UNIVERSIDAD NACIONAL ATONOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

ELECTROFORESIS UNICELULAR
ALCALINA
ENSAYO COMETA
EQUIPO: 10

Radicales libres
Los radicales libres son tomos o grupos de tomos que tienen un electrn

desapareado o libre por lo que son muy reactivos ya que tienden a captar un
electrn de molculas estables con el fin de alcanzar su estabilidad
electroqumica.

La vida media biolgica del radical libre es de microsegundos, pero tiene la

capacidad de reaccionar con todo lo que est a su alrededor provocando un
gran dao a molculas, membranas celulares y tejidos.

ESPECIES REACTIVAS DE OXGENO

Son un conjunto de

molculas reactivas
producidas en algunos
procesos metablicos
en los que participa el
oxgeno. Las ROS son
molculas muy
reactivas entre las que
se encuentran los iones
de oxgeno, los
radicales libres y los
perxidos.

Importancia de los radicales libres

Nuestro propio cuerpo produce en cantidades moderadas
radicales libres para luchar contra bacterias y virus por
medio de la fagocitosis.
Los radicales libres aumentan notablemente durante la
ovulacin, la implantacin y a medida que transcurre la
gestacin.
Tambin est relacionado con el aumento de la fluidez y
polaridad de las membranas durante la implantacin.

QU ES EL ESTRS OXIDATIVO?

ESTRS OXIDATIVO
Desequilibrio en clulas debido a un aumento en radicales libres y/o una disminucin
en los antioxidantes.

El problema para la salud se produce cuando nuestro organismo tiene que soportar

un exceso de radicales libres durante aos, producidos por la atmsfera, humo de

cigarrillos y el consumo de aceites vegetales hidrogenados tales como la margarina
el consumo de cidos grasos trans (como los de las grasas de la carne).

Se pueden originar daos en la

clula, como:
Oxidacin en cidos grasos

poliinsaturados
Oxidacin de aminocidos
Oxidacin de Carbohidratos
Dao en el DNA

Antioxidante
Un antioxidante es una sustancia capaz de neutralizar la accin oxidante de los radicales libres
mediante la liberacin de electrones en nuestra sangre, los que son captados por los radicales
libres.

CLASIFICACIN DE LOS ANTIOXIDANTES

Enfermedades relacionadas
con el estrs oxidativo
El estrs oxidativo se presenta en diversos estados
patolgicos en los cuales se altera la funcionalidad
celular, contribuyendo o retroalimentando el desarrollo
de
enfermedades
degenerativas
como
la
aterosclerosis,
cardiomiopatas,
enfermedades
neurolgicas y cncer

Fundamento
Evala el dao del material gentico causado por diferentes

agentes qumicos y fsicos. El dao es representado por un aumento

de fragmentos del ADN que migran fuera de las clulas del ncleo
bajo una forma caracterstica similar a la cola de un cometa; estos
fragmentos son generados por rompimientos del ADN.

IMPORTANCIA
Desde hace varias dcadas el ensayo Cometa, se ha convertido en
un mtodo establecido para el estudio del dao de cido
desoxirribonucleico.
Esta metodologa bsica ha sido ampliada, y permite ahora, detectar
con alta sensibilidad una gran variedad de daos del cido
desoxirribonucleico en cualquier tipo de clulas. Pero es importante
tener claro que su especificidad no es absoluta.

Ventajas
Bajo costo
Requiere bajas cantidades de
reactivos en el ensayo.
Rpido
Virtualmente puede analizarse
cualquier poblacin de clulas
eucariotas

Desventajas
No seala en que cromosoma
se encuentra el dao.
Debe estar protegido de la luz
durante la electroforesis.
Susceptible a contaminacin.

APLICACIONES
Ensayos de genotoxicidad (in vivo e in vitro).
Epidemiologa molecular
Reparacin del ADN

Biomonitoreo humano

Ecotoxicologa

Funciones de los reactivos

Amortiguador de corrimiento

Solucin de lisis

Perxido de hidrgeno

Bromuro de etidio

Metodologa
Preparacin de la muestra:

Metodologa
Electroforesis:

Metodologa
Tincin y lectura:

Metodologa
Control positivo:

BIBLIOGRAFIA
Legorreta H., M., Mosqueda R., N.A., Hernndez C., F., Soto C., I. Detection of an ABCA1
Variant Associated with Type 2 Diabetes Mellitus Susceptibility for Biochemistry and
Genetic Laboratory Courses. Biochemistry and Molecular Biology Education.
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