Laboratorio Clinico Veterinario

PRACTICA 1
Métodos de sujeción y obtención de muestras para

diagnostico de laboratorio en animales domésticos.
1. INTRODUCCION
Los veterinarios tienen la necesidad de consultar laboratorios de análisis clínicos

para resolver determinados problemas de diagnóstico. Sin embargo, este esfuerzo
puede verse mermado por una selección, obtención, preparación, manejo y envío
inadecuado de las muestras. Esta situación puede ser evitada mediante el
seguimiento cuidadoso de algunos principios generales:
 La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento.
 La toma de la muestra deberá realizarse seleccionando las técnicas de sujeción y

manejo que impliquen menor grado de estrés para el paciente y menor riesgo
para la persona que la obtiene, tomando en consideración las condiciones del
lugar y de las características propias de cada especie.
 Suele ser preferible el envío de varios especimenes del mismo lugar.
 Las muestras deberán ser perfectamente identificadas.
 Deberá incluirse la Historia Clínica del individuo.
 Para cada caso se elegirá el tipo de recolección, manejo, conservación y envío

más adecuado, a la especie y tipo de padecimiento presentado.
 Cuidar en lo posible, el manejo estéril de la muestra y en una cantidad adecuada.
 En caso de envío Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra, forma de

manejo y verificar que se lleve a cabo en el menor tiempo posible.
En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en distintas

especies domésticas, así como la toma de muestra de orina y recolección de heces.
2. 2.1 OBJETIVO
El alumno seleccionará y aplicará las técnicas de sujeción y manejo más

adecuadas para la obtención de muestras sanguíneas y de heces en tres
especies diferentes de animales domésticos (perro, gato, ave de corral),
3. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN
TECNICA DE PUNCION VENOSA
En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan más

satisfactoriamente con la sangre venosa. La punción venosa, se realiza con aguja y
jeringa de distintas medidas según el caso, ejecutándola sobre cualquiera de las
venas superficiales del individuo: Por ejemplo en el caballo, la vaca y la oveja se
emplea la vena yugular; Las venas safena y radial, pueden sugerirse para el perro y
gato; El cerdo es sangrado normalmente en la vena cava anterior y en algunas razas
en la auricular; Los animales de laboratorio como el cobayo, ratón, rata y conejo son
desangrados fácilmente en el corazón, vena caudal o auricular.
4. LISTA DE REQUERIMIENTOS
4.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
1 Alcohol 70° 1L
2 Benzal 1L
3 Xilol 50 ml
4 Vaselina pura 100% 500 gr
5 Xilocaina 10% 100ml
6 Ketamina 50% 100
4.2 Material
NUM. CLAVE DESCRIPCION CANTIDAD
1 Guantes desechables 7
2 Jeringas desechables de 3 ml 7
3 Agujas desechables del No 21 4
6 Jeringas de insulina 3
7 Sonda de alimentación infantil 1
8 Cinta adhesiva opaca, tela adhesiva de 1

2-3 cm.
9 Cordón de algodón de 0.5 cm de 5 m.

diámetro
10 Tijeras 1
11 Gradillas 5
12 Tubos de ensaye 13 x 100 5
13 Porta objetos de vidrio 10
14 Cubreobjetos de vidrio 10
15 lanceta o bisturí 1
16 Hojas de bisturí 3
17 Algodón 1 paquete
18 Ligas 5
19 abate lenguas 10
20 cucharillas rectales o tubos de vidrio 10

21 frascos de vidrio 10
4.3 Equipos de Laboratorio
NUM. CLAVE NOMBRE DEL EQUIPO
1 Microscopio
4.4 Material biológico
1 Perro de talla mediana o grande
2 Gallina o pollo grande
3 Gato adulto.
5. TECNICA O PROCEDIMIENTO
5.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO.
 PUNCIÓN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posición dorsal, se palpa

entre la 2a y 3a costilla del lado izquierdo, se coloca la aguja entre las citadas
costillas, se presiona ligeramente sobre la zona y se jala él embolo de la jeringa
para obtener la muestra (Es necesario cuidar la introducción de aire para evitar
producir embolia gaseosa).
 PUNCIÓN EN LA VENA MARGINAL DE OREJA. Se coloca una torunda dentro

del conducto auditivo del conejo, se limpia con alcohol y se recorta el pelo de la
oreja con una tijera. Se pasa un algodón con xilol para irritar la zona, con una
lanceta o bisturí se podrá obtener la muestra.
 PUNCIÓN DE VENAS CAUDALES.
 RESERCION DE COLA Y DEDOS.
 SANGRADO EXHAUSTIVO Y DECAPITACION.

5.1.2 TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO.
El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las venas safena

y radial. Lo más importante para una correcta obtención de muestra será la
adecuada sujeción del individuo. Posteriormente se deberá ocluir la vena por presión
digital o torniquete. La piel sobre la vena es móvil, por lo cual se deberá inmovilizar
con los dedos de la mano que sujeta el miembro. La aguja deberá insertarse con el
bisel hacia arriba (No 21 para perros y 22 al 25 para gatos). Se deberá evitar
interrumpir la circulación por tiempos prolongados para evitar hemoconcentración. La
cantidad a obtener será de 5 a 10 ml. evitando colapsar la vena. Al final se retirará la
aguja y se vaciará cuidadosamente en un tubo previamente preparado.
5.1.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA.
El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más comunes

aplicados a la practica veterinaria, es de gran ayuda para el diagnóstico diferencial
tanto de padecimientos generalizados como del aparato genitourinario.
Para su recolección es necesario emplear recipientes limpios,

preferentemente estériles. La muestra se recogerá durante la micción o por sondeo,
siendo este último más adecuado por estar libre de detritus uretral o vaginal. Es difícil
cateterizar a un perro más de una o dos veces al día puesto que la reacción tisular al
traumatismo, causa un estrechamiento del lumen uretral a través del os penis.
5.1.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES.
Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como medida de

protección en la toma de muestras de heces, así como seguir las indicaciones
especificas para cada tipo de animal, utilizando recipientes limpios o estériles para la
recolección de la muestra.
En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener muestras

directamente del recto del animal, con un guante de plástico. Una vez obtenida una
muestra adecuada, el guante es reversado hacia adentro, sirviendo de esta forma
como recipiente de recolección, una vez colectado se sella, se identifica y se envía
refrigerada al laboratorio. En los animales pequeños, las muestras fecales son
obtenidas por medio del termómetro o una varilla de vidrio, aunque esta pequeña
cantidad será apenas suficiente para un examen directo.
En caso de no ser posible la recolección directa se procederá a tomar la
muestra directamente del recto, se cuidara que la defecación ocurra sobre un piso
previamente lavado. En este caso la muestra se recogerá con guante plástico,
espátula de madera, tomando solo la capa superior que no entró en contacto con el
suelo.
5.2 REPORTE DE RESULTADOS
6. CONFIABILIDAD ANALÍTICA
No requiere.
7. GARANTIA DE CALIDAD
7.1 Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

México.
8. PRACTICABILIDAD
8.1 Los alumnos realizaran las actividades descritas en la práctica, organizados en

pequeños equipos de tres participantes, los cuales deberá aplicar las estrategias
descritas en las tres especies mencionadas, bajo la supervisión del Catedrático.
9. REFERENCIAS
9.1 De la Puente G. José. Manual de Exterior y manejo y Técnicas de sujeción de

los animales domésticos. UNAM. México.
9.2 Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

México.
9.3 El Manual Merck de Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.

PRACTICA 2
El método de flotación para la identificación de
huevecillos de nematodos en cánidos, felinos y aves.
1.- INTRODUCCION
La parasitología estudia los seres que viven momentánea y/o

permanentemente, sobre o dentro de otros organismos vivientes, obteniendo de los
mismos su subsistencia. Las enfermedades parasitarias son la interrelación entre el
agente etiológico (parásito), el hospedero y el medio ambiente, en donde al romperse
la relación de equilibrio se produce sintomatología y se origina la enfermedad.
Existen algunos parámetros que nos sirven para destacar la importancia que
guardan en Medicina Veterinaria, por ejemplo: la incidencia en animales domésticos,
la mortalidad por parasitosis, las erogaciones económicas producidas a los
productores, así como la repercusión social y económica.
Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a las

enfermedades parasitarias, sus agentes etiológicos, patología, sintomatología, y la
forma de combatirla, sin lograr su control mediante el diagnóstico e identificación que
permita el control de las infestaciones subsecuentes.
2.- OBJETIVO.
El alumno aplicará la técnica de Faust, para la identificación de huevecillos de
las principales especies de nematodos gastrointestinales en cánidos, felinos y aves.
3.- PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN
La presente práctica consiste en la determinación de parásitos mediante

técnicas de frotis directo y flotación. Consiste en dispersar una suspensión de
material fecal en solución de mayor densidad que los huevecillos de parásitos, la
diferencia en la gravedad específica hace que los huevos se eleven a la superficie.
Cuando los huevos permanecen demasiado tiempo en la solución de concentración,
pueden deformarse.
Esta técnica es recomendada para la identificación de quistes de protozoarios

y huevos de helmintos, ya que son capaces de flotar en pesos específicos de 1,000 a
1,200. Los huevecillos de trematodos son mucho más pesados, por tanto solo
flotarán en líquidos con pesos específicos superiores a los 1,300.
4.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)
1 Solución saturada de sal 1.190 a 20°C 5L
2 Solución saturada de azúcar 1. 120 a 15°C 5 L
3 Solución cloruro de zinc 1.890 a 20°C 5L
4.2 Materiales de laboratorio
1 Vasos de precipitado 100 ml 7
2 Tubos de ensaye 7
3 Portaobjetos 4
4 Cubreobjetos 3
5 Gradillas 2
6 Pinzas 3
7 Coladeras de malla fina de plástico 6 1

a 7 cm diámetro
8 Abate lenguas o varillas de vidrio 1
9 Gasas 5 m.
11 Lazos de alambre 5
12 Espátulas 5
10
10
1 paquete
10
10
10
4.3 Equipo de Laboratorio
1 Microscopio
2 Centrífuga (opcional)
4.4 Material Biológico

1. heces de perro
2. heces de gato
3. heces de aves
4. heces de cerdo
5. heces de bovino u ovino
Para la elaboración del frotis directo se emulsifica una pequeña cantidad de

heces en agua y se aplica una pequeña capa sobre el portaobjetos. Se coloca el
cubreobjetos y se examina el frotis en el objetivo de menor aumento, investigando la
presencia de huevos, quistes y larvas. Este método es valioso cuando se sospecha
de la presencia de larvas de nemátodos o protozoarios móviles.
5.1 MÉTODO DE FLOTACION
En un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con algo de

solución de enriquecimiento utilizando para ello una espátula. Luego se agregan 90
ml de solución de enriquecimiento agitando vigorosamente para obtener una mezcla
bien homogénea. Si las heces contienen muchas partículas grandes se cuela la
mezcla en colador fino. Se debe recordar que algunos huevos quedan en el residuo
detenido por la malla del colador. Lugo se deja reposar la mezcla por unos minutos
hasta que las burbujas de aire hayan salido y dejar flotar cuidadosamente un
cubreobjetos sobre la superficie del líquido. Los huevos de parásitos flotarán hacia la
superficie y se adherirán al cubreobjeto. Después de media hora el cubreobjeto es
cuidadosamente tomado con una pinza y colocado sobre el portaobjetos. La
preparación es observada al microscopio.
La flotación de los huevos en la solución de enriquecimiento se puede acelerar

por medio de la centrifugación. El tubo para centrífuga debe ser lo suficientemente
ancho que permita colocar el cubreobjetos sobre la superficie del líquido. La
suspensión se centrifuga con el cubreobjeto sobre la superficie del líquido. Si ello no
es posible, la capa superficial del líquido puede ser sacada con un lazo de alambre y
luego colocada sobre el portaobjetos. .
6. CONFIABILIDAD ANALITICA.
7. GARANTÍA DE CALIDAD
7.1 THIENPONT, D; ROCHETTE, F; VANPARIJS, O.F.J. Diagnóstico de las

Helmintiasis por medio del examen coprológico. Janssen Research Foundation.
Beerse Belgica. 1979.
8. PRACTICABILIDAD

descritas en las tres especies mencionadas, bajo la supervisión del Catedrático
9. BIBLIOGRAFÍA

9.2 QUIROZ, R. H. Parasitología y Enfermedades parasitarias de los animales

domésticos. Ed Limusa. México.
9.3 LAPAGE, G. Parasitología Animal. Logia. Ed. Continental. México.

PRACTICA 3
EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA
IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE TREMATODOS
EN HECES DE RUMIANTES.
1. INTRODUCCION
La Fasciolasis, Distomatosis hepática, Palomilla o Mariposa del hígado, es

una enfermedad que afecta comúnmente a las ovejas, así como a las cabras,
bovinos, cerdos, equinos, eventualmente al hombre y a algunos animales silvestres,
presentando una amplia distribución mundial.
Es una enfermedad parasitaria debida a la presencia y acción del Tremátodo

Fasciola hepática . Presenta un proceso inflamatorio crónico del hígado y
conductos biliares, causando trastornos digestivos y nutricionales
2. OBJETIVOS
El alumno aplicará la técnica de sedimentación simple, para la identificación de
huevecillos de trematodos en las heces de rumientes.
Los huevecillos de trematodos son fácilmente identificables en frotis directo o

por la técnica de sedimentación, debido a la presencia de un opérculo polar, el cual
puede ser destruido en soluciones hipertónicas, por lo cual no se recomiendan las
técnicas de flotación.
4.1 Reactivos
1 Solución Salina Fisiológica 1L
2 Éter 1L
3 Ácido acético 5% 100 ml
4 Azul de metileno 1% 100 ml
4.2 Material
NUM. CLAVE NOMBRE DEL MATERIAL CANTIDAD
1 Vasos de precipitado 100 ml 10
2 Tubos para centrífuga (cónicos) 20
3 Portaobjetos 20
4 Cubreobjetos 20
5 Gradillas 10
6 Pipetas Pasteur 10
7 Coladeras de malla fina de plástico 10
8 palillos finos de madera 10
9 Gasas 10
11 Goteros de cristal 10
12 Espátulas 10
1 Centrífuga
2 Microscopio
 heces de ovino
 heces de bovino
5.1 METODO DE SEDIMENTACION SIMPLE
Como se mencionó anteriormente, esta técnica se utiliza únicamente cuando se

sospecha la presencia de huevecillos de tremátodo u otra clase de huevecillos
operculados.
5.1.1 Se coloca una suspensión de heces en agua (puede utilizarse solución salina)
en un tubo de ensaye cónico, colada a través de una malla fina.
5.1.2 Se deja el tubo en reposo por un mínimo de 15 minutos o a centrifugación a

baja velocidad.
5.1.3 Se extrae el sedimento mediante una pipeta Pasteur o gotero.
5.1.4 Se examina al microscopio en un portaobjetos.
5.2 METODO DE TELEMAN.
5.2.1 En 5 ml. de solución de ácido acético al 5% se suspende 1 gr. de heces

agitándolo.
5.2.2 Se deja reposar por un minuto y se coloca dentro de un tubo de centrifugación.
5.2.3 Se le agrega igual cantidad de éter y se agita vigorosamente.
5.2.4 Se centrifuga durante un minuto a 1500 RPM.
5.2.5 El sedimento que se forma contiene los huevecillos de tremátodo, y presenta

encima una capa de ácido acético y una capa de éter, con una capa de restos
de heces entre ambas.
5.2.6 Con un palillo fino y largo se afloja el sobrenadante de las paredes del tubo y
se decanta, debiendo quedar solo el sedimento
5.2.7 Se agregan unas gotas de agua al sedimento y se mezcla vigorosamente
5.2.8 Se toman unas gotas de esta suspensión y se colocan sobre el portaobjetos,

examinándolo bajo el pequeño aumento.
Con este método es posible evaluar la intensidad de la infestación.
5.3 PROCESAMIENTO DE RESULTADOS
6. CONFIABILIDAD ANALITICA

8. PRACTICABILIDAD

10.BIBLIOGRAFÍA



PRACTICA 4
EL METODO DE HARADA MORI PARA CULTIVO
LARVARIO DE ANCYLOSTOMA Y UNCINARIA EN
PERROS Y GATOS.
1. INTRODUCCION
La Anquilostomiasis o Uncinariasis es la Infestación causada por la presencia

ya acción de larvas y adultos de varias especies de Ancylostoma y Uncinaria en
intestino delgado y otros tejidos en perros y gatos, Clínicamente se caracteriza por
anemia ferropénica, adelgazamiento, diarrea sanguinolenta y en algunos casos
edema en patas. Es común en cachorros posterior al destete, pudiéndose observar
también en perros confinados.
2. OBJETIVOS
El alumno aplicará la técnica de Harada Mori para identificar las distintas
especies de Anclostomas o Uncinarias presentes en las heces de perros y gatos.
El cuadro clínico por tanto es característico en zonas con problemas

enzooticos. Su diagnostico se debe apoyar con la observación de huevos en heces,
en relación con u cuadro anémico (hematocrito).
Para el diagnostico de larvas se recomienda el método de Harada Mori, ya

que las larvas son muy sensibles a la sequedad.
4. 1 Reactivos
1 Agua destilada 1L
4.2 Material
1 Papel filtro. (13 x 120 mm) 50 cm
2 tubos de centrífuga cónico de 15 ml 10
3 Tapones para tubos de centrífuga de 15 10

ml
4 Pipetas 10
4.5 Equipos de Laboratorio
1 Estufa de cultivo
2 Lupa
3 Microscopio
1. heces de Perro parasitado o sospechosos

5. TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS
5.1 El cultivo de larvas en heces de perro o gato infectado, se lleva a cabo por el
Método de Harada Mori dentro de un tubo de ensaye .
5.1.1 Se toma una delgada capa de heces de 1 a 2 mm, y se extiende sobre el papel
filtro, colocándola en el tercio medio.
5.1.2 Se agregan 3 ml de agua destilada en el tubo de ensaya.
5.1.3 Se coloca el papel filtro con la muestra dentro del tubo, de tal modo, que el
extremo inferior haga contacto con el agua (un cm aproximadamente) sin que
haga contacto el agua con las heces.
5.1.4 En el extremo superior del tubo se coloca un tapón de algodón, sosteniendo el

otro extremo del papel.
5.1.5 Este cultivo se lleva de 7 a 10 días en la estufa a temperatura promedio de 24

a 28 C.
5.1.6 Cada día se deberá verificar que el agua contacte con la superficie de papel,
en caso necesario se agregará más agua destilada.
5.1.7 Las heces se mantendrán húmedas gracias al papel filtro y tan pronto como las
larvas se hallen libres, emigrarán hacia el agua.
5.1.8 Las larvas son sacadas con una pipeta y examinadas al microscopio con el
menor aumento.
7. GARANTIA DE CALIDADA

8. PRACTICABILIDAD

9. BIBLIOGRAFIA



PRACTICA 5
IDENTIFICACIÓN DE LARVAS DE NEMATODOS
PULMONARES POR EL METODO DE BAERMAN
1. INTRODUCCION
Los huevos de nemátodos y larvas en heces de bovinos, son casi los mismos
que se encuentran en pequeños rumiantes domésticos y salvajes, en medicina
veterinaria, el aparato de Baerman ha sido de gran ayuda para la identificación de
parásitos pulmonares de la familia Protostrongylidae principalmente.
Cuando se usan heces recién extraídas siempre que se encuentren

larvas, estas serán identificadas como nemátodos pulmonares, puesto que solo
estas son vivíparas. Si por ejemplo se utilizan heces de más tiempo de recolectadas,
las larvas de Strongyloides, Trichostrongylídeos y otros nemátodos pueden ser
encontradas, tras la eclosión de los huevecillos, lo que obviamente interferirá en el
diagnóstico.
2. OBJETIVOS.
El alumno aplicará la técnica de Baerman en diversas muestras frescas de
heces de rumiantes, para la identificación de parásitos pulmonares.
Cualquier infección por pequeña que sea, puede ser detectada por medio de
este aparato y puede ser utilizado cuantitativamente, siempre que se pese con
exactitud la cantidad de heces a utilizar.
El aparato de Baerman consiste en un embudo de vidrio sostenido por un

soporte y en su parte inferior tiene colocado un tubo de goma de 10 cm de largo que
termina en una pequeña pipeta (gotero). El tubo de goma es cerrado por un clip. La
boca del embudo es cubierta con una malla coladora de gasa o alambre cuya
abertura sea de 0.6 a 0.7 mm, la que se empuja un poco en la mitad de manera que
se sumerja principalmente en el embudo, ésta se cubre por debajo con doble capa
de gasas.
4.1 Reactivos
1 Agua destilada 2L
4.2 Material
1 Embudos de vidrio 10
2 Soporte universal con pinza 10
3 Tubo de goma 5m
4 goteros 10
5 Clips 10
6 Gasas 20
7 Mallas coladoras de alambre con abertura 10

de 0.6 a 0.7 mm
8 Portaobjetos 20
9 Cubre objetos 20
4.3 Equipo

1 Microscopio
2 Centrifuga
4.4 material Biológico
1. Heces de bovino u ovino sospechoso a parásitos pulmonares
Colocar sobre las gasas 20 g de heces frescas. Llenar el embudo con agua
tibia (max. 30°C) en la cual deben sumergirse completamente las heces. Si las heces
son muy líquidas se deben usar varias capas de gasas. Colocar todo el aparato a
temperatura ambiente durante 24 hrs. las larvas saldrán de las heces ya remojadas y
pasando a través del colador, irán a depositarse en el cuello del embudo
concentrándose en el fondo. Cuando el clip es abierto se deben recolectar las
primeras 3 a 4 gotas (no más) en un portaobjetos de vidrio y sin cubreobjetos
deberán ser examinadas al microscopio bajo el aumento menor. Las larvas de
nemátodos se verán mover activamente. También se podrá recolectar dentro de un
tubo para centrífuga de 5 a 10 ml, procediendo al centrifugado, tras la decantación
del sobrenadante, larvas obtenidas deberán estar en el sedimento del tubo.

8. PRACTICABILIDAD

pequeños equipos de tres participantes, los cuales deberá aplicar las
estrategias descritas en las tres especies mencionadas, bajo la supervisión del
Catedrático.
9. BIBLIOGRAFÍA



PRACTICA 6
TECNICAS HEMATOLOGICAS EN
MEDICINA VETERINARIA.
1. INTRODUCCION
En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan mas

satisfactoriamente con la sangre venosa prefiriéndose como se indicó en la primera
práctica: la vena yugular para caballos, bovinos, ovejas y cabras; el corazón en
conejos, cobayos y ratones, y la vena cava para el cerdo.
2. OBJETIVOS.
El alumno realizara la biometría hemática en tres muestras de diferentes

especies domésticos para realizar el análisis de las diferencias significativas que
presentan cada uno de ellos.
3. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACION
Las técnicas empleadas en medicina veterinaria son similares a las utilizadas

en hematología humana, sin embargo existen algunas consideraciones que serán
necesarias indicar.
En primer lugar los eritrocitos de perro son especialmente susceptibles a la

hemólisis, por lo cual se deberá evitar el exceso de presión negativa sobre la jeringa,
así como la formación de espuma que la favorezca (utilizar jeringas de 5 a 10 c.c.
con émbolo bien ajustado).
Es importante recordar que para las determinaciones de hemoglobina y la

cuenta globular, se requiere un anticoagulante y refrigeración (solución al 10% con 4
partes de oxalato de potasio y 6 de oxalato de amonio, colocando 0.15 c.c. en tubos
de 5 c.c. para perro y gato o 0.3 para tubo de 10 c.c. en especies mayores. También
podrán utilizarse de 2 a 4 mg de cristales de oxalato de sodio y citrato de sodio en
solución evaporando a sequedad en tubo de ensaye inclinado).
4.1 Reactivos
1 Cianometa
2 Standard para cianometa
4.3 Material
1 Tubos de vacutainer con EDTA 10
2 Tubos de ensaye de 13 x 100 10
3 Portaobjetos 50
4 Capilares 10
5 Lámparas de alcohol 5
6 Pipetas de sahli 5
7 Boquillas 5
8 Gradillas 5
4.3. Equipo
1 Microcentrífuga
2 Espectofotómetro
3 Microscopio
4 Disco lector
4.4. Material biológico
4.1 Muestras de sangre de diferentes especies animales:
a. Bovino
b. Ovino
c. Perro
d. Gato
e. Pollo
Una vez recibida la muestra se mezcla por inversión, se preparan 4 frotis de sangre y
se dejan secar, y se llenan dos pipetas: una para determinación de hemoglobina y
otra para conteo de leucocitos. Se procederá a la verificación de la cuenta
leucocitaria, a la tinción de frotis para el estudio microscópico y la cuenta diferencial
(fórmula blanca) y la determinación de hemoglobina.
5.1PREPARACION DEL FROTIS DE SANGRE.
5.1.1 Este procedimiento requiere sangre fresca.
5.1.2 Para extender la preparación serán necesarias varias láminas limpias, sobre
las cuales se colocará una gota de sangre en el extremo de la lámina.
5.1.3 Con otra lámina se procede a extender la sangre, deslizándola mediante un

movimiento rápido, al poner en contacto el borde de la lámina con la gota, en
un ángulo agudo.
5.1.4 Secar mediante calor o aire, evitando la fragmentación y crenación de los
eritrocitos.
5.1.5 La laminilla deberá ser identificada y teñida con los procedimientos usuales
(Wright).
5.1.6 Una vez seca, se observará al microscopio tanto los eritrocitos como los
núcleos de los leucocitos.
5.2 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
Existen dos tipos de procedimientos para la determinación de hemoglobina, ambos

son colorimétricos, el directo es el método de Tallqvist en donde el color de la sangre
total expuesto en un papel secante se compara con un patrón, este es utilizado en
campo, y dentro de los métodos indirectos se utilizan el hemaglobinómetro de Shali o
el de Handen - Hausser, en el cual la hemoglobina es convertida primero en
hematina ácida y entonces se compara con un patrón (escala graduada).
5.3 CUENTA DE LEUCOCITOS
Para esta prueba se requiere sangre venosa oxalatada, extraída en las 24 horas
previas al examen.
5.3.1 La muestra de sangre se vierte sobre un frasco pequeño con ácido clorhídrico
1-10 normal, mezclándola cuidadosamente por inversión repetida.
5.3.2 Se procede al llenado de la pipeta de glóbulos blancos hasta 0.5 3.
5.3.3 La punta de la pipeta deberá introducirse en el frasco que contiene diluyente y

se aspira cuidadosamente, mezclando el contenido mediante movimientos de
rotación, hasta la marca 11.
5.3.4 Una vez lleno deberá ser agitado manual o eléctricamente hasta asegurar la
homogeneización de la mezcla.
5.3.5 El siguiente paso consiste en el llenado de la cámara contadora, la cual deberá

estar limpia y libre de grasa.
5.3.6 Se procede a colocar el cubreobjetos sobre la cámara.

5.3.7 Nuevamente se agita la pipeta, y se desechan dos o tres gotas del capilar
graduado de la pipeta.
5.3.8 Posteriormente, se procede al llenado por capilaridad, de la cámara sobre las

dos hendiduras que separa al borde del cubreobjetos con la misma.
5.3.9 Una vez llena, se procede a la observación al microscopio para el conteo de

los leucocitos existentes en cuatro de los cuadros grandes del campo, la suma
de su contenido, se multiplica por 50 para dar el total.
5.3.10 Cada cuadro grande posee 16 cuadros secundarios y presenta un área de 1

milímetro cuadrado y su profundidad es de 0.1 mm (cuatro décimas de
milímetro cubico a una dilución de 1 a 20).
5.4 CUENTA DE ERITROCITOS.
Para el llenado de la pipeta se sigue una técnica semejante a la anterior,

sustituyendo el liquido de dilución (Hayem), se llena hasta la marca 101 y se
procede al llenado de la cámara contadora.
5.4.1 La cuanta de los eritrocitos se lleva a cabo en el área central finamente

graduada de la cámara.
5.4.2 Se cuentan los cuadros secundarios de las esquinas y el cuadro central (cinco
en total).
5.4.3 Para el cálculo de la cifra total, la suma de los eritrocitos de los 5 cuadros es
multiplicada por 10,000 y da la cifra total.
5. 5. PROCESAMIENTO DE RESULTADOS
http://personal.us.es/pinero/citohistoma/docencia/practicas/guiones/PRACTICA7.
pdf
8.PRACTICABILIDAD

9. BIBLIOGRAFIA
9.1 BENJAMÍN M. M. Manual de Patología Clínica Veterinaria. 4ª Edición. Ed.

Limusa. México. 1990
9.2 COLES, E. H. Diagnóstico y Patología Veterinaria. 5ª Edición. Ed.

Interamericana. México. 1998
9.3 El Manual Merck de Veterinaria. Merck &CO. Centrum España 1988

PRACTICA NO 7
DIAGNOSTICO DE MASTITIS MEDIANTE LAS
PRUEBAS DE HOTIS Y DEL AZUL DE BROMOTIMOL
1. INTRODUCCION
La mastitis es una enfermedad aguda o crónica de tipo bacteriano que afecta

la glándula mamaria de diversas especies animales siendo de importancia
económica significativa en el caso del ganado bovino, el agente causal puede ser
variado entre los que tenemos a los Staphylococcus spp., Corynebacterium
pyogenes, E. coli, Pseudomonas spp.
2. OBJETIVOS
El alumno realizará la toma de muestra de leche de un bovino hembra en

producción, para identificar la presencia de Mastitis mediante las técnicas de
Hotis y del azul de bromotimol.
Para el diagnóstico de la mastitis se han aconsejado un sinnúmero de

procedimientos clasificándose de la siguiente manera:
1. Examen físico del animal (palpación e inspección).
2. Examen físico de la leche.
3. Examen químico de la leche (con indicadores como el azul de bromotimol).
4. Examen microscópico de la leche investigando la presencia de leucocitos y

bacterias (directo o en muestra incubada).
5. Pruebas presuncionales de cultivo encaminadas a identificar al microorganismo,

así como la prueba de Hotis.
6. Procedimientos específicos de cultivo para el aislamiento e identificación del
germen.
El éxito en el resultado de la prueba dependerá en gran medida de un estricto

procedimiento de recolección que evite la contaminación de la muestra.
Estas precauciones no serán tan estrictas en caso de que las pruebas sean de
carácter físico y químico.
4.1 Reactivos
1 Solución clorada 200 ppm 10 L
2 Alcohol 70% 5L
3 Azul de bromotimol 1L
4 Púrpura de bromocresol 1 - 300 1L
5 Tinción de Gram
4.2 Material
1 Lienzos de tela estéril (magitel) 20
2 Paletas para prueba de mastitis 5
3 Frascos de vidrio estériles 20
4 Tubos de ensaye 13 x 100 30
5 Tubos de ensaye 20 cc con tapón 30

de rosca
6 Pipetas pasteur 10
7 Portaobjetos 20
1 Estufa de cultivo
2 Microscopio
4.4 Material biológico
1. Vacas en etapa de lactación
2. Muestras de leche directa de la ordeña
5.1 PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA
5.1.1 Limpieza de la ubre.
5.1.2 Lavado con solución clorada (200 ppm).
5.1.3 Secar con lienzo limpio.
5.1.4 Secar y esterilizar el pezón con alcohol al 70%.
5.1.5 Despuntar para la prueba de paño negro, en su caso.
5.1.6 Ordeñar directamente sobre el recipiente evitando el contacto con el pezón.
5.1.7 Las muestras de cada cuarto deberá ser tomadas por separado, identificando
el cuarto a que corresponden.
5.1.8 lavar y desinfectar las manos del ordeñador antes y entre la toma de cada
cuarto.
5.1.9
5.2 PRUEBA DE AZUL DE BROMOTIMOL.
5..2.1 Extraer con cuidado 5cc de leche de cada cuarto y colocar en los tubos
dispuestos
5.2.2 Agregar 0.5 a 1.0 cc de solución de azul de bromotimol en cada tubo.
5.2.3 Proceder a la lectura apoyado con iluminación natural preferentemente.
5.2.4 Reacción amarillo verdoso equivale a un pH normal.
5.2.5 Reacción verde a verde oscuro o azul, presencia de exudado inflamatorio.
5.2.6 Vaciar las soluciones de las pruebas después de cada examen, y lavar con
agua neutra.
Esta prueba no es exacta al comienzo ni en la fecha cercana al final de la lactancia.

Los papeles indicadores pueden suplir a la solución con menor exactitud en los
resultados.
5.3 PRUEBA DE HOTIS
5.3.1 Preparar cada tubo agregando 1cc de solución estéril de púrpura de

bromocresol al 1-300.
5.3.2 Marcar los tubos a 16 cc.
5.3.3 extraer suficiente leche mediante la técnica estéril, para llenar el tubo hasta la
marca.
5.3.4 Tapar y mezclar el contenido por inversión.
5.3.5 Incubar por espacio de 24 Hrs a 37 C y observar los cambios físicos que
experimente.
5.3.6 Interpretación de la prueba : esta prueba esta destinada a revelar la presencia
de Streptococcus agalactiae.
5.3.7 Cuando el color vire a amarillo, revela la presencia de gérmenes que

fermentan la lactosa debido a la baja del pH de la solución.
5.3.8 Reacción negativa. cuando no hay cambios o adquiere una coloración grisácea
con o sin sedimento.
5.3.9 Reacción positiva. el color de la solución varia del gris al amarillo brillanteñ se
presentan los flóculos amarillentos, observandose desde unos cuantos en el
fondo y los lados del tubo hasta un sedimento denso.
La prueba de Hotis puede ser asociada al examen microscópico directo, para lo cual
se procederá a incubar los tubos de ensaye invertidos, para que, en caso de
muestras positivas, el sedimento adherido al tapón sea observado al microscopio
preparando los frotis necesario
8. PRACTICABILIDAD

9. BIBLIOGRAFIA



PRACTICA 8
TINCION DE ESPOROS DE Bacillus anthracis
1. INTRODUCCION
La formación del esporo es un mecanismo especializado para la supervivencia

bacteriana en circunstancias difíciles. Su función es encerrar un genoma o paquete
genético, en un vehículo aislante que le permita la germinación subsiguiente en un
medio adecuado. Los esporos, que son células en el sentido estricto de la palabra,
se encuentran en un estado de criptobiosis o vida latente, sin actividad metabólica y
muestran un aumento marcado en la resistencia a diversos agentes químicos o
físicos como por ejemplo la desecación, congelación y resistencia al calor y a las
radiaciones.
2. OBJETIVOS
los alumnos aplicarán la técnica de tinción con verde de malaquita, para la

identificación de esporos de Bacillus anthracis en una muestra de cepa vacunal.
El efecto que las condiciones ambientales tienen sobre la formación del esporo
varía de un tipo de bacteria a otra. Ejemplo; el bacilo de la Fiebre carbonosa (Bacillus
anthracis), solamente forma esporos en condiciones de aerobiosis y estas no pueden
encontrarse en impresiones de órganos como el bazo de animales muertos de
Antrax, en donde la insuficiencia de aerobiosis del tejido impide la formación del
esporo.
4.1 Reactivos
1 Cepa vacunal de Bacillus 1 fco

anthracis.
2 Verde de malaquita 1 fco
3 Solución acuosa de safranina 1 fco
4.2. Material de laboratorio
1 Portaobjetos 5
2 Lápiz graso 5
3 Asa bacteriológica 5
4 Platina 5
5 Jeringa desechable de 3 ml 1
1 Microscopio
5.1 TINCION DE ESPOROS CON VERDE DE MALAQUITA
5.1.1 Con ayuda de una jeringa, depositar una gota de Cepa vacunal en el centro de
un portaobjetos y fijar.
5.1.2 Aplicar verde de malaquita y calentar hasta la emisión de vapores, durante 1

minuto.
5.1.3 Lavar con agua corriente.
5.1.4 Contrastar con solución acuosa de Safranina, durante 15 segundos.
5.1.5 Lavar, secar y observar al microscopio.
Resultados a observar: Los esporos se tiñen en verde claro y las formas

vegetativas en rojo.
8. PRACTICABILIDAD

9. BIBLIOGRAFIA


9.4 CARTER, G. R. Bacteriología y Microbiología Veterinaria. Ed. M.M.M. México.

1990
9.5 MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriología y Virología Veterinaria. Ed.

Acribia. México.
PRACTICA 9
PRUEBA DE INTRADERMO-REACCION PARA
DETECCIÓN DE FASCIOLA Y TUBERCULOSIS
1. INTRODUCCION
La práctica se basa en la posibilidad de diagnosticar en condiciones de campo

a algunas enfermedades crónicas de los animales, mediante la inoculación de
antígenos conocidos y demostrando una respuesta inmune previa, denominada
Hipersensibilidad.
2. OBJETIVOS
2.1 El alumno elaborara el antígeno especifico de Faciola hepática para ser

utilizado en las pruebas diagnósticas de intra-dermo reacción en pequeños
rumiantes.
2.2 El alumno realizara la prueba de tuberculinización en vacas para identificar

las reacciones de Hipersensibilidad de tipo IV en los casos positivos a
tuberculosis bovina.
Siendo la tuberculosis bovina una zoonosis muy importante en el campo de la

Salud Pública, además de la campaña nacional de control y erradicación de este
problema, es para nosotros conocer perfectamente la técnica de detección, así como
saber dictar las políticas a seguir en el momento de encontrar uno o más animales
afectados (reactores), evitando así mayores problemas debido a su alta
transmisibilidad.
La observación de la reacción de la tuberculina, es una hipersensibilidad de

tipo IV (Gell-Coombs), debido a que en ella participan linfocitos T y macrófagos, esto
es, se precisa que haya una infección primaria de tuberculosis que pudiera ser clínica
o subclínica y que se hubiese implementado una respuesta inmune y que ahora
estaremos en posibilidad de demostrarlo y que estas células al momento del contacto
con la tuberculina liberen unas substancias denominadas genéricamente como
"linfocinas" y otras substancias como las amino-vaso activas; Esto dar por resultado
que en el sitio de la inoculación o de contacto se forme un proceso inflamatorio con
infiltración de linfocitos, monocitos y polimorfonucleres "neutrófilos", así como las
aminas vaso activas e interleucinas que promueven la salida de líquidos del torrente
sanguíneo, provocando el edema.
Aunque generalmente existe un elevado grado de resistencia del hospedador,

en numerosas ocasiones se han registrado casos de inmuno supresión en
enfermedades crónicas, lo que hace que el microorganismo prolifere de manera
relativamente incontrolada en los tejidos del individuo y al mismo tiempo se podría
observar una reactividad negativa a la prueba de la tuberculina; también se han
registrado casos de resistencia familiar baja a la tuberculina, lo cual indica que existe
una gran capacidad para producir diversos grados de inmunidad celular a un
organismo infectante determinado, esto es bajo control genético en los antígenos del
complejo mayor de histocompatibilidad (MHC).
Aparte de la tuberculosis existen otras enfermedades que pueden ser

diagnosticadas mediante el mismo tipo de prueba, obviamente cada una requiere de
su antígeno específico, estas son, como: lepra (lepromina), brucelosis (brucelina),
paratuberculosis (johnnina), muermo equino (maleína), histoplasmosis
(histoplasminina), coccidioidomicosis (coccidioidina), hidatidosis (líquido del quiste
hidatídico, prueba de Cazzoni), linfogranuloma venéreo (macerado de neoplasias,
prueba de Frei), y con algunos virus inactivados (rinotraqueítis infecciosa bovina,
Aujezsky, rabia, etc.).
En la prueba diagnóstica de la tuberculosis hay dos tipos de antígenos según

la bacteria de donde se originen: aviar o mamífero (bovino), estas substancias se
conocen como Derivado Proteico Purificado de la tuberculina. Debiéndose aplicar por
vía intradérmica 1/10 de mililitro (0.1 ml ó 100 ml), en el pliegue caudal o en la tabla
del cuello del bovino, registrándose las lecturas a las 72 horas; los resultados deben
anotarse como: REACTORES O NO REACTORES (positivos o negativos,
respectivamente). Es necesario conocer la Norma Oficial Mexicana para el control y
erradicación de la tuberculosis bovina.
También como pruebas intradérmicas podemos manejar algunos diagnósticos

de parasitosis, pero estas reacciones no las podemos ubicar como hipersensibilidad
tipo IV, sino como del tipo III puesto que en ellas participan complejos inmunes (Ag-
Ab-C'), y su reactividad puede ser observada en unos cuantos minutos,
permaneciendo hasta 6 u 8 horas.
Un problema parasitario común en nuestra zona y diagnosticable por este
método es la fasciolasis; para ello necesitaremos un extracto proteico de Fasciola
hepática en una concentración final de 0.03%. Esta prueba se considera muy útil
cuando se trata de determinar el estado de salud de un hato muy grande y que para
el cual en el laboratorio de parasitología no habría suficiente tiempo ni lugar; se
pueden elaborar antígenos parasitarios de Strongylus sp., Metastrongylus sp.,
Áscaris sp., Stephanurus sp., Cisticercus sp., Aunque en muchos de ellos existir el
problema de reacciones cruzadas, principalmente entre las familias afines.
4.1 Reactivos
1 Tuberculina PPD Aviar y 1 fco

mamífero
2 Solución Salina Fisiológica 5L
3 Método de Biuret o Kendall
4.2 Materiales de laboratorio
1 Jeringas de tuberculina c/agujas cal. 25-27 20
2 Jeringas de 5 ml con aguja del 21 5
3 Vernier (pie de Rey, nonio, cutímetro) 5
4 Mortero estéril 6
5 Vasos de precipitado de 500 ml 6
6 Pistilo estéril 6
7 Cajas de petri 6
8 Pinzas de disección 6
9 Gasas 15
10 Embudo de cristal 6
11 Tubos para centrífuga 12
4.3 Equipos de laboratorio
1 Báscula
2 Centrífuga
3 Espectrofotómetro
1. Fasciolas vivas
2. Bovinos u ovinos
5.1 ELABORACION DE ANTIGENO PARA DIAGNÓSTICO DE FASCIOLA
Para la elaboración de un antígeno para el diagnóstico de una parasitosis, los

parásitos frescos son lavados repetidas veces en SSF, hasta que se liberen de toda
la materia orgánica que les rodea, se secan y taran, luego son macerados y se
suspende la papilla al 10% son SSF, centrifugar y titular la proteína del sobrenadante
(SN) son un método apropiado ( Biuret y/o Kjelldal), ajustar a 0.3 % de proteína. Para
conservarlo se congela a -20 C, liofiliza o refrigera a 4-6C.
5.2 METODOLOGÍA DE LA PRUEBA DE INTRADERMOREACCION
Se realiza antisepsia en el pliegue caudal del bovino sospechoso (base de la

cola) y se aplica INTRADERMICAMENTE 0.1 ml de la tuberculina (PPD). Ser
positivo (reactor) cualquier manifestación inflamatoria que se observe en las
próximas 72 horas. Si un animal resulta reactor se le deber realizar una prueba
doble comparativa en la tabla del cuello, en donde se le rasurará y medirá el grosor
de la piel previo a la aplicación y se le aplicarán sendas dosis de PPD aviar y
mamífero, (siendo el PPD aviar en la parte anterior del sitio afeitado), leyéndose a las
72 horas. Para realizar la interpretación final se deber restar la medida de los
pliegues cutáneos de las 72 horas a la medida inicial de ellos.
6. REPORTE DE RESULTADOS
6.1 REGISTRO DE RESULTADOS
Prueba caudal
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
Prueba doble comparativa
Bovino No. Sexo Edad Raza Lectura RESULTADO
Inicial final
Mam Av Mam Av
Parasitosis
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
8. PRACTICABILIDAD

9. BIBLIOGRAFIA

9.4 CARTER, G. R. Bacteriología y Microbiología Veterinaria. Ed. M.M.M. México.

1990
9.5 MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriología y Virología Veterinaria. Ed.

Acribia. México.
9.6 HERNANDEZ-BELTRAN, A. y LOPEZ-YÁNEZ, B. Reacciones serológicas en la

inspección de carnes y embutidos. 1977. Tesis recepcional. FMVZ-UV.
9.7 NORMA OFICIAL MEXICANA. NOM-023-ZOO-1995 identificación de especie

animal en músculo de bovinos, ovinos, equinos, porcinos y aves, por la prueba de
inmuno difusión en gel. Diario Oficial de la Federación el 14 de septiembre de 1995.
edición a cargo de la "Comisión Nacional de Sanidad Agropecuaria". México, DF.
PRACTICA 10
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN PRUEBAS
SEROLOGICAS Y LACTEAS PARA LA DETERMINACION
DE BRUCELOSIS.
1. INTRODUCCION
Las pruebas de aglutinación son la base del conocimiento sero epidemiológico

de las campañas de control y erradicación de diversos problemas sanitarios de los
animales, como: brucelosis y salmonelosis aviar.
2. OBJETIVOS
El alumno realizara la técnica serológica de aglutinación en placa para la

determinación de Brucelosis en bovinos.
Las reacciones de aglutinación, al igual que las de precipitación, tienen como

componentes: antígeno, anticuerpo y electrolitos; pero en la aglutinación el antígeno
es forme, esto quiere decir que son células o partículas de éstas.
El fenómeno de aglutinación se lleva a cabo en dos etapas, siendo la primera

la formación de complejos inmunes, o sea la unión de antígenos y anticuerpos,
conformando lo que se conoce como complejos primarios, esta parte es inmediata,
específica e invisible; luego pasa a conformar los denominados complejos
secundarios, o sean las uniones de los complejos primarios entre sí, esta fase es
mediata, específica y visible.
La brucelosis es una zoonosis que incapacita al humano y causa mermas

económicas considerables en la ganadería nacional mediante abortos, esterilidad,
decomisos y muerte. Existe cierta dificultad para diferenciarla clínicamente de otras
afecciones del aparato reproductor de los bovinos como son: vibriosis
(campylobacteriosis), tricomoniasis, desnutrición, disfunciones hormonales, etc. Esto
ha originado la creación de diversos métodos de laboratorio para diagnosticarla en
los animales sospechosos. Estos métodos utilizan suero sanguíneo, leche, líquido
seminal, desde el punto de vista sero epidemiológico, además de que dichas pruebas
difieren en sensibilidad y especificidad. Desde el punto de vista bacteriológico se
intentará el aislamiento a partir del moco vaginal, cotiledones, contenido gástrico del
producto abortado, etc.
Las pruebas sero epidemiológicas son:
Especie
1.- Huddleson (placa) Bovino, cerdo y hombre
2.- Lenta en tubo (SAT) Bovino
3.- Tarjeta (Ag tamponado y rosa de bengala) Bovino y hombre
4.- Anillo en leche (Bang). Bovino
5.- Fijación del complemento. Bovino
6.- 2--Mercapto-etanol * Bovino
7.- Rivanol * Bovino
8.- Inactivación por calor (56 °C por 30 minutos) Bovino, cerdo
9.- Coombs. Bovino, cerdo
* Estas dos pruebas son capaces de detectar anticuerpos no vacunales (IgG),

destruyendo o precipitando a los anticuerpos de origen vacunal (IgM). Para funciones
de campaña para el control y erradición de la brucelosis se están empleando las
pruebas de tarjeta, rivanol y fijación del complemento, como rutina y para el control
permanente de los hatos lecheros libres de la enfermedad se está empleando la
prueba de anillo en leche (Bang); así como el aislamiento bacteriológico para la
confirmación de los casos.
4. LISTA DE REQUERIMINETOS
4.1 Reactivos
1 Antígeno Brucella abortus pH 3.65 1 fco

aba-test-tarjeta coloreado
con rosa de bengala
2 Antígeno Brucella abortus 1% 1 fco

aba-test-rivanol
3 Antígeno Brucella abortus 1 fco

aba-test-leche
4.2 Material
1 Agujas para punción calibre 18 o 20 15
2 Tubos vacutainers 15
3 Marcador 1
4 Placas de vidrio con cuadrícula 2.5 x 5

2.5 cm
5 Gradilla 5
6 Palillos de dientes 1 caja
7 Pipetas de Bang .02 ml 5
8 Pipetas serológicas de 0.2 mL 5
9 Pipetas automáticas graduables 5
10 Caja aislante con refrigerantes 1
11 frascos de vidrio con tapa 5

12 Lámpara de alcohol 1
1 Caja de iluminación o Negatoscopio
1. Bovinos hembras sin vacunaciones contra Brucella
2. Leche de vaca de reciente ordeño
Para la obtención de la sangre se deberá hacer una punción en la vena caudal

colectándose esta en el tubo al vacío (vacutainer), rotularlo (identificación definitiva
del animal) y dejarlo en posición HORIZONTAL hasta que alcance la perfecta
coagulación, posteriormente colocarlo en forma vertical en la gradilla, así cuando el
coágulo se retraiga soltará mayor cantidad de suero. es importante que la colección
de las muestras se hagan con DIFERENTE aguja (siempre estéril).
La muestra de leche puede ser individual o colectiva, esta se utilizará para la

prueba de Bang, aunque es preferible como muestra de hato pues es capaz de
detectar a una vaca reactor entre la leche de 60 animales.
5.1 PRUEBA DEL ANTIGENO TAMPONADO (tarjeta).- (Pietz 1968). La prueba es

cualitativa, se utilizan 30 L (microlitros, 0.03 ml) de suero sanguíneo y la misma
cantidad del Abatest-tarjeta, coloreado con rosa de bengala y un pH de 3.65. Se
colocan los reactivos sobre una placa de vidrio , de plástico o cartón satinado y
mezclar con palillos de dientes, rotar la mezcla y esperar hasta 4 cuatro minutos a la
aparición de la reacción. Debido al pH bajo, las IgM muchas veces no establecen
perfectamente la aglutinación, mientras que en presencia de IgG, esta sí se realiza
mejor.
5.2 PRUEBA DE ANILLO EN LECHE (prueba de Bang).- (Fleishaver 1937). Esta
prueba detecta aglutininas en la leche, se utiliza para inspeccionar hatos que han
sido declarados libres de la infección. Se debe homogeneizar la leche (perol, tanque
de enfriamiento, bote, etc.), se toman unos mililitros y se lleva al laboratorio en donde
se deberá refrigerar de 12-72 horas. Luego calentar al ambiente por 30-60 minutos
los reactivos (antígeno y muestras), colocar en tubos de ensaye un ml de la muestra
y agregarle 30 L de antígeno, mezclarlo e incubar en estufa de laboratorio a 37 °C
durante 30-60 minutos, la lectura se hará según el cuadro anexo en resultados:
5.3 RIVANOL.- (Anderson, 1964). El rivanol (lactato 2-etoxi-6,9 diamino-acridina) es

un colorante derivado de la acridina y tiene la particularidad de precipitar a proteínas
del suero de los bovinos. Mediante el uso de cantidades iguales de suero y una
solución de rivanol al 1%, queda un precipitado y un sobrenadante después de 30
minutos de incubación y centrifugación a 2000 rpm por 10 minutos en este
sobrenadante se detectan exclusivamente las IgG. Además debe emplearse un
antígeno especialmente elaborado para esta prueba con un pH de 5.8-6.2, pues
debe compensarse el efecto de la dilución de los anticuerpos.
Se requiere una placa de vidrio cuadriculada, pipetas de Bang o de 0.02 ml, en

donde se colocarán formando una columna, diversas cantidades de la muestra (0.08,
0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml que significarán títulos de 1.25, 1:50, 1:100, 1.200 y 1.400
respectivamente), luego se les añadirán 30 L de antígeno a cada cuadro y se
agitarán con un palillo de dientes, desde la mayor hasta la menor dilución del suero
sanguíneo, aglutinación igual o mayor que el título de 1:50 se considera positivo.
Para la elaboración de cada uno de los reactivos se utiliza la misma semilla de

B. abortus cepa 1119-3 que Cepanzoo proporciona al laboratorio productor. estas
bacterias se cultivan en cubas de fermentación en PBS, peptona y dextrosa,
adicionado un perfecto aireado para obtener un adecuado incremento celular;
manteniendo el control de calidad en cuanto se refiere a la:
 Disociación: mantenimiento de la cepa en su fase lisa
 Pureza: contener solamente B. abortus
 Esterilidad: que no haya contaminación con hongos, virus y otras bacterias.

Las diferencias entre los reactivos además de la coloración, estriba en la
concentración celular bacteriana:
Placa 10-12%
Tubo 4.5%
Leche 4.0%
Tarjeta 8.0%
Rivanol 4.0%
RELACIONES ANTIGENICAS ENTRE BRUCELAS
BACTERIA SUERO MONOESPECIFICO AGLUTINACION
Br. abortus anti-abortus si
Br. abortus anti-melitensis no
Br. melitensis anti-melitensis si
Br. melitensis anti- abortus no
Br. suis anti-abortus si
Br. suis anti.suis si
Br. suis anti-melitensis no
También se detectado reactividad cruzada entre bacterias del género Brucella

y Pasteurella, Campylobacter y Yersinia.
TIZARD. Inmunología Veterinaria. 1998
8. PRACTICABILIDADA

9. BIBLIOGRAFIA
9.1 AGUIRRE, M. R. A. Brucelosis bovina, diagnóstico comparativo por medio de las

pruebas serológicas de fijación de superficie, aglutinación en placa y en tubo. Tesis
recepcional. FMVZ-UV. 1969.
9.2 GONZALEZ, P.V. Porciente de reactores serológicos positivos a brucelosis. Tesis

9.3 LOPEZ, A. C. Investigación serológica de brucelosis canina por los métodos de

Huddleson y Brewer diagnostic kits (card test) en la ciudad de Veracruz. Tesis
9.4 MORILLA, G.A. y cols. Manual de inmunología. Ed. Diana-técnico. 1986. 1a. Ed.
México.
9.5 TIZARD. Inmunología Veterinaria. 1998

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PRACTICA 1

Métodos de sujeción y obtención de muestras para

Los veterinarios tienen la necesidad de consultar laboratorios de análisis clínicos

 La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento.

 La toma de la muestra deberá realizarse seleccionando las técnicas de sujeción y

 Suele ser preferible el envío de varios especimenes del mismo lugar.

 Las muestras deberán ser perfectamente identificadas.

 Deberá incluirse la Historia Clínica del individuo.

 Para cada caso se elegirá el tipo de recolección, manejo, conservación y envío

 Cuidar en lo posible, el manejo estéril de la muestra y en una cantidad adecuada.

 En caso de envío Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra, forma de

En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en distintas

El alumno seleccionará y aplicará las técnicas de sujeción y manejo más

3. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN

TECNICA DE PUNCION VENOSA

En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan más

NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

4 Vaselina pura 100% 500 gr

5 Xilocaina 10% 100ml

6 Ketamina 50% 100

3 Agujas desechables del No 21 4

4 Agujas desechables del No 22 3

5 Agujas desechables del No 25 2

7 Sonda de alimentación infantil 1

8 Cinta adhesiva opaca, tela adhesiva de 1

9 Cordón de algodón de 0.5 cm de 5 m.

12 Tubos de ensaye 13 x 100 5

13 Porta objetos de vidrio 10

20 cucharillas rectales o tubos de vidrio 10

4.3 Equipos de Laboratorio

NUM. CLAVE NOMBRE DEL EQUIPO

4.4 Material biológico

1 Perro de talla mediana o grande

2 Gallina o pollo grande

5.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO.

 PUNCIÓN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posición dorsal, se palpa

 PUNCIÓN EN LA VENA MARGINAL DE OREJA. Se coloca una torunda dentro

 PUNCIÓN DE VENAS CAUDALES.

 RESERCION DE COLA Y DEDOS.

 SANGRADO EXHAUSTIVO Y DECAPITACION.

El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las venas safena

5.1.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA.

El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más comunes

Para su recolección es necesario emplear recipientes limpios,

5.1.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES.

Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como medida de

En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener muestras

5.2 REPORTE DE RESULTADOS

7.1 Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

8.1 Los alumnos realizaran las actividades descritas en la práctica, organizados en

9.1 De la Puente G. José. Manual de Exterior y manejo y Técnicas de sujeción de

9.2 Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

9.3 El Manual Merck de Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.

La parasitología estudia los seres que viven momentánea y/o

Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a las

3.- PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN

La presente práctica consiste en la determinación de parásitos mediante

Esta técnica es recomendada para la identificación de quistes de protozoarios

4.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)

NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD

1 Solución saturada de sal 1.190 a 20°C 5L

2 Solución saturada de azúcar 1. 120 a 15°C 5 L

3 Solución cloruro de zinc 1.890 a 20°C 5L

4.2 Materiales de laboratorio