Enzimas

Las enzimas son biocatalizadores de

naturaleza proteica

(catalizan reacciones bioquímicas que de otro modo se llevarían a cabo a

velocidades extremadamente lentas)
¡¡aumentan la velocidad 103 a 1020 veces!!

- Como catalizadores, las enzimas actúan en

pequeña cantidad y se recuperan
indefinidamente.
- No llevan a cabo reacciones que sean
energéticamente desfavorables.
- No modifican el sentido de los equilibrios
químicos, sino que aceleran su consecución.
Nomenclatura

Antiguamente las enzimas fueron nombradas atendiendo

al compuesto sobre el que actuaban, añadiéndole el
sufijo -asa o haciendo referencia a la reacción catalizada.
Así tenemos:
- ureasa, cataliza la hidrólisis de la urea
- amilasa, la hidrólisis del almidón
- lipasa, la hidrólisis de lípidos
- ADNasa, la hidrólisis del ADN
- ATPasa, la hidrólisis del ATP, etc.
 En la actualidad, se ha adoptado una clasificación y
Clasificación nomenclatura sistemática, en la que cada enzima tiene un
número de clasificación.
Tipo Reacción que cataliza Esquema

1. Oxidorreductasas Transferencia de electrones

(oxido reducción)

2. Transferasas Transferencia de grupos

funcionales

3. Hidrolasas Reacciones de hidrólisis

4. Liasas Adición a dobles enlaces

5. Isomerasas Reacciones de isomerización

6. Ligasas o sintetasas Formación de enlaces con

Hidrólisis de ATP
 Enzimas: características
• Son proteínas globulares. Están plegadas formando un surco o bolsillo
en el que encajan la molécula o las moléculas reactivas (el sustrato) y
donde tienen lugar las reacciones. Esta región del enzima se conoce
como sitio activo. El sustrato se une al sitio activo mediante
interacciones débiles como son: puentes de hidrógeno, electrostáticas,
hidrófobas.
• Tienen pesos moleculares que oscilan entre 12.000 y un millón.
• Muchas son estereoespecificas (solo actúan sobre un isómero)
• Algunas son proteinas conjugadas (necesitan una porción no proteica)
 Enzimas: estereoespecificidad
La acción de la enzima es
extremadamente selectiva - COO-
sobre un substrato específico. COO
C-H Maleato
(tripsina solo corta el enlace C-H Fumarato
(= ,cis)
peptidico en Lys o Arg) H-C (= ,trans) C-H
COO- COO-

+ N H 3+

Aspartasa
Aspartasa

COO- COO-
H3+N-C-H H-C- NH3+
C-H2 C-H2
COO- COO-

L-Aspartato D-Aspartato
 Enzimas que dependen de un cofactor
Una enzima conjugada completa se denomina holoenzima, y
está formada por una parte proteica (apoenzima) y un cofactor no
proteico (coenzima)

HOLOENZIMA =
APOENZIMA + COENZIMA
 Enzimas que dependen de un cofactor
La actividad optima de algunas enzimas depende de la cooperación de sustancias no
proteicas

Existen dos categorías de cofactores:

• Inorgánicos: incluyen iones simples como Zn2+, Mg2+, Fe2+, Cu2+, K+, Na+
• Orgánicos: denominados generalmente coenzimas. Tienen un significado especial
en la nutrición de los mamíferos ya que la mayoría son derivados de vitaminas o
las mismas vitaminas

El papel del cofactor es:

1- Alterar la estructura tridimensional de la proteína o la unión con el substrato o ambas
2- Participar en la reacción como otro sustrato (gralmente para coenzimas)
 Enzimas que dependen de un cofactor
La actividad optima de algunas enzimas depende de la cooperación de sustancias no
proteicas
 Enzimas que dependen de un cofactor
La actividad optima de algunas enzimas depende de la cooperación de sustancias no
proteicas
 Enzimas que dependen de un cofactor
La actividad optima de algunas enzimas depende de la cooperación de sustancias no
proteicas

La coenzima compensa las transformaciones sufridas por el sustrato

 Enzimas que dependen de un cofactor
La actividad optima de algunas enzimas depende de la cooperación de sustancias no
proteicas

La coenzima compensa las transformaciones sufridas por el sustrato

Coenzimas

Adenosine Triphosphate (ATP)

Coenzyme A (CoA)

Nicotinamide Adenine
Dinucleotide (NAD+) Nicotinamide Adenine Dinucleotide
Phosphate (NADP+) Flavin Adenine Dinucleotide (FAD)
Coenzimas

Formas oxidada y reducida de NAD (y NADP). El anillo en rojo se reduce por la adicion de
un ion hidruro al C-4
Modo de acción de las enzimas

Modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo del enzima:

• Modelo llave cerradura

Supone que la estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias, de la misma forma que una llave encaja en
una cerradura. Este modelo es válido en muchos casos, pero
no es siempre correcto.
Modo de acción de las enzimas

Modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo del enzima:

• Modelo del ajuste inducido

el sitio activo adopta la conformación idónea sólo
en presencia del sustrato. La unión del sustrato
al centro activo del enzima desencadena un
cambio conformacional que da lugar a la
formación del producto. Sería algo así como un
cascanueces, que se adapta al contorno de la
nuez
Propiedades de las enzimas

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de

actuar como catalizadores.
Como proteínas, poseen una conformación natural más estable que las demás
conformaciones posibles. Así, cambios en la conformación suelen ir
asociados en cambios en la actividad catalítica. Los factores que influyen de
manera más directa sobre la actividad de un enzima son:
pH
temperatura
cofactores
 Efecto del pH sobre la actividad enzimática

Los enzimas poseen grupos químicos ionizables

(carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH, etc.)
en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según
el pH del medio, estos grupos pueden tener carga
eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la
conformación de las proteínas depende, en parte, de
sus cargas eléctricas, habrá un pH en el cual la
conformación será la más adecuada para la
actividad catalítica. Este es el llamado pH óptimo.

Como ligeros cambios del pH pueden provocar la

desnaturalización de la proteína, los seres vivos han
desarrollado sistemas más o menos complejos para
mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiológicos.
 Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

En general, los aumentos de

temperatura aceleran las
reacciones químicas. Las
reacciones catalizadas por
enzimas siguen esta ley general.
Sin embargo, al ser proteínas, a
partir de cierta temperatura, se
empiezan a desnaturalizar por el
calor. La temperatura a la cual la
actividad catalítica es máxima se
llama temperatura óptima.

Por encima de esta temperatura, el aumento de

velocidad de la reacción debido a la temperatura es
contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica
debida a la desnaturalización térmica, y la actividad
enzimática decrece rápidamente hasta anularse
 Una enzima es un catalizador que acelera la velocidad
de una reacción quimica

Modo de acción de los catalizadores

Perfil energético de una reacción Perfil energético de una reacción
espontánea catalizada

Reacción
Energía catalizada
de
activación

La acción de los catalizadores consiste en disminuir la energía de

activación (Ea)
Reacciones espontáneas: G < 0
Modo de acción de las enzimas

La enzima (E), se combina con el substrato (S) formando el complejo de

transición, enzima-substrato (E-S), mediante una reacción reversible, cuya
energía de activación es menor que la de la reacción no catalizada. Cuando
se forma el producto de la reacción (P), se regenera de nuevo la enzima (E)
de forma libre, la que puede combinarse de nuevo con otra molécula de
substrato (S).

E + S  ES  E + P
 CINÉTICA ENZIMÁTICA
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo
de la reacción catalítica y de la especificidad de la enzima

La medida se realiza siempre en las condiciones óptimas y se utilizan concentraciones

saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reacción observada es la
velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los
productos o la desaparición de los reactivos.
CINÉTICA

Método de las velocidades iniciales:

Consiste en medir la velocidad inicial de la
reacción (v0) para diferentes concentraciones.
v0 = pendiente de la curva de avance a tiempo
cero.
Condiciones
Mediciones antes de que se consuma el 10% del
total del sustrato, ([S]= constante a lo largo del
experimento.)
 

Además, en estas condiciones no es necesario

considerar la reacción inversa, ya que la
cantidad de producto formada es tan pequeña que
la reacción inversa apenas ocurre. De esta forma
se simplifican enormemente las ecuaciones de
velocidad.
CINÉTICA ENZIMÁTICA

La primera clave en cuanto al

comportamiento enzimáticos lo
aportaron Henri (1903) y Michaelis y Cinética de orden 0
Menten (1913). Durante su trabajo v=k
observaron que cuando mantenían
constante E y variaban la S obtenian
una relacion hiperbolica entre la
velocidad   y la S Cinética de orden 1
v = k S

Propusieron entonces describir la grafica hiperbólica como una

transición entre una cinética de orden 1 a 0
CINÉTICA ENZIMÁTICA

Cuando [S]0 es pequeña, la velocidad

inicial es directamente proporcional a la
concentración de sustrato, y por tanto,
la reacción es de primer orden. A
altas [S]0, la enzima se encuentra
saturada  por el sustrato, y la velocidad
ya no depende de [S]0. En este punto, la
reacción es de orden cero y la
velocidad es máxima (Vmax).
MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Las reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas:

1- Formación del complejo enzima-sustrato (ES)
2- Descomposicion del complejo enzima-sustrato: formación del producto,
liberando el enzima libre (E + P)

k2
k3
E + S  ES  E + P
k1
Ecuación de Michaelis-Menten:

Relación entre v0 y la
concentración de sustrato

Hay enzimas que no obedecen la ecuación de

Michaelis-Menten. Se dice que su cinética no es
Michaeliana. Esto ocurre con los enzimas
alostéricos, cuya gráfica v frente a [S] no es una
hipérbola, sino una sigmoide (Figura de la
derecha). En la cinética sigmoidea, pequeñas
variaciones en la [S] en una zona crítica (cercana a
la KM) se traduce en grandes variaciones en la
velocidad de reacción.
 Significado de la constante de Michaelis-Menten (KM)

1- KM es la concentración de sustrato para la cual la velocidad de reacción es la mitad de

la velocidad máxima. En efecto, si KM = [S], la ecuación de Michaelis-Menten se reduce a: v
= Vmax/2.
• El valor de KM da idea de la afinidad del enzima por el sustrato:
- a menor KM, mayor afinidad del enzima por el sustrato
- a mayor KM, menor afinidad.
• Los valores de KM de muchos enzimas son próximos a los de la concentración
fisiológica de sus sustratos, de forma que pequeñas variaciones en la [S] pueden suponer
grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metabólica.
 Significado de la constante de Michaelis-Menten (KM)

La cantidad de glucosa requerida para el 50% de la saturación es 1000 veces menor que la
requerida para alosa. La enzima es mas eficiente para glucosa y para manosa
 k2 k3
E + S  ES  E + P
k1
Significado de la velocidad máxima (Vmax)
1- Es la expresión de la eficiencia del funcionamiento enzimático.
Sin embargo, resulta mas conveniente expresar la eficiencia en términos de la cantidad molar
de cada enzima: la ACTIVIDAD MOLECULAR O NÚMERO DE RECAMBIO DE LA
ENZIMA que representa los moles de sustrato transformado por mol de enzima por unidad
de tiempo

Ejemplo: anhidrasa carbonica

CO2 + H2O H2CO3

Un ensayo tipo Michaelis-Menten en condiciones optimas (pH próximo a 7 y T: 35-37ºC)

muestra que 1g de la enzima presenta una Vmax de 1.2 x 10-3 moles de CO2 transformados
por minuto. El PM de la enzima es 30000; por lo tanto 1g representa:
0.000001/30000 moles de enzima = 3.3 x 10-11 moles, entonces:

Vmax
actividad molecular 
moles de E presente
1.2 x 103 moles de CO2 transformados / min

3.33 x 1011 moles de enzima
 36 x 106  moles de CO2 / min/ mol de enzima
CÁLCULO DE LA KM Y DE LA VMAX DE UN ENZIMA

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v 0 frente a [S]0) es una

hipérbola La Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la curva experimental, y la K M
corresponde a la concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad
de la Vmax.
 CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA
Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax es más sencillo utilizar la
representación doble recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea recta. Esta
representación doble recíproca recibe el nombre de representación de Lineweaver-Burk
Es una recta en la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

1 KM 1 1
 
vo Vmax S 0 Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales
se puede calcular gráficamente, los valores de K M
y Vmax de un enzima para diversos sustratos.
CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA

En el estudio de la actividad catalítica de una enzima se obtuvieron los siguientes

datos experimentales, a partir de los cuales deben determinarse los valores de KM y
Vmax Rta: KM :2.27 mM y Vmax: 0.51 mg/min

Producto
S
formado
(mM)
(mg/min)
1.5 0.21
2.0 0.24
3.0 0.28
4.0 0.33
8.0 0.40
16 0.45
1 KM 1 1
 
vo Vmax S 0 Vmax
 Inhibición enzimática

Algunos antibióticos, medicamentos quimioterapéuticos, insecticidas y herbicidas son

sustancias que interfieren en el funcionamiento de enzimas específicas. En las células
naturalmente se producen inhibiciones de enzimas lo que se conoce como biorregulación.
Los inhibidores pueden unirse reversible o irreversiblemente a las enzimas. Los inhibidores
irreversibles se unen covalentemente a residuos aminoacídicos de la enzima impidiendo su
acción. Este es el efecto de Hg+2, Pb+2 , los gases neurotóxicos y los compuestos arsenicales.
Los inhibidores reversibles se unen a la enzima por el mismo tipo de interacciones que se
producen entre las enzimas y los sustratos y dentro de ellos se encuentran los inhibidores
competitivos y no competitivos.

Casos
Casos
1-1-Competitiva
Competitiva 2-2-No
Nocompetitiva
competitiva 3-3-Irreversible
Irreversible
 Inhibición enzimática competitiva El inhibidor competitivo tiene
generalmente una estructura similar a
sitio
activo
la del sustrato.
Sustrato El complejo EIcomp no da productos y
E
inhibidor disminuye el número de moléculas de
E libres en condiciones de
interaccionar con el S.
E
S ¿Cómo se detecta?
Tanto el
sustrato Se mide v0 en función de S en
productos
como el presencia y ausencia de I
inhibidor
el inhibidor EI pueden
evita la unirse al
unión del sitio activo
sustrato al
sitio activo

No se afecta la Vmax pero KM tiene un valor

mayor
Inhibición enzimática competitiva

El Inhibidor es análogo químicamente al

sustrato

Tanto el
sustrato
como el
inhibidor
pueden
unirse al
sitio activo

Bezamidina inhibe a tripsina..

 Inhibición enzimática no competitiva Cuando el efecto de una sustancia inhibidora
no se puede revertir aumentando la [S], el
sitio La unión
S I del inhibidor es no competitivo.
activo
inhibidor EL I se une a un sitio distinto al sitio activo y
E distorsiona por eso puede formarse el complejo enzima-
sitio la enzima sustrato-inhibidor (EIS) que no da productos.
del EI La presencia del I actúa como si disminuyera
inhibidor la [E] presente y por eso
el
sustrato nunca se llega a la Vmax por más que se
EIS y el aumente la [S]. Las moléculas de E libre que
Inhibidor están en condiciones de actuar y dar producto,
pueden se comportan como si no hubiera inhibidor y
unirse al sitio por eso KM no varía.
En ausencia del activo
inhibidor procede simultáneamente
la formación del
el inhibidor
producto
disminuye la
velocidad de
formación del
producto

Si la afinidad de S es la misma por E y EI y la afinidad de

I es la misma por E y ES es una inhibición no
competitiva pura
Si las afinidades son diferentes cambia tanto V max como
KM y se trata de una inhibición no competitiva mixta
Eventos en el sitio activo
El sitio activo contiene residuos de aminoácidos que participan directamente en la
producción y ruptura de los enlaces. Estos residuos se denominan grupos catalíticos.
Aunque las enzimas difieren ampliamente en estructura, especificidad y modo de
acción se pueden establecer algunas generalizaciones:

son
sonhoyos
hoyosoo
esesuna
unapequeña
pequeña Sitio activo
porción hendiduras
porcióndel del hendiduras
(microambientes)
volumen
volumen totalde
total de (microambientes)
lalaEE

lalaunión susudisposición
disposiciónen
esesuna uniónES
ESocurre
ocurre en
unaentidad
entidad por numerosas
por numerosas
cuanto
cuantoaaloslos
tridimensional
tridimensional fuerzas átomos determina
formada fuerzasdebiles
debiles átomos determina
formadapor por lalaespecificidad
especificidadde de
grupos
grupos lateralesde
laterales de lalaenzima
enzima
los aminoácidos
los aminoácidos de de (llave-cerradura,
(llave-cerradura,
lalaproteína
proteína etc)
etc)
 Eventos en el sitio activo
¿Quiénes son estos residuos catalíticos responsables de la actividad de las
enzimas?
Son aminoácidos con cadenas laterales químicamente reactivas
• serina
• treonina
• cisteina
• ácido aspártico
• ácido glutámico
Serina Treonina Cisteina
• lisina
• arginina
• tirosina
• histidina

Ácido Aspártico Ácido Glutámico

 Eventos en el sitio activo
¿Cómo operan estos residuos catalíticos?
1- Catálisis por tensión de enlace: Las interacciones entre los grupos R de las proteínas y
el sustrato originan perturbaciones en los ángulos de enlace o la longitud de la molécula de
Sustrato
2- Catálisis ácido-base: los grupos R pueden actuar como donores o aceptores de protones
(ácidos o bases de Bronsted) o electrones (ácidos o bases de Lewis)
3- Catálisis por orientación: los grupos R y el sustrato están en una orientación optima
para reaccionar unos con otros
 Eventos en el sitio activo

Carboxipeptidasa A
actúa sobre el extremo carboxilo
terminal de los polipéptidos (se residuos catalíticos
utiliza para determinar la secuencia
de manera similar a la tripsina)
Consta de 307 residuos de aac, su
PM es 34000 contiene Zn2+ como polinucleótido
cofactor

La ruptura C-N ocurre debido cofactor

a un aumento en la
polarización del enlace C=O
debido a la influencia el Zn2+ y
la donación de protones de
tirosina, entre otros eventos
 ESPECIFICIDAD ENZIMATICA
La especificidad de las enzimas es una consecuencia del alto grado de organización del
sitio activo (secuencia de aminoacidos)

Tipos de especificidad

Absoluta Relativa
cada E cataliza solo pueden catalizar el mismo tipo de
una reacción reacción con mas de un sustrato
similar

Sitio activo altamente

ordenado y rígido. Sitio activo flexible, puede sufrir
(Modelo llave ligeras modificaciones
cerradura) (Modelo del encaje inducido)
 Estereoespecificidad

La enzima “distingue” o “reconoce” grupos quimicos identicos (estereoisomeros)