 kJ/mol
Esta energía es suficiente para romper el
enlace O=O del oxígeno.
 Absorción de la Luz
Cuando una molécula absorbe un fotón,
su energía aumenta. Se dice que ha
pasado a un estado excitado.
Si una molécula emite un fotón, su
energía disminuye
El estado de mínima energía de una
molécula se llama estado fundamental
 Medida espectrofotométrica
Cuando una muestra absorbe luz, la potencia
radiante del haz de luz disminuye.
La potencia radiante, P, es la energía por segundo y
por unidad de área del haz de luz
La luz se hace pasar a través de un monocromador
para seleccionar una longitud de onda. La radiaciòn
es monocromática.
La luz monocromática con una potencia radiante P0 ,
incide en una muestra de longitud b. la potencia
radiante del haz que emerge por el lado opuesto de
la muestra es P. Como la muestra puede haber
absorbido algo de luz, P ≤ P0
 Transmitancia
La transmitancia, T, se define como la fracción
de la luz incidente que pasa a través de la
muestra.
P
Transmitancia: T = -----
P0

T puede valer de 0 a 1
El porcentaje de transmitancia es simplemente
100 T y puede valer desde 0 a 100 %.
 Absorbancia
P
A = - log10 ---- = - log T
P0
Relación entre transmitancia y absorbancia

T= P/P0 % T = T*100 A
1 100 0
0,1 10 1
0,01 1 2

¿Cual, A o T, es directamente proporcional a la concentración?

 Absorbancia
Cuando no se absorbe luz,
– P= P0 y A=0

Si se absorbe el 90 % y se transmite el 10 %,
– P= P0/10 y A= 1

Si solamente se transmite el 1 % de luz,

– A= 2
La Absorbancia a veces también se llamaba densidad óptica
 Absorbancia

La absorbancia es
importante porque es
directamente proporcional a
la concentración, c, de la
especie que absorbe la luz en
la muestra.
 Leyes de la Absorción
Cuando un haz de radiación
monocromática, con una potencia
P0, incide sobre una cubeta
conteniendo una solución, puede
ocurrir que:
 Leyes de la Absorción

Po = Pt + Pd + Pa

Cubeta

Pd

Pt < Po
Pt
Po
Pa
 Leyes de la Absorción
Parte del haz de radiación sea absorbido
por el medio que está siendo analizado.
Parte de la radiación incidente sea
reflejada:
– dependiendo de la especie absorbente o,
– de las diferencias entre  del medio de
propagación de la radiación y el  del medio
que esta siendo analizado.
 Leyes de la Absorción

Parte de la radiación incidente sea

dispersada:
– Dependiendo del medio: no sea transparente
ni homogéneo
Parte de la radiación incidente sea
transmitida, siendo su potencia menor a la
potencia de la radiación inicial o incidente.
 Potencia Reflejada
Puede ser minimizada:
– Uso de medidas relativas y,
– Cubetas con paredes homogéneas, de
menor espesor y de caras paralelas
– Una cubeta conteniendo la muestra y otra
cubeta conteniendo todos los componentes
de la cubeta anterior menos la sustancia de
interés.
 Potencia Reflejada
La medida del haz transmitido
por la segunda cubeta servirá
de referencia para calibrar el
instrumento, antes de la
medida de la potencia
transmitida por la cubeta que
contiene el material a analizar.
 Potencia Reflejada

Como vemos es necesario

usar:
– Cubetas prácticamente idénticas
– De espesor reducido y
– De caras paralelas
 Potencia Dispersada
Normalmente los procedimientos
involucrados en la absorción de
luz, son realizados en soluciones
homogéneas y transparentes, de
modo que la potencia de la
radiación dispersada puede
despreciarse
 Leyes de la Absorción
Por lo anterior podemos considerar que:
– PO = P a + P t
Las potencias incidente y transmitida
pueden ser medidas directamente, y
La potencia absorbida puede determinarse
como la diferencia entre P0 y Pt.
– P a = Po - Pt
 Leyes de la Absorción
Investigaciones sobre la relación entre las
potencias de radiación incidente y
transmitida fueron realizadas por Pierre
BOUGUER (1729) y por Johann H.
LAMBERT (1760), llegando a enunciar
dos leyes fundamentales que caracterizan
al proceso de absorción:
 Leyes de la Absorción

“La intensidad o potencia de

luz monocromática transmitida
por un medio homogéneo es
proporcional a la intensidad o
potencia de luz incidente”
Pt = k P o ( It = k Io )
 Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
“La intensidad o potencia de luz
monocromática transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar
aritméticamente el espesor del medio
absorbente”
Pt = Po e-kb ( It = Io e-kb )
 Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
Pt = P o e -kb

b = espesor del medio absorbente

k = constante para la longitud de onda
y el medio absorbente, denominada
coeficiente de absorción
Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
Pt = P o e -kb

Pt = Po 10-0.4343 kb
k’ = k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10 -k’b
Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
Pt = Po 10- k’b

Pt  k 'b
 10
PO
 Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
Pt
- log  k'b
PO

Pt / Po = Transmitancia, fracción de la
luz incidente transmitida por un espesor b
 Ley de Lambert - Bouguer

“Cuando una radiación monocromática

proveniente de una onda plana pasa a
través de un medio capaz de absorber
radiación, de concentración constante,
la potencia radiante disminuye
logarítmicamente a medida que la
longitud del paso óptico aumenta
aritméticamente”.
Leyes de la Absorción: Ley de Beer
August Beer (1852) estudió la influencia
de la concentración del componente
absorbente en la transmisión y
absorción de la luz.
Descubrió que existe la misma relación
entre la transmisión y la concentración
que la descubierta por Lambert entre la
transmisión y el espesor del medio
absorbente:
Leyes de la Absorción: Ley de Beer

“La intensidad o potencia de un

haz de luz monocromática
transmitido disminuye
exponencialmente al aumentar
aritméticamente la concentración
de la especie absorbente”
Pt = Po e-kc
Leyes de la Absorción: Ley de Beer

Pt = P o e -kc

Pt = Po 10-0.4343kc
k’’ = k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10-k’’c
Leyes de la Absorción: Ley de Beer

Pt = Po 10 -k’’c

Pt
 log  k'' c
P0

Pt
como A   log
P0
Leyes de la Absorción: Ley de Beer

Pt
 log  k'' c
P0
Ley de Lambert – Bouguer - Beer

Pt = Po 10 -k’b

Pt = Po 10-k’’c

Pt = Po 10-k’k’’bc
Ley de Lambert – Bouguer - Beer

definiendo una constante a

a = k’ * k’’
y como P
A   log t
P0
tenemos
Ley de Lambert – Bouguer - Beer
LEY DE BEER

– A = Absorbancia
– b = trayecto óptico, cm
– a = absortividad, L g-1 cm-1
– c = concentración, g/L
Ley de Lambert – Bouguer – Beer
LEY DE BEER

–A = Absorbancia
– b = trayecto óptico
–  = absortividad molar
– c = concentración molar
 Leyes de la Absorción:
Ley de t-Beer
A =  bc
 = absortividad Molar = M-1 cm-1
c = moles/L b = cm

 permite comparar cuantitativamente

la absorción de varias especies
 Leyes de la Absorción:
Ley de Lambert-Beer
La absortividad Molar  depende de:
– La sustancia absorbente
– Longitud de onda
– Temperatura de medición
– Solvente

A mayor ε mayor nivel de

absorción observado por lo que
más sensible el método
espectrométrico
 Ley de Beer

A = abc o A = ε bc

Esta ecuación demuestra la

relación lineal entre la A y la
concentración c
 Ley de Beer

Por lo que manteniéndose

constante el camino óptico, es
posible determinar la
concentración de una especie en
solución a través de una medida
de absorbancia
 Ley de Beer
“Cuando un haz de radiación
monocromática proveniente de una
onda plana, pasa a través de un medio
capaz de absorber radiación, contenido
en una celda de paso óptico constante,
la potencia radiante disminuye
logarítmicamente a medida que aumenta
la concentración aritméticamente”
Alcances de la Ley de Beer
Mayoritariamente se aplica en las
regiones UV, VIS, IR cercano, R. X.
Aplicable a especies químicas: iones,
moléculas y átomos.
Aplicable a soluciones diluidas, y matrices
sin gran complejidad.
Aplicable a niveles de detección de
analitos del orden ppm o menores.
Alcances y Aplicaciones de la
Ley de Beer

Absorción radiación UV-VIS por

compuestos orgánicos
Absorción radiación UV-VIS por
compuestos Inorgánicos
Aplicaciones de la Ley de
Beer
Determinación de un constituyente
absorbente presente en una muestra
Determinación de dos o más especies
absorbentes presentes en una muestra.
Valoraciones fotométricas en cuyo
sistema participa una o más especies
absorbentes.
Cinética de reacciones químicas
 Aplicaciones de la Ley de
Beer
Determinación de un constituyente
absorbente
Determinación de dos o más especies
absorbentes
Valoraciones fotométricas en cuyo
sistema participa una o más especies
absorbentes.
Cinética de reacciones químicas
Aplicaciones de la Ley de Beer

Determinación de un constituyente
absorbente presente en una muestra:
– Medición directa de la muestra y un
patrón con lectura próxima a la muestra:
– Mediante Curvas de Calibración
Aplicaciones de la Ley de Beer

– Medición directa de la muestra y un

patrón con lectura próxima a la
muestra:

AX
C X  CR
AR
 CURVAS DE CALIBRACIÓN: el concepto

Indirecto o de Calibración externa:

externa las muestras contienen un
cantidad desconocida del analito y los patrones tienen una
cantidad perfectamente conocida de analito. Los patrones
contienen al analito pero éste es EXTERNO al analito de la muestra

Adiciones Patrón o Calibración Interna:

Interna el analito en sí mismo es
usado para la calibración interna. El analito de la muestra es
empleado en el protocolo de calibración.

Patrón Interno : previo a la determinación se añade una cantidad

conocida de una sustancia similar al analito
(patrón interno)
 Construcción de la Curva de
Calibración
Restar el blanco de las señales o asuma un intercepto distinto de
cero en la curva
– Sustraer el blanco de las señales es la práctica más común en los
laboratorios
asegurase que las señales de las muestras queden en el intervalo
de las señales de los estándares
La curva de calibración calculada con su pendiente e intercepto
permite obtener la concentración de las muestras desconocidas
Debe estar seguro que la relación entre la señal y la concentración
es lineal antes de aplicar los mínimos cuadrados para encontrar la
recta
– Si matemáticamente la relación no es conocida, grafique la curva y elija
la mejor opción para interpolar los valores de las muestras, el gráfico es
una opción válida.
 Curva de Calibración externa

–Obtención de la recta:
Representación gráfica: A vs cc
–Completamente lineal
 Gráfica de los puntos
3.5
Calibration curve
3 (n=4 measurments/ std)

2.5
Signal response

1.5

1 y = 0.1976x

0.5

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16
conc, mass, etc
Gráfica de los promedios con rango
de error ± 1
3.500
Calibration curve
3.000 (n=4 measurments/ std)

2.500
Signal response

2.000

1.500

1.000 y = 0.1976x

0.500

0.000
0 2 4 6 8 10 12 14 16
conc, mass, etc
 Gráfica de promedios con error
indicando un intervalo de confianza
de 95 %
3.500 Calibration curve
(n=4 measurments/ std)
3.000

2.500
Signal response

2.000

1.500

1.000 y = 0.1976x

0.500

0.000
0 2 4 6conc, mass,
8 10
etc 12 14 16
 Curva de Calibración externa

–Recta:
Completamente lineal
–la lectura de la muestra se
interpola en la recta
obteniéndose la concentración
de la solución de muestra
 Curva de Calibración externa

– Recta:
Rango lineal y región no lineal
– lectura muestra rango lineal: interpolación en
la recta
– lectura muestra en rango no lineal:
interpolación en región no lineal, pero requiere
mayor número de patrones en esa zona
 Curva de Calibración externa

– Recta:
Puntos distribuidos no linealmente pero
con una tendencia lineal manifiesta
– Elevar número de datos
– establecer la mejor recta que pasa por los
puntos
ecuación de los mínimos cuadrados
residuos cuyo error corresponde a
errores aleatorios de la medida y no a la
concentración
 Curva de Calibración externa

La efectividad y confiabilidad
de sus resultados depende de
la exactitud en las
concentraciones de los
patrones y la mínima
diferencia entre la matriz de
los patrones y de la muestra.
 EJEMPLO
A partir de una solución patrón de 1000
ppm de Ca prepare la siguiente C. de C.

– 100 mL de solución patrón de 100 ppm de Ca

– 100 mL de solución patrón de 80 ppm de Ca
– 100 mL de solución patrón de 60 ppm de Ca
– 100 mL de solución patrón de 40 ppm de Ca
– 100 mL de solución patrón de 20 ppm de Ca
– 100 mL de solución patrón de 10 ppm de Ca
– 100 mL de solución patrón de 5 ppm de Ca
Una muestra de disolución de KMnO4, 1 * 10-
4 M presenta un 36,6 %T cuando se mide a
525 nm en cubetas de 1.0 cm:
– ¿qué Absorbancia presenta la disolución?
– ¿a qué valor cambia el % T si la disolución se
midiera en cubetas de 2 cm?
– ¿cuál es la absortividad molar del compuesto a 525
nm?
– ¿qué concentración presenta una disolución
desconocida de analito si al medirse en las mismas
condiciones que la muestra dio una lectura de 48,3
% T?
 Igualdad de matrices
Opciones Prácticas
– Separar el analito de la matriz de la
muestra permite el uso de las curvas
de calibración externas
– Uso de las Curvas de calibración de
Adición Estándar
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar

El empleo más habitual del Método de las Adiciones Patrón

es para eliminar la existencia de errores sistemáticos
generados por el efecto de matriz por parte de la muestra.

En este sentido los efectos de matriz son

igualados en los patrones al igual que
existen en la muestra.
Curva de Calibración de Adición
Estándar
Formas de aplicación de la Adición Estándar:

– Adicionar diferentes volúmenes de

disolución patrón a varias alícuotas de
muestra del mismo tamaño. Después cada
disolución se lleva a un volumen fijo, antes
de efectuar la medida.
– Adicionar incrementos sucesivos de
volúmenes del patrón sobre un volumen fijo
de muestra exactamente medido, requiere el
control del volumen total en cada
incremento.
 Curva de Calibración de Adición
Estándar
– Preparación de la serie de disoluciones:
– Preparar una serie de matraces aforados de
volumen VT y añadir
alícuotas idénticas, VX, de la disolución problema con
concentración cX
volúmenes variables de una disolución patrón de
analito que tiene una concentración cS.
reactivos apropiados y diluir hasta el volumen
determinado VT, y
– medir la Señal S
 Curva de Adición Estándar
Uso: minimizar interferencias
Preparación de los patrones
•En cada matraz vierta el mismo volumen de muestra
•Agregue cantidades o volumenes creciente de patrón o estándar
•Diluya a volumen conocida e igual todas las solucioneste

solvent
ejemplo e
estánd
ar
muestr
Solución no. 1 2 3 4 a
Std Conc=10 ppm
Muestra vol. 5 5 5 5
Std vol. 0 1 3 4
Total vol. 10 10 10 10
 Adición Estándar
Para calcular la concentración de la
muestra
x
 2.10
2
x  4.20 ppm

2 0 2 4
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar
Pendiente Calibración Externa=
Pendiente Adiciones Patrón

No hay efectos de matriz

Pendiente Calibración Externa <

Pendiente Adiciones Patrón

Sí hay efectos de matriz:

calibrado interno revela
exaltación de la sensibilidad

Pendiente Calibración Externa>

Pendiente Adiciones Patrón

Sí hay efectos de matriz:

calibrado interno revela
inhibición de la sensibilidad
PROTOCOLOS DE CALIBRACIÓN: adiciones estándar

Dos diseños incorrectos en Calibración Interna

Intervalo de concentraciones Intervalo de concentraciones

demasiado grande demasiado pequeño
Protocolos de Calibración

Método de las adiciones

estándar

Cada muestra requiere su propia calibración.

Se necesitan grandes cantidades de muestra.

La automatización es difícil.

En términos estadísticos es menos preciso porque la

determinación se realiza por extrapolación.
Curva de Calibración por Adición
Estándar
La concentración de la muestra viene dado por:
Curva de Calibración de Patrón Interno

– Se basa en la medida de la respuesta

del analito y de otra sustancia empleada
como patrón interno.
– Para esto se preparan una serie de
patrones con cantidades variables y
exactamente conocidas de analito y de
patrón interno y se mide la respuesta
del analito y del patrón interno.
Curva de Calibración de Patrón Interno

– Para construir la curva de

calibración se representa el
cuociente de las respuestas entre
el analito y el patrón interno,
Ra/Rpi, respecto al cuociente de
las concentraciones, Ca/Cpi, para
cada uno de los patrones.
Curva de Calibración de Patrón
Interno

– A continuación se le agrega una

cantidad conocida de patrón interno a la
muestra y se miden sus señales, se
calcula la relación de las respuestas y
se determina la relación de
concentración por interpolación en la
recta de calibración.
 Principio de aditividad de la
Ley de Beer
Sistemas multicomponente : “Si una
solución contiene dos o más sustancias
absorbentes, que no interactúan entre sí, la
absorbancia total de la solución corresponde
a la suma de las absorbancias de las
especies absorbentes”
Ley de Beer:
– A T = A 1 + A2 + A 3
– AT = a1bc1 + a2bc2 + a3bc3
 EJEMPLO
Para obtener el espectro de un compuesto absorbente, se prepararon tres soluciones de
distintas concentraciones y se midieron sus A entre los 300 nm y 820 nm. Las medidas se
resumen en el siguiente gráfico;
a) elegir tres longitudes de onda de trabajo,
b) comprobar si se cumple la Ley de Beer a las longitudes de onda seleccionadas,
c) seleccionar el rango de concentraciones para las curvas de calibración, y
d) elegir una longitud de onda y un rango de concentración para la curva de calibración
que permita medir muestras cuyos contenidos del compuesto absorbente se encuentra
entre 10 y 70 ppm.
2,500
50 ppm
25 ppm
10 ppm
2,000

1,500

1,000

0,500

0,000
250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850

-0,500
Principio de aditividad de la
Ley de Beer
– AT = A1 + A2
– AT = a1bc1 + a2bc2
Si se miden las A a las  de máxima
absorción para cada especie y calculando
previamente las absortividades a esas  y
manteniendo b constante, se pueden obtener
las concentraciones de la mezcla por medio
de un sistema de ecuaciones:
Principio de aditividad de la Ley de
Beer
Para una mezcla de dos componentes
absorbentes: c1 + c2
AT = a1bc1 + a2bc2

a11bc1 + a21bc2 = A T  1 para c1

a12bc1 + a22bc2 = A T  2 para c2

 Cuando los espectros están bien
resueltos
– Los valores de  se aplican a cada especie para cada
longitud de onda, y se miden por separado
– Es posible determinar X e Y despejando las incógnitas en
la ecuación:
A’ ’y b ’x b A’
A’’ ’’y b ’’x b A’’

– X = ----------------------- Y = ---------------------

’x b ’y b ’x b ’y b
’’x b ’’y b ’’x b ’’y b

Cada símbolo a b es un determinante = ad – bc

c d
 Ejemplo
– Si las  de los compuestos X e Y determinadas con
compuestos puros son
272 nm 327 nm

 M-1 cm-1 x 16440 3990

y 3870 6420

– Una mezcla de los compuestos X e Y en una celda de 1,00 cm

tiene una absorbancia de 0.957 a 272 nm y de 0.559 a 327 nm.
Hallar las concentraciones de X e Y en la mezcla.
Principio de aditividad de la Ley de
Beer

Una mezcla de los compuestos X e Y en

una celda de 1,00 cm tiene una
absorbancia de 0.957 a 272 nm y de
0.559 a 327 nm. Hallar las
concentraciones de X e Y en la mezcla.
 Resultados

X = 4.43 x 10-5 M

Y = 5.95 x 10-5 M
 Principio de aditividad de la Ley de
Beer
Mezcla de tres componentes absorbentes:
c1 + c 2 + c 3
AT = 1bc1 +  2bc2 +  3bc3 b cte

A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3 para 1

A2 = 12c1 + 22c2 + 32c3 para 2
A3 = 13c1 + 23c2 + 33c2 para 3
Principio de aditividad de la Ley de
Beer

Mezcla de tres componentes absorbentes:

Resolución: matriz [3*3]

-1
c1 A1 11 21 3 1

A2 12 22 32

c2 =
A3
c3 13 23 33
Aplicaciones de la Ley de Beer: aditividad
Espectrofotometria de derivadas
Una de las dificultades mayores es la
selección de las longitudes de onda
para las mediciones; esto puede
minimizar mediante:
– Uso de la espectrofotometría de derivadas
– Uso de longitud de onda dual, mediante
modulación de la longitud de onda, fuente
de corriente alterna.
Principio de aditividad de la Ley de
Beer:
uso de espectrofotometría de
derivadasEspectro normal:
A
:

A Espectro
 derivado:
•Se grafica la
primera derivada

en función de la
longitud de onda
 Titulación Fotométrica

A + B C + D
Especies Absorbentes:
– Analito
– Reactivo o Titulante
– Producto
 Titulaciones Fotométricas
Absorbe el analito solamente

Peq. mL Titulante
 Titulaciones Fotométricas
Absorbe el titulante solamente

Peq.
mL Titulante
 Titulaciones Fotométricas
Absorbe el producto solamente

Peq.
mL Titulante
 Titulaciones Fotométricas
Absorbe el analito y el titulante

Peq. mL Titulante
 Titulaciones Fotométricas
Absorbe el producto y el titulante, pero el
primero el doble que el segundo

Peq mL Titulante
.
Limitaciones y Desviaciones de la Ley
de Beer
– La Ley afirma que la A es proporcional a la
concentración de la especie absorbente.
– La Ley de Beer se cumple para una radiación
monocromática que atraviesa una disolución diluida,
cuando la especie absorbente no participa en un
equilibrio que depende de su concentración.
Limitaciones :
– Sólo para soluciones diluidas (≤0.01 M) de la mayoría de
las sustancias
– Para soluciones de bajo contenido iónico
– Para soluciones con bajo contenido de grandes
especies moleculares de gran tamaño que puedan
afectar electrostáticamente a la especie absorbente.
– Para soluciones cuyas concentraciones no modifiquen
grandemente el índice de refracción de las soluciones
Limitaciones y Desviaciones de la Ley
de Beer
Desviaciones :
– Químicas:
Por asociaciones, disiociaciones, y/o
reacciones entre los componentes de la
muestra con el analito, entre el analito y el
solvente.
Por cambios en el equilibrio químico de la
especie absorbente, por efecto de cambios
de pH, temperatura, solubilidad,
normalmente por causa de las diluciones.
Limitaciones y Desviaciones de la Ley
de Beer
Desviaciones :
– Instrumentales:
Por el no cumplimiento de hacer incidir sobre la
muestra un haz verdaderamente monocromático
como lo contempla la Ley.
Por la presencia de radiaciones parásitas, radiación
que contamina la radiación separada por el sistema
selector de longitud de onda. Esta radiación se
produce por efectos de dispersión de los diferentes
componentes ópticos del sistema monocromador.
Limitaciones y Desviaciones de la Ley
de Beer
Desviaciones :
– Instrumentales:
Efecto del ancho de banda.
Efecto de la utilización de longitudes
de onda que correspondan a los
extremos útiles de los
espectrofotómetros.