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MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA

FACULTAD DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
MANUAL DE PRCTICAS

BIOQUIMICA

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FUENTE: http://quimicoupagu.blogspot.com/

MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUIMICA


Practica no. 1
SOLUBILIDAD DE CARBOHIDRATOS
FUNDAMENTO:
Loa carbohidratos son en general mas solubles en agua y solventes inorganicos y
menos solubles o insolubles en solventes inorganicos.
REACTIVOS:
-Agua destilada
-HCl 5%
-NaOH 5%
-Etanol
-Cloroformo
-Carbohidratos
Glucosa
Fructosa
Xilosa
TECNICA:
Colocar aproximadamente 15 mg de cada uno de los carbohidratos en tubos
etiquetados y examine su solubilidad en agua, alcali diluido, acido diluido, etanol y
cloroformo aadiendo 2ml de solvente.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
1.- PRUEA DE BIAL PARA PENTOSAS.
FUNDAMENTO:
Cuando se calienta pentosas con HCl concentrado se forma furfural que se
condensa con orcinol (3,5-dihidroxitolueno), en presencia de iones ferricos para
dar un complejo coloreado.
GENERALIDADES:
-Explique que es un monosacrido, oligosacarido y un polisacarido.
-Clasificacion de los monosacridos en base al numero de atomos de carbono que
poseen
_Escriba las formulas de una triosa, una terrosa, una pentosa y una hexosa.
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REACTIVOS:
1.- Reactivo de Bial. Disolver 1.5 g de orcinol en 500 ml. De HCl concentrado.
Agregar a esta solucion 20 gotas de FeCl3. Guardar en frasco ambar.
2.- Solucion de carbohidratos:
Glucosa: 1g/100ml
Xilosa: 1g/100ml
TECNICA:
1.- Rotular los tubos de ensaye de 15 x 150 con el nombre del carbohidrato a
probar y el nombre de la prueba (Bial).
2.- Pipetear 1ml de la muestra (sol. de carbohidrato) al tubo de ensaye
correspondiente, y 2.5 ml de reactivo de Bial.
3.- Colocar en bao de agua hirviente hasta la aparicion de color, y sacar
inmediatamente.
RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
PRUEBA DE SELIWANOFF
FUNMDAMENTO:
Las cetosas se deshidratan mas rapidamente que las aldosas dando derivados de
furfural que se condensan con resorcinol para formar un compuesto coloreado, por
lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado que ocasionaria la
deshidratacin de las aldosas.
GENERALIDADES:
-Explique que es una aldosa y una cetosa
-Escriba la formula de Fisher y de Haworth de una aldosa y una cetosa con
nombres.
REACTIVOS:
1.- Reactivop de Seliwanoff. Disolver 0.7 g de resorcinol en 100 ml de HCl
concentrado. Agregar agitando 100 ml de agua destilada. Guardar en frasco
ambar.
2.- Solucion de fructosa y glucosa 1g/100ml cada uno.
TECNICA:
1.- Rotular los tubos de endsaye con el nombre del carbohidrato y el nombre de la
prueba (Seliwanoff).
2.- Pipetear 2 ml del reactivo de Seliwanoff a cada tubo y aadir 2 gotas del
carbohidrato al tubo de ensaye correspondiente. Calentar en un bao de agua
hirviente hasta la aparicion de color.
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RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
PRUEBA DE YODO
FUNDAMENTO:
El yodo forma complejos coloreados de absorcin con los polisacaridos.
GENERALIDADES:
-Enlace glucosidico , como se forma, estructura quimica de uno.
-Describa la estructura quimica de sacarosa, almidon, y glucogeno.
REACTIVOS:
1.- Solucion de yodo (mezclar 2 g de KI y 1 g de yodo , disolver esta mezcla en
agua destilada, completar a 100 ml).
2.- Solucion de
almidon
1g/100ml
sacarosa
1g/100ml
glucosa
1g/100ml
TECNICA:
Colocar en una capsula de porcelana 3 gpotas de solucionn problema y 3 gotas de
yodo, observe los colores.

RESULTADOS:
OBSERVACIONES:
Practica no. 2.
IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS II.
REACCIN DE TOLLENS.
FUNDAMENTO: LA PRUEBA DE T0LLENS ES UNA REACCIN
CARACTERSTICA PARA AZUCARES REDUCTORES DANDONOS
COMPUESTOS COLOREADOS (NEGROS) CUANDOSE TRATE DE ELLOS.
REACTIVOS:
GLUCOSA 2%
ARABNOSA 2%
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MALT-OSA 2%
SACAROSA 2%
ALMIDON.
REACTIVO DE TOLLENS:
MEZCLAR 10 mL DE HC1 CONCENTRADO CON 2 Ml DE FLOROGLUCNOL AL
2% Y LLEVAR CON AGUA DESTILADA HASTA 18 ml.
TCNICA:
1.- COLOCAR EN EL TUBO DE ENSAYO CORRESPONDIENTE 0.5MLDE LAS
SOLUCIONES A PROBAR (GLUCOSA, ARABINOSA, MALTOSA, SACAROSA,
ALMIDON
2.- AGREGAR 1 ML DE REACTIVO DE TQLLENS Y MEZCLAR.
3.- CALENTAR EN UN BAO DE AGUA HIRVIENTE POR 3 A 4MIN.
4.- UN COLOR OSCURO ES UNA PRUEBA POSITIVA.
RESULTADOS:

OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
FUNDAMENTO: LA REACCIN DE FEHLING ESTA BASADA EN LA ACCIN
REDUCTORA QUE TIENEN LOS AZUCARES SOBRE LOS IONES CPRICOS
EN MEDIO ALCALINO
REACTIVOS:
GLUCOSA 2%
ARABINOSA2%
MALTOSA 2%
SACAROSA 2%
FRUCTOSA 2/o
ALMIDN 2%
AGUA DESTILADA.
REACTIVO DE FEHLING:
SOLUCIN A: PESAR 34.65 g DE SULFATO DE COBREY DISOLVER EN 300 ml
DE AGUA DESTILADA, LLEVAR A 500 ml CON AGUA Y CONSERVAR EN
FRASCO CON TAPN DE HULE.

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SOLUCIN B.- PESAR 125 g D KOH Y 173 g DE TARTRATO DE SODO Y
POTASIO, Y LLEVAR CON AGUA DESTILADA A 500 ML, CONSERVAR EN
FRASCO REVESTIDO DE PARAFINA Y CON TAPN DE HULE.
TCNICA:
PREPARACIN DEL TESTIGO:
1.- COLOCAR EN UN TUBO DE ENSAYE 2 ml DE AGUA DESTILADA
2.- AGREGAR 0.5 ml DE FEHLING A Y 0.5 ml DE FEHLING B Y MEZCLAR.
3.- CALENTAR EN BAO MARA A EBULLICIN DURANTE 5 MIN.
4.- NO DEBE PRODUCIRSE UN PRECIPITADO ROJO LADRILLO
PREPARACIN DE LOS PROBLEMAS:
1.- COLOCAR EN EL TUBO CORRESPONDIENTE 1ml DE LAS SOLUCIONES A
PROBAR (GLUCOSA, ARABINOSA, MALTOSA, SACAROSA, FRUCTOSA Y
ALMIDN)
2.- AGREGAR 0.5 ml DE FEHLING A Y 0.5 ML DE FEHLING B Y MEZCLAR
3.- CALENTAR EN BAO MARA EN EBULLICIN DURANTE 5 MIN.
4.- UN PRECIPITADO ROJO LADRILLO SERA UNA PRUEBA POSITIVA.
RESULTADO:
OBSERVACIONES:

CONCLUSIONES:
REACCION DE LA ANTRONA.
FUNDAMENTO:
LOS
ACIDOS
CONCENTRADOS
ORIGINAN
UNA
DESIDRATACION DE LOS MONOSACARIDOS PARA RENDIR FURFURALES
QUE SON DERIVADOS ALDEHIDICOS DEL FURANO, POR EJEMPLO: LA DGLUCOSA CON ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO (HCl) PRODUCE 5
HIDROXI METIL FURFURAL.
ESTOS PRODUCTOS SE COMBINAN LUEGO CON ANTRONA PARA DAR UN
COMPLEJO COLOREADO.

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REACTIVOS:
1.- SOLUCION DE ANTRONA 2 GR/LT EN HCl CONCENTRADO.
2.- SOLUCION DE GLUCOSA 1 GR/100 ML
3.- FRUCTOSA 1 GR/1OO ML.
TECNICA:
1.- APROXIMADAMENTE A 2 ML DE ANTRONA AGREGUE 5 GOTAS DE LA
SOLUCION PROBLEMA, MEZCLAR FUERTEMENTE Y OBSERVAR EL CAMBIO
DE COLOR.
RESULTADO:

OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 3.
REACCIN DE BENEDICT PARA AZUCARES REDUCTORES
Fundamento:
Esta prueba se basa en la reaccin de reduccin del cobre de Benedict. La
glucosa y otras sustancias reductoras reducen los iones cpricos a iones cuprosos
y forman un oxido cuproso rojo. El color azul de Cu++ es negativo para sustancias
reductoras.
Generalidades:
Escriba las frmulas de la glucosa, la sacarosa y un segmento del almidn (en
forma de alfa amilasa).
Reaccin de Fehling.
Consiste en:
1 ml de la solucin problema (Hidrolizado)
+
0.5 ml de Fehling A
+
0.5 ml de Fehling B
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Calentar 5 minutos en bao de agua hirviente
Reactivos:
1.
2.
3.
4.

Reactivo de Benedict
solucin de almidn 2%
solucin de sacarosa 2%
Solucin de glucosa a diferentes concentraciones indentificadas como:
Glucosa 1, 2,3 y 4.

Tcnica:
Pipetee 0.5ml de la solucin problema en un tubo de ensayo de 15 x 150 y
agregue 1 ml de reactivo de Benedict, mezclar y colocar en un bao de agua
hirviendo por 3 min.
Auxliese de la tabla siguiente para determinar la cantidad aproximada de glucosa
presente en las soluciones de glucosa 1, 2,3 y 4.
color
Azul

Concentracin aprox. de glucosa


(g/100ml)
0 g/100ml (Negativa)

Azul verdoso

0.3 g/100ml

Verde oliva

1.0 g/100 ml

Azul caf

1.5 g/100 ml

Rojo ladrillo

2.0 g/100 ml o ms

Hidrlisis de la Sacarosa
5 ml de sacarosa 2%
+
6 gotas de HCl concentrado
Mezclar y calentar 5 minutos en agua hirviente
Enfriar
Agregar 15 gotas de NaOH 5% para neutralizar
Efectuar una prueba de Fehling al hidrolizado
Reaccin de Fehling
1 ml de la solucin problema (Hidrolizado)
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+
0.5 ml de Fehling A
+
0.5 ml de Fehling B
Calentar 5 minutos en bao de agua hirviente
Resultados y Observaciones:
Conclusiones:
PRACTICA NO. 4
FERMENTACIN DE LA GLUCOSA POR LEVADURAS
(Sacharomyces cereviceae)
FUNDAMENTO:
La glucosa es un carbohidrato fermentable por las levaduras.
REACTIVOS:
Solucin de glucosa (1 g en 100 ml)
Reactivo de benedict.
Levadura de panadero seca activa.
TCNICA:
1.- En un vaso de precipitado de 25 ml. Pipetee 10 ml de la solucin de glucosa y
aada 0.3 g (la punta de una esptula) de levadura. Mezcle perfectamente hasta
que la mezcla sea homognea. Incube a 37 grados.
Realice una prueba de Benedict a esa mezcla a los 30 min., y a la hora y media de
incubacin.
2.- Para verificar que la solucin de glucosa es un azcar reductor, realice una
prueba de Benedict a la solucin de glucosa.
3.- Para verificar que la levadura no contiene la presencia de ningn azcar
reductor realice un blanco de la siguiente manera:
Mezcle 0.3 g (la punta de una esptula) de levadura con 10 ml. De agua destilada.
Efecte una prueba de Benedict tomando 0.5 mi de esta solucin de levadura.
Nota: La prueba de Benedict se efecta de la sig. Manera:
Pipetear 0.5 ml. de la solucin problema en un tubo de 15 X 150
Aadir 1 ml. de Reactivo de Benedict.
Calentar en bao de agua hirviente durante 3 min.
INTERPRETACION:

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1. Muestra no fermentada: reaccin de Benedict positiva (rojo ladrillo)
2. Muestra fermentada: reaccin de Benedict negativa (azul).
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 5.
DETERMINACIN DE GLUCOSA DEL SUERO POR EL METODO DE LA
GLUCOSA OXIDASA.
ANTECEDENTES:
La determinacin de la glucosa en fluidos biolgicos asido bien documentadas. La
prueba de glucosa pude ser diagnostica mente significativa en diabetes e
hipoglucemia.
FUNDAMENTO:
La glucosa es oxidad por la glucosa oxidasa a cido gluconico hiperoxido de
hidrogeno en presencia de peroxidasa reacciona con el hidroxibenzoato y 4aminoantipirina (PAP) para producir un cromgeno de Quinoneimina rojo con un
mximo de absorbancia a 505 nm.
GLUCOSA OXIDASA
B-D-Glucosa + o2 + H2O

cido D-gluconico +H2 O 2


Peroxidasa

H2O2 + Hidroxibenzoato + 4-Aminoantipirina


Cromgeno Quinoneimina Rojo +H 2
La concentracin de glucosa es directamente proporcionar a la absorbancia del
cromgeno de Quinoneimina a 505 nm.
MATERIAL:
1 tubo de ensaye de 13/100
1pipeta de 20 microlitros
1 pipeta de 5ml.
REACTIVOS:
Reactivo de color:
Una solucin conteniendo despus de reconstitucin 0.5125 mml. / L de
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4-antipirina, 10mmol /L de p- hidrixibenzoato, > 20 000 U/L de glucosa oxidasa,
>1000 U/L peroxidasa (Rbano Picante), buffer y preservativo.
Estndar de glucosa
Una solucin acuosa conteniendo 90 ml/dL la glucosa y perceptivos
PRECAUCIONES:
No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con la piel y ojos.
RECOLECIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA:
La muestra de eleccin de be ser plasma preparado de la sangre colecta con
anticoagulante fluorado. Otro plasmas y sueros pueden usarse si separados del
paquete globular y ensayados rpidamente.
El plasma fluorado para anlisis de glucosa e estable a 2-8 C por 5 das.
PROCEDIMIENTOS:
1.-prepare el reactivo de trabajo de glucosa
2.-en tubos separados pipetee 20 microlitros del estndar o del suero a ensayar
3.-aada 2 ml. De reactivo y mezcla.
4.- incube por 10 minutos a 37C, y determine la absorbancia del estndar
(A s) y de cada cero (A) a 505 nm. Contra blanco de reactivo.

CALCULOS Y RESULTADOS
La glucosa se expresa en mg/dL o mmol/Litros
Glucosa mg/Dl= A X concentracin del estndar
A s
A= absorbancia del problema
As = absorbancia del estndar
ESTANDAR = 90mg. /dL (
) X (90 ) =
(

VALORES ESPERADOS
70-105mg. / dL
Estos valores son sugeridos. Se recomienda que cada laboratorio establezca el
rango para el rea en que esta localizado.
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OBSERVACIONES:
RESULTADOS:
Absorbancia estndar de la glucosa:
A= 0.310
B= 0.315
Abs. Problema
Abs. Estndar
.323
.312

X 90 =

90

mg/dl

83 mg/dl

RESULTADOS:
CONCLUCIN:
PRACTICA NO. 6.
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA.
FUNDAMENTO:
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA.
Son pruebas que miden la capacidad para metabolizar la glucosa. Las personas
que padecen de diabetes mellitus tienen altos niveles de glucosa en la sangre y
las pruebas de tolerancia a la glucosa son una de las herramientas para
diagnosticarla.
Este examen tambin se realiza para diagnosticar diabetes mellitus en estudios
investigativos que involucren a los diabticos y en casos en los que se sospeche
la presencia de esta enfermedad, a pesar de haber realizado un examen en
ayunas de glucosa en sangre, con resultados normales, as como para el
diagnstico de hiperinsulinismo (elevacin de los niveles de insulina).
Los mtodos ms utilizados ms comnmente para evaluar la tolerancia a una
sobrecarga de glucosa pueden ser:
1. Pruebas de tolerancia utilizando una dosis nica oral de glucosa.
2. Pruebas de tolerancia con una dosis intravenosa de glucosa.
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La prueba ms comn de tolerancia a la glucosa es la oral. Despus de una noche


de ayuno, el paciente ingiere una solucin que contiene una cantidad conocida de
glucosa. Se toma una muestra de sangre basal, antes de que el paciente ingiera la
solucin de glucosa y de nuevo cada 30 minutos despus hasta por 2 3 horas,
segn la solicitud del mdico, para la determinacin de glicemia. Adems, el
paciente no puede comer durante el examen y se recomienda informar al mdico
acerca del uso de medicamentos que pueden afectar los resultados del examen.
Con frecuencia se solicita la medicin de los niveles de insulina (hormona
producida por el pncreas que permite introducir la glucosa desde la sangre hasta
la
cada
una
de
las
clulas
del
cuerpo).
Cuando se suministra la glucosa por boca, la absorcin desde el tracto
gastrointestinal hacia la sangre contina durante un lapso variable, que depende
de la cantidad de glucosa suministrada. La mxima absorcin de glucosa se
estima en 0,8 g/kg de peso por hora.
La tolerancia a la glucosa suministrada por va oral, mide el balance entre la
velocidad de pasaje de la glucosa al fluido extracelular y su separacin por la
asimilacin celular y la excrecin urinaria, si la hubiere.
Por tanto, la prueba puede influirse no slo por aquellos factores vinculados con la
utilizacin de la glucosa, sino tambin por los que influyen en su absorcin.
Las pruebas intravenosas de tolerancia a la glucosa son poco comunes. Para
realizar este tipo de prueba, al paciente se le inyecta por va venosa una cantidad
conocida de glucosa durante tres minutos, previa la medicin de los niveles de
insulina en la sangre en el minuto uno y en el tres.
INTERPRETACIN
En condiciones normales la sangre en ayunas debe tener un nivel de glucosa
inferior a 100 mg/dl.
Los valores sanguneos normales son:
Ayunas: 60 a 100 mg/dl
1 hora: menos de 200 mg/dl
2 horas: menos de 140 mg/dl.
Entre 140 y 199 se considera que existe intolerancia a la glucosa y es un grupo
que tiene mayor riesgo de desarrollar diabetes.
Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnstico de diabetes.

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Los criterios utilizados para definir la condicin de anormalidad de una curva de
tolerancia ,se basan en el nivel o pico elevado alcanzado por la concentracin
sangunea y la falta de retorno al nivel normal, 2 horas despus de la ingestin de
glucosa, siendo este ltimo el ms importante.
Un valor hipoglucmico (bajo de glicemia) de 3 a 5 horas despus de la ingestin
de la glucosa se observ en ciertos pacientes cuya curva de tolerancia era de tipo
diabtico, interpretndose un hiperinsulinismo, tpico del estado diabtico.

DIBUJOS:
CALCULOS Y RESULTADOS:
CONCLUSIONES:
PRACTICA NO. 7.
DETERMINACIN DE GLUCOSA SERIADA.
ANTECEDENTES:
La determinacin de la glucosa en fluidos biolgicos asido bien documentadas. La
prueba de glucosa pude ser diagnostica mente significativa en diabetes e
hipoglucemia.
MATERIAL:
4 tubo de ensaye de 13/100
1pipeta de 20 microlitros
1 pipeta de 5ml.
REACTIVOS:
Reactivo de color:
Una solucin conteniendo despus de reconstitucin 0.5125 mml. / L de
4-antipirina, 10mmol /L de p- hidrixibenzoato, > 20 000 U/L de glucosa oxidasa,
>1000 U/L peroxidasa (Rbano Picante), buffer y preservativo.
Estndar de glucosa
Una solucin acuosa conteniendo 90 ml/dL la glucosa y perceptivos
PROCEDIMIENTOS:
1.-prepare el reactivo de trabajo de glucosa
2.-en tubos separados pipetee 20 microlitros del estndar o del suero a ensayar
3.-aada 2 ml. De reactivo y mezcla.
4.- incube por 10 minutos a 37C, y determine la absorbancia del estndar
(A s) y de cada cero (A) a 505 nm. Contra blanco de reactivo.
CALCULOS Y RESULTADOS
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La glucosa se expresa en mg/dL o mmol/Litros
Glucosa mg/Dl= A X concentracin del estndar
A s
A= absorbancia del problema
As = absorbancia del estndar
ESTANDAR = 90mg. /dL (
) X (90 ) =
(

VALORES ESPERADOS
70-105mg. / dL
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
CONCLUCIN:
PRACTICA NO.8.
Determinacin de protenas totales.
Historia del Mtodo
La reaccin de color de las molculas de protenas con iones cpricos, es
conocida como la reaccin de color de Biuret, y es conocida desde 1878, desde
las publicaciones de Riegler en 1914 se han hecho varios intentos para estabilizar
los iones cpricos en ractivos alcalino. Kingsley modific el procedimiento en 1939
y en 1942 para incluir el uso de sodio como agente complejo. Este procedimiento
fue modificado ms tarde por Weichselbaum y Gornall. El presente mtodo est
basado en estas modificaciones.
Principio
++
Protena + Cu

lcali
complejo de color

La protena en suero forma un complejo coloreado violeta cuando reacciona con


iones cpricos en solucin alcalina, la intensidad del color violeta es proporcional a
la cantidad de protena presente cuando se compara contra una solucin de
concentracin conocida de protena.
Reactivo
Hidrxido de sodio 600 mM; sulfato de cobre 12mM. Tartrato de sodio
potasio 32 Mm; Yoduro de potasio 30Mm; ingredientes no reactivos.
El reactivo esta listo para su uso
El reactivo se guarda a temperatura ambiente
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El reactivo debe ser una solucin azul plido. La presencia de turbidez o de
un precipitado negro indica deterioro del reactivo y no debe ser usado.
Material

Reactivo de protena total


Pipetas automatizadas
Cronmetro
Tubos de ensaye
Espectrofotmetro

Procedimiento (Manual)
Etiquetar los tubos para blanco, estndar, paciente, etc.
Pipetee 1.0 ml del reactivo de trabajo a cada tubo.
Aadir 20 Ul de la muestra a los tubos respectivos, mezclar por
inversin,
Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
Ajustar el espectrofotmetro a cero con el blanco a 540 nm.
Leer y anotar las absorbancias de todos los tubos.
Calibracin
Use estndar acuoso de protena (8g/dL) o suero calibrador. Se debe calibrar de
acuerdo a las instrucciones de calibracin del instrumento. Si el resultado de los
controles se encuentra en el rango, la prueba debe ser recalibrada.
Clculos
Abs = Absorbancia
Abs (Paciente)
-------------------Abs (Estndar)

* concentracin del estndar = concentracin de protena g/dl.


g/dL

Valores esperados
6.2 8.5 g/dl
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES:
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CONCLUCIN:

PRACTICA NO. 9.
PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA
OBJETIVO
Cuantificacin de las protenas totales y albmina en el suero.
FUNDAMENTO
Proteina:
La protena presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio
alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por
espectrofotometra.
Albumina:
La determinacin colorimetrica de albumina humana en suero se realiza en un
medio amortiguado, lo cual permite su union por puentes de hidrogeno a
colorantes o indicadores como el verde de bromocresol, tiene la propiedad de
enlazarse especficamente con la albmina produciendo un cambio de color de
intensidad proporcional a su concentracin.
GENERALIDADES
Las protenas sricas estn separadas aproximadamente en albminas y
globulinas; en otras palabras, la protena total = albmina + globulina. La albmina
es la protena de mayor concentracin en el suero que sirve para trasportar
muchas molculas pequeas, pero tambin juega un papel decisivo en el
mantenimiento de la presin onctica de la sangre, es decir, impedir que el lquido
se filtre a los tejidos.
Las globulinas se dividen a grandes rasgos en globulinas alfa-1, alfa-2, beta y
gammaglobulinas, las cuales se pueden separar y cuantificar en el laboratorio
mediante la electroforesis y la densitometra.
La fraccin alfa-1 incluye la alfa-1 antitripsina (ver Alpha-1 antitripsina ) y la
globulina fijadora de tiroxina (ver T3, T4, RT3U ). La fraccin alfa-2 contiene la
haptoglobina, ceruloplasmina, HDL y alfa-2 macroglobulina.
En general, los niveles de protenas alfa-1 y alfa-2 aumentan en presencia de
inflamacin. La fraccin beta incluye la transferrina (ver hierro srico ), el
plasmingeno (ver anlisis del factor VIII ) y las beta lipoprotenas (ver LDL). La
fraccin gamma incluye los diferentes tipos de anticuerpos (inmunoglobulinas M, G
y A).
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Valores Normales

Protena total: 6,4 a 8,3 g/dl


Albumina: 3-5 gr / 100ml

METODOLOGIA:
BIURET
VERDE DE BROMOCRESOL
REACTIVOS
Verde de bromocresol (BCG) 0.15 g/L. Buffer pH 4.56- 4.76; Surfactante,
ingredientes no reactivos y estabilizadores.
Reactivo de proteinas (biuret)
Patron para proteinas totales.
Patron para albumina.
El reactivo esta listo para usarse
El reactivo es estable a la fecha de caducidad, guardado a temperatura
ambiente.
El reactivo debe ser una solucin verde-amarilla, clara. Si presentan
turbidez o precipitado el reactivo es insatisfactorio y debe ser descartado.
PRECAUCIONES:
Los reactivos causan irritacion. Evite el contacto con piel, ojos y ropa. En caso de
contacto, lavese con abundante agua.
CONSERVACIN
Almacenados a temperatura ambiente, los reactivos son estables hasta su fecha
de caducidad.
INSTRUMENTOS
Use un espectrofotometro o fotocolorimetro calibrado a 540 y 630nm y un bao
capaz de mantener la temperatura a 37C.
MUESTRA
Suero unicamente
MATERIAL

Pipetas automatizadas
Tubos de ensayo
Cronometr
Espectrofotmetro para leer a 630 nm

PROCEDIMIENTO
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Protenas:
1.- Pipetear en tubos de ensaye:
Reactivo
proteinas

BLANCO
de 2.5ml

ESTANDAR
2.5ml

Suero

MUESTRA
2.5ml

0.05ml

patron

0.05ml

2.- Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.
3.- Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la muestras frente al Blanco a 540 nm.
El color es estable durante al menos 2 horas.
Albmina
Etiquete los tubos para blanco, control, estndar, paciente, etc.
Pipetee 1.0 mL del reactivo de trabajo en cada tubo.
Aada 10L de la muestra a los tubos respectivos y mezclar.
Incube por un minuto.
Ajuste el espectrofotmetro a cero con el blanco a 630 nm.
Lea y anote las absorbancia de todos los tubos.
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
Reactivo
de 2.5ml
2.5ml
2.5ml
albumina

Suero patron

0.01ml

Suero problema

0.01ml

OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIN:
Cuestionario.
1.- Cul es la protena plasmtica ms abundante?
2.- donde es sintetizada la albmina?
3.- Cuntas cadenas polipetida y cuantos aminoacidos constituyen la albmina?
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4.- funciones de la albmina?
5.- Qu se produce cuando la concentracin de albmina disminuye en sangre
de manera importante disminuyendo la presin osmtica con la consecuente
extravasacin del H2O?
6.- Qu entiende por hipoalbuminemia?
7.- diga 2 patologas que produzcan hipoalbuminemia?
8.- Qu entiende por hiperalbuminemia?
9.- diga un estado patolgico en el que se presenta hiperalbuminemia?
PRACTICA NO. 10.
TRIGLICERIDOS GPO (LIQUIDO)
PRINCIPIO:
Trigliceridos
Glicerol + ATP

lipasa
GK

GliceroL-1-fosfato + O2

glicerol + acidos grasos


gliceroL-1-fosfato + ADP
GPO

DAP + H2O2

H2O2 + 4-AA + 4-clorofenol POD quinoneimina + HCl + 2 H2O


Los trigliceridos en suero son hidrolizados a glicerol y cidos grasos libres por
accin de la lipasa. En presencia de ATP y glicerol cinasa (GK) el glicerol se
convierte a glicerol-1-fosfato. El glicerol-1-fosfato es despues oxidado por la
enzima glicerol-fosfato oxidasa (GPO) para obtener peroxido de hidrogeno. La
condensacion del peroxido con 4-clorofenol y 4-aminofenazona en presencia de
peroxidasa (POD) produce una quinineimina de color rojo seco el cual se absorbe
a o cerca de 500 nm. La intensidad del complejo coloreado formado es
directamente proporcional a la cantidad de trigliceridos en la muestra.
REACTIVOS:
Buffer de Good (pH 7.3-7.5) 50 mM, 4-clorofenol, ATP 0.5 mM, sal de magnesio 12
mM, 4-aminofenazona 0.3 mM, glicerol cinasa (microbial) > 250 U/L, glicerolfosfato oxidasa (microbial) > 200,000 U/L, surfactantes, estabilizadores y
preservativos, incluido azida de sodio (0.1 %).
MATERIAL:
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Reactivo de trigliceridos GPO


Pipetas automatizadas
Tubos de ensayo
Cronometro
Bloque termico
Espectrofotometro capaz de leer a 500 nm
Estandar o calibrador de trigliceridos

PROCEDIMIENTO MANUAL:
1. Identificar los tubos: blanco, estandar control, etc.
2. Pipetear 1 mL de reactivo en cada tubo.
3. Agregar 10 uL de suero a sus respectivos tubos. Mezclar suavemente.
4. Incubar todos los tubos por 5 minutos.
5. Ajustar el espectrofotometro a 0 con el blanco (500-520 nm)
6. Leer y anotar absorbancias. El color final es estable por 60 minutos.
VALORES ESPERADOS:
44-148 mg/dL. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores
de referencia.
CALCULOS:
NOTA.- Los trigliceridos se expresan en mg/dL o mmol/L
mg/dL= Abs. (desconocido)/ Abs. (estandar) x concentracion std trigliceridos
mg/dL.
Para convertir el valor a mmol/L, se debe multiplicar el resultado por 0.0113.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIN:
PRACTICA NO. 11.
COLESTEROL
PRINCIPIO.
col. esterasa
steres de colesterol.

colesterol + ac. Grasos


Col. oxidasa

Colesterol + H2O

colesterol 3-one + H2O2

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H2O2 + 4-AAP + fenol

POD

quinoneimina + 4H2O

La intensidad de color rojo es directamente proporcional al colesterol total en la


muestra cuando se lee a 500 nm.
REACTIVOS
4-AAP. 3 mM: colesterol estearasa - 150 u/l ; colesterol oxidasa 150U/l: fenol 15
mM; buffer fosfato pH 6.8; estabilizadores no reactivos y preservativos.
El reactivo esta listo para usarse.
No se debe utilizarse si esta turbio.
INTERFERENCIA
Algunas drogas y sustancia pueden afectar la determinacin de colesterol.
Material
Reactivo de colesterol
Pipetas automatizadas
Tubo de ensayo
Cronometro
Bloque trmico
Espectrofotmetro capaz de leer a 500 nm.
PROCEDIMIENTO (MANUAL)
1. identificar los tubos: blanco, estndar. Control, etc.
2. pipetear 1 ml de reactivo en cada tubo. Precalentar a 37C por lo menos por
5 min.
3. agregar 10 UL de suero a sus respectivos tubos.
4. incubar los tubos por 5 min.
5. ajustar el espectrofotmetro a 500 nm.
6. leer y anotar la absorbancia.
VALORES OBSERVADOS
Colesterol deseable
200 mg/dl
Colesterol alto
240mg/dl
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
CALCULOS
ABS= ABSORVANCIA
Mg / dl =

abs. (Desconocido)

* Concentracin de colesterol mg/ dl

Abs. (Estndar)
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS:
CONCLUCIN:

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