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PREPARACION DE UN MEDIO DE

CULTIVO
ING. LORENA OA, M.BIO.MOL.
INGENIERA FORESTAL

ANTES DE EMPEZAR
Agua destilada: agua desmineralizada, dureza reducida

Reactivos empleados deben ser de alto grado de pureza


Agar probado para cultivo de tejidos vegetales

Procedimiento depende de:


Tipo de medio

Consistencia: slido, semislido o lquido


Presencia de componentes termolbiles

MEDIOS (SEMI)SLIDOS SIN SUSTANCIAS


TERMOLBILES
Incorporacin de
componentes
base*

Distribucin del
medio en
recipientes

Esterilizacin en
autoclave

Adicin de
reguladores de
crecimiento

Adicin y
disolucin del
agar

Cuarentena

Incorporacin de
otros compuestos

Ajuste pH (5.8)

Uso del medio


de cultivo

* Componentes base = sales minerales + vitaminas + fuente de carbono

MEDIOS (SEMI)SLIDOS CON SUSTANCIAS


TERMOLBILES
Incorporacin de
componentes base

Adicin de sustancias
termolbiles al medio
autoclavado (30-40C)

Distribucin del medio


de cultivo en
recipientes

Adicin de
reguladores de
crecimiento

Filtracin de
sustancias
termolbiles en
cmara de flujo

Cuarentena

Incorporacin de otros
compuestos

Esterilizacin en
autoclave del medio y
de los recipientes a
usar

Uso del medio de


cultivo

Ajuste pH (5.8)

Adicin y disolucin
del agar

MEDIOS LQUIDOS SIN SUSTANCIAS TERMOLBILES


Incorporacin de
componentes
base

Esterilizacin en
autoclave

Cuarentena

Adicin de
reguladores de
crecimiento

Distribucin del
medio en
recipientes

Uso del medio


de cultivo

Incorporacin de
otros compuestos

Ajuste pH (5.8)

MEDIOS LQUIDOS CON SUSTANCIAS TERMOLBILES


Incorporacin de
componentes base

Distribucin del medio


en los recipientes

Cuarentena

Adicin de
reguladores de
crecimiento

Adicin de sustancias
termolbiles al medio
de cultivo (30-40C)

Uso del medio de


cultivo

Incorporacin de otros
compuestos

Filtracin de
sustancias
termolbiles en
cmara de flujo

Ajuste pH (5.8)

Esterilizacin en
autoclave del medio y
de los recipientes

PREPARACIN DE UN MEDIO MS
Tabla 01. Componentes de las soluciones stock de medio MS.
Stock

Sales

Volumen a usar
(ml)

NH4NO3
KNO3

Concentracin
Final
(mg/L)
1650
1900

I
II

MgSO4.7H2O
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O

370
16.9
8.6
0.025

10

III

CaCl2.2H2O
KI
CoCl2.2H2O

440
0.83
0.025

10

IV

KH2PO4
H3BO3
NaMoO4.2H2O

170
6.2
0.25

10

FeSO4.7H2O
NaEDTA

27.84
37.24

10

Vitaminas

Glicina
Tiamina
Piridoxina
Ac. Nicotnico
*Mioinositol*

2
0.1
0.5
0.5
100

20

PREPARACIN DE SOLUCIONES MADRE


Solucin madre I:
Nitrato de amonio NH4NO3

Nitrato de amonio KNO3

C1 = ?

C1 = ?

V1 = 20mL

V1 = 20mL

C2 = 1650mg/L

C2 = 1900mg/L

V2 = 1L

V2 = 1L

1 1 = 2 2

1 1 = 2 2

2 2
1 =
1
(1650/)(1)
1 =
0.02

2 2
1 =
1

1 = 82500/ = 82.5/

1 = 95000/ = 95/

(1900/)(1)
1 =
0.02

PREPARACIN DE SOLUCIONES MADRE


Tabla 02. Cantidad para preparar soluciones madre
Stock

Sales

Masa para
preparar 1L

NH4NO3
KNO3

82.5g
95g

II

MgSO4.7H2O
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O

37g
1.69g
0.86g
2.5mg

III

CaCl2.2H2O
KI
CoCl2.2H2O

44g
83mg
2.5mg

IV

KH2PO4
H3BO3
NaMoO4.2H2O

17g
0.62g
25mg

FeSO4.7H2O
NaEDTA

2.78g
3.72g

Vitaminas

Glicina
Tiamina
Piridoxina
Ac. Nicotnico

200mg
10mg
50mg
50mg

ADICIN DE SACAROSA
Las concentraciones de sacarosa (azcar comercial) se especifican en porcentajes peso-peso
Ejemplo: medio MS enriquecido con 3%.

Qu significa? 3g por cada100mL de medio de cultivo


1 1 = 2 2
2 2
1
(1/)(1)
1 =
2/

1 =

1 = 0.5

ADICIN DE REGULADORES DE CRECIMIENTO


Solucin madre de BAP

Solucin madre de 2,4-D

C1 = 2mg/mL

C1 = 1.5mg/mL

V1 = ?

V1 = ?

C2 = 1mg/L

C2 = 5mg/L

V2 = 1L

V2 = 0.5L

1 1 = 2 2

1 1 = 2 2

2 2
1 =
1
(1/)(1)
1 =
2/

2 2
1 =
1
(5/)(0.5)
1 =
1.5/

1 = 0.5

1 = 1.67

DEBER
Se desea preparar 500ml de un medio MS enriquecido con 2.5mg/L de BAP y 0.25mg/L de AIA; si las soluciones madre
de estas hormonas tienen 1.5mg/ml de BAP y 1.5mg/ml de AIA. Indique el volumen de solucin madre que debe usar
para la preparacin. (incluya unidades en los clculos)
Se cuenta con Piridoxina de 1mg/ml, Mioinositol de 0.15g/ml, Tiamina de 0.5mg/ml, cido nicotnico de 2mg/ml y Glicina
de 1.5mg/ml para preparar 750ml de un medio que contenga 2.5mg/L de piridoxina, 200mg/L de mioinositol, 2.5mg/L
de tiamina, 1.5mg/L de cido nicotnico y 1mg/L de glicina. (incluya unidades en los clculos)
Si la receta de un medio de cultivo indica 1.5% de azcar, indique la cantidad de azcar que se tiene que pesar para
preparar medio litro de dicho medio.
El medio Knudson (orquideas) posee la siguiente concentracin de sales: 1g/L de Ca(NO3)24H2O, 0.25g/L de K3PO4,
0.25g/L de MgSO47H2O, 0.025g/L de FeSO47H2O, 0.0075g/L de MnSO4H2O y 0.5g/L de (NH4)2SO4. Se desea
preparar 1L de solucin stock 10X (es decir 10 veces ms concentradas que el medio normal) para facilitar la
preparacin del medio. Indique las cantidades de reactivo deben pesarse para preparar el litro de solucin stock.

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