TALLER N°1: EL GENOMA HUMANO

OBJETIVOS

 Conocer la estructura del ADN y sus características

 Conocer el proceso de secuenciamiento por Sanger y la estrategia de
secuenciamiento del genoma humano.
INTRODUCCION:
Dentro de los conocimientos científicos acerca del origen de la vida en la tierra y
la evolució n de la misma, el material gené tico de los seres vivos juega un rol
central como la unidad funcional má s bá sica de una cé lula. EL ADN tiene una
historia fascinante desde su descubrimiento inicial hasta el momento en que
James Watson y Francis Crick pudieron dilucidar su estructura. Esta comienza desde
1869, cuando el mé dico Friedrich Mieschner logró extraer de forma rudimentaria
al ADN, tendiendo características diferentes de las proteínas; bloques
estructurales de las cé lulas y que eran el verdadero objetivo de su experimento.
Desde entonces, las técnicas asociadas a la biología molecular, permitieron conocer
los componentes del ADN, dilucidar su estructura molecular, definir sus funciones
y relacionarlas a los procesos bioló gicos naturales y patoló gicos. En el presente
taller, se revisará la estructura del ADN, como fue el proceso del descubrimiento
de su estructura y a partir de ella, las características que posee. En un segundo
bloque, se revisará el proyecto genoma humano, y cual fue la estrategia para el
secuenciamiento del genoma.

ALINEAMIENTO DE COMPETENCIAS:
CE1. Conoce los conceptos fundamentales de la estructura, regulació n y
funcionamiento del genoma humano
El ADN
A principios de la dé cada de 1950, el bió logo estadounidense James Watson y el
físico britá nico Francis Crick propusieron su famoso modelo de la doble hé lice del
DNA. Fueron los primeros en cruzar la línea de meta en esta "carrera" científica,
en la que otros como Linus Pauling (quien descubrió la estructura secundaria de
las proteínas) tambié n trataban de encontrar el modelo correcto.

En lugar de realizar nuevos experimentos en el laboratorio, Watson y Crick

principalmente recolectaron y analizaron fragmentos de informació n existente y los
juntaron de formas novedosas y reveladoras. Algunas de sus pistas má s importantes
sobre la estructura del DNA fueron producto del trabajo de Rosalind Franklin, una
química que trabaja en el laboratorio del físico Maurice Wilkins.
Franklin era experta en una poderosa técnica para la determinació n de la estructura
de moléculas, conocida como cristalografía de rayos X. Cuando la forma
cristalizada de una molé cula, como el DNA, se expone a rayos X, los á tomos en el
cristal desvían algunos de los rayos y forman un patró n de difracció n que da
pistas sobre la estructura de la molé cula.

La cristalografía de Franklin dio a Watson y Crick importantes pistas sobre la

estructura del DNA. Algunas de estas provenían de la famosa "imagen 51," una
imagen de difracció n de rayos X del DNA sorprendente y extraordinariamente clara
que produjeron Franklin y su estudiante de posgrado (Ver fig 1).

Fig 1. Imagen modificada de "La estructura y secuencia del DNA", de OpenStax

College, Biología.

La cristalografía de Franklin dio a Watson y Crick importantes pistas sobre la

estructura del DNA. Algunas de estas provenían de la famosa "imagen 51," una
imagen de difracció n de rayos X del DNA sorprendente y extraordinariamente clara
que produjeron Franklin y su estudiante de posgrado. (Arriba se muestra un ejemplo
moderno del patró n de difracció n que produce el DNA). El patró n de difracció n en
forma de X de la imagen de Franklin inmediatamente le sugirió a Watson una
estructura helicoidal de dos cadenas para el DNA.

Watson y Crick reunieron datos de varios investigadores (entre ellos Franklin,

Wilkins, Chargaff y otros) para ensamblar su célebre modelo de la estructura 3D
del DNA. En 1962, James Watson, Francis Crick y Maurice Wilkins recibieron el
Premio Nobel de medicina. Desafortunadamente, para entonces Franklin había
muerto y los premios Nobel no se otorgan pó stumamente.

Actividad 1
Observe el video respecto al descubrimiento de la estructura del ADN
[https://www.youtube.com/watch?v=FMIsQlrtg_w] y resuelva las siguientes
preguntas:
1. ¿De qué están compuestos los cromosomas?
2. ¿En qué consiste la teoría de la replicación semi-conservativa del ADN?
¿Cómo la estructura del ADN contribuye a esta teoría?
3. ¿Cómo el trabajo de Erwin Chargaff contribuyó al descubrimiento de la
estructura del ADN?

Actividad 2
A continuació n, daremos lectura al artículo:

“MOLECULAR STRUCTURE OF NUCLEIC ACIDS”, propuesta por

Watson y Crick en 1953. (El paper se encuentra al final del taller)

En base a lo leído, responda las siguientes preguntas.

1. ¿Por qué la estructura de Pauling y Corey era insatisfactoria?
2. ¿Có mo afectan los niveles de agua en la molé cula?
3. Complete la siguiente imagen con la informació n correspondiente
4. Dada una hebra simple de DNA: ATCCAGGTAC, construya la cadena de
DNA complementaria
5. Escriba las secuencias complementarias de DNA en sentido 5’  3’
a) 5’ ATCGTGACTTAGG 3’
b) 3’ TAACGGTAGCTAT 5’
6. Si una molé cula de una doble hé lice de DNA tiene un contenido A+T del 48 %,
¿cuá les son los porcentajes de las cuatro bases (A, T, G y C) de esta molé cula?

EL PROYECTO GENOMA HUMANO

El Proyecto del genoma humano (PGH) fue un programa de investigació n
colaborativo e internacional el cual buscaba dilucidar la secuencia del material
genético humano, para poder clasificarlo y determinar la funció n de todos los
genes contenidos en el, para así entender el funcionamiento del cuerpo humano a
una escala molecular. Este conjunto de material gené tico se denominó “genoma” y
comprende a todo el material gené tico incluido dentro de una cé lula. El proyecto
genoma humano se vio motivado por los hallazgos recientes como la estructura
del ADN, la reacció n en cadena de la polimerasa y la té cnica de secuenciamiento
de Sanger; que representaban los medios para obtener la secuencia genó mica
completa. Sin embargo, su tamañ o se presentaría como el primer obstá culo.

La historia del PGH puede categorizarse en tres momentos. La etapa preparatoria

y de implementació n se ubica entre los añ os 1988 y 1992; cuando se propuso el
proyecto en el Instituto nacional de Salud estadounidense (NIH), dado su
aprobació n y apoyo. La segunda etapa se da desde 1993 a 1998, cuando Francis
Collins, Sucesor de Watson en el NIH, impulsa el desarrollo del proyecto PGH,
incrementando la participació n de varios laboratorios con capacidad de
secuenciamiento alrededor del mundo. Finalmente, la tercera etapa se desarrolla
para el añ o 2001, cuando un antiguo científico del NIH, Craig Venter, anuncia que
la corporació n Celera fundada por el, iniciará el secuenciamiento del genoma de
forma paralela y privada utilizando la té cnica de secuenciamiento Shot-gun. Esta
amenaza directa al proyecto pú blico llevo a la “carrera por el genoma humano”, la
cual llevo a la publicació n de una secuencia al 90% en el 2001 en la revista nature.

Un dato sorprendente de esta primera versió n preliminar fue que el nú mero de

genes humanos parecía ser significativamente menor que las estimaciones
anteriores, que variaron desde 50,000 genes hasta tantos como 140,000. La secuencia
completa fue terminada y publicada en abril de 2003; la cual ha revelado que existen
solamente 20,500 genes humanos. La secuencia humana completa ahora puede
identificar sus ubicaciones. Este producto final del PGH ha dado al mundo un
recurso de informació n detallada sobre la estructura, organizació n y funció n del
conjunto completo de genes humanos. Esta informació n puede considerarse como
el conjunto bá sico de "instrucciones" hereditarias para el desarrollo y funció n de un
ser humano.

Actividad 3
Esquematice el proceso de secuenciamiento tipo Sanger y su adaptación para el
método automatizado

Actividad 4
A continuación, se presenta el proceso por el cual se logró secuenciar el genoma
humano. Lea con atención la estrategia y ordene los pasos correctamente en la
figura correspondiente:
CUESTIONARIO ADICIONAL

1. ¿Puede la secuenciación del DNA identificar las mismas afecciones de la

salud al nacer con la misma eficacia y velocidad que los métodos
tradicionales?
2. ¿Es útil tener la secuencia del genoma desde el nacimiento para la
atención clínica de ese individuo?
3. ¿Qué sucede si la secuencia del genoma revela información sobre
enfermedades incurables, o incluso afecciones de la salud que no se
presentarán sino hasta la vida adulta?
4. ¿Qué riesgo representa para los recién nacidos que la identificación de
variantes genéticas específicas, tales como la predisposición a una
enfermedad, pudiera dar pie a discriminación en el futuro?
5. ¿Cómo pudiera el uso de la secuenciación del genoma afectar al apoyo
público para los programas de pruebas de detección sistemática para recién
nacidos?
6. ¿Qué tan factible sería para los estados realizar la secuenciación del
genoma además de, o en vez de, los programas de pruebas existentes?
7. ¿Hay consideraciones adicionales para la obtención y el almacenamiento
de las secuencias del genoma de recién nacidos frente a muestras
sanguíneas de recién nacidos?
8. Que es factor de impacto y cual es para la revista Nature y cual para Science.
BIBLIOGRAFÍA

1. Dahm R. Friedrich miescher and the discovery of DNA. Dev Biol [Internet].
2005;278(2):274–88. Available from:
http://dx.doi.org/10.1016/j.ydbio.2004.11.028
2. Watson, J. D., & Crick, F. A structure for deoxyribose nucleic acid. (1953).
3. Watson JD et al. Biología Molecular del gen. 5ta Ed. Ed. Medica
Panamericana. (2006)