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1.
OBJETIVOS
a) Objetivo general.Realizara clculos para las precauciones de disoluciones, adecuadas y exactas de las disoluciones en el
laboratorio. Con la finalidad de tener una buena extraccin del DNA.
b) Objetivos especficos. Preparar las disoluciones utilizados en medios de cultivos para la regulacin del PH de otras
disoluciones preparadas.
Identifique y maneje el equipo necesario en las prcticas correspondiente en laboratorio.
Determinar los clculos de las diferentes disoluciones, con respecto a los reactivos con que se
cuenta en laboratorio de la U.A.G.R.M. de la facultad de ciencias Farmacuticas y Bioqumicas
Realizar en laboratorio los clculos usando las frmulas matemticas y fsicas.
2.
MARCO TEORICO
Todas las clulas, a excepcin de las clulas anucleadas de los eritrocitos maduros en humanos,
contienen ADN en sus ncleos celulares. Tambin podemos encontrar ADN dentro de otros
compartimentos celulares diferentes al ncleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La
cantidad
de
ADN
presente
en
algunos
tejidos
es
muy
pequeo;
por e s t e m o t i v o n o r e p r e s e n t a u n a f u e n t e c o n v e n i e n t e d e e x t r a c c i n , a i s l a m i e
n t o y purificacin, para ser empleado en diferentes estudios de carcter gentico, biolgico. y/o bioqumico.
Muchos tejidos contienen alta actividad de desoxirribonucleasa (DNAasa) que rompe la
macromolcula en pequeos fragmentos. Para seleccionar un tejido como fuente de ADN debe
reunir dos condiciones: contener gran cantidad de material gentico poseer baja actividad de DNAasa.
Este procedimiento permite obtener cidos nucleicos, con un bajo grado de pureza. Que sern almacenados en
congelacin para usos posteriores.
Contempla la descripcin de las distintas fases de la tcnica, el material necesario. La preparacin de
disoluciones.
Tambin incluye notas de seguridad y medioambiente de los reactivos utilizados.
Solucin stock: es una solucin que posee una concentracin alta de una o varios compuestos y reactivos
qumicos conocidos.
Clasificacin de disolucin
Segn el tamao del soluto o fase dispersada en el disolvente las disoluciones se clasifican en:
Las disoluciones groseras: Tambin se llaman dispersiones Ya que las partculas dispersadas al tener un tamao
superior a 0.1 u se observan a simple vista. Por ejemplo:
Los medios de cultivo liquido de bacterias.
Las disoluciones verdaderas: Son lasms utilizadas en el laboratorio, las partculas dispersadas no se pueden
observar, ya que tiene un tamao de partcula inferior a las 0.001 u.
Las unidades fsicas que expresan la concentracin de las disoluciones se basan en magnitudes fsicas como la
masa y el volumen. Son las unidades clsicas para expresarla.
Formulas importantes para preparacin de disoluciones:
C1*V1=C2*V2
C1 Concentracin inicial
C2 concentracin final
V1= Volumen inicial
V2 volumen final
2.g=M(PM).V
(g =gramos, M=Molaridad. PM= peso molecular y V= volumen en litros)
Forma expresado de las disoluciones
Entre las disoluciones de concentracin expresada en unidades qumicas Molaridad, molalidad, normalidad.
Milimolar, micromolar.
Solucin de Acetato de sodio:
A 60ml de una disolucin de acetato de sodio 5 M, Aadir 11.5 ml de cido actico glacial, y 28.5 ml de agua
destilada, estabilizar el ph=3.
Prepare un volumen de 5 ml.
SOLUCIONES SIMPLES
a) Prepare 5ml de etanol 72% a partir del 96 %
DATOS
V1*C1=V2*C2
V1= 5ml
V2=V1*C1C2
C2 = 72%
V2= 5ml*72%/96%
C1 = 96%
V2= 3.75ml
PM =46g/mol
B).-Prepare 5ml de hidrxido de sodio 0,2M. a partir de ---30%---------DATOS
V1*C1=V2*C2
V1= 5ml
C2 = 69%
20g------ 100ml
x-------1000ml
V2=V1*C1C2
V2= 5ml*0.2mol/5mol
C1 = 96%
PM =46g/mol
200g-----x
x=200g
40g------1mol
V2= 0,2ml---200ml
X= 5mol
C)
Prepare 5ml de hidrxido de sodio 2M. a partir de ---25%------DATOS
V1*C1=V2*C2
V1= 5ml
30g------ 100ml
C2 = 2mol
x-------1000ml
Na0H=30%
x=250g
PM =40g/mol
V2=V1*C1C2
V2= 5ml*0,2mol/7,5mol
V2= 0,13ml
40g------1mol
300g-----x
X= 6,25 mol.
C1= 2mol/1000ml*40gNa0H/1mol*100ml =8%Na0H
30g Na0H*x/5mlx8g Na0H
X= 8g Na0H (5ml)/30gNa0H
X= 1,6 ml
d) Prepare 5ml de lauril sulfato sdico (SDS)AL -----20%---DATOS
V1= 5ml
C2 = 20%
--- DATOS
V1*C1=V2*C2
V1= 10ml M=d x Pza x 10/PM
C2 = 2,5%HCL V1= 10ml*2.5%/37%
d= 1.198
C1= 37%HCL
M= 1.198*37%*10/36.5
V1= 0,226ml------226,89
M= 0,1 gms
M=1.198*2.5%*10/36.5
M=0,27
V1= 10ml*0,8205mol/12,144mol
V1= 0,226ml------226,89
f) prepare solucin de fenol, cloroformo. Alcohol isoamilico, la relacin por partes es.
80: 40: 2, esto es 80 partes de fenol, 40 partes de cloroformo y 2 partes de alcohol
isoamilico. volumen de 20 ml
DATOS
FENOL---------------
80 80ml de fenol-------122ml
CLOROFORMO ----
40 x
------
ALCOHOL ISOAMILICO---- 2
VT= V1+V2+V4
20ml
VT= 19.98mlx1000ml
x= 13.11ml de fenol
VT= 19987.86
T0TAL
122
40ml de cloroformo------122ml
x
------ 20ml
x= 6.55ml de cloroformo
2ml alcohol isoamilico-----122ml
x
-------- 20ml
x= 0.32ml alcohol iso.
x=
1923mg CH3C00Na3h20
disodico ACNaCH2P042H20
C= 0.6M
PM= 156,01g/mol
PM= 141,96G/mol
Pka=-log ka
Pka=-log1,3x10-8
Acido
0.284mol ------1000ml
Pka=7.88
Ph=pk+logcB/Ca
10ml
x= 0,00284mol
8 -7.88+logCb/Ca------------logCB/Ca=8-7.88156,01g
-------1mol
-------
1.32Ca=CB
CT= CA+CB------0.66=1CB+(1.32Ca)-------0.66=2.32Ca
Ca=0.66/2.320.374mol----------1000ml
--- --0,00284mol
x=
BASE
0.443g-----443mg
x= 0,00374mol
PROCEDIMIENTO
1. Preparar las siguiente solucin
Solucin de lavado
Tampn fosfato
= 14 mol
5 mol x 1 M
1000 M
= 5 x 10-3
EDTA
Ajustar el PH a 8.0
= 1 mol
Solucin lavado
b) Cloruro de Magnesio
MgCl2 =
5 mM x
1M
1000 mM = 5 x 10 -3 M < 0,3
Datos
C1 = 0,6 m
sol, stock
C2 = 5 X 10-3 m
V1 = ?
x 5 ml
V2 = 10 mol
V 1 = C2 V 2
C1
X = 0,031 g H2O
-3
V1 = 10 ml x 10 M
0,1 M
- 5 ml
4,95 ml H2O
V1 = 0,5ml
b) Glucosa
PH = Glucosa = 180,15 / mol
Datos
C1 = 0,3 M
56 mM x 1 M
1000 mM
C2 = 0,056
x 5 ml
V1 = ?
V2 = 10 ml
= 0,056 M
V 1 = C2 C2
C1
x = 0,27 g glucosa
270 mg glucosa
V2 = 0,056 M 10 ml = 1,866 ml
0,3 M
1866 NL
b) EDTA
1 mMol
1M
1000 mM
= 1 x 10-3
C2 = 1 x 10-3
x 5 ml
V1 = ?
x = 5 x 10-4 mol
V2 = 30 ml
V 1 = C2 C2
C1
V1 = 1 x 10-3 10 ml = 0,01 ml
0,01 M
100 NL
x = 0,018 g 2H2O
0,018 g 2H2O
- 5 ml
4,98 ml 2H2O 4990 NL 2H2O
Solucin de Lisis
a) Tampn Fosfato 24 mM
Glucosa
56 mM
EDTA
8 mM
Ajustar PH = 8,0
Prepare 10 ml de volumen final de la solucin lisis
a) tampn fosfato
Datos
24mM 1M = 0,024 M
1000 M
C1 = 0,06 M
C2 = 0,024 M
V1 = ?
V2 = 10 ml
V 1 = C2 C2
C1
V1 = 0,025 M 10 ml
0,06 M
V1 = 0,025 M ml 4166 NL
c) EDTA
2H2O
PM = 336,24 g / mol
PM 372,24 g / mol
8 mMol x 1 M
1000 nM
= 8 x 10-3 M
Datos
C1
C2
V1
V2
=
=
=
=
0,1 M
8 x 10-3
?
10 ml
Concentra
cin de la
sol. Stock
Nelva
Zulema
Anabel
Elfi
0,3M
0,4M
0,06M
0,1M
EDTA
Nombre
Concentra
Peso del
reactivo
30 mg
40 mg
60 mg
100 mg
Volumen
final de la
solucin
Stock
4,838ml
4,78ml
4.969 ml
4,95 ml
Volumen
para
preparar
la dilucin
166 ul
125 ul
833 ul
500 ul
Volumen
final
De la
dilucin
10ml
10ml
10ml
10ml
Peso del
Volumen
Volumen
Volumen
del
estudiante
cin de la
sol. Stock
reactivo
Nelva
Zulema
Anabel
Elfi
0,3M
0,4M
0,06M
0,00M
558,36 mg
744 mg
111 mg
186,2 mg
SOLUCION DE LISIS
G L U CO S A
Nombre
Concentra
Peso del
del
cin de la
reactivo
estudiante sol. Stock
Nelva
Zulema
Anabel
Elfi
0,3 M
0,4 M
0,06 M
0,3 M
EDTA
Nombre
del
estudiante
Concentra
cin de la
sol. Stock
Nelva
Zulema
Anabel
Elfi
0,3M
0,4 M
0,06 M
0,1 M
270,225 mg
360 mg
54 mg
270 mg
Peso del
reactivo
558,36 mg
744,48 mg
1116 mg
18,61 mg
final de la
solucin
Stock
4,946 ml
4, 928 ml
4,99 ml
4,982 ml
para
preparar
la dilucin
33,33 ul
125 ul
160 ul
100 ul
final
De la
dilucin
10ml
10ml
10ml
10ml
Volumen
final de la
solucin
Stock
5ml
5ml
5ml
5ml
Volumen
para
preparar
la dilucin
1866,66 ul
1400 ul
9,330 ul
1866 ul
Volumen
final
De la
dilucin
10ml
10ml
10ml
10ml
Volumen
final de la
solucin
Stock
4,838 ml
4,838 ml
4,893 ml
4,99 ml
Volumen
para
preparar
la dilucin
166 ul
1400 ul
1330 ul
8000 ul
Volumen
final
De la
dilucin
10ml
10ml
10ml
10ml
Volumen
final de la
solucin
Stock
4,946 ml
4,928 ml
4,99 ml
4,98 ml
Volumen
para
preparar
la dilucin
333,33 ul
275 ul
1660 ul
1000 ul
Volumen
final
De la
dilucin
10ml
10ml
10ml
10ml
RESUPENSION E D T A
Nombre
del
estudiante
Concentra
cin de la
sol. Stock
Nelva
Zulema
Anabel
Elfi
0,3 M
0,4 M
0,06 M
0,1 M
Peso del
reactivo
558,36 mg
724 mg
111 mg
186 mg
OBSERVACIONES
Las soluciones preparadas se deben guardar a 4C. Para su conservacin hasta el momento de su uso en la
extraccin del material gentico plsmido de las Bacterias
CONCLUSION
En las prcticas se llev a cabo los clculos dados por el docente a diferentes concentraciones `para cada
grupo, siendo el docente quien escoga la concentracin ms apropiada para la preparacin de los reactivos,
teniendo mucho cuidado con el lauril sulfato de sodio ya que al diluir produca burbujas, con nuestras
preparaciones fue satisfactorio.
BIBLIOGRAFIA
1. 2.- Sanbrook, J and D.Russell2001molecularcloning A Laboratory manual 3raediccion.
2. 1.- Gua de laboratorio de FMC-420