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J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776

https://doi.org/10.1007/s13197­020­04594­0

ARTÍCULO ORIGINAL

Extracto de anacardo (Anacardium occidentale L.) procedente de un

subproducto del procesamiento del jugo: evaluación de su toxicidad.
actividades antiproliferativas y antimicrobianas

Jessica María Silva Sousa1 • Fernando Antonio Pinto de Abreu2 • Ana Lu´cia Tasca Va Ruiz3 •
Gisele Goulart da Silva4 • Sandra Lira Machado5 • Carolina Peixoto Gira˜o García1 •
Francisco Oiram Filho1 • Nedio Jair Wurlitzer2 • Evaˆnia Altina Teixeira de Figueiredo1 •
Francisco Ernani Alves Magalha˜es6 • Celli Rodrigues Muniz2 • Guilherme Julia˜o Zocolo2 •
Ana Paula Dionı´sio2

Revisado: 5 de junio de 2020 / Aceptado: 17 de junio de 2020 / Publicado en línea: 25 de junio de 2020
Asociación de Científicos y Tecnólogos de Alimentos (India) 2020

Resumen El extracto de anacardo (CAE) es un producto con
color amarillo intenso obtenido de las fibras residuales del jugo
Procesando. Aunque se sabe que el CAE es rico en carotenoides y
ácidos anacárdicos, las actividades biológicas del
Este potencial colorante alimentario natural permanece inexplorado. El
El presente estudio es el primero en investigar la toxicidad,
actividades antiproliferativas y antimicrobianas del CAE liofilizado (L­
CAE) y sus productos encapsulados,
utilizando maltodextrina (M­CAE) o goma de anacardo (CG­CAE) como
transportistas. Además de su alto contenido en carotenoides, los
El contenido fenólico en todos los materiales se determinó utilizando
UPLC­QTOF­MSE . La toxicidad aguda se realizó
utilizando pez cebra adulto (Danio rerio); antiproliferativo
La actividad se evaluó utilizando siete tumores humanos diferentes.
líneas celulares [U­251 (glioblastoma), MCF­7 (mama, adenocarcinoma),
NCI­ADR/RES (ovario multirresistente
adenocarcinoma), NCI­H­460 (pulmón, carcinoma de células grandes),
PC­3 (próstata, adenocarcinoma), OVCAR­3 (ovario
adenocarcinoma), y HT­29 (colon, adenocarcinoma)]
y un queratinocito humano inmortalizado (HaCaT) mientras
la actividad antimicrobiana se evaluó sobre Staphylococcus aureus
ATCC 25923, Listeria monocytogenes ATCC
19115, Escherichia coli ATCC 25922 y Salmonella
Microorganismos Typhimurium ATCC 51812. Tanto las muestras de
CAE liofilizadas como las encapsuladas no ejercieron efectos agudos.
toxicidad contra el pez cebra ni efecto antiproliferativo
contra líneas celulares tumorales y no tumorales humanas. Más,
L­CAE mostró actividad antimicrobiana potencial contra
Listeria monocytogenes, lo cual se confirmó mediante microscopía
electrónica. Los hallazgos actuales demostraron que
CAE es una fuente potencial de compuestos bioactivos para usar como
un aditivo en la industria alimentaria.

Palabras clave Anacardium occidentale Toxicidad Adulto

Material complementario electrónico La versión en línea de este
pez cebra Antiproliferativo Antimicrobiano
artículo (https://doi.org/10.1007/s13197­020­04594­0) contiene material
complementario, que está disponible para usuarios autorizados.

& Ana Paula Dionisio

Introducción
ana.dionisio@embrapa.br

1
Departamento de Tecnología de Alimentos, Universidad Federal de El anacardo (Anacardium occidentale L.) es una planta tropical
Ceará, Fortaleza, CE 60356­000, Brasil fruta que se encontró originalmente en Brasil, donde es ampliamente
2
Embrapa Agroindu´stria Tropical, Calle Dra Sara Mesquita, cultivados y explotados comercialmente. El producto principal del árbol
2270, Fortaleza, CE 60511­110, Brasil de anacardo es el anacardo (fruta verdadera), que
3
Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Universidad Estatal de Es rico en grasas y proteínas. Después de quitar la tuerca del
Campinas, Campinas, SP, Brasil pedúnculo, los pseudofrutos se convierten en desechos o se procesan
4
Departamento de Ciencias Fisiológicas, Piracicaba Dental en la industria, principalmente, para producir jugo de anacardo.
Escuela, Universidad Estatal de Campinas, Piracicaba, Posteriormente, aproximadamente del 20% al 25% de los pseudofrutos
SP 13414­903, Brasil
utilizados en la industria procesadora permanecen como fibras residuales
5
Departamento de Nutrición, Universidad Estatal de Ceará, y en su mayoría se descartan o se utilizan como suplementos alimentarios
Fortaleza, CE 60714­903, Brasil para animales (Abreu et al. 2013).
6
Universidad Estatal de Ceará, Taua´, CE 63660­000, Brasil

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Ha aumentado el número de estudios que han explorado el
aprovechamiento eficiente de este residuo agroindustrial.
Abreu et al. (2013) informaron un proceso para la obtención de un extracto
de anacardo (denominado CAE) utilizando fibras de anacardo como
materia prima y agua como extractante. El agua logró extraer los
carotenoides (que presentan un comportamiento lipófilo) porque estos
componentes, en este producto/proceso específico, se encuentran en una
estructura emulsionada. El producto final tiene un color amarillo intenso,
lo que demuestra su potencial uso como colorante alimentario. El proceso
optimizado implica el tratamiento enzimático de las fibras de anacardo,
seguido de prensado secuencial y microfiltración de flujo cruzado (Abreu
et al. 2013) para generar un producto con alto contenido de carotenoides,
que se concentró mediante un proceso de microfiltración. En consecuencia,
se concentraron los ácidos anacárdicos (AnAc), que están presentes de
forma natural en todas las partes del anacardo. Los ácidos anacárdicos
son lípidos fenólicos reconocidos por sus propiedades antibacterianas,
antitumorales y antioxidantes (Hamad y Mubofu 2015). Sin embargo, a
pesar de sus conocidos beneficios biológicos, dosis más altas de AnAc
demostraron toxicidad en ensayos agudos y subagudos en ratones.
Carvalho et al. (2011) observaron anomalías leves (disminución de los
niveles de hematocrito y hemoglobina y aumento de los niveles de urea)
en ratones hembra BALB/c que habían recibido las dosis más altas de
AnAc (600 o 1000 mg/kg). Sin embargo, no se observaron efectos
adversos con dosis de AnAc inferiores a las
300 mg/kg, lo que indica que esta dosis es segura. Sin embargo, los
autores sugirieron que se deberían realizar estudios biológicos adicionales
utilizando AnAc.
El CAE tiene un color amarillo intenso debido a que es rico en
carotenoides, donde la auroxantina y la b­criptoxantina representan
alrededor del 50% del total de carotenoides (Abreu et al. 2013).
Aunque el CAE es una fuente interesante de pigmentos carotenoides,
estos compuestos son susceptibles a la degradación cuando se aíslan
(Boon et al 2010). Además, se deben emplear métodos de procesamiento
rentables para preservar los carotenoides y otros compuestos bioactivos
(Saini et al.
2015). Se utilizan portadores, como la maltodextrina o la goma de
anacardo, para estabilizar estos carotenoides, que están fuertemente
asociados con posibles beneficios para la salud de los seres humanos
(Saini et al 2015). Sin embargo, las propiedades colorantes y biológicas
de estos extractos que contienen bioactivos (encapsulados y no
encapsulados) aún deben evaluarse y deben explorarse debido a sus
posibles aplicaciones, especialmente en la industria alimentaria.
Las propiedades biológicas de los productos naturales han atraído
durante mucho tiempo la atención de los investigadores, y se han
explotado estudios que investigan sus actividades biológicas específicas,
tanto in vivo como in vitro, utilizando líneas celulares y diversos modelos
animales. Para explorar eficazmente los mecanismos biológicos y los
efectos asociados con una enfermedad, el organismo modelo utilizado
para el estudio debe proporcionar ventajas técnicas y prácticas (Kang et
al. 2013). El
765
El sistema modelo del pez cebra (Danio rerio) ha surgido recientemente
como un organismo modelo vertebrado muy útil para estudiar genética,
desarrollo, toxicología ambiental, farmacología, reparación de daños en
el ADN, cáncer y otras enfermedades (Dai et al. 2014 ). Para investigar
los efectos de los carotenoides, Saidi et al. (2015) evaluaron el efecto de
la zeaxantina en la agudeza visual del pez cebra adulto. Más
recientemente, se utilizaron embriones de pez cebra como modelos de
desarrollo de vertebrados para identificar, aislar y caracterizar metabolitos
teratogénicos de glucósidos carotenoides producidos por cianobacterias
(Jaja­Chimedza et al. 2017). Sin embargo, los autores observaron que los
efectos tóxicos de los ácidos anacárdicos u otros carotenoides
(o materiales que contienen niveles más altos de estos componentes) en
el pez cebra adulto aún están por explorarse.
El presente estudio tuvo como objetivo investigar las propiedades
biológicas del CAE (liofilizado, L­CAE) y sus materiales encapsulados, M­
CAE y CG­CAE, preparados utilizando maltodextrina o goma de anacardo
como portador, respectivamente. En particular, el estudio se centró en
sus efectos antiproliferativos y antimicrobianos, con el objetivo de reforzar
o proponer nuevas aplicaciones de estos extractos, como fuente de
compuestos bioactivos para uso alimentario o con fines farmacológicos.
Además, también se evaluaron sus toxicidades agudas para el pez cebra
adulto maduro.
material y métodos
Preparación de extracto de anacardo (CAE)
Los pedúnculos de anacardo (Anacardium occidentale L.), variedad
CCP­76, fueron utilizados para la producción de jugo por la empresa
''NatVita'' de Eusebio (Ceará­Brasil). Después del procesamiento del jugo,
las fibras residuales se congelaron a ­18 C y se transportaron a Embrapa
(Fortaleza­Brasil) para obtener el extracto de anacardo (CAE). Brevemente,
las fibras se mezclaron con agua (1:1 p/p), se homogeneizaron y se
prensaron bajo una prensa continua de tipo helicoidal (Incomap 300,
Fortaleza, Brasil), que consiste en un eje helicoidal con diámetro creciente
en el extremo, y rodeado por un tamiz de acero inoxidable de 0,5 mm,
que permite la separación del jugo de las fibras, con una capacidad
nominal de 300 kg/h para producción de jugo.
Después de los seis ciclos de prensado, se obtuvo una suspensión de
color amarillo fuerte. Después de una prefiltración a través de una malla
de acero inoxidable de 0,3 mm para eliminar las partículas suspendidas
grandes, la suspensión resultante se centrifugó (modelo Her­aeus
Megafuge 40, ThermoFisher Scientific, Lan­genselbold, Alemania) a
4415 g durante 5 min. Luego el extracto se envasó en bolsas de polietileno,
se congeló a ­20 C y se almacenó para análisis posteriores.
Para la obtención del CAE, el extracto producido mediante prensado
se sometió a un sistema de microfiltración equipado con membranas
cerámicas tubulares. Experimentos de microfiltración
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se llevaron a cabo utilizando un equipo a escala de laboratorio TIA
(Techniques Industrielles Applique´es, Bolle`ne, Francia) utilizando un
conjunto compuesto por cuatro membranas monotubulares de alúmina
MEMBRALOX (Pall­Exekia, Bazet, Francia) con un área de filtración de
0,022 m2 y diámetro medio de poro de 0,2 lm. La presión transmembrana
fue de 2,75 bar y la temperatura se controló a 40 C (± 2 C) en todas las
pruebas.
El proceso se llevó a cabo utilizando el modo de concentración hasta una
relación de reducción volumétrica (VRR de 16). La fracción de
carotenoides se concentró en la fase de retención y se denominó extracto
de anacardo (CAE). Posteriormente, el CAE fue sometido a los diferentes
procesos de secado [liofilización (L­CAE), encapsulación en secador por
aspersión usando maltodextrina como portador (M­CAE) y encapsulación
en secador por aspersión usando goma de anacardo como portador (CG­
CAE)].
Goma de anacardo y maltodextrina como agentes encapsulantes.
Se recolectaron muestras crudas del exudado de goma de anacardo de
árboles nativos (variedad CCP­076) en Pacaju, Ceará, Brasil. Las
muestras fueron purificadas según la metodología descrita por Torquato
et al. (2004) con algunas modificaciones. Inicialmente, la resina cruda del
anacardo se colocó en un secador en una estufa con circulación de aire
a 45 C. Después del secado, la resina cruda se molió, se tamizó (0,3 mm)
y se disolvió en agua destilada (10 g/100 ml). .
La solución resultante se agitó durante 2 hy luego se filtró.
Posteriormente, se añadió etanol al 96% al filtrado en una proporción de
3:1 (etanol:filtrado) para precipitar el polisacárido.
La mezcla se refrigeró durante 12 h hasta su total decantación. Se drenó
el sobrenadante y el precipitado se centrifugó a 2825 g durante 5 minutos
a 25 C (modelo Heraeus Mega­fuge 40, ThermoFisher Scientific,
Langenselbold, Germain). Después de la centrifugación, el precipitado se
colocó en una bandeja de acero inoxidable y se colocó en una estufa con
circulación de aire a 45 C hasta la completa evaporación del etanol.
El material seco se molió (Molino Analítico Básico A­11, IKA) y se tamizó
(0,3 mm) para obtener la goma de anacardo (CG) purificada. El agente
encapsulante maltodextrina (DE 10) se adquirió de Cargill Company,
Brasil.
Preparación del CAE encapsulado.
Se prepararon muestras de CAE encapsuladas con maltodextrina (M) o
goma de anacardo (CG) siguiendo métodos optimizados (datos no
mostrados). La relación CAE: material encapsulante fue de 5:1 (CG:CAE)
o 3,5:1 (M:CAE). El CAE se homogeneizó durante 1 min utilizando el
transportador (Homogenizador modelo TE 102 Turratec, Tecnal,
Piracicaba, Brasil). Después de filtrar en un tamiz de acero inoxidable
(malla de 0,3 mm) para evitar la obstrucción del atomizador, la suspensión
final se secó por aspersión usando un Spray Dryer (LM MSD
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modelo 1.0; Labmaq do Brasil, Ribeirão Preto, Brasil). Las condiciones
operativas fueron las siguientes: temperatura de entrada de aire, 150 C;
flujo de aire comprimido (3,0 L/min), caudal de alimentación (0,4 L/h) y
flujo de aire de secado (3,5 m3 /min).
métodos analíticos
Color
Los análisis de color se realizaron midiendo la reflectancia directa del
sistema de coordenadas rectangulares (L*, brillo; a*, intensidad de rojo y
verde; y b*, intensidad de amarillo y azul) aplicando la escala de color
CIELAB usando un colorímetro (Chroma ­Medidor modelo CR­410,
Konica Minolta Sensing Inc., Osaka, Japón). Después de estandarizar el
instrumento con una placa blanca (L0 = 97,51, a0 = 0,16 y b0 = 1,75), se
evaluaron los colores de las muestras (50 g, por placa) a temperatura
ambiente (25 C). Los análisis se realizaron por triplicado.
Contenido total de carotenoides
El contenido total de carotenoides se determinó según el método descrito
por Higby (1962). El procedimiento fue el siguiente: la muestra (0,2 g de
CAE, 0,5 g de M­CAE y 0,5 g de CG­CAE) se añadió a 30 mL de alcohol
isopropílico y 10 mL de hexano. Después de la homogeneización durante
60 s usando un mezclador vortex, la muestra se transfirió a un embudo
de decantación y el volumen se completó con agua destilada hasta 125
mL. Después de 30 min, se lavó la muestra y se repitió el proceso tres
veces. Luego, la fracción que contenía los carotenoides se filtró en un
matraz de 50 mL, con 5 mL de acetona, completando el volumen con
hexano. Todo el análisis se realizó por triplicado. La lectura se realizó en
un espectrofotómetro (modelo SP­220, Biospectro, Brasil) a 450 nm. Los
datos se expresaron como mg de carotenoides/100 g de muestra según
la siguiente ecuación: Carotenoides totales ¼ ð Þ A 100 =ð Þ 250 LW
;
donde A = absorbancia; L = ancho de la cubeta en cm; y W = el peso de
la muestra original en gramos dividido por el volumen final de dilución en
ml.
Contenido de ácido anacárdico (AnAc)
Las muestras de CAE se solubilizaron a una concentración de 1 mg/ml
en metanol, se filtraron directamente en filtros de disco de PTFE de 0,45
lm en viales y luego se inyectaron en el sistema de HPLC por triplicado.
El sistema HPLC constaba de un cromatógrafo (Shimadzu LC­20AB
Prominence, Kyoto, Japón) junto con un detector de matriz de diodos
(Shimadzu SPD­M20A Prominence) y un muestreador automático
(Shimadzu
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Prominencia SIL­20AC). Los ácidos anacárdicos presentes en las
muestras de CAE se cuantificaron siguiendo un método validado descrito
por Oiram Filho et al. (2018) utilizando una columna cromatográfica C18
de fase inversa Shim­pack CLC–ODS (M) (150 mm 9 4,6 mm 9 5 lm,
Shimadzu).
La fase móvil utilizada fue una mezcla que contenía agua (Disolvente A),
acetonitrilo (Disolvente B) y ácido acético en una proporción de 20:80:1
en modo isocrático. El análisis se realizó durante 30 min con un caudal
de 1,5 ml/min y una temperatura de 30 C utilizando un volumen de
inyección de 20 l.
Los cromatogramas se controlaron a una longitud de onda de 280 nm y
los espectros UV se registraron de 200 a 400 nm.
Confirmación estructural de ácidos anacárdicos (AnAc) por UPLC–QTOF–
MSE Para confirmar las estructuras de AnAc, las muestras se analizaron
en un sistema Acquity UPLC (Waters, Milford, MA, EE. UU.) acoplado a
un cuadrupolo/tiempo de ­espectrómetro de masas de vuelo (QToF)
(Waters, Milford, MA, EE. UU.). Los compuestos se separaron en una
columna Acquity BEH C18 (150 mm x 2,1 mm, 1,7 lm; Waters, Milford,
MA, EE. UU.) operada a 40 °C. El sistema eluyente empleado fue una
mezcla de A (0,1 % de ácido fórmico en agua). y B (ácido fórmico al 0,1%
en acetonitrilo) con un caudal de 0,4 ml/min. El gradiente varió linealmente
de 5 a 95% B (v/v) durante 20 min. El volumen de inyección de muestra
fue de 5 l. Los espectros de masas se obtuvieron en modo de iones
negativos en un rango de masas de 50 a 1180 Da. El espectrómetro se
operó con programación de centroide MSE usando un voltaje de cono de
40 V. La presión del gas de secado se ajustó a 35 psi a 370 C, mientras
que la presión del gas del nebulizador se ajustó a 40 psi. Se utilizó un
voltaje capilar de 3500 V y un voltaje de protección contra rociado de 600
V. La identificación de AnAc se realizó utilizando fórmulas moleculares y
valores m/z obtenidos a partir de espectros de masas de alta resolución
utilizando el software MassLynx (Waters Corporation). Los datos obtenidos
del presente estudio se compararon con los presentados en estudios
anteriores (Trevisan et al. 2006; Oiram Filho et al. 2018).
Evaluación biológica
Evaluación in vivo
Mantenimiento del pez cebra Macho y hembra de pez cebra salvaje
(Danio rerio) adulto de 60 a 90 días de edad con tamaños similares (3,5
± 0,5 cm) y peso (0,3 ± 0,2 g) se obtuvieron de Agroquı´mica: Come´rcio
de Produtos Veterina´ rios LTDA, proveedor ubicado en Fortaleza (Ceará,
Brasil).
Cada grupo estuvo compuesto por 50 peces, los cuales fueron aclimatados
durante 24 h en un tanque de vidrio de 9 L (30 cm 9 15 cm 9 20 cm) que
contenía agua del grifo declorada (ProtecPlus) y bomba de aire con filtro
sumergido a 25 C y pH 7,0. bajo
767
condiciones de ritmo circadiano casi normales (ciclo de luz/oscuridad de
14:10 h). Antes de los experimentos, los peces tuvieron acceso a la
comida ad libitum durante 24 h. Después de los experimentos, los
animales fueron sacrificados mediante inmersión en agua helada (2 a 4
C) durante 10 min hasta que se observó pérdida de amplitud en los
análisis por movimientos circulares (CONCEA 2018).
Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el Comité de Ética en
Investigación Animal del Estado de Ceará.
Universidad (CEUA­UECE), y el protocolo experimental fue presentado
bajo el N. 7210149/2016.
Protocolo general Los protocolos se realizaron siguiendo los
procedimientos descritos en Magalha˜es et al. (2017). El día del
experimento, los peces cebra fueron seleccionados al azar y transferidos
a esponjas húmedas para tratamiento oral (po) con las muestras (diluidas
en agua destilada) o controles (vehículo, agua destilada) usando una
micropipeta variable de 20 lL. Después del tratamiento, se colocaron
peces cebra individuales en vasos de precipitados (250 ml) que contenían
150 ml de agua de la pecera y se les permitió recuperarse.
Prueba de campo abierto Los animales (n = 6/grupo) fueron tratados con
L­CAE o M­CAE o CG­CAE (2, 40 y 200 mg/kg; po) o vehículo (control,
agua destilada; 20 lL ; po) y sometidos a la prueba de campo abierto para
determinar posibles alteraciones en la coordinación motora de los peces
ya sea mediante sedación y/o relajación muscular siguiendo el protocolo
descrito por Magalha˜es et al. (2017). Se incluyó un grupo ingenuo. El
número de cruces de línea (LC) para cada pez se anotó de 0 a 5 min.
Para cada grupo experimental, los cruces de líneas en porcentaje (LC%)
se expresaron como media ± error estándar en relación con el valor de
LC de los peces sin tratamiento previo (100%) (Magalha˜es et al. 2017).
Después de confirmar la normalidad de la distribución y la homogeneidad
de los datos, los datos se analizaron mediante análisis de varianza
(ANOVA), seguido de la prueba de Tukey. P \0,05 se consideró
estadísticamente significativo. Todos los análisis se realizaron utilizando
el software GraphPad Prism v. 5.01.
Toxicidad aguda El estudio de toxicidad aguda se realizó con pez cebra
adulto (Danio rerio) de acuerdo con las directrices de la OCDE (OCDE
1992). Los animales (n = 6/grupo) fueron tratados con L­CAE, CG­CAE y
M­CAE (2, 40 o 200 mg/kg; po) o vehículo (control, agua destilada; 20 l;
po) . El comportamiento de los peces se evaluó visualmente durante 96
h después del tratamiento, después de lo cual se evaluaron cambios en
la velocidad de nado, pérdida del equilibrio, respiración y comportamiento
anormal. La mortalidad de los peces se registró diariamente y la LD50
se determinó siguiendo el método Trimmed Spearman­Karber con
intervalos de confianza del 95% (CONCEA et al. 2018).
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Ensayo de actividad antiproliferativa in vitro.
Condiciones de cultivo celular Siete líneas celulares de tumores humanos
diferentes [U­251 (glioblastoma), MCF­7 (mama, adenocarcinoma), NCI­
ADR/RES (adenocarcinoma de ovario multirresistente), NCI­H­460
(pulmón , carcinoma de células grandes), PC­3 (próstata, adenocarcinoma),
OVCAR­3 (adenocarcinoma de ovario) y HT­29 (colon, adenocarcinoma)]
fueron proporcionados amablemente por el Instituto Nacional del Cáncer
en Frederick (NCI­USA). Una línea celular inmortalizada de queratinocitos
humanos (HaCaT) fue proporcionada amablemente por el Prof.
Dr. Ricardo Della Coletta (Universidad de Campinas). Para todos los
experimentos, las líneas celulares se mantuvieron en medio completo
[RPMI 1640 (Gibco, EE. UU.) suplementado con suero bovino fetal al 5
% (v/v) (FBS, Gibco) y penicilina:estreptomicina al 1 % (v/v). (Nutricell,
1000 U/mL:1000 g/mL)] en atmósfera humidificada con 5% de CO2 a 37
C.
Preparación de la muestra Se diluyeron alícuotas (5 mg cada una) de
doxorrubicina (Eurofarma, 0,5 mg/5 mg, control positivo), extracto
enriquecido con carotenoides de anacardo (L­CAE), micropartículas vacías
de goma de anacardo (CG) y maltodextrina (M). en DMSO (50 lL) y
posteriormente se le añadió 950 lL de medio completo (solución de
trabajo). Las concentraciones objetivo finales se obtuvieron mediante
diluciones seriadas en medio completo. Además, las micropartículas CG­
CAE y M­CAE se diluyeron en DMSO/medio completo como se describió
anteriormente mientras se ajustaban las muestras de masa a 5 mg/l de
CAE.
Ensayo de actividad antiproliferativa El ensayo de actividad
antiproliferativa in vitro se realizó como describen Monks et al. (1991).
Brevemente, después de ajustar la densidad de cada línea celular
(consulte Material complementario, Tabla S1), las suspensiones
celulares se colocaron en placas de 96 pocillos (100 l/pocillo). Después
de 24 h, las células se trataron con concentraciones variables de L­CAE,
micropartículas vacías de CG y M, CG­CAE y M­CAE [0,25, 2,5; 25; 250
lg/ml (100 l/pocillo)] en triplicado durante 48 h. Para la doxorrubicina,
las concentraciones finales oscilaron entre 0,025 y 25 µg/ml. Antes del
tratamiento ( placa T0) y después ( placa T1), las células se fijaron con
ácido tricloroacético (50%, 50 l/pocillo, Sigma) y la cuantificación de
proteínas se realizó mediante el ensayo de sulforodamina B (k = 540
nm). Los resultados se representaron como perfil de crecimiento celular
para cada línea celular en función de la concentración de cada muestra.
La concentración efectiva, denominada GI50 (concentración de muestra
requerida para provocar el 50% de la inhibición del crecimiento celular)
se determinó mediante análisis de regresión sigmoidea utilizando el
software ORIGIN 8.0 (Origin Lab Corporation).
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Actividad antimicrobiana
Microorganismos La actividad antimicrobiana se evaluó en
microorganismos Gram positivos (Staphylococcus aureus ATCC 25923
y Listeria monocytogenes ATCC 19115) y Gram negativos (Escherichia
coli ATCC 25922 y Salmonella Typhimurium ATCC 51812).
Preparación del inóculo A partir de los cultivos madre mantenidos a 4 C
en agar nutritivo magro, se extrajo un asa de cada microorganismo y se
cultivó en medio sólido de agar tripticasa de soja (TSA) (Difco, Sparks,
EE. UU.), excepto Listeria monocytogenes. que se mantuvo en extracto
de levadura (YE) enriquecido con TSA (Becton, Dickinson, Sparks, EE.
UU.). Luego de la incubación a 35 C durante 24 h, se observó
macroscópicamente la morfología de las colonias (aspecto y tamaño)
para verificar la pureza de las cepas. Utilizando un asa de inoculación,
se transfirió una colonia de cada microorganismo a un tubo de 15 ml que
contenía 5 ml de caldo de soja tríptico (TSB) estéril (Difco, Sparks, EE.
UU.). Los tubos se incubaron a 35 C durante 24 h para obtener una
muestra microbiana.
suspensión con una concentración final de 1,5 9 108 UFC/
ml.
Método de difusión en agar Las actividades antimicrobianas de los
extractos se determinaron mediante la técnica de difusión en agar según
los protocolos del Clinical and Lab­oratory Standards Institute (CLSI
2015) con modificaciones. Todas las suspensiones bacterianas (108
UFC/mL) se sembraron en la superficie de agar Mueller­Hinton (MH),
excepto Listeria monocytogenes, que se sembró en agar Mueller­Hinton
enriquecido con extracto de levadura (MH­YE).
Después de 5 a 15 minutos, se perforaron asépticamente pocillos de 5
mm de diámetro sobre la superficie del agar, después de lo cual se
añadió a cada pocillo 50 l de diluciones seriadas de L­CAE, M­CAE y CG­
CAE (100, 50, 25 y 12,5 mg/mL) en Tween 80 (2%, en agua). Después
de 30 minutos de incubación a 25 C, todas las placas se incubaron a 35
C durante 24 h. La actividad antimicrobiana se evaluó visualmente en
función de los tamaños de las zonas de inhibición que rodean los pocillos.
Se utilizaron soluciones estériles de Tween 80 (2%, en agua) y
bencilpenicilina benzatina 300.000 U/mL (Eurofarma) como controles
negativos y positivos, respectivamente.
Microscopía electrónica de transmisión de barrido (STEM) de bacterias.
Las imágenes bacterianas se obtuvieron siguiendo la metodología
descrita por Hooton et al. (2011) con modificaciones. Para preparar la
cepa de inóculo, se cultivó Listeria monocytogenes ATCC 19,115 en
medio agar tripticasa de soja (TSA) (Difco, Sparks, EE. UU.) enriquecido
con extracto de levadura (TSA­YE) y posteriormente se incubó a 35 C
durante 24 h. Después de la incubación, se prepararon diluciones de
muestra (10­1) utilizando 9 ml de agua de peptona al 0,1% (Difco,
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J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776 769

Sparks, EE. UU.) como diluyente para obtener una bacteria final
7
concentración de 1,5 9 10 UFC/mL. Volúmenes equivalentes
de la muestra (100 l) a la concentración de 100 mg/ml,

36,52

0,01b
38,31
0,03a
46,02
0,12c
Después de lo cual se agregaron 100 l de cada inóculo a un recipiente estéril.

b*

±
±
Eppendorf y posteriormente homogeneizado. Las muestras
Se incubaron a 35 C durante 24 h. Posteriormente, las muestras
fueron tratados durante 4 h con 100 lL del fijador de Karnovsky
solución en cacodilato según los métodos de Kar­novsky (1965). Se
colocó una pequeña gota de suspensión bacteriana lavada en una rejilla

0,02a
8,28

0,01b
0,02c
de malla de cobre recubierta de carbón.

±
a*

­±

­±
y se dejó reposar durante 3 min. Luego se eliminó el exceso de
suspensión bacteriana utilizando papel de filtro. por negativo
tinción, se añadió una gota de ácido fosfotúngstico (pH 7,4).
añadido a cada rejilla, y el exceso de tinte se eliminó después
1 min usando papel de filtro. Cada cuadrícula fue cubierta y

0,02a
81,69
36,87

0,01b
78,67
0,04c
Color
se dejó secar durante 15 min. Las rejillas se visualizaron en

L*

±
±

±
SEM acoplado al detector STEM (modelo Vega 3 SBU,
TESCAN, República Checa), con una aceleración de tensión adecuada
de 30 kV.

Resultados y discusión

Carotenoides
Los resultados de la caracterización de L­CAE (liofilizado

3,41a
96,28

0,80b
25,95

0,71b
24,59
(mg/
100
extracto de anacardo), M­CAE (extracto de anacardo

g)

±
encapsulado con maltodextrina) y CG­CAE (anacardo
extracto de manzana encapsulado con goma de anacardo) se resumen
en la Tabla 1.
AnAc estaba formado por una mezcla de a saber.
0 0 0
6­[8 (Z),11 (Z),14 ­ácido pentadecatrienil]salicílico ( 1 ,
0,01b

0,01c
3,55

3,23
C15:1

0,02a
21,48

0 0 ±

±
conocido como ácido anacárdico C15:3), 6­[8 (Z),11 (Z)­pluma­
±

ácido tadecadienil]salicílico (2, ácido anacárdico C15:2), y

0
6­[8 Ácido (Z)­pentadecenil]salicílico (3, ácido anacárdico
C15:1) (Kubo et al. 2006). Las largas cadenas alquílicas de
Los ácidos anacárdicos provienen de la condensación de ácidos saturados o
0,01b

0,00c

Ácidos grasos insaturados con compuestos fenólicos generados.

2,21

2,03
C15:2

0,01a
10,84

a través de vías derivadas de acetato­malonato (Morais et al.

±

2017); C15:3, C15:2 y C15:1 fueron identificados en todos

materiales probados (Fig. 1 y material complementario,
Tabla S2 y Figura S5­S7).
L­CAE mostró mayores concentraciones de bioactivos.
C15:3

0,00c
0,06a

0,00b

compuestos (carotenoides y ácidos anacárdicos, AnAc) en relación con

1,86
9,42

2,04

±
±

los tratamientos con los materiales encapsulados.

Sin embargo, la encapsulación CAE es una estrategia interesante.
para proteger los compuestos bioactivos, como se informa en otros
estudios sobre microencapsulación utilizando bixina (Barbosa et al.
anacárdicos

2005) y compuestos fenólicos (Nunes et al. 2015), para

0,01b

0,01c
Ácidos

7,80

7,12
0,05a
41,74
Total
(mg/

ejemplo. Los diferentes materiales de la pared de encapsulación.

±

±
g)

(maltodextrina o goma de anacardo) mostraron niveles similares de carotenoides

contenidos (P [0,05) pero diferencias significativas en el color
estadísticamente
Caracterización

maltodextrina

L* Valores de coordenadas , a* y b*. Los resultados anteriores son

encapsulado
promedios
confianza
columnas
Muestras

anacardo
liofilizado
seguidos
intervalo

Extracto
extracto
difieren
prueba

esperado, dado que la goma de anacardo tiene un color amarillo natural

misma
Tukey
aplicó
Tabla

goma
CAE,

CAE;
95%.
entre
CAE
CAE

CAE

CAE

CAE
letra
CG­
yCG­

yCG­
con
Los

con
del
Se
M­

M­
de

M­
un
no
en
de

de
sí.
L­

L­

L­
la

(L* = 91,87 ± 0,01; a* = 1,49 ± 0,01; y

1

123
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770 J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776

Fig. 1 un perfil cromatográfico de CAE (1 mg/ml), (I) trieno AnAc, (II) dieno AnAc, (III) monoeno AnAc, analizado a 280 nm. b. Los espectros UV
de (I) AnAc trieno, (II) AnAc dieno, (III) AnAc monoeno y su estructura molecular respectivamente.

b* = 8,60 ± 0,01), mientras que el tratamiento con maltodextrina
produjo los siguientes valores: L* = 103,22 ± 0,01; un* = –
0,25 ± 0,01, b* = 2,88 ± 0,01.
Como se describió anteriormente, todos los materiales probados
(L­CAE, M­CAE y CG­CAE) contienen AnAc
(41,74 ± 0,05, 7,80 ± 0,0 y 7,12 ± 0,01 mg/g para
L­CAE, M­CAE y CG­CAE, respectivamente). El
proceso de encapsulación, aunque se considera una protección para
los componentes biológicos, presenta una concentración mucho
menor de AnAc, debido a la adición de material de pared. los purificados
AnAc, extraído del líquido de la cáscara de anacardo (CNSL),
muestra importantes actividades biológicas, como agentes
gastroprotectores y antitumorales, y exhibe propiedades antimicrobianas y
propiedades antioxidantes (Sukumari­Ramesh et al. 2011;

123
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J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776
Fig. 2 Efecto de L­CAE o M­CAE
o CG­CAE (2 o 40 o 200 mg/kg; po)
sobre la actividad locomotora de pez
cebra adulto, analizado
individualmente durante 0 a 5 min
en la prueba de campo abierto.
Cada columna representa la media
± errores estándar de la media (n = 6/
grupo). Los números encima de las
barras indican el porcentaje de
actividad locomotora. ANOVA
con prueba post­hoc de Tukey (#p\ 0.05
vs.
L­CAE 40 mg/Kg). Control: vehículo
(Agua destilada). Ingenuo: grupo no
tratado (Control)
Carvalho et al. 2011). El CAE presenta AnAc en su composición. Sin
embargo, la concentración no fue suficiente para promover una actividad
antiproliferativa ya que este efecto se observó cuando el AnAc se usó en
concentraciones más altas que en los experimentos CAE. Los AnAc están
presentes en anacardo, nuez y CNSL en concentraciones variables; en
particular, las concentraciones más altas se detectaron en CNSL (353,6
mg/g), seguido de la fibra de anacardo (6,1 mg/g) y el anacardo tostado
(0,65 mg/g) (Trevisan et al. 2006; Agostini­Costa et al. 2004). Aunque
estudios previos informaron efectos biológicos significativos del CNSL, que
contiene niveles más altos de AnAc, presenta una toxicidad moderada
cuando se prueba de forma aguda en ratas (Harlita et al. 2016).
Por lo tanto, evaluamos la toxicidad aguda de CAE y sus materiales
encapsulados (M­CAE y CG­CAE) para peces cebra adultos individuales,
considerando que la concentración de AnAc en el proceso de la membrana
puede causar toxicidad.
La mortalidad del pez cebra (Danio rerio) sexualmente maduro,
expuesto a diferentes concentraciones de L­CAE, M­CAE y CG­CAE se
presenta en el Material complementario (Tabla S3). El tratamiento con L­
CAE, M­CAE o CG­CAE (2, 40 o 200 mg/kg; vo) durante 96 h no ejerció
toxicidad para el pez cebra adulto (LD50 [ 200 mg/kg). Además, el
tratamiento con L­CAE, M­CAE y CG­CAE no alteró las actividades
locomotoras (P [0,05 frente a ingenuo o vehículo) del pez cebra adulto
según la prueba de campo abierto (Fig. 2 ).
La actividad locomotora es uno de los parámetros en el análisis del
comportamiento que se utilizan para evaluar el efecto de las drogas en el
sistema nervioso central del pez cebra adulto y causan deterioro locomotor
o no locomotor (Taylor et al.
771
2017; Benneh et al. 2017). Recientemente, adaptamos la prueba de
campo abierto en pez cebra adulto siguiendo los métodos de Ahmad y
Richardson (2013) para investigar los efectos de los fármacos analgésicos
(Magalha˜es et al. 2017). Empleamos los mismos métodos usando L­CAE,
M­CAE o CG­CAE para evaluar sus efectos en el aparato locomotor del
pez cebra adulto.
sistema. Los resultados no mostraron alteraciones significativas en la
coordinación motora, la sedación o la relajación muscular de los peces.
El pez cebra adulto se ha utilizado como modelo animal para
complementar los estudios con roedores para investigar la genética, la
biología del desarrollo, la neurobiología y la toxicología (Caballero y
Candiracci 2018) debido a sus ventajas, que incluyen el bajo costo, la
adaptabilidad diversa, el ciclo reproductivo corto, la alta fecundidad y la
transparencia de sus embriones (Dai et al. 2014). En el presente estudio,
se utilizó pez cebra adulto como modelo alternativo para evaluar las
toxicidades agudas de L­CAE, M­CAE y CG­CAE. Los resultados indicaron
que los extractos no fueron tóxicos para el pez cebra adulto durante hasta
96 h de incubación en todas las concentraciones probadas. Sin embargo,
se deben realizar estudios in vivo adicionales para evaluar los efectos
crónicos y subcrónicos del CAE utilizando el pez cebra como modelo de
ensayo.
CAE es una fuente de AnAc, y se ha informado que estos compuestos
poseen propiedades anticancerígenas y antibacterianas (Sukumari­Ramesh
et al. 2011; Zhao et al.
2018). Para evaluar las posibles propiedades biológicas de CAE, se
realizaron pruebas utilizando los tres materiales (L­CAE, CG­CAE y M­
CAE). Como lo demuestra el perfil de crecimiento celular en presencia de
doxorrubicina (Fig. 3a, Tabla 2), todas las células (siete líneas celulares
tumorales humanas y una línea celular no tumoral) presentaron una
respuesta particular a una
123
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772 J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776

Fig. 3 Efecto de doxorrubicina, L­CAEW, M­CAE, CG­CAE y Líneas celulares tumorales humanas: U­251 (glioblastoma), MCF­7
micropartículas CG y M vacías sobre líneas celulares tumorales y no (mama, adenocarcinoma), NCI­ADR/RES (adenocarcinoma de ovario
tumorales después de 48 h de tratamiento. Muestras: a Doxorrubicina multirresistente), NCI­H­460 (pulmón, carcinoma de células grandes),
= control positivo; b L­CAE = extracto de anacardo liofilizado; c CG­ PC ­3 (próstata, adenocarcinoma), OVCAR­3 (adenocarcinoma de
CAE = extracto de anacardo encapsulado con goma de anacardo; d M­ ovario) y HT­29 (colon, adenocarcinoma). Línea celular no tumoral:
CAE = extracto de anacardo encapsulado con maltodextrina; e CG = HaCaT (queratinocito humano inmortalizado)
microcápsulas vacías de goma de anacardo; f M = microcápsulas de maltodextrina vacías.

123
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J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776 773

Tabla 2 Concentración de
Líneas celulares Muestras
doxorrubicina, L­CAE, M­CAE,
CG­CAE y CG y M vacíos doxorrubicina L­CAE CG­CAE M­CAE CG METRO

micropartículas necesarias para

Causa el 50% del crecimiento celular. U251 0.026 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250
inhibición ( valores GI50), en lg/ MCF7 \0,025 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250
mL, después de 48 h de tratamiento
NCI­ADR/RES 0,16 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250
NCI­H460 \0,025 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250
PC­3 0,23 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250
OVCAR­03 0,14 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250

HT29 0,26 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250

hacat \0,025 [250 [ 250 [ 250 [ 250 [250

Muestras: Doxorrubicina = control positivo; L­CAE = extracto de anacardo liofilizado; CG­CAE = anacardo
extracto de manzana encapsulado con goma de anacardo; M­CAE = extracto de anacardo encapsulado con mal­
todextrina; CG = microcápsulas vacías de goma de anacardo; M = microcápsulas de maltodextrina vacías
Líneas celulares tumorales humanas: U­251 (glioblastoma), MCF­7 (mama, adenocarcinoma), NCI­ADR/RES (adenocarcinoma
de ovario resistente a múltiples fármacos), NCI­H­460 (pulmón, carcinoma de células grandes), PC ­3 (próstata, adenocarcinoma),
OVCAR­3 (adenocarcinoma de ovario) y HT­29 (colon, adenocarcinoma). No tumoral
línea celular: HaCaT (queratinocito humano inmortalizado)
GI50: Inhibición del crecimiento 50: concentración de muestra necesaria para provocar el 50 % de la inhibición del crecimiento celular

Fig.4 Electrón de transmisión

micrografías de Listeria
monocytogenes (ATCC 19115):
una célula de control no tratada en
27.400 9 aumentos; y
células b después de la exposición a L­CAE
a 23.900 9 aumentos.
Controlar las células de L. monocytogenes
cultivadas a 35 C/24 h tienen una
pared celular intacta. hay una perdida
de pared celular en Listeria
monocitogenes (ATCC 19115)
después de la exposición a L­CAE

agente antiproliferativo. Considerando muestras CAE, incluidas las cápsulas
vacías de CG y M, ni libres ni
CAE encapsulados no fueron capaces de inhibir la proliferación
de todas las células humanas analizadas, lo que da como resultado la concentración requerida
para promover un 50% de inhibición del crecimiento celular mayor que el
concentración probada más alta (GI50 [250 lg/mL, Fig. 3 y
Tabla 2). Más aún, ambos materiales de pared CG y M no
afectar la proliferación celular a pesar de estar presente en niveles más altos
concentración que CAE en muestras CG­CAE y M­CAE
(Figura 3 y Tabla 2).
Según la literatura (Sukumari­Ramesh et al. 2011;
Zhao y cols. 2018), se ha informado que el ácido 2­hidroxi­6­
pentadecilbenzoico, derivado saturado de AnAc, es
agente antiproliferativo en diferentes líneas celulares tumorales. Nuestro
Los resultados pueden sugerir que la presencia de laterales insaturados.
La cadena en los AnAcs identificados en CAE podría afectar la
potencial antiproliferativo. Además, como una mezcla compleja de
varios compuestos, la concentración de AnAcs en CAE,
entre 7,12 y 41,74 mg/g (Tabla 1), tal vez fue
insuficiente para promover el efecto antiproliferativo en el
condiciones experimentales utilizadas.
Además, la ausencia de efecto antiproliferativo sobre
Las células no tumorales (HaCat, queratinocitos humanos inmortalizados)
sugirieron que estas muestras pueden no interferir
en la proliferación de células en tejidos normales, corroborando los
resultados en el modelo del pez cebra. Como ya se describió, el CAE libre
y encapsulado no afectó significativamente
el sistema nervioso central o actividades neuromotoras además
dosis letales superiores a las probadas en el modelo de pez cebra.
Estos resultados indican un posible uso seguro de CAE.

123
Machine Translated by Google
774
(liofilizado o encapsulado) como tinte natural industrial que amplía las
alternativas de colorantes de origen natural.
Impulsada por la percepción del consumidor, la demanda de tintes
naturales ha aumentado en los últimos años (Sigurdson et al. 2017).
Por lo tanto, se puede explorar el uso de CAE (liofilizado o encapsulado)
como fuente natural de colorante alimentario amarillo.
Los resultados de los ensayos de actividad antimicrobiana mostraron
que sólo L­CAE ejerció actividad antimicrobiana contra Listeria
monocytogenes; El tratamiento con 50 y 100 mg/mL de L­CAE produjo
zonas de inhibición alrededor de las colonias con tamaños de 11 y 13
mm, respectivamente (Material complementario, Tabla S4). Por el
contrario, CG­CAE y M­CAE no exhibieron actividad antibacteriana.
Asimismo, la menor cantidad de AnAc de los tratamientos CG­CAE y M­
CAE, presentados en la Tabla 1, sería indicativo de la menor actividad
antimicrobiana, sugiriendo una relación entre la actividad antibacteriana
y la cantidad de AnAc, alrededor de 5,5 9 mayor en L­CAE, en
comparación con los encapsulados (CG­CAE y M­CAE). Nuestra hipótesis
es que el AnAc, presente en CAE, es capaz de ejercer su efecto
antimicrobiano. Respecto al tratamiento CG­CAE, se observa que la
goma de anacardo (CG) no aportó la cantidad de AnAc como se esperaba,
debido a su purificación para su uso como material encapsulante.
Torquato et al. (2004) demostraron que CG ejercía solo una actividad
débil contra Saccharomyces cerevisiae pero ninguna actividad contra
todos los demás microorganismos probados, y concluyeron que los
resultados negativos pueden explicarse por la eliminación de AnAc
durante la purificación de CG.
Curiosamente, se descubrió que la L­CAE era eficaz contra Listeria
monocytogenes, una bacteria grampositiva. Como se muestra en la Tabla
1, L­CAE contenía la concentración más alta de AnAc, lo que podría
explicar su actividad antimicrobiana. Además, estudios previos han
demostrado los efectos antimicrobianos de los AnAc, que resultaron
eficaces contra Staphylococcus aur­eus resistente a la meticilina (Muroi
y Kubo 1996; Kubo et al. 2003). Sin embargo, como saben los autores,
estos son los primeros informes que demuestran la actividad
antimicrobiana de CAE, un material rico en AnAc, contra Listeria
monocytogenes.
La microscopía electrónica es una herramienta poderosa para investigar los
efectos de los factores estresantes en las células bacterianas (Xing et al. 2009).
Se llevaron a cabo experimentos de microscopía electrónica de
transmisión para observar directamente el daño a la membrana inducido
en células de Listeria monocytogenes después de la exposición a L­CAE.
Se examinaron los cambios en la estructura de las células de L.
monocytogenes después de 24 h de tratamiento con L­CAE.
calculado en base a las imágenes TEM (Fig. 4). Las células de L.
monocytogenes no tratadas mostraron paredes exteriores lisas y bien
definidas (Fig. 4a). Las células tratadas con L­CAE presentaron ligeras
arrugas y rugosidad en la pared exterior (Fig. 4b).
Por lo tanto, los colapsos cóncavos y los espacios observados usando
TEM indicaron la posible formación de poros locales que podrían haber
resultado en una viabilidad celular reducida. Coherente
123
J Food Sci Technol (febrero de 2021) 58(2):764–776
Con hallazgos anteriores, los resultados actuales indicaron que L­CAE
fue eficaz contra Listeria monocytogenes.
L­CAE contenía concentraciones más altas de compuestos bioactivos
(ácido anacárdico y carotenoides) en relación con los materiales
encapsulados (CG­CAE o M­CAE), lo que respaldaba sus efectos
antimicrobianos. Por lo tanto, nuestros hallazgos actuales demostraron
los efectos de L­CAE contra L. monocytogenes y alentarán futuros
estudios antimicrobianos utilizando L­CAE.
Conclusión
El extracto obtenido de las fibras de anacardo (Anac­ardium occidentale)
es fuente de ácidos anacárdicos y carotenoides. Tanto las muestras
liofilizadas como las encapsuladas del extracto de anacardo (CAE) no
ejercieron toxicidad aguda en el modelo de pez cebra (Danio rerio) ni
mostraron actividad antiproliferativa contra las líneas celulares tumorales
y no tumorales analizadas. Además, los hallazgos actuales demostraron
que el CAE liofilizado es una fuente potencial de compuestos
antimicrobianos. Sin embargo, más estudios deberían investigar los
mecanismos celulares subyacentes a la actividad antimicrobiana de este
extracto, además de su posible uso como colorante.
Agradecimientos Los autores agradecen el apoyo financiero recibido de la Empresa
Brasileira de Pesquisa Agropecua´ria (EMBRAPA) y la beca del Coordenac¸a˜o de
Aperfeic¸oa­mento de Pessoal de Nı´vel Superior—Brazil (CAPES)—Finance Code 001 .
Cumplimiento de estándares éticos
Conflicto de intereses Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
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Nota del editor Springer Nature se mantiene neutral con respecto a reclamos
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