Ultra Violeta-Vis 2019

FUNDAMENTOS DE
ESPECTROSCOPIA
Dr. DANIEL SANCHEZ VACA 2019

Absorption Spectra of Hydrogen
Espectro de emisión discreto
Discrete Absorption Spectrum

Slit
Gas Hidrógeno
Film
Fuente de luz
blanca Prisma
Película fotografica
¿QUÉ ES LA ESPECTROSCOPIA?
* La espectroscopia es el estudio de la interacción entre la
radiación electromagnética y la materia, con aplicaciones en
química, física y astronomía, entre otras disciplinas científicas.
El análisis espectral en el cual se basa, permite detectar la
absorción o emisión de radiación electromagnética a ciertas
longitudes de onda, y relacionar éstas con los niveles de energía
implicados en una transición cuántica.
LOS MÁS USADOS
Los métodos espectrométricos, más ampliamente

utilizados son los relacionados con la radiación
electromagnética, la cual adopta varias formas como:
• La luz
• El calor
• Rayos gama
• Rayos X
• Radiaciones ultravioleta
• Microondas y
• Radiofrecuencia
RADIACCION ELECTROMAGNÉTICA
CARACTERÍSTICAS DE LA ONDA
ELECTROMAGNÉTICA
• Amplitud (A): Desplazamiento máximo de un punto respecto
de la posición de equilibrio (punto en el que la onda pasa de
positiva a negativa y viceversa)
• Longitud de onda (λ): Distancia entre dos puntos análogos
consecutivos. Se mide en metros (m). | λ = c / f | f = c / λ
• Frecuencia (f): Número de ciclos o vibraciones por unidad de
tiempo. Se mide en herz (Hz).
• Período (T): Tiempo invertido en efectuar un ciclo o vibración
completa. | T = 1 / f | f = 1 / T
• Velocidad (v): Velocidad con que se propaga la onda. | c = 3
x108 ms. | v = λ x f
.
EFECTO DE LA ONDA ELECTROMAGNÉTICA EN OTROS
MEDIOS
Ondas electromagnéticas
Se propagan por el espacio sin necesidad de un
medio, pudiendo por lo tanto propagarse en el
vacío.
EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
EL ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
ONDAS EN EL ESPACIO NO LIBRE
Hay que considerar los efectos del ambiente

en la propagación de las ondas.
1. Reflexión
2. Refracción
3. Difracción
REFLEXIÓN
De la misma forma que las ondas de luz se reflejan en un espejo,
las ondas electromagnéticas son reflejadas por cualquier medio
conductivo como el metal o la superficie de la tierra
REFLEXIÓN
• La reflexión completa solo ocurre para un conductor

teóricamente perfecto y el campo eléctrico es perpendicular
al elemento reflejante.
• Cuando la superficie reflectora no es plana, sino curva, la
curvatura de la onda reflejada es distinta de la onda
incidente.
• Cuando el frente de onda incidente es curvo, y la superficie
reflectora es plana, la curvatura del frente de la onda
reflejada es igual a la del frente de la onda incidente.
REFRACCIÓN
*La refracción electromagnética es el cambio de

direcciones de un rayo al pasar en dirección
oblicua de un medio a otro con distinta velocidad
de propagación.
*La velocidad a la que se propaga una onda
electromagnética es inversamente proporcional a
la densidad del medio en el que los hace.
REFRACCIÓN
ÍNDICE DE REFRACCIÓN
*El grado de flexión o refracción que hay en la

interface entre dos materiales de distintas
densidades es bastante predecible, y depende del
índice de refracción de cada material.
*El índice de refracción no es más que la relación
de la velocidad de propagación de la luz en el
espacio vacio entre la velocidad de propagación de
la luz en determinado material
c
n 
v
DIFRACCIÓN
• Se define la difracción como la modulación o redistribución de

la energía dentro de un frente de onda, al pasar por la orilla
de un objeto opaco,
• Es el fenómeno que hace que las ondas que están viajando
en un camino recto puedan rodear un obstáculo
ABSORCIÓN DE RADIACIÓN
•Absorción atómica
•Absorción molecular
•Absorción inducida por un campo magnético
Dr. DANIEL SANCHEZ VACA 2017
CONTENIDOS
1. Introducción
Métodos Instrumentales de Análisis:
• Métodos ópticos. Clasificación
• Radiación electromagnética
• Espectro electromagnético
2. Absorción de radiación electromagnética
3. Fundamentos de la espectrofotometría de absorción UV-Vis

• Teoría de la absorción de radiación UV-Vis
• Espectro de absorción
• Especies absorbentes. Tipos de transiciones electrónicas
• Bases del color
4. Leyes de la absorción de la radiación: Ley de Lambert – Beer

• Limitaciones y Desviaciones de la Ley de Beer
5. Instrumentación
6. Aplicaciones analíticas
• Características analíticas del método
• Análisis cuantitativo. Detalles del procedimiento experimental
• Aplicaciones al análisis de alimentos 22
Métodos Instrumentales de Análisis
1. Introducción
Están basados en la medida de propiedades químicas y físicas de
los analitos con fines cualitativos y cuantitativos.
La medida se realiza en un instrumento apropiado.
Propiedad medida Método Instrumental Método
Instrumental
Absorción de Espectrofotometría de Óptico

radiación absorción
Emisión de radiación Espectroscopía de emisión Óptico
Potencial eléctrico Potenciometría Electroanalítico
Corriente eléctrica Voltamperometría Electroanalítico
Resistencia eléctrica Conductimetría

23 Electroanalítico
Métodos ópticos de análisis
1. Introducción
Métodos que miden alguna propiedad de la radiación
electromagnética emitida por la materia o que interacciona con ella
Clasificación
Métodos espectroscópicos: Existe intercambio de energía entre la
radiación electromagnética y la materia
•Métodos de absorción: Miden la disminución de la potencia de la
radiación electromagnética debida a la absorción que se produce
en su interacción con el analito
•Métodos de emisión: Miden la radiación electromagnética
emitida cuando el analito es excitado por energía térmica,
eléctrica o radiante
Métodos no espectroscópicos: Se producen cambios en la dirección
o en las propiedades físicas de la radiación electromagnética:
Dispersión
Refracción
Difracción
Rotación óptica 24
La radiación electromagnética
1. Introducción
• La radiación electromagnética es una forma de energía

que se transmite por el espacio a gran velocidad sin
soporte de materia.
• La radiación electromagnética puede describirse según:
la teoría ondulatoria: formada por ondas
la teoría corpuscular: flujo de partículas o corpúsculos

de energía llamados fotones
25
Teoría ondulatoria . Parámetros ondulatorios
1. Introducción
• La radiación electromagnética (REM) se representa como ondas
consistentes en campos eléctricos y magnéticos que están en fase y
que oscilan sinusoidalmente de manera perpendicular entre sí y
respecto a la dirección de propagación
Parámetros ondulatorios
Campo eléctrico
y Longitud de onda λ
Amplitud A
•La potencia P: es la energía del haz que

Campo magnético z Dirección x llega a un área dada por segundo
26
1. Introducción
Teoría corpuscular. Propiedades corpusculares de la radiación electromagnética
La radiación electromagnética es considerada como paquetes discretos

de energía llamados fotones o cuantos.
Dualidad onda-partícula:
Un fotón es una partícula de radiación electromagnética con masa cero y
energía E proporcional a la frecuencia de la radiación ϑ
La energía de un fotón: E = h ϑ
•E = energía del cuanto de radiación: Cal mol-1
•ϑ = frecuencia de la radiación : hertzio (Hz) = ciclos s-1
•h = constante de Planck = 6,624 • 10-27 erg s
λ
Velocidad de la luz : v = ϑ λ
Velocidad de la luz en el vacío: c = 3,00 • 1010 cm s-1 µm = 10-6 m
nm = 10-9 m
Energía de un fotón :E = h ϑ = h c /λ Å = 10-10 m
Cuando λ aumenta, disminuye la energía y frecuencia del fotón
27
Espectro electromagnético
1. Introducción
• Abarca un intervalo muy

amplio de longitudes de
onda o energías.
• Según su λ recibe diferentes
nombres.
• La luz visible, que es la única
perceptible por el ojo
humano, representa
solamente una pequeña
parte del espectro, desde
350-380 a 750-780 nm.
28
Absorción: proceso por el cual una especie, en un medio

transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la
radiación electromagnética.
El fotón absorbido hace pasar a la especie de su estado
fundamental a un estado excitado de energía M*:
M + h ϑ → M*
Tras un corto período de tiempo, aproximadamente 10-8 a 10-9
s, se pierde la energía de excitación, generalmente en forma
de calor, y la especie M vuelve a su estado fundamental:
M* → M + calor
Los métodos de absorción tienen la ventaja de producir poca o
ninguna alteración en el sistema estudiado.
29
Requisitos
Para que la radiación electromagnética sea absorbida por

la materia deben cumplirse dos condiciones generales:
1) Debe haber una interacción entre el campo eléctrico de la
radiación y alguna carga eléctrica de la sustancia
2) La energía de la radiación incidente debe ser exactamente igual a
la energía cuantizada que requiere la sustancia.
Ecuación de Bohr
ΔE = Ef – Ei = h ϑ
h ϑ: energía del fotón absorbido
Ei: energía total de la materia en el estado fundamental
Ef: energía total de un estado permitido de energía superior
o estado excitado. 30
3. Fundamento de la Espectrofotometría de Absorción UV-visible
Método instrumental óptico basado en la medida directa de

la absorción de radiación electromagnética UV-Visible, por las
moléculas del analito contenido en la muestra.
• La región ultravioleta comprende entre 180 y 400 nm y la región

visible comprende entre 350 y 750 nm.
• Las radiaciones UV y visible tienen en común el hecho de que la

absorción de ambas regiones por moléculas, provoca la
excitación de e- de enlace a niveles de E superiores.
• Los picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos de

enlaces de la especie absorbente, base de su aplicación
cualitativa
31
•Un analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas

longitudes de onda características de la radiación
electromagnética UV-Visible.
•En este proceso, la radiación es transferida temporalmente a la
molécula y, como consecuencia, disminuye la intensidad de la
radiación.
•Dicha disminución, debida a la absorción experimentada por el
analito, puede ser cuantificada utilizando diversas magnitudes,
siendo la Absorbancia, A, la más comúnmente utilizada en la
espectrofotometría de UV-Vis.
La aplicación cuantitativa de la espectroscopía de absorción
UV-Vis se basa en la medida, a una λ fija, de la A de una
disolución del analito contenida en una cubeta transparente de
camino óptico b cm. 32
Atenuación de un haz de radiación por Transiciones energéticas en la

una especie absorbente contenida en la molécula del analito
cubeta
E2
Disolución de analito de
concentración c
ΔE2 = E2-E1=hδ2= hc/λ2
Radiación
incidente Radiación E1
P0 transmitida
P ΔE1 = E1-E0=hδ1 = hc/λ1
Cubeta
E0
Espectro de absorción
b Absorbancia A
Transmitancia = T = P/P0
Absorbancia = A = - log T = log P0 /P
λ, nm 33
Transmitancia y absorbancia
Transmitancia: fracción de radiación que una sustancia deja pasar cuando la

REM atraviesa la muestra.
Transmitancia = T = P/P0
T puede valer desde 0 hasta 1. %T puede valer desde 0 hasta 100 %
Absorbancia: es la atenuación de la intensidad de la radiación cuando ésta

incide sobre una muestra. Es la cantidad de energía que la sustancia toma para
pasar a un estado más excitado.
A aumenta a medida que aumenta la atenuación de la radiación.
Cuando no hay absorción de radiación Po= P y entonces A = 0,, mientras que si
se absorbe el 99% de la radiación, solo se transmite el 1%, la A = 2
Absorbancia = - log T = log P0 /P
34
Espectros de absorción
 Un espectro de absorción es una
representación gráfica de la absorbancia
de un analito (o de otra magnitud
equivalente) en función de la longitud de
onda de la radiación λ (o de otro
Absorbancia A
parámetro relacionado con la energía de
la radiación utilizada).
El máximo de absorbancia obtenido en

λmax
el espectro de absorción de un analito, λ nm
nos dará la longitud de onda que
proporciona la mayor sensibilidad
posible, y por tanto será la que se
utilizará en el análisis
espectrofotométrico de dicho analito. 35
Teoría del color
•La sensación de color se produce cuando disminuye

apreciablemente una o más zonas de la región visible.
•Si el ojo recibe luz de todas las λ de la región visible el efecto es luz
blanca.
•El color aparente siempre es el color complementario del que ha
sido eliminado.
•Los colores complementarios son útiles para predecir la λ de
absorción de los compuestos coloreados: una disolución amarilla,
absorberá luz azul 450-480 nm, para analizarla debemos usar luz con
esta λ seleccionada con el monocromador o bien usar un filtro azul,
que transmite esta luz azul
36
complementario
λ (nm) Color absorbido λ (nm) Color observado
380-420 violeta 520 - 550 amarillo-verde
420 - 440 azul-violeta 550 - 580 amarillo
440 - 470 azul 580 - 620 anaranjado
470 - 500 verde-azul 620 - 680 rojo
500 - 520 verde 680 - 780 púrpura
520 - 550 amarillo-verde 380 - 420 violeta
550 - 580 amarillo 420 - 440 azul-violeta
580 - 620 anaranjado 440 - 470 azul
620 - 680 rojo 470 - 500 verde-azul
680 - 780 púrpura 500 - 520 verde
Una disolución se observa de color azul cuando se ilumina con luz policromática, porque
absorbe λ 580-620 nm (anaranjado) y transmite
37 o deja pasar λ 440-470 nm (azul)
Teoría de la absorción molecular. Cambios de energía durante la
absorción
Absorción molecular
• Para cada estado electrónico en
una molécula existen varios VIS UV 3
2
estados vibracionales y para E
1
E 2 0
cada uno de éstos, numerosos
niveles rotacionales.
• Etotal= Eelectrónica + Evibracional + Erotacional
3
2
• La radiación absorbida por la E1

1
0
molécula puede ser utilizada

para originar las diversas
transiciones electrónicas
posibles. 3
2
1
E0
• ΔE = Ef – Ei = h ϑ = Energía del λ1 λ4 λ´1 λ´4 0
fotón absorbido
Diagrama de niveles de energía
38
Especies absorbentes
* Las especies absorbentes: moléculas

orgánicas y aniones inorgánicos que tienen
electrones:
* • en orbitales moleculares σ
• en orbitales moleculares π
• en orbitales no enlazantes n.
n Tipos de transiciones electrónicas : Cuando
absorben fotones de E adecuada se pueden dar
 4 tipos de transiciones electrónicas:
•σ→σ*
• n→ σ *
 • π → π*
• n→ π*
39
Transiciones electrónicas entre niveles de energía moleculares
Sus electrones más exteriores o electrones de enlace pueden

Especie ser elevados a niveles de E más altos al incidir sobre ellas una
absorbente radiación electromagnética apropiada
• Grupo atómico presente en una molécula que lleva

asociada una banda de absorción electromagnética:
C=C; C=O; C=N.
Grupo • Especies con grupos funcionales con enlaces π.
cromóforo • Grupos cromóforos →dobles y triples enlaces.
• Bandas en el UV cercano y visible.
• Etileno, carbonilo, éster, amida, nitro…
Grupo Grupos que no producen por sí mismos bandas de absorción,

pero intensifican la de los grupos cromóforos: C-Br; C-OH
auxocromo
Bandas de campo Responsables del color de muchos iones y compuestos de

ligando metales de transición
40 que poseen orbitales d y f
4. Leyes de la absorción de la radiación
Ley de Lambert-Beer
Al interaccionar la radiación electromagnética con la materia, tiene lugar
la absorción si la ϑ de la radiación coincide con la energía necesaria para
que el sistema pase a un nivel de energía superior y permitido
h ϑ = E2 - E1
Las dos leyes fundamentales que rigen el comportamiento de la fracción
de la radiación incidente absorbida al pasar a través de una muestra dada
son:
Ley de Lambert: predice el efecto que produce el espesor del medio-

muestra sobre la fracción de radiación que se absorbe.
Ley de Beer: establece el efecto de la concentración del medio-muestra

sobre la fracción de radiación que se absorbe.
41
Ley de Lambert-Beer: muestra cómo la absorbancia es directamente

proporcional a la longitud b de la trayectoria a través de la solución y a la
concentración c del analito o especie absorbente.
A  a·b·c A   ·b·c
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades L/cm·g, si c=g/L)

b: longitud del camino que recorre la radiación a través del medio absorbente.
c: concentración expresada en g/L (mg/L, ...).
Si la concentración c viene expresada en mol/L, la cte de proporcionalidad se

denomina absortividad molar y se representa por  (unidades L/cm·mol).
La absortividad molar, , es característica de cada especie a una λ
determinada.
42
-Disoluciones que contienen varias especies absorbentes:
Para cada λ: Atotal =∑Ai = A1 + A2 + .... + An
Como A =  · b · c
A = 1 · b · c1 + 2 · b · c2 + …. +n · b · cn
Siendo 1, 2, …, n los componentes absorbentes.
Potencia del haz

Ley de Lambert- Beer antes de
atravesar la
muestra
Absortividad
Absorbancia molar Concentración molar
P0 de las especies
=bc
total medida
a la longitud
AT,l = log absorbentes
P
de onda l
camino
óptico
Potencia del haz

P después de
P0
= Transmitancia (T) atravesar la A=bc
muestra
A = -logT
44
Ley de Lambert- Beer
Comprobación de la Ley de Beer. Curva de calibrado
• La Ley de Beer debe comprobarse siempre antes de utilizarla para un

análisis cuantitativo exacto.
• Para ello se preparan una serie de disoluciones estándar del analito
en el intervalo en el que se supone que se encuentra la muestra.
• Se registra el espectro de absorción utilizando una de ellas.
• Se mide la absorbancia de dada una de las disoluciones a la λ del
máximo de absorción del analito con una longitud de cubeta dada,
generalmente 1 cm.
• Se representan las absorbancias en función de las concentraciones.
• Si la ley de Beer se cumple en todo el intervalo de c estudiado: A =
εbc se obtiene una línea recta en todo el intervalo, que pasa por el
origen.
• La recta obtenida se llama Curva de calibrado.
• Pueden aparecer desviaciones positivas o negativas a partir de una
determinada concentración debido a Limitaciones de la ley de Beer
y/ó a posibles errores experimentales cometidos
45
Desviaciones de la Ley de Beer

La proporcionalidad directa entre absorbancia y concentración cuando b es
constante, sólo se cumple en un intervalo de concentraciones del analito.
Fuera de dicho intervalo se observan en las curvas de calibrado desviaciones
positivas o negativas de la linealidad debido a las limitaciones de la Ley de Beer:
A
respuesta debida
a la autoabsorción
A= εbc o a la luz escasa que
atraviesa la cubeta
Intervalo
respuesta del blanco,
lineal
interferencias o escasa
sensibilidad
concentración
Para la aplicación cuantitativa, las medidas 46

de A de la muestra deben estar incluidas en
el intervalo lineal
Limitaciones de la Ley de Beer
• Limitaciones propias o reales

– Variación de la absortividad con el índice de refracción n, que
varía con la c.
– Para c < 0,01 M n= cte: Ley de Beer se cumple.
• Incumplimiento de las premisas de la ley de Beer.

– Interacciones entre el soluto y la radiación producidas por
mecanismos distintos al de absorción.
– Interacciones entre las especies absorbentes del soluto .
– Radiación no monocromática.
47
5. Instrumentación
Componentes básicos de los espectrofotómetros
Fuente de
Selector Cubeta Dispositivo
energía
de λ muestra
Detector de lectura
radiante
Muestra
Monocromador Detector
Fuente de
radiación
Luz Luz
compuesta monocromática I
I0 b
48
5. Instrumentación
Fuente de energía radiante

Características
Continua. Estable. Intensa
Lámpara de Para λ en
Lámpara de
intensidad lumínica
Tungsteno o Wolframio el Visible

Deuterio
300 500 700 900 1100

Para λ en el
Ultravioleta longitud de onda (nm)
49
5. Instrumentación
Selector de λ
Características
•longitud de onda de máxima transmisión

•ancho de banda efectivo
Monocromadores de prisma
Filtros de corte
Monocromadores de red
Filtros de absorción
Filtros de interferencia
Fotómetros Espectrofotómetros
50
5. Instrumentación
Cubetas
Características
Absorción mínima a la longitud de onda de trabajo

Colocar con caras transparentes perpendiculares a la dirección del haz incidente
Sílice Vidrio o plástico
Ultravioleta Visible
51
5. Instrumentación
Detectores
Su función es convertir la respuesta del instrumento en una señal

medible.
Características
•deben responder a un amplio rango de longitudes de onda

•deben dar respuesta rápida
•deben ser sensibles a bajos niveles de radiación
•deben producir señal eléctrica fácilmente amplificable
•la señal debe ser proporcional a la potencia radiante
Fototubos Fotomultiplicadores Fotodiodoarray

52
5. Instrumentación
Espectrofotómetros
Haz sencillo
Fuente de Sistema Cubeta de Registrador

radiación selector de Fotodetector Amplificador o PC
λ muestra
Cubeta de
referencia
Doble haz
Cubeta de Fotocelda 1
muestra
Fuente de Sistema Amplificador Registrador
selector de diferencial o PC
radiación λ
Cubeta de
Fotocelda 2
referencia
53
La espectrofotometría de absorción molecular se puede aplicar tanto al análisis

cualititativo como cuantitativo.
Análisis cualitativo: Los espectros de la muestra se comparan con los de los

correspondientes estándares, con el fin de identificar las bandas de absorción
coincidentes. Este tipo de análisis es más frecuente en UV e IR para identificar
compuestos orgánicos y más rara vez se utiliza en Vis.
Análisis cuantitativo: Está basado en la ley de Lambert-Beer en el intervalo de

concentraciones de cumplimiento de la ley.
•Se establece la curva de calibrado usando estándares y la absorbancia de la
muestra de concentración desconocida se remite a la curva (a veces basta con un
solo estándar).
•En espectrofotometría Vis, el analito se suele incorporar a una especie compleja
que presente bandas de absorción intensas.
•Siempre que sea posible se debe medir la absorbancia a λmax
54
Características de los métodos espectrofotométricos
 Amplia aplicabilidad: Análisis orgánico e inorgánico

 Elevada sensibilidad: los límites detección de 10-4 a 10-5 M.
 Selectividad de moderada a alta.
 Buena exactitud: errores de concentración 1-5% o incluso menores.
 Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotométricas.
 Se prestan a una fácil automatización.
Campo de aplicación
 Especies absorbentes: compuestos orgánicos que contengan grupos
cromóforos y especies inorgánicas como son los metales de transición.
 Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo
para producir un compuesto absorbente.
55
Metodología cuantitativa. Detalles del procedimiento experimental
Toma y tratamiento de la muestra

•Realizar un espectro de absorción de la muestra
Selección de la •Para obtener máxima sensibilidad, realizar las medidas de A
longitud de onda a una λ que corresponda a un máximo de absorción λmax, ya
que el cambio en la absorbancia por unidad de concentración
es mayor en este punto.
•la naturaleza del disolvente

Control de las variables •el pH de la disolución
que influyen en la absorbancia •la temperatura
•las concentraciones altas del electrolito
•la presencia de sustancias interferentes
Elegir las condiciones para el análisis
 Determinación de •Calibración con patrones de concentración conocida
la relación entre •Método de las adiciones estándar
la absorbancia A a) El método de un solo punto
56
b) El método de las adiciones múltiples
y la concentración c
Calibración con patrones de concentración conocida
•Pocas veces es posible suponer el cumplimiento de la ley de Beer y utilizar un

único patrón para determinar la absortividad molar.
•Comprobar la ley de Beer realizando un calibrado a la λ del máximo de
absorción.
•Se miden las absorbancias de patrones y muestras y se obtiene la ecuación de la
recta de calibrado generalmente aplicando el método de mínimos cuadrados:
• A = mc + b
•Los estándares o patrones de calibración se deben aproximar tanto como sea
posible a la composición final de las muestras reales y deben abarcar un
intervalo razonable de concentraciones del analito.
•La concentración de la muestra se calcula a partir de la ecuación de la recta de
57
calibrado sustituyendo su valor de A y despejando la c correspondiente
Calibración con patrones de concentración conocida
A (l = 508 nm)
A muestra
Analito en la
muestra
58
Método de las adiciones estándar

Cuando se analizan muestras complejas, como alimentos ó cenizas vegetales,
suele ser imposible o muy difícil preparar estándares que se asemejen a las
muestras.
En este caso, el método de las adiciones estándar es útil para contrarrestar los
efectos de matriz.
Método de las adiciones estándar. El método de un solo punto

•Se toman dos porciones de la muestra
•Una porción se mide como de costumbre
•A la segunda porción se le agrega una cantidad conocida de la disolución estándar
de analito
•Ambas respuestas se utilizan entonces para calcular la concentración
desconocida, suponiendo una relación lineal entre la respuesta y la concentración
del analito 59
Método de las adiciones estándar. El método de un solo punto
•Absorbancia de la primera disolución
A1 = K cx
cx concentración desconocida de analito en la 1ª disolución
K constante de proporcionalidad.
•Absorbancia de la segunda disolución

A2 = (K vx cx / v t) +( K v s c s / v t)
vx volumen de la disolución de concentración desconocida de analito,

vs volumen agregado de la disolución estándar de analito,
v t es el volumen total después de la adición y
cs es la concentración de la disolución estándar de analito
cx = A1 v s c s / A 2 v t - A1 vx
60
Método de las adiciones estándar. El método de las adiciones
múltiples
•Varias alícuotas idénticas Vx de la solución desconocida con concentración Cx se
transfieren a matraces volumétricos de volumen Vt.
• A cada uno de esos matraces se le añade un volumen variable Vs de una
disolución patrón del analito, con concentración conocida Cs.
•Después, se añaden los reactivos que originan el color y se diluye cada solución
hasta un volumen Vt.
•Si el sistema químico sigue la ley de Beer,
A i= (ε b Vs Cs / Vt ) + (ε b Vx Cx / Vt ) = K Vs Cs + K Vx Cx
K es una constante = ε b / Vt
•Una gráfica de AI en función de Vs debe originar una recta de la forma
A i = m Vs + b
Donde la pendiente m y la ordenada en el origen b vienen dadas por
m = K Cs y n = K Vx Cx
•El análisis de mínimos cuadrados de los datos se puede utilizar para determinar
m y b; después, es posible calcular Cx a partir del cociente de esas dos cantidades
y los valores conocidos de Vx y Cs
Cx = (Cs / Vx ) ( n/m)
61
Método de las adiciones estándar . El método de las adiciones múltiples
A0 A1 A2 A3
A = mc+b 0 = mc muestra + b Cmuestra = b/m
Concentración añadida del

estándar
Concentración
c1 c2 c3
de la muestra
62
Aplicaciones al análisis de alimentos
• La espectroscopia en la región ultravioleta-visible (UV-Vis) es una de las

técnicas de laboratorio más comúnmente encontradas en el análisis de los
alimentos.
• Ejemplos:
• Cuantificación de macrocomponentes (el contenido total de hidratos de
carbono, por medio del método del fenol-ácido sulfúrico)
• Las estimaciones de enranciamiento (el estado de la oxidación de los
lípidos, por medio del ensayo del ácido tiobarbitúrico)
• Determinación de pigmentos basada en su absorción de radiación en la
zona del visible
Especies que no
• Análisis del contenido de proteínas solubles. absorben en el Visible:
• Determinación de nitritos en jamón de York mediante su reacción
• Determinación de hierro en vinos previa con reactivos
adecuados para dar un
• Determinación de fosfato en bebidas compuesto coloreado
63

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Dr. DANIEL SANCHEZ VACA 2019

Espectro de emisión discreto

Discrete Absorption Spectrum

Los métodos espectrométricos, más ampliamente

Hay que considerar los efectos del ambiente

• La reflexión completa solo ocurre para un conductor

*La refracción electromagnética es el cambio de

*El grado de flexión o refracción que hay en la

• Se define la difracción como la modulación o redistribución de

3. Fundamentos de la espectrofotometría de absorción UV-Vis

4. Leyes de la absorción de la radiación: Ley de Lambert – Beer

Absorción de Espectrofotometría de Óptico

Emisión de radiación Espectroscopía de emisión Óptico

Potencial eléctrico Potenciometría Electroanalítico

Corriente eléctrica Voltamperometría Electroanalítico

Resistencia eléctrica Conductimetría

• La radiación electromagnética es una forma de energía

• La radiación electromagnética puede describirse según:

la teoría ondulatoria: formada por ondas

la teoría corpuscular: flujo de partículas o corpúsculos

•La potencia P: es la energía del haz que

Teoría corpuscular. Propiedades corpusculares de la radiación electromagnética

La radiación electromagnética es considerada como paquetes discretos

• Abarca un intervalo muy

Absorción: proceso por el cual una especie, en un medio

Para que la radiación electromagnética sea absorbida por

Método instrumental óptico basado en la medida directa de

• La región ultravioleta comprende entre 180 y 400 nm y la región

• Las radiaciones UV y visible tienen en común el hecho de que la

• Los picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos de

•Un analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas

Atenuación de un haz de radiación por Transiciones energéticas en la

Absorbancia = A = - log T = log P0 /P

Transmitancia: fracción de radiación que una sustancia deja pasar cuando la

Absorbancia: es la atenuación de la intensidad de la radiación cuando ésta

El máximo de absorbancia obtenido en

Teoría del color

•La sensación de color se produce cuando disminuye

• La radiación absorbida por la E1

molécula puede ser utilizada

* Las especies absorbentes: moléculas

Sus electrones más exteriores o electrones de enlace pueden

• Grupo atómico presente en una molécula que lleva

Grupo Grupos que no producen por sí mismos bandas de absorción,

Bandas de campo Responsables del color de muchos iones y compuestos de

Ley de Lambert: predice el efecto que produce el espesor del medio-

Ley de Beer: establece el efecto de la concentración del medio-muestra

Ley de Lambert-Beer: muestra cómo la absorbancia es directamente

a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades L/cm·g, si c=g/L)

Si la concentración c viene expresada en mol/L, la cte de proporcionalidad se

Potencia del haz

Potencia del haz

Comprobación de la Ley de Beer. Curva de calibrado

• La Ley de Beer debe comprobarse siempre antes de utilizarla para un

Desviaciones de la Ley de Beer

Para la aplicación cuantitativa, las medidas 46

Limitaciones de la Ley de Beer

• Limitaciones propias o reales

• Incumplimiento de las premisas de la ley de Beer.

Componentes básicos de los espectrofotómetros

Fuente de energía radiante

Continua. Estable. Intensa