Hematopoyesis I

• Definición: la hematopoyesis es el mecanismo fisiológico

responsable de la formación continua de los distintos tipos
de células sanguíneas, de forma que los mantiene dentro de
los límites de la normalidad en la sangre periférica.
• Cálculos basados en el volumen sanguíneo, en el
nivel y vida media de cada tipo celular en la
circulación, indican que cada día un adulto
produce aproximadamente:

200 billones de eritrocitos

100 billones de leucocitos
100 billones de plaquetas

NEJM 2006; 354:2034-2045

• El proceso hematopoyético implica una
compleja interrelación entre un proceso
genético intrínseco de las células sanguíneas y
su medio ambiente.

• Esta interrelación determina si las Stem Cells

hematopoyéticas,(SCH), los progenitores, y las
células sanguíneas maduras permanecen en
reposo, proliferan, se diferencian, se
autorenuevan o sufren apoptosis.
• Todas las células sanguíneas maduras derivan
de una Stem Cell común, que son células
pluripotentes, o sea con capacidad potencial de
originar diferentes linajes celulares.

• Tienen capacidad de autorrenovación y el

potencial para diferenciarse y comprometerse
hacia un linaje particular.
• Tienen el aspecto de un linfocito pequeño o mediano.

• La SCH es poco abundante, se calcula 1 cada 20x106 de

células nucleadas en médula ósea (MO).

• Residen en sitios especiales dentro de la MO (nichos).

• Su identificación es posible mediante inmunotipificación.

• Este método pone de manifiesto moléculas de la superficie

celular (CD o “clusters de diferenciación”) mediante el uso
de Acs monoclonales y citometría de flujo.
Las principales moléculas utilizadas en la tipificación las SCH mediante
citometría de flujo y Acs monoclonales son:

• CD34:interviene en la adhesión celular, en la comunicación con la matriz

extracelular. Su expresión es elevada en células progenitoras tempranas y
disminuye progresivamente en función de la maduración celular, hasta
desaparecer en etapas diferenciadas a un linaje determinado.

• CD38:actuaría como molécula de adhesión uniendo las SCH a células

endoteliales y facilitando su transmigración hacia los tejidos. Tiene amplia
distribución en las células del sistema inmune y contribuye al desarrollo de
procesos inflamatorios y autoinmunes.

• CD117 (c-kit): promueve la proliferación y diferenciación de la SCH a células

progenitoras comprometidas.
Aunque el fenotipo de la SCH no es totalmente conocido, por estudios
inmunológicos se las define como CD34+CD38-/+, y negativa para
otros marcadores de linaje. Las muy primitivas son CD34-

Las SCH CD34+CD38+ son mas abundantes que las CD34+CD38-, pero
se comprobó que estas últimas pueden reconstituir y mantener la
hematopoyesis multilinaje en ratones con inmunodeficiencias después
de realizar un trasplante.

El marcador CD117 se expresa en el 2/3 de las células CD34+.

• La diferenciación celular ocurre desde la SCH
pluripotencial a través de precursores hematopoyétcos
que están restringidos en su potencial de desarrollo.

• La existencia de distintos progenitores celulares se ha

demostrado por técnicas de cultivos celulares “in vitro”.

• Es por esto que se habla de unidades formadoras de

colonias, o CFU.
 Esquema del ensayo de colonias medulares

En 1) la capa de agar contiene nutrientes y varios tipos de leucocitos, en un medio semisólido. 2) Células
medulares, incluyendo SCH, se agregan hasta formar una segunda capa. 3) Cuando la placa se incuba, colonias
de leucocitos se forman en la segunda capa.4) Las colonias se cuentan y se identifican las células. Si el
contenido celular de la primer capa se modifica, se forma otro tipo de colonias, lo cual implica la existencia
de diferentes factores estimulantes de colonias (CSF).
Representación esquemática de la SC pluripotente y las distintas líneas celulares originadas. A partir de la SC
pluripotente, se pueden originar el progenitor común mieloide, CFU GEMM, o el progenitor común linfoide. De
la diferenciación del CFU GEMM, a través de sucesivas etapas madurativas se llega a los elementos sanguíneos
reconocibles en sangre periférica: eritrocitos, plaquetas, monocitos, neutrófilos, eosinófilos y basófilos. El
producto de la diferenciación del precursor linfoide común son los linfocitos B, T y las células “natural killer “.
• La SCH tiene capacidad de auto-renovación de
modo que la celularidad medular permanece
constante en estado de salud.

• El sistema tiene considerable amplificación, se

supone que una SCH es capaz de producir 106
células maduras luego de 20 divisiones.

• Las SCH acumulan mutaciones génicas con la

edad, y se cree que tales mutaciones pueden
estar presentes en tumores originados en ellas.
a) Las células medulares incrementan su diferenciación y pierden la
capacidad de auto-renovación a medida que maduran. b) Una sola SCH
produce, después de múltiples divisiones celulares > 106 células
maduras
• En condiciones normales la mayoría de las SCH están en la
fase G0 del ciclo celular, mientras que muchos de los
progenitores, de ellas originados, están proliferando y
produciendo células maduras.

• En ausencia de situaciones de stress esta condición está

balanceada por el nivel de apoptosis de los progenitores y
células maduras.
• Una variedad de factores de crecimiento (GF o
CSF) estimulan a las SCH y progenitores a
proliferar y diferenciarse en leucocitos,
hematíes y plaquetas.

• Cuando el sangrado, la infección u otro

desorden terminan, y la demanda de células
sanguíneas vuelve a la normalidad, los procesos
anti-apoptóticos y proliferativos disminuyen,
las células se redistribuyen en los sitios de
depósito y la cinética de la hematopoyesis
vuelve a niveles basales.
• Frente a situaciones de sangrado, infecciones,
etc, ocurren diferentes procesos.

• Células en depósito, tanto medulares como

adheridas a los endotelios vasculares son
liberadas a la circulación para localizar el sitio
de la injuria.

• Disminuye el número de progenitores y células

maduras que sufren apoptosis.
Estructura de la médula ósea

• La MO es el lugar de formación de los elementos

sanguíneos debido a su capacidad de permitir el
anidamiento, crecimiento y diferenciación de las
células germinales pluripotentes.

• Está constituida por un tejido blando, esponjoso, que

contiene sangre, grasa y células hematopoyéticas,
que yacen en una red vascular y de células
fibroblásticas ramificadas contenido en un estuche
óseo.
La hematopoyesis ocurre en un microambiente apropiado (nicho), provisto por la
matriz extracelular. El nicho puede ser vascular, limitado por el endotelio, o
endosteal, limitado por los osteoblastos. Las células mesenquimales junto con las
endoteliales, osteoblastos y fibroblastos producen GF, moléculas de adhesión y
citoquinas que mantienen las SCH y permiten su desarrollo.
 Vacuola grasa
Tejido
hematopoyético

Megacariocitos

Trabécula
ósea

Biopsia de cresta ilíaca posterior de MO normal, en donde

alrededor del 50% es tejido hematopoyético y 50% materia grasa
• El microambiente medular engloba un conjunto
de sustancias químicas hormonales,
neurotransmisoras y diversas células,
endoteliales, mesenquimáticas, reticulares,
linfocitos T, macrófagos, adipocitos , etc., que
son esenciales para el normal desarrollo de la
célula germinal.
Reguladores de la hematopoyesis del medio ambiente medular

• Citoquinas.
• Quimioquinas.
• Componentes de la matriz extracelular.
• Moléculas de adhesión.
• Células hematopoyéticas y no hematopoyéticas.
• Nutrientes, vitaminas.
• Procesos fisiológicos.
• Citoquinas: amplia familia de proteínas que median
efectos positivos y negativos sobre la actividad celular,
apoptosis, proliferación, diferenciación, respuesta
inmune, etc.
Actúan por acoplamiento a receptores específicos,
activando vías de señalización.

• Quimioquinas: regulan el tráfico celular, el “homing” a

los sitios de necesidad y también actúan como
reguladores de crecimiento.
• Componentes de la matriz extracelular: colágeno,
laminina, fibronectina, heparán sulfato. Forman el
citoesqueleto en donde se localizan las SCH.

• Moléculas de adhesión: median la unión de las SCH a los

componentes de la matriz. La adherencia inicia además
una serie una de vías de señalización y regula la expresión
de genes que intervienen en el ciclo celular.
• Células: LT, NK, macrófagos, fibroblastos, osteoblastos,
adipocitos.

• Nutrientes: Zn, Se, Cu, Vit A, D, E, ácido retinoico.

• Procesos fisiológicos: movimiento de fluidos intercelular,

fuerzas de estiramiento y compresión actuando sobre las
células, concentración de O2, estado de óxido-reducción del
medio ambiente medular, etc.
 Regulación de la hemopoyesis
• La hematopoyesis comienza con la división de la SC, en
la cual una célula reemplaza la SC (auto-renovación) y la
otra se compromete a la diferenciación.

• El linaje celular seleccionado depende tanto del azar

(estocástico), como de señales externas recibidas por
la célula progenitora.

• Varios factores de transcripción regulan la

supervivencia de las SCH (SCL,GATA-1,2,NOTCH-1,
FOG-1, etc.), mientras que otros están involucrados en
la diferenciación.
 Factores de crecimiento hematopoyéticos

• Los FC (GF, CSF) son hormonas glicoproteicas que

regulan la proliferación y diferenciación de las
células progenitoras hematopoyéticas y la función
de las células maduras.

• Pueden actuar localmente en los sitios donde se

producen por contacto célula-célula, o circular en
plasma.
• Se unen a la matriz extracelular para formar
nichos en donde se adhieren tanto las SCH
como los precursores.

• Los GFs pueden producir proliferación,

estimular la diferenciación, maduración
prevenir apoptosis y afectar las funciones de
las células maduras.

• Las células del estroma son la principal fuente

de GFs excepto para eritropoyetina (Epo)
(riñón), y trombopoyetina (Tpo) (hígado).
Los GF pueden estimular proliferación, diferenciación, maduración, suprimir
apoptosis, afectar funciones de células maduras. Ej con el G-CSF.
 Las citoquinas hematopoyéticas son polifuncionales

El G-CSF puede desempeñar diferentes funciones comprometidas con la supervivencia,

proliferación, diferenciación, maduración y estimulación funcional de la progenie granulocítica
©2008 by American Society of Hematology
• Tipos de acción de las citoquinas hematopoyéticas :

A) Restricción de linaje

B) Acción sobre múltiples linajes

Las citoquinas hematopoyéticas pueden actuar de distinta manera. (A) se denomina restricción de linaje, en
donde la Epo actúa exclusivamente sobre los precursors eritroides. En (B) la acción es sobre multiples
linajes. Así el CSF-GM puede actuar en la producción de granulocitos, monocitos, eosinófilos,
megacariocitos y eritrocitos, si bien se necesita una alta concentración para los dos últimos tipos celulares.
 Tejidos productores de las citoquinas hematopoyéticas

Metcalf D. Blood
2008;111:485-491

Diferentes tejidos pueden ser origen de las citoquinas hematopoyéticas. En A) la Epo es principalmente producto del tejido
renal, si bien hay una pequeña proporción producida en hígado. En B), el CSF-GM es producto de diferentes tejidos y tipos
celulares, tejido pulmonar, músculo estriado, timo, tejido vesical, linfocitos T, etc. En C), el M-CSF, puede actuar como un
factor humoral, circulante, y producido por diferentes tejidos, o bien como un factor expuesto sobre la membrana de células
del estroma.
• La proliferación y diferenciación de las células
comprometidas requiere la presencia de un factor
estimulante específico para cada uno de ellas.

• Las citoquinas que estimulan la expansión y

diferenciación de las células progenitoras se
denominan CSF, porque se analizan en función de su
capacidad para estimular la formación de colonias
celulares en los cultivos de médula ósea.
 Citoquinas con actividad hematopoyética
Nombre Origen Actividad principal Crom.
IL1 Mac/Mo Junto a IL3 coestimula células primitivas 2q

IL2 LT Estimula el crecimiento de células T 4q

IL3 LT Estimula todas las células comprometidas en una 5q
línea
IL4 LT Coestimula todos los tipos de células uni y 5q
multilínea mieloide
IL5 LT Formación de colonias eosinófilas 5q
IL6 LT Colabora con IL3 7q
IL7 LT Estimula células preB, preT y MK 8q
IL8 LT Estimula el progenitor neutrófilo -
IL9 LT Estimula células T y progenitores eritroides -

IL11 - Estimula células B, MK y mastocitos -

C-kit lig Fibroblastos Factor Stem Cell -
Factores de crecimiento hematopoyético con actividad estimulante de colonias mieloides

Factor Abrev. Origen Actividad principal Crom.

Eritropoyetina Epo Riñón Proliferación y maduración de la 7q
Hígado línea eritroide en los estadios
más maduros

FEC-macrofágico CSF-M Macrófago- Crecimiento de colonias de 5q

[Link]- macrófagos
Fibroblastos
FEC-gránulo- CSF-GM [Link]- Crecimiento de colonias de 5q
macrofágico Fibroblastos granulocitos y macrófagos

FEC-granulocítico CSF-G Macrófagos- Crecimiento de colonias de 17q

[Link]- granulocitos
Fibroblastos
La importancia de una citoquina hematopoyética como el G-SCF puede ser validada
en diferentes modos. En A), la administración de G-CSF eleva el recuento de
neutrófilos, en B) al deletear el gen que codifica el G-CSF, el resultado es un bajo
recuento de neutrófilos, una pobre respuesta a los procesos infecciosos y una
muerte prematura.
Receptores de los factores de crecimiento

• Muchas citoquinas y factores de crecimiento ejercen sus

actividades biológicas a través de la interacción con receptores
de superficie.

• Contienen subunidades, en general α y β, una es específica de

cada receptor y la otra común.

• La interacción α-β forma un complejo receptor de alta afinidad

que se une al ligando respectivo y trasduce diferente tipo de
señales.
• Estos receptores de superficie tienen uno o dos
dominios extracelulares de unión a citoquinas, un
dominio transmembrana, y uno intracelular con
estructuras que reclutan quinasas de la familia
Janus (JAK).

• El acoplamiento de una molécula de GF por el

receptor induce cambios conformacionales que
llevan al acercamiento de las JAKs y a su mutua
fosforilación.
 HGF

PI3,4,5P
JAK2 JAK2 JAK2 P-JAK2
P-GAB or P-IRS
P-SHP2
p85 and p110
P-SHC
P-Y P-GRB2 Ras
Y Y SOS
Y
P-STAT3 Akt
P-ERK1 or 2
P-STAT5
Gene transcription P-p38MAPK
(e.g., BCLXL, cyclin D, hematopoietic growth factors P-GSK3b
and hematopoietic growth factor receptors) P-FOX
Representación esquemática de la interacción de un factor de crecimiento hematopoyético (HGF) con su receptor de
superficie. Esto produce un cambio conformacional que lleva a la fosforilación de diferentes quinasas. El posterior
acoplamiento estímulo-respuesta conduce a la transcripción de distintos genes que codifican moléculas antiapoptóticas
(BCLXL), reguladoras del ciclo celular (ciclinas) y GF adicionales y sus receptores.
• Una vez que las JAKs son activadas por HGFs
específicos, se fosforilan moléculas de
señalamiento secundarias, que disparan diferentes
eventos que promueven sobrevivencia,
proliferación y diferenciación.
Interacción GF-R y señales de transducción

• Las principales vías son:

- JAK/STAT
- MAP quinasa (mitogen-activated protein)
- IP3

• Los factores actúan sobre las células que expresan

los correspondientes receptores.

• La unión del GF-R activa las diferentes vías lo cual

conduce a la activación transcripcional de genes
específicos.
 Producción de factores de crecimiento hematopoyéticos

• La producción de GF por distintos tejidos es tanto constitutiva como inducible, y sujeto a la

absorción por células que expresan el receptor.

• La producción de Epo es inducible por hipoxia en el riñón y constitutiva en el hígado (10%) y se

excreta por orina.

• G-CSF es principalmente inducible en fibroblastos y macrófagos y desde células activadas por

citoquinas inflamatorias como IL1, IL6 y TNFα.

• Trombopoyetina (Tpo) es producida en forma constitutiva por el hígado (50%) y mucho menos por
el riñón, e inducible en el hígado por IL6 y por el estroma medular frente a una disminución en el
número de plaquetas (trombocitopenia).

• G-CSF y la Tpo son removidos de la circulación por el respectivo receptor sobre los neutrófilos y
plaquetas respectivamente.
 Erythropoietin

Thrombopoietin
Inducible Constitutive
erythropoietin erythropoietin
Constitutive G-CSF
thrombopoietin Inducible Inducible
thrombopoietin
thrombopoietin
Constitutive
Hematopoietic stem cells
thrombopoietin
and progenitor cells
Stromal cells
Neutrophil Inducible
G-CSF
Platelets nducible
Inducible G-CSF
G-CSF Endothelial
cells Inducible
G-CSF

Macrophages Fibroblasts
 Factores de crecimiento hematopoyéticos
• Sobre SC pluripotencial: SCF, FTL3-L,VEGF.

• Sobre los progenitores celulares

multipotenciales: IL3, GM-CSF, IL6, G-CSF, Tpo.

• Sobre progenitores comprometidos: G-CSF, M-CSF, IL5,

Epo, Tpo.

• Actúan sobre las células del estroma: IL1, TNFα.

SCF: factor stem cell. Ftl3-L: es una citoquina hematopoyética que interacciona con receptores de quinasa
III, es esencial en el mantenimiento de la hematopoyesis. VEGF: factor de crecimiento vascular endotelial
Resumen:

• La hematopoyesis normal es un proceso en múltiples pasos en el cual el

desarrollo de un linaje ocurre como consecuencia de la diferenciación inicial
de SC pluripotentes.

• Esto genera precursores hematopoyéticos multipotentes y la subsecuente

diferenciación hacia los diferentes linajes.

• Todo esto se desarrolla bajo el control de los efectos ordenados de

diferentes factores de crecimiento (HGFs).

• Los GF que actúan en etapas tempranas, mantienen un pool de SCH y células

progenitoras. Sobre estas últimas, GF más tardíos, como Epo, G-CSF, M-
CSF, IL5 y Tpo, actúan incrementando la producción de uno u otro linaje
celular en respuesta a las necesidades.