INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR
Práctica No. 1 Preparación de Algunas Soluciones y
Reguladores Utilizados en el Laboratorio de Biología Molecular
y Manejo de Micropipetas
E8 7QM2
INTEGRANTES DOCENTES
◦ COLÓN VALLADARES PAULINA YUNUÉN DR. CARLOS WONG BAEZA
◦ DIAZ NERIA ABEL DRA. ISABEL WONG BAEZA
◦ GARCÍA HERNÁNDEZ FRIDA MARIANA M EN C. JESSICA CASTAÑEDA CASIMIRO
◦ LÓPEZ RODRÍGUEZ DANIELA MONSERRAT
15 DE NOVIEMBRE DEL 2024
REALICE LOS CÁLCULOS Y DESCRIBA COMO
PREPARARÍA LAS SIGUIENTES SOLUCIONES
1. 100 mL de acetato de potasio (PM = 98.14 g/mol) 3M, pH 4.8
1. Pesar 29.44 g de acetato de potasio.
g = M x PM x V(L)
2. Disolver en diluyente.
3. Verter a un matraz aforado de 100 mL.
g = 3 x 98.14 x 0.1
4. Completar aforo con el diluyente.
g = 29.44
5. Ajustar el pH con HCl.
2. 50 mL de glucosa (PM = 180 g/mol) 1M (estéril)
1. Pesar 9 g de glucosa.
g = M x PM x V(L)
2. Disolver en diluyente.
3. Verter a un matraz aforado de 50 mL.
g = 1 x 180 x 0.05
4. Completar aforo con el diluyente.
g=9
5. Esterilizar por filtración.
3. 20 mL de acetato de sodio (PM= 136 g/mol) 3M, pH 5.2
1. Pesar 8.16 g de acetato de sodio.
2. Preparar la solución, disolviendo el acetato de
sodio en un volumen menor que el final.
3. Aforar la solución al volumen final deseado (20mL).
4. Ajustar el pH con una solución ácida, como el ácido
clorhídrico.
4. 50 mL de hidróxido de sodio (NaOH) (PM= 40 g/mol) 10N
1. Pesar 20 g de hidróxido de sodio.
2. Preparar la solución, disolviendo el acetato de
sodio en un volumen menor que el final.
3. Aforar la solución al volumen final deseado (50mL).
5. 20 mL de dodecil sulfato de sodio (SDS) al 10% 1. Pesar 2 g de dodecil sulfato de sodio (SDS).
2. Disolverlo en un volumen menor al final de diluyente.
3. Verter en un matraz aforado de 20 mL.
4. Completar aforo con el diluyente.
6. 50 mL de Tris (PM= 121 g/mol) 1M, pH 8.0 1. Pesar 6.5 g de Tris.
2. Disolver en un volumen menor al final de diluyente.
3. Verter en un matraz aforado de 50 mL
4. Completar aforo con el diluyente
5. Ajustar el pH con una base o álcali (ej. NaOH).
7. 100 mL de una solución stock de TE (tris 100 mM, EDTA 10 mM) (estéril).
Tris (PM= 121 g/mol)
EDTA (PM=372 g/mol)
1. Pesar 1.21 g de tris y 0.372 g de EDTA en una
1. 100mL= 0.1L
balanza analítica.
2. Tris=100mM= 0.1M 2. En un matraz aforado de 100ml, disolver los 1.21
Moles de tris=0.1L x 0.1M= 0.01moles g de tris en el agua, luego, añadir los 0.372 g de
EDTA y agitar hasta que ambos compuestos estén
Masa de tris= 0.01moles x 121 g/mol= 1.21 gramos
completamente disueltos. Llenar con agua estéril
3. EDTA 10mM=0.01M hasta alcanzar el volumen final de 100 ml, si es
Moles de EDTA= 0.1L x 0.01m= 0.001 moles
necesario, ajustar el pH con HCl o NaOH diluido.
Masa de EDTA= 0.001 moles x 372 g/mol= 0.372 gramos 3. Filtrar la solución utilizando una membrana de
filtro de 0.22 µm para asegurarse de que la
solución sea estéril.
8. 250 mL de una solución stock de TBE (Tris y ácido bórico 890 mM y EDTA 25 mM).
Tris (PM=121 g/mol)
Ácido bórico (PM=61.84 g/mol)
EDTA (PM=372 g/mol)
1. Pesar 126.92 g de tris, 13.76 g de ácido
1. 250mL= 0.25L bórico, y 2.325 g de EDTA en una balanza
2. Tris=890mM= 0.89M
analítica
Moles de tris=0.25L x 0.89M= 0.2225moles 2. En un matraz aforado de 250ml, disolver los
Masa de tris= 0.2225moles x 121 g/mol= 26.92 gramos 26.92 g de tris en el agua, añadir 13.76 g de
3. Ácido bórico= 890mM= 0.89M ácido bórico y mezclar hasta que esté
Moles de ácido bórico= 0.25L x 0.89M=0.2225moles
completamente disuelto, agregar 2.325 g de
EDTA hasta que esté disuelto. Llenar con
Masa de ácido bórico=0.2225moles x 61.84= 13.76 gramos
agua estéril hasta alcanzar el volumen final
4. EDTA 25mM=0.025M
de 250 ml, si es necesario, ajustar el pH con
Moles de EDTA= 0.25L x 0.025M= 0.00625 moles HCl o NaOH diluido.
Masa de EDTA= 0.00625 moles x 372 g/mol= 2.325 gramos
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3μL=0.003
Equipos 1 y 2. MEDICIÓN DE 3μL g
TABLA 1. VALORES OBTENIDOS TABLA 2. VALORES OBTENIDOS
POR EL EQUIPO 1 POR EL EQUIPO 2
No. de medición Valor obtenido No. de medición Valor obtenido
1 0.004 1 0.003
2 0.002 2 0.002
3 0.003 3 0.003 0.5μL-10μL
4 0.002 4 0.003
Calibrada conforme
5 0.003 5 0.003
ISO 8655-2:2022
Promedio 0.0028 Promedio 0.0028
SD 8.36x10-4 SD 4.47x10-4
% de error -6.66% % de error -6.66%
CV 28.57% CV 15.96%
Equipos 3 y 4. MEDICIÓN DE 9μL
0.009 gramos
TABLA 3. VALORES TABLA 4. VALORES
OBTENIDOS POR EL OBTENIDOS POR EL
EQUIPO 3 EQUIPO 4
No. de medición Valor obtenido No. de medición Valor obtenido
1 0.010 1 0.009
2 0.008 2 0.007
3 0.009 3 0.008
4 0.010 4 0.007
5 0.009 5 0.007
Promedio 0.0092 Promedio 0.0076
SD 8.36x10-4 SD 8.94x10-4
% de error 2.22% % de error 15.55%
CV 9.09% CV 11.76%
8.82 µL y 9.18 µL (si el error es del ±2%)
2μL-20μL ±1%, el volumen estará entre 8.91 µL y 9.09 µL.
Equipos 5 y 6. MEDICIÓN DE 73μL 73 μL=0.073 g
TABLA 5. VALORES OBTENIDOS TABLA 6. VALORES OBTENIDOS
POR EL EQUIPO 5 POR EL EQUIPO 6
No. de medición Valor obtenido No. de medición Valor obtenido
1 0.070 1 0.071
2 0.071 2 0.071
3 0.071 3 0.072
4 0.071 4 0.072
5 0.071 5 0.072
Promedio 0.0708 Promedio 0.0716
SD 4.47x10-4 SD 5.47x10-4
% de error -3.01% % de error -1.92%
CV 0.63% CV 0.76%
Equipos 7 y 8. MEDICIÓN DE 622μL (0.622 g)
TABLA 7. VALORES OBTENIDOS TABLA 8. VALORES
POR EL EQUIPO 7 OBTENIDOS POR EL EQUIPO 8
No. de Valor Valor Valor Valor No. de Valor Valor Valor Valor
medición obtenido obtenido obtenido obtenido medición obtenido obtenido obtenido obtenido
(P1000) (P1000) (P200) 600μL (P1000) (P1000) (P200) 600μL
622μL 600μL 22μL +22μL 622μL 600μL 22μL +22μL
1 0.616 0.598 0.018 0.616 1 0.604 0.590 0.020 0.610
2 0.611 0.588 0.018 0.606 2 0.610 0.591 0.021 0.612
3 0.611 0.592 0.021 0.613 3 0.611 0.590 0.021 0.611
4 0.613 0.592 0.021 0.613 4 0.609 0.592 0.021 0.613
5 0.610 0.594 0.021 0.615 5 0.611 0.592 0.021 0.613
Promedio 0.6122 0.5928 0.0198 0.6126 Promedio 0.609 0.591 0.0208 0.6118
SD 2.38x10⁻³ 3.63x10⁻ 1.64x10⁻³ 3.91x10⁻³ SD 2.91x10⁻³ 1x10⁻³ 4.47x10⁻⁴ 1.30x10⁻³
³
% de error -2.09 -1.5 -5.45 -1.63
% de error -1.57% -1.2% -10% -1.51% CV (%) 0.4778 0.1692 2.1490 0.2124
CV (%) 0.3887 0.6123 8.2828 0.6382
ISO 8655-2 (2002)
CUESTIONARIO
1. Indique los cálculos que haría para preparar 100mL de una solución de NaCl 5M
1. Pesar 29.22g de cloruro de sodio
2. Preparar la solución, disolviendo
el cloruro de sodio en un volumen
menor que el final.
3. Verter a un matraz aforado de
100 mL
4. Completar aforo con el diluyente.
2. ¿Cómo prepararía una solución de agarosa al 0.7% en 25 mL de regulador TBE 1X?
1. Pesar 0.175 g de agarosa.
2. Disolverlo en un volumen menor al final de TBE 1X.
3. Verter en un matraz aforado de 25 mL.
4. Completar aforo con TBE 1X.
3. ¿Cómo prepararía 100 mL de regulador TAE 1X a partir de una solución concentrada 50X?
C1V1 = C2V2 V2 = C1V1 / C2 * 2 mL de regulador TAE 50X aforado a 100mL con diluyente
C1 = 1X V2 = (1) (100) / 50
V1 = 100 mL V2 = 2 mL
C2 = 50X
V2 = ?
4. Sabiendo que el NaCI tiene un peso molecular de 58.44 g:
a) Describa cómo prepararía 85 mL de una solución de NaCl al 3.5%.
b) ¿Cuál sería la concentración molar de esta solución?
c) ¿Qué volumen de la solución al 3.5% se requieren para preparar 22.5 mL de una solución al 0.4%?
1. 3.5% significa 3.5 gramos de NaCl en cada 100 mL de Calcular los gramos de NaCl en 1 litro (1000 mL):
solución. En una solución al 3.5%, hay 3.5 g de NaCl por cada
100 mL de solución. Entonces, en 1000 mL (1 L):
3.5𝑔 3.5𝑔
2. 𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝐶𝑙 = 100𝑚𝑙
𝑥85𝑚𝐿 = 2.975𝑔 𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝐶𝑙 =
100𝑚𝑙
𝑥1000𝑚𝐿 = 35𝑔
3. Pesar 2.98 g de NaCl, disolver el NaCl en un matraz Convertir los gramos de NaCl a moles:
aforado de 85 mL, completar con agua destilada hasta Usamos el peso molecular del NaCl (58.44 g/mol):
𝐺𝑟𝑎𝑚𝑜𝑠
alcanzar el volumen final de 85 mL. 𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝐶𝑙 =
𝑃𝑀 × 𝑉
35𝑔
𝑀𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝐶𝑙 = = 0.599𝑀
58.44𝑔/𝑚𝑜𝑙
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2𝑉2 Concentración molar: La solución al 3.5% tiene una
(3.5%)×V1=(0.4%)×22.5 mL concentración aproximada de 0.6 M.
(0.4%) × 22.5𝑚𝐿
𝑉1 = = 2.7𝑚𝐿
3.5
Entonces, se necesitan 2.57 mL de la solución al 3.5% para
preparar 22.5 mL de una solución al 0.4%.
CONCLUSIONES
• Los valores obtenidos por el equipo 1 son más exactos y precisos a comparación de los obtenidos por el
equipo 2.
• Los resultados del equipo 3 presentan mayor exactitud en sus mediciones que la del equipo 4, al medir 9
microlitros con una micropeta de volumen 2 microlitros-20 microlitros.
• Los resultados del equipo 6 fueron más exactos que los del equipo 5, pero menos precisos que ellos al utilizar
una micropipeta de 20 – 200 microlitros.
• El equipo 7 obtuvo mediciones más exactas de 622 μL utilizando solo una micropipeta, mientras que el equipo
8 obtuvo mediciones más exactas al utilizar 2 micropipetas.
• En una micropipeta a menor volumen hay mayor error relativo.
• EL uso inadecuado de la micropipeta puede generar errores de medición y afectar los resultados esperados y
la reproducibilidad del experimento.
REFERENCIAS
• Organización Internacional de Estandarización. (2002). Piston-operated volumetric
apparatus Part 2: Piston pipettes (ISO 8655 – 2).
[Link]
