BIOSEGURIDAD

Aspectos éticos y Validación

Seguridad en el laboratorio

Tener en cuenta:
 En cultivo de células, frecuentemente se encuentran riesgos de tipo biológico, radioactivo y menos frecuente,
químico.
 Personal responsable que vele por la seguridad y el correcto cumplimiento de las normas.
 Nuevo personal debe ser considerado como aprendiz, instruirlo en procedimientos, roles, aspectos éticos, de
calidad y validación. (Instrucciones deben estar por escrito también)
 Ser racional, usar sentido común y ser proporcional ante la identificación de riesgos.
Evaluación de Riesgos

 Principio importante dentro de las normas de seguridad, en el cual se identifica y

clasifica adecuadamente los posibles riesgos.
p98
Procedimientos de operación estándar

Sustancias Condiciones
Equipo
peligrosas ambientales

• Estas deben ser evaluadas en un mismo proceso, no por aparte.

• Cada procedimiento se le debe definir un operativo estándar.
• Es más rentable minimizar factores de riesgo y prevenir, que atender cualquier imprevisto.
Normas de seguridad

• Tener en cuenta reglamentación local.

MANUAL DE BIOSEGURIDAD 2013.pdf

• En Colombia: El Ministerio de Salud y Protección

Social regula el cumplimiento de:
-Ley 9 de 1997 Medidas Sanitarias, Artículos
100-154, 607.
-Ley 55 de 1993 Seguridad en la utilización de
productos químicos. [1]
 Seguridad general p 101

Seguridad
General

Cristalería y
Toxicidad Nitrógeno
Operador Equipo Material Gases Quemaduras
Química Líquido
Punzante
Operador

 Debe tener presente normas de seguridad.

 Debe ser capacitado por la institución en la que labora en cuanto procedimientos adecuados en el laboratorio.
 Evitar sobrestimarlos o subestimarlos; no importa si es experto o apenas empieza, si no sabe los
procedimientos o normas a seguir, se le considera aprendiz.
 Indispensable un supervisor, el cual debe asegurar que cada procedimiento se lleve a cabo.
Equipo

 En el laboratorio debe estar un supervisor general que se encargue del mantenimiento de equipos,
disponibilidad eléctrica y fiabilidad mecánica.
 Un encargado de cada pieza del equipo, que supervise el mantenimiento y operación de los equipos e incluso
instruir a otros.
 Campaña de humos para aquellos equipos que produzcan algún tipo de sustancia poco recomendable.
Cristalería y material punzante.

 Cuidado al manipularlos; forma común de

lesionarse (vidrios rotos, agujas, etc.)
 Material de vidrio y agujas deben ir en
recipientes especiales que los contengan,
sin abusar de su capacidad.
 Peligro de inoculación.
 Minimizar uso de agujas.
Toxicidad química.

 Precauciones especiales con:

• Detergentes.
• Desinfectantes, como el hipoclorito.
• Dimetil sulfóxido (DMSO), criopreservante.
• Mutágenos, carcinógenos, fármacos citotóxicos.
Gases.

 Generalmente se usa: CO2, O2 y N2

 No son dañinos pero se deben usar adecuadamente:
Riesgo de fugas (asfixia, incendio, sellado de
ampollas)
 Las instalaciones deben tener máxima ventilación y
monitores de gases.
Nitrógeno líquido.

 Riesgos:
• Congelación: Contacto directo produce quemaduras, metales los
rompe. Usar guantes crioprotectores.
• Asfixia: Al dispensar nitrógeno líquido o insertar muchas muestras
en el congelador. Ventilación adicional y monitoreo ya que 1L de
nitrógeno líquido se convierte en 700L de nitrógeno gaseoso.
• Explosión: Al sumergir ampollas en éste, causa un diferencial de
presión, si ésta no está correctamente sellada puede explotar
violentamente al descongelar. Usar recipiente cerrado, máscara y
gafas al descongelar. Preferible: almacenar en fase de gas o en
congelador con N líquido perfundido y usar ampollas de plástico.
Tipo cuello ancho
Quemaduras.

 Fuentes de quemaduras: Autoclaves, hornos, placas calientes, elementos qque han tenido contacto con los
anteriores, mecheros.
 Colocas advertencias en equipos.
 Esperar enfriamiento de material esterilizado.
 Uso de guantes aislantes.
FUEGO

 Riesgo asociado con el mechero Bunsen y

alcohol para esterilizar.
 Mantener alejados el uno del otro.
 Instrumentos en alcohol en recipiente de cuello
estrecho y no mantenerlo lleno, no usarlo en
llama abierta.
 Cuidado de devolver instrumentos recién
flameados al alcohol.
Radiación ionizante

Radiación
ionizante

Irradiación por Irradiación por

Eliminación de
Ingestión reactivos fuentes de alta
residuos
marcadores energía
Ingestión

 Fuente de riesgo: radiomarcadores, muy solubles, pueden ser ingeridos al salpicarse en las manos o por
aerosoles (pipeteo, uso jeringa)
 Como: nucleótidos tritiados, yodo radioactivo.
 Trabajar con éstos en cámara clase II, usar guantes, mantener elementos en bandeja con papel absorbente,
trabajar con lo estrictamente necesario.
Eliminación residuos radioactivos

 Depende de las normas locales de disposición de residuos.

 Manejar un registro que tenga en cuenta límite máximo y cantidad desechada.
 Contenedores donde se eliminan deben: Descontaminarse con detergente apropiado (secuestrante como
Decon), usar hipoclorito, y solución resultante debe tratarse como desecho radioactivo.
Irradiación por reactivos marcadores.

 Radiación β y γ de los isótopos 32P, 125I, 131I, 51Cr.

 Protegerse con blindaje de plomo (2mm de espesor)
 Almacenar isótopos en olla de plomo.
 El isótopo 32P puede trabajarse a mínima concentración y tiempo en pantallas de metacrilato (antirruido)
 Cámara clase II.
Irradiación por fuentes de alta energía.

 Equipos como: fuentes de UV, rayos X, 60Co, usados para

esterilizar o detener proliferación celular en capas
alimentadoras.
 Rayos X y 60Co: Fuentes de alta energía deben ser
ubicados en lugares especiales con estricto control.
 Fuente de UV: Causa quemaduras y daño ocular. Usar
gafas de filtro y evitar irradiación directa.
 Controlar radioisótopos según normativa local en cuanto
almacenamiento y desecho.
 Examen médico general.
 Advertencias de riesgo radioactivo en equipos.
Riesgo biológico

Riesgo biológico

Cámaras de seguridad
Niveles de contención Material de biopsia Eliminación residuos
microbiológica Manipulación genética Fumigación
biológica humana biológicos
(MSCs)
Niveles de contención biológica.

 4 niveles definidos por NIH

 Se refieren a las instalaciones y los procedimientos de seguridad que se requieren.
p 109
Cámaras de seguridad microbiológica (MSCs)

 Protección mínima.
 Protección intermedia (peligros potenciales).
 Máxima protección contra patógenos conocidos.
 p 106
Material de biopsia humana.

 Conocido el origen del material biológico, es más clara la seguridad que se debe tener en cuenta, pero
existen dos áreas donde el riesgo no es inmediatamente aparente:

• Como: transfección, infección retroviral, hibridación celular

interespecífica.
Desarrollo de • Transformación de virus, virus anfitrópicos, transformación de
técnicas
líneas celulares humanas, xenoingertos de ratones
recombinantes para
inmunodeficientes.
nuevos transgenes.
• En éstas áreas no se tiene aún suficiente información
epidemiológica, se debe tratar con cautela.

• En muestras humanas, biopsia o autopsia de primates, líneas

celulares, productos de origen animal (sobretodo si viene de
Inclusión de agentes regiones con alto nivel de enfermedades infecciosas).
adventicios.
• Se debe confirmar la infección, determinar grado de
contención, tener ciertas precauciones…
• Precauciones de manejo de muestras
probablemente infectadas.

 Transporte de especímenes en contenedor de doble envuelta, a la vez encerrado en plástico opaco o papel resistente
al agua, y transportado por persona capacitada.
 Etiquetar y registrar en libro las muestras que van al refrigerador y en éste señalar riesgo biológico.
 Disección y trabajo de cultivo en cámara clase II, ojalá en habitación separada.
 Evitar en lo posible uso de instrumentos cortantes en el manejo de dichas muestras.
 Los cultivos deben ir en cajas de plástico etiquetadas como riesgo biológico, con nombre del responsable y fecha.
 Material de vidrio e instrumentos deben ser desinfectado, depositarlos en bolsas de seguridad y llevarlos al
autoclave.
 Teniendo muestras infectadas: desechar en bolsas de riesgo biológico dobles junto con los reactivos utilizados,
llevara autoclave o incinerar. Los instrumentos y equipos utilizados dejarlos en desinfectante por 2h y luego
autoclave. Aumentar nivel de contención.
Manipulación genética.

 Cualquier procedimiento que requiera alterar la información genética de las células o líneas celulares, debe
ser autorizado por su respectiva autoridad local.
Eliminación de residuos biológicos peligrosos.

 La eliminación está bajo control de autoridades locales, con las cuales la institución que los produce ha
llegado a acuerdos de buenas prácticas.
 Previamente deben ser esterilizados: Depositar en bolsas esterilizadas sin sellas en autoclave o sumergirlos
en desinfectante cuya concentración depende de la norma local (generalmente 300ppm de cloro).
Fumigación.

 La MSC debe ser fumigada cuando esté en mantenimiento o después de trabajar con patógenos
potencialmente peligrosos.
 La fumigación consiste en hacer circular formaldehído (o peróxido de hidrógeno) en la cámara por 1h, se
deja toda una noche dejando que evacúe el gas.
Bioética

Se deben manejar ciertos principios en cuantos la obtención, manipulación y uso final del material.

• Restricciones que se limitan al uso de animales superiores y la forma como obtienen

Tejidos animales. muestras de ellos.
• Forma de cómo el animal es alojado o mantenido.

• Depende del comité local y su normativa.

• Consentimiento del paciente o su pariente.
• Dejar por escrito autorización y que conste todo lo q se llevará a cabo.
• Corto resumen del proyecto que se llevará a cabo con esto.
• Garantizar confidencialidad del origen de la muestra.
Tejidos humanos.
• Establecer propiedad de las líneas celulares y sus derivados.
• Modificación genética de la línea celular requiere autorización.
• Derechos de patentes si llega a nivel comercial.
• El donante debe dar su consentimiento para la revisión de sus tejidos de posibles
patógenos y si quiere que le informen o no.
Aseguramiento de la calidad

 Procedimientos: Cada laboratorio de investigación debe tener definidos los procedimientos de operación
estándar para cada práctica. Siempre debe estar en medio físico o virtual.
 Control de calidad: El funcionamiento de instalaciones, equipos, preparación de medios y reactivos, deben
estar sujetos a pruebas de rutina. Éstas pruebas las deben realizar personas diferentes a las que regularmente
trabajan en ellos.
Validación

 Al usar líneas celulares éstas deben ser validadas por los encargados de la validación de éstos, si no lo hacen, reducen la
fiabilidad de la investigación. [2]
• Que la línea celular coincida con su descripción.
Autenticación • Una manera de saberlo es averiguando su perfil genético, se
requiere que esté disponible DNA del donante.

• Como se aisló una línea celular y lo que le sucedió después

del aislamiento.
Procedencia
• Requiere hacer registro de todo procedimiento al que se le
someta.

• Asegurarse de que la línea celular no esté contaminada, si está

así, pierde valor.
Contaminación • Evitar contaminación: Técnica aséptica adecuada, obtener línea
celular de una fuente validada, en lo posible evitar el uso de
antibióticos, pruebas para detectar microorganismos.
Bibliografía

 [1] Compendio de normas legales en Colombia sobre salud ocupacional, CAPITAL SAFETY 2da Edición,
2012.
 [2] Culture of animal cell, R.Freshney, 6ta Edición, 2010.