Manual de Inmunologia

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS
DE INMUNOLOGIA
1
INDICE
INTRODUCCION …………………………………………………………………………………………………………… ….3
REGLAMENTO INTERNO EN EL AREA TECNICA DEL LABORATORIO CLINICO…………………… …
4
NORMAS DE BIOSEGURIDAD …………………………………………………………………………………………… 4
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD …………………………………………………………………………………..…. …..6
OBJETIVO GENERAL ………………………………………………………………………………………………………… .7
OBJETIVOS ESPECIFICOS…………………………………………………………………………………………..…….. 7
1.0 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE PARA EXAMENES DE INMUNOLOGIA…………………..….8
2.0 PRUEBA RAPIDA DE REAGINA (METODO RPR)…………………………… …………………………....10
3.0 DETECCION DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE INMUNODEFICIENCIA HUMANA (PRUEBA
RAPIDA) ……………….…………………..……………………………………………………………………………..14
4.0 ANTIGENOS FEBRILES ………………….…………………………………………………………………………..16
5.0 TIPEO SANGUINEO (PRUEBA DIRECTA EN TUBO)………………………………………………………18
6.0 DETERMINACION VARIANTE Du………………………………………………………… …………………….21
7.0PRUEBA DE EMBARAZO…………………………………………………………………………………………….23
8.0 BIBLIOGRAFIA………………………………………………………………………………………………………….24
2
INTRODUCCION
El en el mundo existen cantidad de microorganismos infecciosos que pueden causar
infección si estos se adhieren y se multiplican en los tejidos hasta llegar a causar
enfermedad o la muerte del hospedador.
El sistema inmunocompetente desde el punto de vista funcional tiene dos divisiones: el
sistema de inmunidad innata y el sistema inmune adaptativo. el papel de la resistencia
natural o innata o inmunidad innata o especifica; actúa como la primera línea de defensa
contra agentes infecciosos y potencialmente contra patógenos que son detectados antes
que ellos se establezcan y desencadenen una infección, por otro lado si este mecanismo
de defensa es rebasado se desarrollara una resistencia especifica con sus dos ramas:
Inmunidad Humoral e Inmunidad Celular especifica ante el microorganismo especifico.
En el presente manual se presente orientar al profesional de laboratorio clínico a cómo
realizar de una manera correcta las diferentes pruebas inmunológicas que se realizar en el
laboratorio de pruebas básicas, así mismo una adecuada interpretación de resultados.
También que el profesional de laboratorio desarrolle de manera correcta pruebas como:
tipeo sanguíneo, prueba de coombs directo e indirecto y prueba de embarazo.
3
REGLAMENTO INTERNO EN EL AREA TECNICA DEL LABORATORIO CLINICO.
1. El equipo del laboratorio no puede ser extraído de su lugar de origen.
2. Todo equipo, material y reactivo deberá encontrarse buenas condiciones.
3. Queda prohibido el ingreso a personas no autorizadas a las instalaciones del
laboratorio técnico.
4. El personal regente y de labor técnica debe de presentarse en el laboratorio con su
respectiva gabacha blanca hasta la rodilla y manga larga con elástico en los puños,
la cual siempre debe de mantenerse bien abotonada, ropa formal o uniforme,
zapatos de cuero (cubriendo todo el pie).
5. Es obligación del personal de regencia y labor técnica utilizar protección personal
que estos cumplan con las normas de bioseguridad establecidas. ( mascarillas,
guantes, lentes protectores y gorro)
6. El personal regente y de labor técnica deberán comportarse de manera
responsable durante la realización de las pruebas, dedicándose exclusivamente al
procesamiento de los exámenes clínicos dentro del laboratorio.
7. El personal regente y de labor técnica deberán respetar la hora de entrada y de
salida programada según su horario laboral.
8. Es obligación de las personas que laboran en el laboratorio que estos cumplan con
las normas de bioseguridad establecidas.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
1. Todo el personal que ingrese al laboratorio deberá usar gabacha blanca hasta la
rodilla, manga larga y elástico en los puños; con el fin de proteger la ropa con
posible material toxico y/o contaminante.
2. No se puede fumar, maquillarse, peinarse, beber, comer ni guardar alimentos
dentro del laboratorio.
3. Las mesas de trabajo debes de desinfectarse antes y después de cada jornada
laboral.
4. Todo material contaminado y no contaminado debes de ser descartados en su
respectivo recipiente. Nota: bolsa roja material contaminado, bolsa negra material
no contaminado.
5. Todo material cortopunzante se debe descartar en garrafones con hipoclorito de

sodio al 10% y estos deben de estar debidamente rotulados.
4
6. La cristalería utilizada se debe de descartar en recipientes con hipoclorito de sodio
y estos deben estar debidamente rotulados para cada cristalería.
7. En caso de derrame de una muestra contaminante en el piso o la mesa de trabajo,
de bebe de aplicar la solución desinfectante alrededor y encima del derrame
cubrirlo con papel periódico o similar, dejarlo por 30 minutos para después limpiar
el área.
8. Durante el desarrollo de los procedimientos operativos debe de evitarse el
contacto con los ojos, nariz, boca y cabello, porque este es uno de los principales
riesgos de contaminación.
9. No se debe de tener las uñas largas, para evitar acumulación de suciedad o
contaminación; así también evitar el uso de prendas como anillos, pulseras, relojes
u otras prendas que pueden contribuir con la contaminación.
10. Al procesar toda muestra biológica, siempre deben usarse guantes de látex, por
considerarse estas potencialmente con contaminantes.
11. Debe hacerse uso de mascarilla, lentes protectores, gorro al procesar muestras
que produzcan esporas, aerosoles contaminantes o sustancias que produzcan
emanaciones toxicas.
12. Para hacer uso de pipetas serológicas, volumétricas, etc. se debe utilizar
propipetas y nunca debe hacerse directamente con la boca.
13. No debe de levantarse la tapa de las centrifugas, mientras este funcionando, ni
tratar de detenerla con las manos.
14. Debe de realizarse el aseo de manos después de tocar material contaminante,
antes y después de usar guantes de látex y antes de retirarse del laboratorio.
5
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
1. Tanto el personal regente y de labor técnica deberán portar la gabacha blanca
hasta las rodillas, manga larga y con elástico en el puño, así se evitara cualquier
accidente.
2. Todo el personal regente y de labor técnica deberá desinfectar la mesa de trabajo
antes y después de sus procedimientos operativos.
3. El personal a cargo de regencia y de labor técnica debe de limpiar la mesa de
trabajo descartando todo lo que no utilice en sus respectivos descartes y
basureros.
4. El personal que labora dentro de la labor técnica nunca deberá de abrir la tapa de
la centrifuga mientras esta aun se encuentre funcionando ni destapar tubos
inmediatamente después de centrifugar y agitar.
5. En caso de derrame de una muestra en el piso o la mesa de trabajo, aplicar la
solución desinfectante, cubrir con papel periódico, dejarlo por 30 minutos antes de
limpiar el área.
6. Todo el personal del laboratorio no podrá retirarse del laboratorio sin antes
realizarse el aseo de manos por haber manipulado material contaminante.
7. Todo el personal que labora en el área técnica, no podrá beber, fumar, comer,
maquillarse, peinarse, comer ni guardar alimentos dentro del área técnica.
8. En el laboratorio esta prohibida la practica de pipetear con la boca.
9. Toda muestra biológica se considera potencialmente peligrosa e infecciosa, por lo
que debe de tratarse con las medidas del caso.
10. Todo objeto cortopunzante deberá de manejarse con el extremo cuidado evitando
así accidentes por pinchazo o cortaduras.
11. Si se nota alguna vibración o ruido anormal de la centrifuga hay que detener su
funcionamiento inmediatamente, revisar si esta correctamente calibrada.
6
OBJETIVO GENERAL
Brindar las los procedimientos de pruebas de inmunohematologia realizadas en

laboratorios clinicos de pruebas básicas.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
1. Que el Licenciado en laboratorio clínico encargado del área técnica conozca

el adecuado procedimiento para la realización de pruebas de embarazo,
tipeos sanguíneos y coombs.
2. Que el Licenciado en laboratorio clínico conozca todos los procedimientos
empleados de VIH, Sifilis y todos los análisis clínicos contemplados en este
manual.
7
1.0 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA
EXÁMENES DE INMUNOLOGÍA
PROPÓSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunología.
MUESTRA REQUERIDA:
5 mL de sangre venosa sin anticoagulante.
MATERIALES:
- Jeringa estéril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 ½ o sistema de extracción al vacío.
- Torundas de algodón.
- Alcohol etílico (70%).
- Marcador de vidrio.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapón de hule o tubos del sistema de extracción al vacío.
- Gradilla para tubos.
- Guantes descartables.
PROCEDIMIENTO:
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cómodamente al paciente para la extracción tomando en cuenta que el área de sangría
debe contar con suficiente iluminación.
- Seleccionar la vena apropiada para la punción.
- Realizar asepsia con torunda de algodón humedecida con alcohol etílico al 70% de adentro hacia
fuera.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre la
mano varias veces para favorecer la dilatación de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
8
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrás el émbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en la jeringa
hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado al vacío introducir
el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presión se atraviese el extremo inferior
de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto del vacío.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodón sobre la piel
donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rápido por debajo de la pieza de algodón, pedir al paciente
que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la sangre
por las paredes del mismo.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm po 10 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.
- Verificar nuevamente la identificación del paciente.
FUENTES DE ERROR
- Prolongada aplicación del torniquete.
- Extracción violenta de la sangre, que puede provocar hemólisis.
- Empleo de tubos mal lavados.
- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta.
- Dejar los tubos con muestras destapados.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al análisis químico a realizar.
- Separación inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en baño de María).
- Centrifugación inadecuada de la muestra.
RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.
9
2. PRUEBA RÁPIDA DE REAGINA (Método RPR)
PROPÓSITO:
Detectar y cuantificar anticuerpos reagínicos en suero, que corresponde a un diagnostico

presuntivo de Sífilis, La prueba de RPR, es una modificación del antígeno VDRL (pruebas no
treponémicas).
El RPR es una prueba que contiene micropartículas de carbón para visualizar la reacción antígeno–
anticuerpo.
MUESTRA REQUERIDA:
5mL de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 mL de

suero).
MATERIALES Y REACTIVOS:
- Tarjeta o lámina en círculos de 18 mm.
- Dispensadores de 50 uL.
- Tapadera plástica para formar cámara húmeda.
- Frasco plástico con aguja calibrada para depositar 16uL.
- Antígeno: Cardiolipina, Lecitina, Colesterol y partículas de carbón.
- Agua destilada.
- Papel toalla.
- Aplicadores de madera.
- Solución salina 0.85%.
- Puntas plásticas.
- Tubos 12x75 mm.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al análisis químico a realizar.
- Separación inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en baño de María).
- Centrifugación inadecuada de la muestra.
10
EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Rotador serológico de 100 rpm.
- Macrocentrífuga.
- Micropipeta automática regulable.
PROCEDIMIENTO:
Prueba cualitativa:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Identificar los sueros y círculos de la tarjeta o lámina de reacción.
- Depositar en cada círculo de la tarjeta ó lámina, 50 uL. de los sueros en estudio y controles
positivo y negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el volumen sea exacto.
- Extender el suero sobre la superficie del círculo con el extremo opuesto del dispensador.
- Homogenizar el antígeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero.
- Colocar la tarjeta en el rotador serológico y cubrirla con la cámara húmeda.
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lámina de adelante hacia atrás observar a simple vista con buena iluminación
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo.
- Toda prueba cualitativa que presente aglutinación se debe hacer prueba semicuantitativa.
Prueba semicuantitativa:
- En cinco círculos poner con el dispensador una gota (50 µL) de solución salina 0.85 %, no
extender.
- Depositar con el dispensador en el primer círculo 50 µL de suero, mezclar aspirando y expeliendo

3 a 6 veces, evitando la formación de burbujas.
- A partir de esta mezcla que constituye la dilución 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en base 2
mezclando y pasando sucesivamente de un círculo a otro 50 µL; descartar los 50µL de la última
dilución.
11
De esta manera se obtienen las diluciones siguientes:
Círculos 1 2 3 4 5
Diluciones 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32
- Extender las gotas por la superficie del círculo, utilizando un mezclador e iniciando por la dilución
más alta.
- Colocar en cada círculo una gota (16 µL) de antígeno bien homogenizado, no agitar
violentamente.
- Colocar las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lámina de adelante hacia atrás observar a simple vista con buena iluminación
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo.
Toda prueba que de una reacción de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.
Prueba cuantitativa:
- En un tubo colocar 1.5 mL de solución salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituyeuna
dilución 1:16)
- A partir de la dilución 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando

sucesivamente de un círculo a otro 50 µL. (Anexo 5)
Descartar los 50 µL de la última dilución y se obtendrán las siguientes diluciones:
Círculos 6 7 8 9 10
Diluciones 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512
12
FUENTES DE ERROR:
- No mezclar el antígeno.
- No leer inmediatamente la reacción.
- Rotador con velocidad inadecuada.
- Aguja dispensadora de reactivo sucia o deteriorada.
- No dispensar las gotas en forma vertical.
- No utilizar cámara húmeda.
- No utilizar los reactivos a temperatura ambiente.
- Mala iluminación para la lectura.
- Diluciones inexactas.
- Uso de reactivos vencidos o en malas condiciones.
- Muestras hiperlipémicas.
- Presencia de infección.
FORMA DE REPORTE:
- Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensión, la cual aparece sin agregados.
- Resultado Reactivo débil: Se observa reacción en la prueba cualitativa y no aparecen agregados

visibles en todas las diluciones semi cuantitativas.
- Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo.
- En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse la

última dilución en la que se observa reacción.
RESPONSABLE:
3.0 DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA
INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rápida)
PROPÓSITO:
Detectarin vitro los anticuerpos formados en el torrente sanguíneo por el virus de la

Inmunodeficiencia Humana (VIH 1 y VIH 2).
13
MUESTRA REQUERIDA:
Suero, plasma y sangre completa.
- Tubos de ensayo 12 x 75 mm .
- Tubos de ensayo 13 x 100 mm .
- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer.
- Papel toalla.
- Protocolo de trabajo. (Anexo 10)
- Tiras reactivas sensibilizadas con antígeno VIH 1 y VIH 2.
EQUIPO:
- Macrocentrífuga.
- Pipeta automática de volumen variable.
- Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO:
- Llevar a temperatura ambiente las tiras reactivas a utilizar.
- Preparar el protocolo de trabajo.
- Cortar la línea de puntos de la bolsa para retirar las tiras reactivas.
- Retirar el plástico de protección de cada tira.
- Identificar las tiras reactivas a utilizar.
14
- Dispensar 50 µL de suero con una pipeta automática sobre la superficie absorbente. (señalada
con una flecha)
- Esperar un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos.
- Leer el resultado.
- Observar el área de reacción.
FUENTE DE ERROR
- Reactivos vencidos y en mal estado.
- Tiras reactivas que no estén a temperatura ambiente.
- Concentraciones bajas de anticuerpos.
- Pacientes con transfusiones masivas.
- Manipular las tiras reactivas con guantes empolvados.
- Infección con una variante del virus que no reacciona con los antígenos específicos utilizados en
la configuración del ensayo.
FORMA DE REPORTE:
REACTIVO:
- Presenta barra roja en las dos ventanas del área de reacción, tanto la del paciente con la ventana
del control.
INDETERMINADO:
Presenta barra tenue en la ventana del área de reacción del paciente y barra roja en la ventana del
control.
NO REACTIVO A LA FECHA:
Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana del
resultado del paciente.
REACCIÓN NO VÁLIDA:
No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta
prueba debe repetirse. No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero sí en la
ventana del paciente, esta prueba debe repetirse.
RESPONSABLE:
15
4.0 ANTÍGENOS FEBRILES
PROPÓSITO:
Investigar en el suero del paciente anticuerpos producidos por infecciones causadas por
Salmonellas, Brucellas, Rickettsias u otras infecciones bacterianas, por las cuales el organismo del
paciente reacciona con la producción de anticuerpos específicos.
MUESTRA REQUERIDA:
Suero.
- Tubos de ensayo 12 x 75 mm.

- Lámina de reacción.
- Papel toalla.
- Antígeno somático “O”.
- Antígeno flagelar “H”.
- Antígeno paratyphico “A”.
- Antígeno paratyphico “B”.
- Antígeno somático O X 19.
- Antígeno somático Brucella abortus.
- Control negativo y control positivo.
EQUIPO:
- Macrocentrífuga.
- Reloj marcador.
- Pipetas automáticas.
- Rotador serológico.
PROCEDIMIENTO:

16
- Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Prueba cualitativa:
- Mezclar las suspensiones cuidadosamente antes de su uso.
- Colocar una gota de muestra en los 6 círculos y una gota de cada control positivo y negativo en su
respectivo círculo.
- Colocar sobre cada muestra o control una gota de reactivo.
- Mezclar con palillos descartables por separado y esparcir el líquido sobre el área completa de
cada círculo.
- Colocar la lámina en un rotador a 100 rpm durante 1 minuto.
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.
Prueba semicuantitativa:
- En caso de obtener resultados positivos hacer determinación semicuantitativa en lámina:

- Colocar en seis tubos 100 µL. de solución salina 0.85% y adicionar en el primer tubo 100 µL de
muestra.
- Hacer diluciones seriadas en base a 2 en los siguientes tubos, de modo de obtener las siguientes
diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y 1:64.
- Continuar el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada dilución
como muestra.
- Continuar el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada dilución
como muestra.
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación.
- Reportar la última dilución en la que se observe aglutinación.
FUENTES DE ERROR:
- Fase precoz de la enfermedad.

- Niveles bajo de anticuerpos.
- Leer la reacción después del tiempo estipulado.
- Rotación inadecuada.
- Reactivos vencidos o deteriorados.
- No homogenizar los antígenos antes de usarlos.
- No llevar a temperatura ambiente los reactivos.
FORMA DE REPORTE:
POSITIVO: Cuando se observa aglutinación macroscópica y reportar última dilución en la que se
observa aglutinación.
NEGATIVO: Cuando no se observa aglutinación.
17
RESPONSABLE:
5. TIPEO SANGUÍNEO
PRUEBA DIRECTA EN TUBO
PROPÓSITO:
Investigar en la sangre la presencia o ausencia de los antígenos A, B y Rh que se localizan en la
superficie de los glóbulos rojos, utilizando anticuerpos específicos para cada uno de ellos.
MUESTRA REQUERIDA:
1 mL de Sangre completa con o sin anticoagulante.
- Frasco lavador.
- Papel toalla.
- Antisuero “A”.
- Antisuero”B”.
- Antisuero RH (anti-D).
EQUIPO:
- Macrocentrífuga.
- Reloj marcador.
- Pipetas automáticas.
- Lámpara para lectura de aglutinación.
PROCEDIMIENTO:
- Identificar previamente los tubos.

- Depositar 2-3 gotas de sangre en un tubo.
- Realizar 3 veces el lavado de células de la siguiente manera:
a) Agregar 1 mL de solución salina 0.85%.
b) Mezclar y llenar con solución salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
c) Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm .
18
d) Descartar toda la solución salina quedando en el fondo un paquete de glóbulos rojos.
- Preparar una suspensión al 5%, colocando una gota de los glóbulos rojos lavados y 19 gotas de
solución salina y mezclar.
- Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar una gota
de glóbulos rojos al 5%.
- Depositar los antisueros respectivos:
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm .
- Leer la presencia o ausencia de aglutinación agitando suavemente los tubos.
FUENTES DE ERROR:
- Hemólisis de los glóbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
- Iluminación inadecuada en el momento de la lectura.
- Dilución inadecuada de los glóbulos rojos.
FORMA DE REPORTE:
Se reporta:
Grupo A: si aglutina el tubo marcado A.
Grupo B: si aglutina el tubo marcado B.
Grupo O: si no aglutinan los tubos marcados A y B.
Grupo AB: si aglutinan los tubos marcados A y B.
RESPONSABLE:
19
6.0 DETERMINACIÓN DE VARIANTE Du
PROPÓSITO:
Comprobar si una persona es verdadero positivo o negativo con respecto al factor Rh (D). La
variante Du se determina cuando el factor Rh es negativo.
MUESTRA REQUERIDA:
Suspensión de eritrocitos al 5%.
- Papel toalla.
- Albúmina bovina.
- Suero antihumano (coombs).
EQUIPO:
- Baño de María.
- Centrífuga.
- Lámpara para lectura de aglutinación.
PROCEDIMIENTO:
- Identificar dos tubos
- En el tubo 1: colocar una gota de suero anti D y agregar una gota de suspensión de eritrocitos al
5% a estudiar.
- Mezclar suavemente.
- En el tubo 2 (control): colocar una gota de albúmina bovina y agregar una gota de suspensión de
eritrocitos al 5% a estudiar.
- Mezclar suavemente.
- Centrifugar ambos tubos a 3400 rpm por 15 segundos.
- Desprender suavemente el botón de células del fondo del tubo.
- Observar presencia o ausencia de aglutinación frente a la luz de una lámpara.
- Si no se observa aglutinación se incuban los tubos a 37°C por 15 minutos.
20
- Lavar los glóbulos rojos de ambos tubos cuatro veces llenándolos con solución salina al 0.85%.
- Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm cada vez y descartar la solución después de cada lavada.
- Agregar a cada tubo 2 gotas de suero Coombs.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm.
- Leer frente a la luz de una lámpara y buscar aglutinación tratando de desprender suavemente el
botón de células.
- Observar aglutinación.
FUENTES DE ERROR:
- Hemólisis de los glóbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
- Iluminación inadecuada en el momento de la lectura.
- Dilución inadecuada de los glóbulos rojos.
- Baño de María con temperatura inadecuada.
FORMA DE REPORTE:
Du POSITIVO: (presencia de aglutinación o botón) = Rh POSITIVO
Du NEGATIVO: (ausencia de aglutinación) = Rh NEGATIVO
RESPONSABLE:
21
7. PRUEBA DE EMBARAZO
PROPÓSITO:
Investigar en orina la presencia de la hormona gonadotropina coriónica (HCG); el método se basa

en la reacción de aglutinación de una suspensión de Látex recubiertas con anticuerpos
monoclonales Anti-hormona gonadotropina coriónica.
MUESTRA REQUERIDA:
Orina o suero , se recomienda utilizar la orina de la primera hora de la mañana, ya que

generalmente contiene mayor concentración de hormona, en el suero no hay hora de toma de
muestra
Muestras de orina: estable 48 horas a 2-8°C o 3 meses a -20°C.
-placas para detección de hormona.

- Papel toalla.
- tubo para muestra
- Dispensadores plásticos.
- Tubos cónicos.
EQUIPO:
22
- Macrocentrífuga.
- Rotador serológico.
- Lámpara de luz.
- Reloj marcador.
PROCEDIMIENTO:
- La muestras de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras.
- Identificar correctamente lámina o tarjeta.
- Sobre cada círculo de lámina o tarjeta depositar 100 µL de muestras a analizar e incluir un control
Positivo y un negativo por cada tiraje.
- Homogenizar suavemente el reactivo de Látex antes de usar.
- Depositar una gota de reactivo de Látex sobre cada una de las muestras y los controles.
- Mezclar con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensión por toda la
superficie interior del círculo
- Emplear un dispensador distinto para cada muestra.
- Colocar la tarjeta o lámina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos.
- Examinar macroscópicamente bajo una fuente de luz la presencia o ausencia de aglutinación
inmediatamente después de retirar del agitador.
FUENTE DE ERROR
- Las concentraciones altas de hormonas folículo estimulante y luteinizante, presentan reacción
cruzada con la hormona gonadotropina coriónica.
- Muestras con bajo niveles de hormona gonadotropina coriónica (antes de las seis semanas, se
recomienda repetir la prueba unos días más tarde).
- La orina de pacientes con enfermedades trofoblásticas tales como carcinoma o quiste
hidatidiforme podrían causar resultado falsamente positivos.
- Realizar la prueba con reactivos que no han sido llevados a temperatura ambiente.
FORMA DE REPORTE:
REACCIÓN DIRECTA:
POSITIVA: Formación aglutinación.
NEGATIVA A LA FECHA: No se observa aglutinación.
REACCIÓN INDIRECTA:
POSITIVA: No se observa aglutinación.
NEGATIVA A LA FECHA: Formación de aglutinación.
Consultar siempre el inserto provisto por la casa comercial.
RESPONSABLE:
23
8.0 BIBLIOGRAFIA
- MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TECNICOS DE LABORATORIO CLINICO DEL PRIMER NIVEL

DE ATENCION ( MINSAL)
24

Manual de Inmunologia

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Manual de Inmunologia

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS

5. Todo material cortopunzante se debe descartar en garrafones con hipoclorito de

Brindar las los procedimientos de pruebas de inmunohematologia realizadas en

1. Que el Licenciado en laboratorio clínico encargado del área técnica conozca

Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunología.

5 mL de sangre venosa sin anticoagulante.

- Jeringa estéril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 ½ o sistema de extracción al vacío.

- Alcohol etílico (70%).

- Gradilla para tubos.

- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.

- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.

- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.

- Seleccionar la vena apropiada para la punción.

- Proceder a puncionar la vena seleccionada.

- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.

- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.

- Centrifugar la muestra a 3000 rpm po 10 minutos.

- Separar el suero del paquete globular.

- Verificar nuevamente la identificación del paciente.

- Prolongada aplicación del torniquete.

- Extracción violenta de la sangre, que puede provocar hemólisis.

- Empleo de tubos mal lavados.

- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta.

- Dejar los tubos con muestras destapados.

- Centrifugación inadecuada de la muestra.

Profesional en Laboratorio Clínico o Laboratorista.

Detectar y cuantificar anticuerpos reagínicos en suero, que corresponde a un diagnostico

5mL de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 mL de

- Tarjeta o lámina en círculos de 18 mm.

- Tapadera plástica para formar cámara húmeda.

- Frasco plástico con aguja calibrada para depositar 16uL.

- Antígeno: Cardiolipina, Lecitina, Colesterol y partículas de carbón.

- Solución salina 0.85%.

- Tubos 12x75 mm.

- Gradilla para tubos.

- Centrifugación inadecuada de la muestra.

- Rotador serológico de 100 rpm.

- Micropipeta automática regulable.

- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.

- Separar los sueros del paquete globular.

- Identificar los sueros y círculos de la tarjeta o lámina de reacción.

- Homogenizar el antígeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero.

- Colocar la tarjeta en el rotador serológico y cubrirla con la cámara húmeda.

- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.

- Depositar con el dispensador en el primer círculo 50 µL de suero, mezclar aspirando y expeliendo

Diluciones 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32

- Colocar las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera

- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.

- A partir de la dilución 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando

Descartar los 50 µL de la última dilución y se obtendrán las siguientes diluciones:

Diluciones 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512

- No leer inmediatamente la reacción.

- Rotador con velocidad inadecuada.

- Aguja dispensadora de reactivo sucia o deteriorada.

- No dispensar las gotas en forma vertical.

- No utilizar cámara húmeda.

- No utilizar los reactivos a temperatura ambiente.

- Mala iluminación para la lectura.

- Uso de reactivos vencidos o en malas condiciones.

- Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensión, la cual aparece sin agregados.

- Resultado Reactivo débil: Se observa reacción en la prueba cualitativa y no aparecen agregados

- Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del círculo.

- En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse la