Separacin Slido-Lquido

Separacin y Procesos
Biotecnolgicos

Cules son las etapas en las

cuales hay una Separacin
Slido-Lquido?

Caldo de Fermentacin
Con Clulas
Clulas

Sin Clulas

Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas

Separacin de Clulas

Rompimiento Clulas
Separacin Material
Intracelular (Desechos)

Sobrenadante

Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Tratamiento de cuerpos
incluidos

Concentracin

Purificacin Alta
Resolucin

Refinamiento

Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto

Caldo de Fermentacin
Con Clulas
Clulas

Sin Clulas

Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas

Separacin de Clulas

Rompimiento Clulas
Separacin Material
Intracelular (Desechos)

Sobrenadante

Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Tratamiento de cuerpos
incluidos

Concentracin

Purificacin Alta
Resolucin

Refinamiento

Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto

Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin

Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin

PProcesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin

Qu contiene la suspensin proveniente del

fermentador?

Fase slida

Fase lquida

m.o intactos
Fragmentos de m.o
Por qu?
Ingredientes insolubles del medio, i.e glucano.
Sustrato insoluble residual

Sustrato soluble residual

Metabolitos intermedios
Productos deseados
Otros productos solubles

 Cules son las operaciones unitarias utilizadas para la

separacin slido-lquido? Cules conocen sus ecuaciones de
diseo?

 Cules son las operaciones unitarias utilizadas para la

separacin slido-lquido?
Sedimentacin

Centrifugacin

S
S

Filtracin

Operaciones auxiliares

Coagulacin

Floculacin

Operaciones de membrana

Microfiltracin

Ultrafiltracin

Dilisis

Extraccin lquido-lquido

Centrifugacin
Operacin unitaria utilizada para la separacin:
slido-lquido
lquido-lquido

CENTRIFUGACIN
Centrifugacin utiliza la diferencia de densidad entre
los slidos y el fluido que lo rodea.
Es una de las principales operaciones utilizadas en la
separacin de clulas desde caldos biolgicos,
especialmente cuando los caldos no son fciles de
filtrar.
Tambin se emplea en la remocin de desechos
celulares, separacin de precipitados proteicos y
recuperacin de productos insolubles (cuerpos incluidos)

Diferentes escalas

Escala Laboratorio

Escala Industrial

Centrifugacn v/s Sedimentacin

Cuando la suspensin se encuentra
detenida los slidos ms densos comienzan
a decantar bajo:
- La accin de la fuerza de gravedad,
proceso llamado sedimentacin.
- Un campo centrfugo el proceso
se llama centrifugacin.

Fuerza

Cuando se utiliza la centrifugacin la diferencia entre la densidad

los slidos (clulas o partculas) y el caldo, se incrementa por la
accin de la fuerza centrfugas que se generan por las altas
velocidades de rotacin de los equipos. El proceso de separacin
es ms rpido

Ejemplos de Centrifugas

Tipo Tubular

De Discos

Comparacin entre los diferentes tipos de

centrfuga
Comparacin entre los diferentes tipos de centrifuga
Caractersticas manejables de la Alimentacin
Tipo de

Tamao de

Contenido

Prueba de

Prueba de

Centrifuga

Partcula

Slidos

Sedimentacin

Consistencia

micras

01 - 200
0.5 - 5.000
0.5 - 200
0.5 - 200
0.5 - 200
0.15 - 200
2 - 5.000

1-5
2 - 20
< 10
< 10
<1
1-5

Tubular
Cmara Mltiple
Discos y boquillas
Discos Tazn abierto
Discos y boquillas
Discos Intermitentes
Tazn Slido

a 1.000 G (min) de los Slidos

2 - 20
2 - 20
1 - 10
1 - 10
1 - 10
1 - 10

torta firme
torta firme
lodo
lodo
lodo
torta firme
torta firme

Comparacin entre los diferentes tipos de

centrfuga
Caractersticas de Procesamiento
Tipo de

Mtodo de

Capacidad

Flujo de la

Fuerza g

Centrifuga

descarga de

lavado de

Alimentacin

Mxima

slidos

torta

L/min

Intermitente
Intermitente
Continuo
Intermitente
Intermitente
Intermitente
Intermitente
Continuo

Ninguna
Ninguna
Moderada
Ninguna
Ninguna
Ninguna
Ninguna
Moderada

Tubular
Cmara Mltiple
Discos y boquillas
Discos Tazn abierto
Discos y boquillas
Discos Intermitentes
Tazn Slido
Decantadora

8 - 100
12,000 - 16,000
1.5 - 335
5,000 - 9,000
3,8 - 3,780
5,000 - 8,500
3,8 - 1,500
5,000 - 7,000
3,8 - 570
14,000 - 16,000
0,38 - 1,500
5,000 - 8,000
1,5 - 250
500 - 800
3, 8 - 1,800
2,000 - 3,200

Caractersticas de la materia celular

Tipo de Clulas

Tamao
m

Densidad
(g/ m3)

Reistencia
Proceso Tipico de
al esfuerzo de Separacin
Corte

Bacteria

0.5 - 3

1050-1080
1050- 1090

Alta

Levaduras

5 - 10

1050 - 1090

Hongos
Filamentosos

1 x 100's

1050 - 1090

Media

Filtracin al vaco

Plantas

1 - 100

1050 - 1090

Baja

Microfiltracion;

Clulas Animales

10 - 40

Muy Baja

Centrifugacion a baja velocidad

Fotacin

Floculos de Clulas

10 - 100's

Variable

Centrifugracion;

1010 - 1080

Centrifugacion;
Micro-filtracion
Filtracin
Centrifugacion

Desechos celulares

0.4

1010-1200

Baja

Protenas Precipitadas

0.1 - 100's

1010-1200

Media

Sedimentacin
Centrifugracion;
Microfiltracion;
Particin en dos fases
Centrifugacion;
Microfiltracion;
Ultrafiltracion

SEDIMENTACION DE SOLIDOS
Una partcula al moverse en un medio continuo e infinito
se ve afectada por 2 fuerzas.

Fuerza de Flotacin
La partcula es acelerada por la fuerza de flotacin, FB,
que es la resultante de la diferencia de densidades entre
la partcula y el fluido (FB). Segn Newton (suponiendo
partculas esfricas):
d3
(1)
FB
(s ) a
6
Donde
d: dimetro de la partcula
s,: densidad de la partcula y del fluido
a: aceleracin del campo al cual est sometido la partcula

Empuje

Fuerza de Roce

Por otra parte, la partcula al moverse se ve retardada

por la fuerza de roce, FD, que se opone al movimiento.
Segn la Ley de Stoke

FD 3 d v

(2)

E
G

Donde
= viscosidad del medio
v = velocidad de la partcula


Debido a estas 2 fuerzas, cuando el sistema alcance el equilibrio,
la partcula se mover a una velocidad constante, igual a la
velocidad terminal cuando:
FB = FD

(3)
Re

Estas condiciones se cumplen cuando:

Casi siempre se cumple en sistemas biolgicos
FB

d3
6

( s ) a FD

3 d v

d v
1


A partir de (3) se puede determinar la velocidad
terminal.

d2
v
(s ) a
18

(4)

depende del campo al cual se encuentre sometida

Si es campo gravitacional
(sedimentacin)

d2
vg
( s ).g
18

ds
distancia que debe recorrer
vg

ts tiempo que demora en sedimentar

(5)

(5a)

Ejemplo 1

a)

Sedimentacin de clulas inmovilizadas

Muchas clulas animales son cultivadas en la superficie de micro-esferas

Esas esferas (microcarrier) tienen una densidad de 1.02 g/cm3 y un
dimetro de 150 m. Un fermentador 50 litros es usado para el
crecimiento de estas clulas en los microcarrier para producir una
vacuna. Despus que las clulas han crecido, la agitacin es detenida y
los microcarrier comienzan a sedimentar. El estanque tiene una razn
entre altura y dimetro de 1,5.
El flujo libre de microcarrier tiene una densidad de 1.00 g/cm3 y una
viscosidad de 1,1 cP. ( 0.011 [g/cm sec] )
Calcule el tiempo de sedimentacin de estos microcarrier suponiendo
que sedimentan a su velocidad terminal.

Si es un campo centrfugo

d2
vr g
( s ) 2 r
18

(6)

Donde
r : radio desde el centro de la centrfuga a la posicin donde se encuentra la
partcula
: velocidad angular de rotacin
2 n rad
n: revoluciones por minuto

(
)
60
s

dr
Distancia que se debe recorrer
g

dt Tiempo que demora en recorrerla

(6a)

Se pueden correlacionar las 2 velocidades

2 .r dr
g vg .

g
dt

Factor G
(Distinto a la eficiencia granulomtrica)

Se define el factor G para caracterizacin y escalamiento de

centrfugas es una medida relativa de la velocidad de sedimentacin de
una partcula en un campo centrfugo con respecto a su gravitacional.

2 .r

g
vg

Generalmente las condiciones de operacin de definen en funcin de los

G que se deben aplicar.

ECUACION DE DISEO
CENTRIFUGA DE BOTELLAS (laboratorio)
Existe un movimiento en la direccin r

dr
d2
r 2
2
vr g

( s ) r vg (
)
dt 18
g
R3

dr

R r vg ( g )o dt
1

Integrando

(10)

(11)

R3
2
v g ( ) t
ln
g
R1

(12)

Ejemplo 2 Centrifugacin discontinua de Clulas de levadura

Una centrfuga, que utiliza botellas, es usada para colectar las

clulas de levadura luego de una fermentacin. Durante la
centrifugacin la distancia entre la superficie del lquido y el eje de
rotacin (eje axial) es 3 cm y la distancia entre el fondo del
cilindro al eje axial es 10 cm.

Las clulas de levadura se pueden asumir como partculas

esfricas con un dimetro de 8.0 m y una densidad de 1.05
g/cm3. El fluido tiene propiedades similares al agua pura.
( Densidad 1.00 g/cm3 y una viscosidad de 0.01 g/cm sec)

La centrifuga est operando a 500 rpm

1. Determine el tiempo que tomar una separacin completa de las
levaduras.

ECUACIONES DE DISEO
CENTRIFUGA TUBULAR
Existe un movimiento en la direccin z y r

Movimiento en Direccin z

vz

dz Q
Q

dt A ( R32 R12 )

(7)

Q: Flujo de alimentacin
R1,R3 : Radio del nivel del lquido, Radio de
la centrfuga


Movimiento en Direccin radial r
2
dr d 2
r

vr g

( s ) r 2 vg (
)
dt 18
g

(8)

Q: Flujo de alimentacin
R1,R3 : Radio del nivel del lquido, Radio de la centrfuga
El movimiento combinado

dr
dr dt g
r 2 ( Ro2 R12 )

vg (
)
dz
dz
vz
g
Q
dt

(9)


Dependiendo de los valores de vg y Q depender la posicin de la
partcula en la centrfuga.

Se puede calcular un flujo ptimo para que una partcula que ingresa
por el centro, slo se pegue a la pared al final. Tal que:
z=L
r = R3

As se determina la ecuacin de diseo

de una centrfuga tubular:

2 L ( R32 R12 )
Q vg
R
g
ln 3
R1

(10)


Simplificando

As se

( R32 R12 )
2R
R3
ln
R1

donde R

determina la ecuacin de diseo de una centrfuga tubular.

2 L R 2 2
Q vg
v g TubuLar
g

Flujo

R3 R1
2

(17)

Caracterstica de la centrfuga y condiciones de operacin

Parmetro de diseo
Funcin de la partcula

ECUACION DE DISEO
CENTRIFUGA DE DISCOS
En un anlisis anlogo para centrfugas
de disco se tiene como ecuacin de
diseo:

2 N D 2 ( R 33 R 31 ) cot
Q vg
v g Discos
3* g

(18)

ND : Nmero de discos.
Ms detalles ver desarrollo:
Belter P., Cussler E.L. and Hu Wei Shou "Bioseparations : Dowstream Processing for
Biotechnology":, John Wiley and Sons , 1988.

Ejemplo 3 Centrifuga continua de Disco para Chlorella

Clulas de Chlorella han sido cultivadas en un estanque abierto, las

clulas sern cosechadas hacindolas pasar a travs de una
centrfuga de discos.

La velocidad de sedimentacin de estas clulas ha sido medida y es

de 1.07 x 10-4 cm/seg.

La centrfuga tiene 80 discos con un ngulo de 40, el radio externo es

15,7 cm y el dimetro interno de 6 cm.

Se planea operar la centrfuga a 6000 r/min.

1.

Estime la cantidad de flujo que puede ser procesado en esta

centrfuga.

Escalamiento de Centrifugacin

El diseo de centrfugas a gran escala involucra el uso de informacin

de laboratorio para predecir el comportamiento de las centrfugas
comerciales.
Mtodos que se pueden utilizar para tratar de adaptar los procesos de
laboratorio a gran escala.

a) Mtodos Cualitativos
b) Mtodos Cuantitativos

a) Mtodos cualitativo (Estimacin Gruesa)

Se establece un coeficiente de dificultad que tiene una separacin

dada para lo cual se calcula un coeficiente entre G y el tiempo
aplicado, ie, G t

2 Ro
G t
t
g

Ro: radio caracterstico o mximo de la centrfuga.

(19)

Existen valores caracterstico para cada variedad de biomasa

Slido
Gt
[sec]
Clulas eucariontes
0.3 10-6
Cloroplastos
0.3 10-6
Desechos clulas eucariotes
2.0 10-6
Ncleo de clula
2.0 10-6
Protenas precipitadas
9.0 10-6
Bacterias
18 10-6
Mitocondrias
18 10-6
Desechos bacterias
54 10-6
Lisosomas
1100 10-6
Ribosomas
1100 10-6
Polisomas
1100 10-6
A gran escala se debe mantener el mismo valor de G t, para ello se
determina G o t y se selecciona que equipo puede ser til

b) Mtodo Cuantitativo

Para cada tipo de centrfuga se define segn una ecuacin del tipo:

Tipo 1
Q v
g

Tipo 1

(20)

Para comparar 2 centrfugas de diferente tipo se deben considerar

factores de eficiencia y se debe cumplir:

Q
Q

(21)

Tipo 1
Tipo 2
Eficiencia, , para cada tipo de centrfuga, es:
Tipo
Botellas (lab)
Tubular
Discos

Eficiencia [%]
100
80
55

Ejemplo 4

Escalamiento

Se han realizado pruebas de laboratorio para definir el parmetro

de escalamiento para el procesamiento de una suspensin con material
celular. En el experimento se procesaron 3.3 [lt/min] de una suspensin de
clulas de E.coli , en una centrifuga tubular de 12.7 [cm] de radio interno y
73 [cm] de largo. Se utiliz una velocidad de rotacin de 16000 r.p.m.

Se requiere seleccionar una centrfuga para procesar 800 [lt/hr] de

la misma suspensin antes mencionada. Para ello se cuenta con las
siguientes alternativas de centrfugas de discos.
Propiedad

Opcin 1

Opcin 2

Opcin 3

N de discos

33

50

66

Radio externo [cm]

35

35

35

Radio interno [cm]

15

15

15

ngulo []

51

51

51

5000

6500

5000

Velocidad mxima
Rotacin [r.p.m.]

Potencia
La potencia consumida por una centrifuga depender del caudal al tratar
Q, de la velocidad angular y del radio R.
As su consumo energtico est dado por:

Potencia *Q* (R)2

Donde es una constante que depende del tipo de centrifuga.

Costo de Centrifugas
El valor depende generalmente del de la centrifuga, as

Actualizacin de los costos con el tiempo

Variaciones en el tiempo de compra

Ct2 = Ct1 It2/It1
C: precio compra
I: indice de costos
t1: base de costeo a tiempo t1
t2: tiempo
INDICES
Chemical Eng Plant Cost Index
Marshall & Swift Equipment
Cost Index

1.
2.
3.

Referencias:
Belter P., Cussler E.L. and Hu Wei Shou "Bioseparations : Dowstream
Processing for Biotechnology":, John Wiley and Sons , 1988.
Doran M." Bioprocess Engineering Principles", Academic Press, 1995.
Tejeda, R.M.Montesinos, R.Guzmn "Bioseparaciones", Editorial
Unison, 1995.