Tinciones y Medios

de Cultivo
Tinciones

 Las tinciones consisten en

preparaciones acuosas de
colorantes o grupos de
colorantes que proporcionan
una variedad de colores a los
microorganismos, tejidos u
otras sustancias de
importancia biológica.
 Presencia, características,
morfología, tamaño y
distribución.
Tinciones

 Índice de refracción:
bacterias y microorg =
Porta Obj.
Tinciones
 Las tinciones son soluciones que consisten en un solvente (agua o
etanol) y una molécula coloreada (un derivado de benceno), el
cromógeno (porción coloreada = cromóforo).
 Los colorantes pueden ser básicos, con el cromóforo cargado
positivamente como el cristal violeta, el azul de metileno, la
safranina, el verde malaquita y la fucsina básica.
 Los colorantes ácidos, con el cromóforo cargado negativamente,
son el rojo Congo, el rosa de Bengala y la eosina.
Tinciones

 La estructura química básica de la

mayoría de los colorantes es el
anillo de benceno.
 Los colorantes difieren unos de
otros en el número y el
ordenamiento de estos anillos y en
la sustitución de los átomos de
hidrogeno con otras moléculas.
 En teoría, ciertos radicales
químicos tienen la propiedad de
absorber la luz a diferentes
longitudes de onda y actúan así
como prismas químicos.
Tinciones. Se pueden clasificar en:

 T. simples:
 Único colorante
 Presencia, tamaño, morfología y
tipo de agrupación.
 Azul de metileno 1%, 2 min.
 Tinta china, como material de
contraste, Cryptoccocus en LCR
Tinciones. Se pueden clasificar en:

 T. diferenciales:
 Más de un colorante
 Para teñir microorganismos específicos o componentes del material
celular
 Gram: La tinción de Gram de una preparación que se observa a 1000
aumentos y en inmersión permite la diferenciación de las bacterias en
función a su morfología (cocos/basilo), su capacidad tintorial
(grampositivos/gramnegativos) y su agrupación
(cadenas/recimos/letras chinas). El límite de sensibilidad de esta
técnica es de unas 105 bacterias por ml.
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
SINDROME MICROORGANISMO
 Infección Urinaria  E. Colli, Proteus, Klebsiella
 Gastritis  Helicobacter pylori
 Enteritis  Salmonella, Shigella,
Campylobacter, Yersinia,
Echerichia, Vibrio, Clostridium

 S. neumoniae, S. aureus y
 Tracto respiratorio inferior H. influenzae

 Neisseria meningitidis,
 Meningoencefalitis neumococo, listeria,
Heamophilus
 Infecciones
cutáneo/mocusas  S aureus.
 Aparato genital  Supuradas (gonococo,
Chlamydia)
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
Tinción de Gram
 Ziehl-Neelsen
 BAAR. Micobacterias y otros microorganismos acidorresistentes.
 Poseen paredes bacterianas con ácidos grasos de cadenas largas
(micólicos) y ceras que las hacen resistentes a la decoloración.
 Decolorante más débil, Nocardia, Rhodoccocus, Cryptosporidium, Isospora
 Kinyoun, método frío, Tergitol.
 T. Wright-Giemsa
 Para detectar parásitos sanguíneos
 Cuerpos de inclusión víricos y por Clamidias, y los generos Borrelia,
Toxoplasma, Pneumocyitis y Rickettsia.
Tinciones. Se pueden clasificar en:
 T. especiales
 T. de capsulas: de Hiss,
 T. de endosporas: de Wirtz-Conklin
 T. de flagelos: Leifson, yodo
 T. específicas
 Anticuerpos marcados con una molécula fluorescente.
 Se detecta la presencia de fluorescencia del microorganismo
 T. directas con fluorocromos
 Naranja de acridina, auramina-rodamina, blanco de calcofluor
 t. indirectas con inmunofluorescencia.
 Isotiocianato de fluoresceína (FITC)
Medios de cultivo

 Es una mezcla equilibrada de nutrientes y otros componentes que

permiten el crecimiento de microorganismos in vitro.
 Se obtiene un número suficiente de microbios que permitirá:
 Determinar la presencia o ausencia de microoganismos y hacer
recuento de los mismos
 Identificar microorganismos
 Determinar la sensibilidad a antimicrobianos
Medios de cultivo

 En términos generales todos los medios de cultivo están compuestos

por:
 Una base mineral, nutrientes inorgánicos
 Macronutrientes: K Mg Ca Fe
 Micronutrientes: Mn Co, Cu, Zn
 Requerimientos específicos
 Una suplementación de la base mineral con:
 Fuente de C, N, S y factores de crecimiento
Medios de cultivo

 Otros constituyentes de uso habitual:

 Agente Gelificante
 AGAR
 Gelatina
 Extractos
 Carbohidratos
 Sangre, Suero, plasma, Peptonas,
 Indicadores de PH
 Otros: Bilis y sales biliares, Agentes reductores y Colorantes.
Medios de cultivo

Según consistencia física Según su composición qui.

 Caldos  Medios definidos o sintéticos
 Medios semisólidos  Medios complejos
 Medios sólidos  Medios enriquecidos
Medios de cultivo
 Clasificación según su función.
 Medios generales: permiten el crecimiento de una amplia variedad
de microorganismos.
 Medios diferenciales: permiten distinguir entre microorganismos en
función de su crecimiento en dicho medio. Por ejemplo, McConkey
permite distinguir fermentación de lactosa, color rosado. Mientras
que las no fermentadoras aportan un color amarillo.
 Medios selectivos: permiten el crecimiento de un determinado
grupo de microorganismos pero no de otros. McConkey posee sales
biliares y cristal violeta en su composición. Inhibe el crecimiento de
GP
 Medios de enriquecimiento: Permiten el crecimiento de un
determinado micoorganismo, sin inhibir completamente el
crecimiento para tu familia
Tinciones

 Todos los colorantes biológicos

tiene alta afinidad por el
hidrógeno.
 Dado que el oxígeno suele tener
mayor afinidad por el hidrogeno
que muchos colorantes, se retiene
color en presencia de aire.
Tinciones