PRACTICA Nº 10

PERFIL LIPIDICO DEL SUERO

(Lipidograma)
Introducción
Con mucha frecuencia se hace en el laboratorio de bioquímica la determinación de los
lípidos del suero sanguíneo que son transportados por las lipoproteínas y que incluye
básicamente al colesterol total, triglicéridos, colesterol transportado por las lipoproteínas de
alta densidad (HDL-Colesterol y colesterol transportado por las lipoproteínas de baja
densidad (LDL-Colesterol). Este conjunto de determinaciones analíticas es denominado
como Perfil Lipídico del Suero o Lipidograma y proporciona una información muy valiosa
del estado del metabolismo lipídico. En algunos casos también se suele incluir en el perfil
lipídico la determinación de los lípidos totales y de algunas apoproteinas séricas, sin
embargo, esta última determinación no está al acceso de cualquier laboratorio de análisis
clínicos.

Inicialmente sólo se determinaba el colesterol total y los triglicéridos para la detección

de anormalidades en el metabolismo de las lipoproteínas, actualmente con la determinación
del perfil lipídico se tiene una mejor información para hacer el diagnóstico y el seguimiento
de las enfermedades metabólicas primarias y secundarias que comprometen el metabolismo
de los lípidos.

El mayor uso del perfil lipídico del suero está actualmente en el establecimiento del riesgo
a padecer enfermedades cardiovasculares ya que al conocimiento que el colesterol total y los
mismos triglicéridos, cuando están a concentraciones altas, constituyen un factor de riesgo
importante , con la determinación de HDL-Colesterol y LDL-Colesterol del suero,
información se ve ampliada ya que se puede precisar si una hipercolesterolemia se asocia a
niveles altos del colesterol transportado por las LDL y que se suele llamar el “mal colesterol”
o si los niveles de HDL-Colesterol (“buen colesterol” ) son altos y más bien constituye un
factor de protección.

Alteraciones en el metabolismo de las lipoproteínas.

Actualmente no existe una clasificación satisfactoria de las alteraciones en el

metabolismo de las lipoproteínas. La clasificación genética que fue proporcionada hasta hace
algún tiempo, se ve actualmente complicada por el incrementado número de mutaciones que
se van descubriendo en los genes comprometidos con la estructura y metabolismo lipídico.
Así por ejemplo, la hipercolesterolemia familiar HF en donde se encuentra una severa
hipercolesterolemia, con triglicéridosséricos normales y depósitos lipídicos (xantelasma y
xantomas sobre los tendones) condicionando prematuramente enfermedad coronaria, se sabe
que actualmente puede ser ocasionada por más de 500 mutaciones diferentes en el gen que
codifica para el receptor de las LDL. También se ha reportado que mutaciones en el gen de
la Apoproteína B, da las mismas manifestaciones clínicas y laboratoriales. La
hiperquilomicronemia familiar, que se presenta con una severa hiperquilomicronemia,
evidente por la turbidez del suero y por el gran aumento de los triglicéridos, se sabe
actualmente que puede ser causada por mutaciones en el gen de la lipasa lipoproteica o en
los genes de la apoproteina C II (Apo C II).

En una forma muy simple, las alteraciones en las lipoproteínas (dislipidemias) se pueden
clasificar en primarias y secundarias.
• Primarias, cuando la alteración no es ocasionada por una enfermedad de fondo
identificable.
• Secundarias, cuando la alteracion es ocasionada como manifestación de una
enfermedad.

Dislipidemias Primarias.

La clasificación más aceptada de las dislipidemias primarias corresponde a la

propuesta por Fredrickson y se basa más en las determinaciones de los lípidos séricos
que en la genética. La ventaja de esta clasificación es que es ampliamente aceptada y
proporciona pautas para su tratamiento.

Las hiperlipoproteinamias descritas por Fredrickson no se dan con la misma

frecuencia, mientras que las de tipo I y V son muy raras, las de tipo IIa, IIb y IV son
muy comunes.

Relación de experimentos
1. Determinación de colesterol sérico total
2. Determinación de triglicéridos séricos
 3. Determinación de HDL-Colesterol

Objetivos
1. Precisar el fundamento de los métodos más usados en la determinación del colesterol
total, triglicéridos y HDL-Colesterol.
2. Determinar el perfil lipídico de varias muestras de suero
3. Hacer la interpretación de las alteraciones que se encuentren en el lipidograma.

CUADRO. Nº Características de las hiperlipoproteinemias de Fredrickson

TIPOS Tipo I Tipo IIa Tipo IIb Tipo III Tipo IV Tipo V

Lipoproteina
Quilomi- LDL y LDL IDL Quilomi-
VLDL
crones. VLDL crones
Colesterol Normal o Normal o Normal o
Total

Triglicéridos Normal

LDL-Colest. Normal o Normal o Normal Normal

HDL-Colest. Normal Normal o Normal o Normal o Normal o Normal o

METODOS USADOS PARA LAS DETRMINACIONES DEL PERFIL LIPIDICO.

Determinación del Colesterol total sérico.

En la actualidad se prefieren el método colorimétrico enzimático para hacer las

determinaciones del colesterol, por su especificidad y facilidad de la determinación.

Fundamento.

El fundamento general de este método es el siguiente:

 1) Una colesterol esterasa (1) hidroliza los ésteres de colesterol para rendir colesterol
libre y ácidos grasos.

2) Enseguida una colesterol Oxidasa, oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido

de hidrógeno.

3) Finalmente el peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa donde el oxígeno

que se desprende reacciona con la 4 aminofenazona (4-AF) permitiendo la formación
de una quinona de color rojo. Se entiende que la intensidad del color formado es
proporcional a la concentración de colesterol en el suero.

Colesterol
Colesterol Esterasa
esterificado Colesterol + Ácido graso

Colesterol O2 + H2O
Oxidasa

Colestenona + H2 O2
4-Aminofenazona
Peroxidasa
H2O
Quinona
Roja
Procedimiento
1. En 3 tubos de ensayo medir los siguientes reactivos:

REACTIVOS 1 (Blanco) 2 (Estandar) 3 (Muestra)

Estándar de colesterol ------ 20 l ------
(200 mg %)
Suero sanguíneo ------ ------ 20 l
Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml

2. Mezclar e incubar los tubos 5 minutos a 37 º C, o por 10 minutos a temperatura

ambiente.
3. Medir la absorbancia a 505 nm
Hacer los cálculos respectivos y expresar la concentración de colesterol en mg/100 ml de
suero.
Determinación de HDL-Colesterol

Fundamento.

a) Se precipitan las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y de muy baja densidad

(VLDL) con el agregado de Sulfato de dextran en presencia de iones magnesio. En el
sobrenadante que es separado por centrifugación quedan las lipoproteínas de alta
densidad (HDL).
b) Luego se procede a determinar el colesterol de las HDL usando el mismo
procedimiento que el descrito para determinar el colesterol total.

Procedimiento

1. Mezclar 0.4 ml de suero con 1.0 ml de reactivo precipitante. Incubar por 15 minutos
a temperatura ambiente y centrifugar durante 20 minutos a 4000 rpm.
2. Utilizar 40 l del sobrenadante para hacer la determinación del HDL-colesterol de
acuerdo a la siguiente Tabla.
REACTIVOS 1 (Blanco) 2 (Estandar) 3 (Muestra)
Estándar de colesterol ------ 20 l ------
(200 mg %)
Sobrenadante ------ ------ 200 l
Agua destilada 40 l 20 l ------
Reactivo de trabajo 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml

3. Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 ºC, o por 10 minutos a temperatura ambiente.

4. Medir la absorbancia a 505 nm.
5. Hacer los cálculos correspondientes y expresar la concentración de HDL-Colesterol
en mg / 100 ml de suero.

Determinación de los triglicéridos séricos

Fundamento
a) Una Lipasa hidroliza los triglicéridos del suero y rinde glicerol más ácidos grasos.
b) El Glicerol formado, luego es convertido en glicerolfosfato en presencia de ATP por
acción de una Glicerol quinasa.
 c) El Glicerol3 fosfato es oxidado luego a dihidroxiacetona fosfato con la formación de
Peróxido de hidrógeno por acción de una Oxidasa.
d) Finalmente, el peróxido de hidrógeno reacciona con los cromógenos p-clorofenol y 4
aminofenazona (4AP) , rindiendo una quinona de color rojo. En esta última reacción
interviene una Peroxidasa.

Lipasa
Triglicéridos Glicerol + Acidos grasos
Glicerol ATP
Kinasa
ADP
Glicerol - 3 P
O2
Oxidasa
p-Clorofenol
4 AP
Dihidroxiacetona P H2O
+ Quinona de
H2O2 color Rojo
Peroxidasa

Procedimiento
1. En 3 tubos de ensayo medir los siguientes reactivos
REACTIVOS 1 (blanco) 2 (Estandar) 3 (Muestra)
Estándar (200 mg%) ------ 20 l ------
Muestra (Suero) ------ ------ 20 l
Reactivo de Trabajo 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml

2. Mezclar e incubar a 37 º C. por 4 minutos o 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Medir la Absorbancia a 505 nm.
4. Hacer los cálculos correspondientes y expresar la concentración de triglicéridos en
mg /100 ml de suero.

Expresión de Resultados.
1. Llene la tabla siguiente con los resultados obtenidos en las determinaciones realizadas
y además con los datos que el profesor le proporcionará en el curso del experimento.
 Colesterol Total HDL-Colesterol Triglicéridos
Paciente
mg % mmoles/L mg % mmoles/L mg % mmoles/L
A 186,92 116,98 198,484

2. Haga la estimativa aproximada de los valores de LDL-Colesterol con los datos del
colesterol total y del HDL-Colesterol de cada suero y consigne los resultados en la
siguiente tabla.

LDL-Colesterol
Paciente Indice Aterogénico
mg % mmoles / L
A 30,24

3. Estime el índice aterogénico para cada caso y consigne los resultados en la Tabla
anterior.
4. Comente los resultados obtenidos para cada paciente, destacando las alteraciones
encontradas y si es posible hacer un diagnóstico tentativo en base a la clasificación
de Fiedrickson.

INTERROGANTES.
1.- Consigne los valores aceptados como normales para cada determinación realizada
Los valores normales de HDL colesterol son mayores a 60 mg/dl.
- Los valores normales de colesterol total son menores a 200 mg/dl
- Los valores normales del índice aterogénico son menores a 4 o 4.5 dependiendo del género
- Los valores normales de triglicéridos son menores a 150 mg/dl
2.- Qué es el índice aterogénico, qué importancia tiene y como se estima?
Conjunto de indicadores bioquímicos a partir del colesterol total, lipoproteínas de alta y baja
densidad y triglicéridos. Su importancia se da en su cálculo que se realiza para estimar riesgos
en las arterias y evitar enfermedades como aterosclerosis, la última causa directa del riesgo
cardiovascular. La fórmula es: Colesterol total/ Colesterol HDL
3.- Es posible hacer la determinación en el laboratorio de LDL-colesterol, para obtener un
valor más exacto que el obtenido mediante la aproximación que Ud. hizo? Cuál sería el
fundamento del método?
Si es posible, ya que se calcula por diferencia entre los valores de colesterol total medio
colorimétricamente en el suero y los valores de colesterol determinados en el sobrenadante
obtenido tras la precipitación
4.- Que se entiende por índice metabólico?
Cantidad de energía utilizada en las reacciones metabólicas. Refiriéndose al número
de calorías que se queman en 24 horas mientras que el cuerpo está en reposo. Existen factores
que alternan en índice metabólico como una mayor masa muscular, mayor superficie corporal
total y sexo.