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Bactericida: Agentes que destruyen y matan a las bacterias Bacteriosttico: Agentes que inhiben el crecimiento de las bacterias Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como mesadas de trabajo Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre piel y/o mucosas
Esterilizacin
N ufc
dN dt
= - KN
tiempo
El tiempo (D) vara para cada temperatura (de ah el subndice t) de forma que a mayores temperaturas el valor de D es menor, es diferente para distintos 5 microorganismos, distintos entornos y diferentes condiciones fisiolgicas.
Efecto de la Temperatura
100 10
70 C
tiempo
6
log n MO viables
100 10
B C
tiempo
7
8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 20 40 Tiempo (min) 60 80
log N sobrevivientes
Agentes Fsicos
CALOR
RADIACIONES
FILTRACIN
9
Calor
Calor hmedo
Ambos pueden ser utilizados en procesos de esterilizacin
Calor seco
10
Calor hmedo
PROCESOS
Esterilizacin: Vapor saturado a presiones mayores que la atmosfrica Tindalizacin (fraccionada por vapor) Pasteurizacin UHT
MECANISMOS DE ACCIN Desnaturalizacin de protenas Destruccin de cidos nucleicos
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Pasteurizacin
LHT (low temperature holding) 30 minutos a 62.8C HTST (high temperature short time) 15 segundos a 71.6C Solo destruye patgenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium
Louis Pasteur
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Tindalizacin
100 C 30 min, 3 das sucesivos Proceso discontinuo con perodos de incubacin intercalados Usos: esterilizacin de productos de baja resistencia trmica, cuando no existe otra opcin
John Tyndall 14
Usos: Esterilizacin de materiales y productos termoestables (salvo productos oleosos y polvos). Descontaminacin de desechos biolgicos.
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Autoclave
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Autoclave
Condiciones : 121 C durante 15-20 minutos, con cargas iniciales bajas 121 C durante 30 minutos, con cargas iniciales altas Indicadores: Fsicos: Temperatura y/o presin Qumicos Indicador biolgico: Geobacillus stearotermophilus (D121C = 5 minutos) Tamao del inculo: 106 esporas
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Temperatura C
120
110
100
3
Tiempo (min.)
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Etapa de calentamiento Etapa de Etapa de enfriamiento mantenimiento
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Calor Seco
Mecanismo de accin: Procesos de oxidacin Controles de proceso de esterilizacin Indicadores fsicos y qumicos Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis var. niger (D160C = 0.3 a 1.8 min, Z=20C, tamao del inculo: 105 esporas)
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Calor Seco
Aire caliente: Equipo: Hornos elctricos Alcance: Se consigue esterilizacin (170 C, 90 minutos o 160 C, 120 minutos) Usos: a) Esterilizacin de: Materiales resistentes al calor Sustancias no miscibles en agua (inyectables oleosos, siliconas, vaselina lquida) Polvos b) Despirogenizacin (250 C 45 minutos o 180 C 4 h, o 650 C 1 min)
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Incineracin:
Destruccin de material contaminado
Flameado :
Desinfeccin
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Resistencia a calor
RESISTENCIA Priones Endosporas bacterianas Mycobacteria Virus sin envoltura lipdica Hongos Bacterias Virus con envoltura lipdica
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Medio no estril
Grampa de sujecin
Vaco
Medio estril
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FILTRACIN DE AIRE
Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) Remocin de hasta el 99.97% de partculas mayores de 0.3 micrones de dimetro Se usan en cabinas o habitaciones de flujo laminar CONTROL Retencin Mnima de un 99.97% de partculas generadas mediante ensayo DOP(di-octil-nftalato) en caliente con un dimetro de 0.3 micrones.
SE USAN PARA Lograr ambientes con nmero de partculas controlado: FLUJOS LAMINARES AREAS DE TRABAJO
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Entrada de aire
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Baja energa
Actividad antimicrobiana
Alta energa
Radiaciones Ionizantes
Caractersticas: Alta energa, baja longitud de onda Gran poder de penetracin Ionizan tomos y molculas No requieren altas temperaturas Tipos: Rayos gamma Rayos catdicos (electrones acelerados) Partculas beta
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Mecanismos de accin:
Formacin de radicales libres Dao al ADN, ARN
Resistencia:
Priones
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Desventajas: Equipo especial, personal entrenado No todos los materiales resisten el tratamiento Reacciones no deseadas en alimentos
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Radiaciones no Ionizantes
Caractersticas: Baja energa, sin poder ionizante Sin poder penetrante Mxima eficiencia biocida a 260nm Mecanismos de accin: Sitio blanco ADN Formacin de dmeros de timina Usos: Desinfeccin de superficies Desinfeccin de aire y agua
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Dmeros de timina
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Procesos de esterilizacin
Agente Calor hmedo Condiciones 121C 15 min. (o equivalente) Usos Material termoestable Penetrable por vapor
Calor seco
Radiaciones ionizantes
25KGy 45KGy
Filtracin
Material filtrable
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Control de Esterilizacin
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Indicador qumico
Cambio de color
Indicador biolgico
Microorganismo resistente
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Colorantes
Desinfectantes y/o Esterilizantes Cloro y Compuestos clorados Aldehdos Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos
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Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas. Desorganizan la estructura fosfolipdica de la membrana. No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.
Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante. Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre
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Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o decontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.
rgano-Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.
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Colorantes
Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDPacetilmuramil-pptido.
Violeta de Genciana
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El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua.
El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo) y Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo. Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica
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Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad enzimtica. Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas. El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.
Glutaraldehido
Paraformaldehido
Formaldehido
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Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso
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Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las protenas y fosfolpidos. El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el resido que queda luego de tratar las superficies.
Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.
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Medios de cultivo
Son sustancias nutritivas preparadas en el laboratorio para el crecimiento de microorganismos
temperatura
Condiciones de cultivo
pH
luz aireacin actividad de agua potencial redox
Medios slidos
Medio qumicamente definido para el cultivo de una bacteria quimioauttrofa capaz de usar iones amonio como fuente de energa
Componente
Sulfato amnico SO4(NH4)2 Bicarbonato sdico CO3HNa Fosfato disdico PO4HNa2 Fosfato monopotsico PO4H2K Sulfato magnsico SO4Mg.7H2O Cloruro frrico Cl3Fe.6H2O Cloruro clcico CL2Ca.2H2O Agua
Medios complejos
La mayora de las bacterias hetertrofas y los hongos se cultivan en medios complejos cuya composicin qumica exacta vara
Los medios complejos estn formados por nutrientes como: Extractos de levadura Extractos de carne Extractos de vegetales Digeridos de protenas de carne Digeridos de protenas vegetales
Las protenas son molculas grandes y relativamente insolubles Pero una digestin parcial con cidos o enzimas las reduce a mezclas de cadenas ms corta de aminocidos: peptonas.
Estos pequeos fragmentos solubles pueden ser digeridos por las bacterias.
Concentracin (gramos/litro)
3 5 5
Las bacterias anaerobias mueren en presencia de oxgeno. Para su cultivo se utilizan medios adecuados denominados medios reductores
Ingredientes como el tioglicolato sdico, que se combina con el oxgeno disuelto en el medio y lo eliminan
Medio electivo
Medios de enriquecimiento
Proporcionan nutrientes y condiciones ambientales favorables para el desarrollo de un microorganismo determinado pero no son adecuados para el crecimiento de otros. Se trata tambin de medios selectivos pero diseados para detectar un nmero pequeo del microorganismo buscado. Ejemplos: Caldo Rappaport-Vassiliadis, caldo lactosa-bilis (2 %)-verde brillante.
Medios de preenriquecimiento
Se utilizan para favorecer el crecimiento de microorganismos injuriados. Ejemplos: Agua peptona-fosfato y caldo nutritivo.
Agar MacConkey
Cantidad (g/l) Peptona de gelatina Peptona de casena Lactosa Sales biliares Cloruro sdico Rojo neutro Cristal violeta Agar 17 1.5 10 1.5 5 0.03 0.001 13.5
Caldo MacConkey
Cantidad (g/l) Peptona de gelatina Peptona de casena Lactosa Sales biliares Cloruro sdico Rojo neutro Cristal violeta 17 1.5 10 1.5 5 0.03 0.001
Agar de Baird-Parker
Triptona Piruvato de sodio Glicina Extracto de carne Cloruro de litio Extracto de levadura Agar Yema de huevo Telurito de potasio