ENZIMAS

 Son macromoléculas que actúan como biocatalizadores,

capaces de acelerar las reacciones químicas en ambos
sentidos, sin consumirse en ella, ni formar parte de los
productos

 Las sustancias sobre las que actúan se llaman Sustratos y el

lugar donde se une éste sustrato a la enzima se llama Sitio
Activo
.
Como?
 Disminuyen La Energía de Activación que es la mínima
energía que se necesita para iniciar una reacción

 Aumenta la velocidad de reacción que se define como la

cantidad de producto que se forma por unidad de tiempo
Características
 Son especificas: una enzima solo puede catalizar un tipo de reacción,
se unen solo a un tipo de sustrato o grupo de sustratos emparentados
estructuralmente

 Son eficientes: una misma enzima puede catalizar miles de reacciones

químicas del mismo tipo, una tras otra. No se consumen en la reacción
(son reciclables)

 Tienen gran capacidad catalítica: mínimas cantidades son suficientes

para lograr una transformación

 Su actividad depende de la Temperatura y del pH: a una T y pH óptimos

las enzimas presentan su mayor actividad, y altas temperaturas
pueden desnaturalizarse

 Tienen sitios activos o dominios catalíticos específicos que se unen al

sustrato , a la coenzima, etc
Modelos de Union Ez-S
 Para formar el complejo ES, el sustrato se fija a un
lugar definido de la Ez llamado Sitio Activo
 El sitio activo es una agrupación de AA,
distribuidos espacialmente de manera precisa
 La U Ez-S se da por enlaces no covalentes (pte H,
VW, etc)
 A fines del s. XIX Fisher emitió la hipótesis de
llave-cerradura (hay complementariedad
estructural pero exige una estructura rígida)
 Actualmente la hipótesis de Koshland de
adaptación o ajuste inducido (considera a la Ez
como una estructura flexible)
El centro ó sitio activo
comprende

 un sitio de unión formado por los

aminoácidos que están en contacto
directo con el sustrato y
 un sitio catalítico, formado por los
aminoácidos directamente implicados
en el mecanismo de la reacción
Nomenclatura
Nomenclatura
 Se les designa el sufijo asa xej ureasa, amilasa
 Se pueden denominar según el tipo de reacción catalizada xej
deshidrogenasa, descarboxilasa
 Algunas Ez tienen nombres arbitrarios xej tripsina, pepsina
 La comisión de Enzimas (EC) de la UNION INTERNACIONAL DE
BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR (IUBMB) otorga un código
numérico específico a cada ez. El mismo consta de 4 números:
-el 1° número corresponde a una de las 6 clases principales según el
tipo de reacción catalizada
-el 2° a la subclase
-el 3° a la subsubclase
-el 4° es el número de orden de la ez en su subclase
xej: la creatinkinasa es EC 2.7.3.2 (transferasa ,gpo transferido es
fosfato, aceptor es gpo amino, n° de orden en el grupo 2)
Los 6 clases de la clasificación
internacional son:
 Oxirreductasas: reacc de óxido reducción
 Transferasas: transferencia de un grupo
funcional
 Hidrolasas: ruptura de una enlaces
mediante adición de agua
 Liasas, ruptura no hidrólitica de enlaces
 Isomerasas: transformación en su isómero
 Ligasas: formación de enlaces. Requiere
energía (ATP)
Regulabilidad de las
Enzimas
Regulación de la catálisis enzimática
Disminución o
aumento de la
eficacia
Estos mecanismos implican
el CAMBIO en la
CONFORMACIÖN
TRIDIMENSIONAL del sito
catalítico haciendo que este
permita o no la entrada de
sustrato
Son mecanismos de
regulación RAPIDA porque
operan sobre la enzima que
ya ha sido sintetizada
Disminución o
aumento de la
concentración
Estos mecanismos implican
el aumento o disminución
en la velocidad de
SINTESIS de una enzima
Son mecanismos de
regulación LENTOS, ya que
dependen de la síntesis de
la nueva proteína
ADN…ARN…Ribosoma…
Síntesis Proteica
¿Cuales son éstos mecanismos?

Disminución o
Disminución o
aumento de la
aumento de la eficacia
concentración

-Alosterismo
-Modificación covalente
-Feed Back Negativo Inducción y represión
-Zimógenos
-Complejos
multienzimáticos
-Compartimentalización
 Alosterismo
Sitio catalítico Sitio catalítico
con con
Conformación Conformación
desfavorable favorable

Modulador Enzima off Enzima on Enzima-Sustrato

alostérico
Kinasa: fosfotransferasa

Fosfatasa: hidrolasa
Feedback o Retroalimentación
Complejos Multienzimáticos

Se unen las distintas enzimas en

una estructura cuaternaria

Los sitios activos de cada enzima

forman como un tubo, de manera
que es más fácil para el sustrato
acceder a cada sitio activo
Zimógenos
Inducción y Represión
MODO DE ACCIÓN DE LAS
ENZIMAS
H2O2  H2O + O2

Perfil energético de una Perfil energético de una

reacción espontánea reacción catalizada
MODO DE
ACCIÓN DE
LAS ENZIMAS

 La acción de los catalizadores consiste en disminuir la

Energía de activación

 Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que

disminuyen la Ea aún más que los catalizadores inorgánicos.

 Por ej, la descomposición del agua oxigenada (H2O2) puede

ocurrir
– sin catalizador E a= 18 Kcal/mol
– con un catalizador inorgánico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
– con una enzima específico (catalasa) Ea= 6 Kcal/mol

 Así, se puede calcular que el platino acelera la reacción 20.000

veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces.
Cinética Enzimática
 Es la rama de la enzimología que estudia la
velocidad de las reacciones catalizadas por las
enzimas así como los factores externos que
influyen sobre dicha velocidad

 La velocidad de una reacción es la cantidad de

sustrato transformado en producto por unidad de
tiempo
 Factores que modifican la cinética
enzimática
 pH
 Temperatura
 Concentración de la Enzima
 El aumento progresivo de la concentración
de sustrato
 La presencia o no de inhibidores
D) pH
C) Temperatura
 Km= constante de Michaelis

Es la concentración a la cual la

velocidad de reacción alcanza un
valor iguala la mitad de la máxima

En condiciones definidas de medio,

pH, temp, etc la km tiene un valor fijo
y sirve para caracterizar a la Ez
La constante de Michaelis-Menten (KM)
es un parámetro cinético importante por
varias razones:

 KM es la concentración de sustrato para la cual

la velocidad de reacción es la mitad de la
velocidad máxima.

 El valor de KM da idea de la afinidad del enzima

por el sustrato:
– a menor KM, mayor afinidad del enzima por el
sustrato, y
– a mayor KM, menor afinidad.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: se mide en
términos de velocidad

 UI: los µmoles de sustrato que la enzima

transforma en un minuto.

 Katal: los moles de sustrato que la enzima

transforma en un segundo

 Cuando se conoce el PM E pura y el número de

centros activos por molécula de enzima, las
medidas de actividad enzimática permiten calcular
el número de recambio: número de moles que la
enzima convierte por cada centro activo y por
unidad de tiempo.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: se mide en
términos de velocidad

 La velocidad de una reacción catalizada por

un enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es
necesario purificar o aislar el enzima.

 La medida se realiza siempre en las

condiciones óptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan
concentraciones saturantes de sustrato. En
estas condiciones, la velocidad de reacción
observada es la velocidad máxima (Vmax).

 La velocidad puede determinarse bien

midiendo la aparición de los productos o la
desaparición de los reactivos.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: se mide
en términos de velocidad

 Unidades:

– UI (unidad internacional): micromoles de

sustrato transformados por minuto
– Katal: moles de sustrato transformados por
segundo
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: se mide en
términos de velocidad

 La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición

de los productos o la desaparición de los reactivos.
- A medida que la reacción transcurre, la
velocidad de acumulación del producto va
disminuyendo porque se va consumiendo el
sustrato de la reacción
- Para evitar esta complicación se procede a
vo medir la velocidad inicial de la reacción
(v0).
- La velocidad inicial de la reacción es igual a
la pendiente de la curva de avance a tiempo
cero
- De esta forma, la medida de v0 se realiza
antes de que se consuma el 10% del total del
sustrato, de forma que pueda considerarse
la [S] como esencialmente constante a
lo largo del experimento.
E) Presencia o ausencia de inhibidores
 Un inhibidor competitivo
 Se parece estructuralmente al sustrato

 Compite con el sustrato original por el sitio catalítico

 Al incrementar la concentración del sustrato, el inhibidor es

desplazado del sitio catalítico por el aumento de sustrato

 Como consecuencia de lo anterior se logra alcanzar la

velocidad máxima

 La Km de la reacción con el inhibidor competitivo y sin

inhibidor es distinta
Un inhibidor no competitivo
 NO se parece estructuralmente al sustrato

 NO compite con el sustrato original por el sitio catalitico

 Al incrementar la concentración de sustrato, el inhibidor NO es

desplazado del sitio catalítico por el aumento del sustrato pues
NO SE UNE AL SITIO CATALITICO. Por lo general se une al
sitio alostérico cambiando la conformación 3D del sitio
catalítico pero no cambia su estructura química

 Como consecuencia de lo anterior no se logra alcanzar la

velocidad máxima

 La Km de la reacción con inhibidor y sin inhibidor es la misma

Ejemplos
 Irreversible: venenos organofosforados
Isoenzimas
ENZIMOLOGIA
CLINICA
Las Ez presentes en plasma pueden ser:

- específicas del plasma: cumplen su función en el plasma

Ej: trombina y plasmina, ferroxidasa

- no específicas del plasma: no tienen función definida en plasma.

Normalmente están en muy baja cc en el plasma

*Ez extracelulares o de secreción: aumentan en sangre

x alteraciones q permiten el pasaje de la glándula al líq
intersticial (obstrucción, inflamación del conducto, etc)
Ej: amilasa, lipasa

*Ez intracelulares: participan en el metabolismo y se

encuentran distribuidas en los distintos compartimentos celul.
La Memb. Plasmática normal no permite el paso de Ez
Enzimas
Cardíacas
Cardiopatía Isquémica
Poco O2 a miocardio

Glucolisis Contractibilidad y
anaerobia Falla bomba Na/K distensibilidad
alteradas

Lactato Salida K+ a
espacio extracel
Arritmia
Acidosis
Dolor

Necrosis

Liberacion de Ez al
plasma
LDH: lactato deshidrogenasa
Cataliza la reducción de piruvato a lactato mediante
el NAD
 Tiene estructura cuaternaria tetramérica (combinación de los
monómeros H (Heart) o M (muscle)
 Las 5 isoenz se clasifican según su desplazamiento electroforético
en:
LDH-1 HHHH Miocardio
LDH-2 HHHM Miocardio y GR
LDH-3 HHMM Cerebro y Riñón
LDH-4 HMMM Hígado y músc. esquelético
LDH-5 MMMM Músc. Esquelético

 La cc de LDH en los tejidos es 500 veces superior a la del plasma

 En el IAM, la LDH se eleva en plasma entre las 8 y 12 hs después
de la aparición del dolor, alcanzando entre el 2° y 6° día valores de
3 a 5 veces superiores. Luego, su cc disminuye lentamente y vuelve
a su valor a los 8-15 días
Creatinquinasa (CK)
 Cataliza la reacción que recupera, a partir del fosfato de creatina, el
ATP consumido durante la contracción muscular
 Tiene estructura cuaternaria dimérica, subunidades B
(brain) y M (muscle).
 Las 3 isoez se clasifican según movilidad electroforética
en:
CK-1 BB cerebro
CK-2 MB miocardio
CK-3 MM musculo, cerebro y miocardio
 En el IAM, la CK total en plasma se eleva entre las 4 y 8
hs despues del inicio de la lesión y aprox a las 24 hs
alcanza una cc máxima, disminuyendo hasta 5 días
despues
 La CK-MB alcanza un pico entre 12 y 15 hs después del
dolor y vuelve a valores al 2° y 3° día
 La especificidad diagnóstica de la CK es baja xq tb se
eleva en distrofia muscular, fiebre, hipotiroidismo,
alcoholismo, inyecciones musculares y ciertos fármacos
Enzimas
Hepáticas
Se elevan de 20 a 50 veces x encima del
lím sup de referencia en las hepatitis víricas
y tóxicas. (no es proporc al daño)

Elevaciones menores en MNI, colestasis

intrahepática, hepatitis crónica y
alcoholica,dengue y ciertos farmacos

En algunas enfermedades hepáticas sus

valores están normales ej: hemocromatosis
 Fosfatasa alcalina
 Se localiza en casi todos los tejidos principalmente en:
-epitelio intestinal: participa del transporte de lípidos
-osteoblastos: interviene en el proceso de remodelación ósea
-placenta: sobretodo en el 3° trimestre
-hígado: en las memb. de los sinusoides y canalículos
 En plasma provienen fundamentalmente del hígado y huesos
 Para confirmar el origen hepático se dosan otras Ez tb como
GGT y 5’NT
 Las mayores elevaciones de FAL se producen en las
obstrucciones extrahepáticas y en el cáncer de cabeza de
páncreas (superando hasta 10 veces los niveles superiores de
referencia)
 En las enf. Oseas, la FAL aumenta cuando se produce
regeneración (activ. Osteoblástica) no cuando hay destrucción
xej: aumenta en raquitismo, enf. de Paget y sarcoma
osteogénico
 Glutamiltranseptidasa (GGT)
 Los niveles en plasma se elevan
especialmente en colestasis, ictericias
obstructivas y enf. Infiltrativas y tb esteatosis,
hepatitis infecciosas, medicamentos
(warfarina, fenobarbital, fenitoína), etc

 Se usa para discernir el origen de una FAL alta

 Es el mejor marcador del alcoholismo

(disminuye en abstinencia y aumenta al
reincidir)
 5’ Nucleotidasa
 Se eleva en las colestasis, obstrucciones hepáticas y
lesiones inflitrativas, y en menor grado en hepatitis virales

 Es menos sensible que la FAL pero más específica porque

no se ve alterada por enf. Oseas

 También se usa, junto a la GGT, en los enfermos

sometidos a quimioterapia ya que su síntesis no es influída
por fármacos

 En niños reemplaza al dosaje de FAL porque esta está

influenciada por el crecimiento oseo
Enzimas Obstrucción Embarazo Osteopatía
Biliar

FAL A A A

5’NT A N N

GGT A N N
Enzimas
Pancreáticas
Amilasa
 Se encuentra en varios tejidos: páncreas, glándulas
salivales, intestino delgado, riñon, glandulas sudoríparas,
ovarios, etc pero en glánd. salivales y pancreas es donde se
encuentran en mayor proporción

 Su dosaje es útil en pancreatitis aguda. Aumenta dentro de

las 24 hs del inicio del dolor (detectable a partir de las 3 hs)

 Vuelve a la normalidad entre los 2 y 7 días, en cambio en

orina se mantiene hasta 10 días después

 No es específica de pancreatitis aguda porque se eleva en

otros procesos (peritonitis, parotiditis, ulcera, apendicitis
perforada, etc)
Lipasa
 Se localiza fundamentalmente en pancreas
pero tb en hígado y estómago
 Se resorbe en túbulos renales tras la
filtración glomerular x lo que no se
encuentra en orina
 En la pancreatitis aguda, se mantiene alta
hasta 2 sem después
 Puede aumentar tb en: paratoditis, ulcera,
obstrucción biliar, etc