UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

FACULTAD DE AGRONOMÍA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE SUELOS

CURSO: CONTAMINACIÓN DE SUELOS

PRACTICA N°4:
“Análisis estadístico de estudios sobre biorremediación de suelos ”

Profesor: Erik Nikos Córdova Chuquival

Integrantes:
- Florez Quiquia, Yanira Aimet 20171134
- Chavez Martinez, Brenda 20171130
- Ramos Valenzuela, Eduardo Keny 20180156
- Lagos Huayhuameza, Marlo Cesar 20171189

Lima - Perú
2023
1. INTRODUCCIÓN
La contaminación del suelo es un problema ambiental que afecta la calidad de vida de
las personas y la biodiversidad del planeta. La presencia de sustancias tóxicas en el
suelo puede tener efectos negativos en la salud humana y en los ecosistemas. La
remediación de suelos contaminados es un proceso complejo y costoso que requiere la
aplicación de diversas estrategias y tecnologías. Entre estas tecnologías, se encuentra
la bioremediación, que utiliza microorganismos para degradar los contaminantes
presentes en el suelo.

Entre los microorganismos utilizados en la bioremediación de suelos contaminados,

las bacterias juegan un papel crucial debido a su capacidad para metabolizar una
amplia gama de compuestos orgánicos e inorgánicos.

En el presente trabajo, se escogen 4 artículos científicos que emplean bacterias para

biorremediar el suelo contaminado con fenantreno, un compuesto contaminante
presente en los hidrocarburos, para así determinar cual(es) es(son) el(los)
tratamiento(s) que resultan con mayor rendimiento de remoción empleando bacterias
mediante un análisis estadístico

2. OBJETIVOS

● Analizar 4 casos de aplicaciones de la biorremediación de suelos y mediante

un análisis estadístico determinar la mayor efectividad entre estos.

3. MARCO TEÓRICO
3.1. Acción de microorganismos aislados:
La introducción de microorganismos aislados de un sitio contaminado ayuda a
resolver el problema de contaminación de suelos, ya que pueden degradar los
constituyentes y tienen una gran tolerancia a la toxicidad. Poseen actividades de
peroxidasas y oxigenasas, lo que permite la oxidación de algunas fracciones del
petróleo. Esta oxidación cambia las propiedades de los compuestos haciéndolos
susceptibles a ataques secundarios y facilitando su conversión a dióxido de carbono y
agua (Benavides et al., 2006).
3.2. Biodegradación:
Muchos microorganismos son capaces de utilizar sustancias contaminantes, como el
petróleo y sus derivados, como fuente de alimentación.
El petróleo está constituido por diferentes moléculas compuestas de átomos de
carbono y de átomos de hidrógeno denominadas hidrocarburos que son poco solubles
en agua. Contiene una compleja mezcla de hidrocarburos diferentes: alifáticos
(cadenas lineales de carbono), alicíclicos (carbono en una estructura de anillo sin
dobles enlaces) y aromáticos (carbonos en una estructura de anillo con dobles enlaces
dentro del anillo), y una proporción más pequeña de compuestos no hidrocarburos.
Estas moléculas pueden ser utilizadas, metabolizadas y asimiladas por ciertos
microorganismos. (Filtec, 2014 )
3.3. Hidrocarburos Aromáticos Policiclicos (HAP):
Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs) son un grupo de más de 100
sustancias químicas diferentes que se forman durante la combustión incompleta del
carbón, petróleo y gasolina, basuras y otras sustancias orgánicas como tabaco y carne
preparada en la parrilla. Los HAPs se encuentran generalmente como una mezcla de
dos o más de estos compuestos, tal como el hollín.

Algunos de los HAPs son manufacturados. Estos HAPs puros generalmente son
sólidos incoloros, blancos o amarillo-verde pálido. Los HAPs se encuentran en
alquitrán, petróleo crudo, creosota y alquitrán para techado, aunque unos pocos se
usan en medicamentos o para fabricar tinturas y pesticidas. (ATSDR, 1996)

Figura 1. Estructura química de algunos Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos

(HAP)

Fuente: Superintendencia de Riesgo del Trabajo, 2019

3.4. Fenantreno:

El fenantreno es un hidrocarburo aromático policíclico con fórmula molecular

C14H10. Tiene dos anillos bencénicos fusionados en una posición orto, lo que le
confiere una forma característica de "V". El fenantreno es un sólido cristalino de color
blanco o ligeramente amarillento, poco soluble en agua pero soluble en disolventes
 orgánicos como benceno y cloroformo.El fenantreno tiene diversas aplicaciones,
como la producción de insecticidas, herbicidas, fungicidas, colorantes, materiales
fotosensibles y otros compuestos orgánicos. (Graham & Craig , 2014)

3.5. Género Pseudomonas :

El género Pseudomonas es un grupo de bacterias Gram negativas ampliamente
distribuidas en el medio ambiente. Estas bacterias son metabólicamente versátiles y se
han identificado en muchos ecosistemas acuáticos y terrestres. Las especies de
Pseudomonas tienen la capacidad de degradar una amplia variedad de compuestos
orgánicos, incluyendo hidrocarburos aromáticos, alifáticos, policíclicos y sustancias
químicas sintéticas como los plaguicidas. Esto hace que sean importantes para la
biorremediación de contaminantes ambientales, ya que pueden transformar y
mineralizar los contaminantes en sustancias menos tóxicas o no tóxicas (Lalucat et al.,
2006).
La biorremediación es un proceso de eliminación de contaminantes ambientales a
través de procesos biológicos, que involucra la actividad microbiana. Las bacterias del
género Pseudomonas son conocidas por su capacidad para degradar compuestos
orgánicos persistentes, como los hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAH) y los
compuestos clorados. Las enzimas producidas por Pseudomonas, como la catecol
oxidasa, la catecol 2,3-dioxigenasa y la hidroxilasa, pueden degradar estos
compuestos en dióxido de carbono, agua y compuestos no tóxicos. Además, algunas
especies de Pseudomonas también tienen la capacidad de transformar metales pesados
en formas menos tóxicas (Das & Chandran, 2011).
Pseudomonas aeruginosa es una de las especies más estudiadas del género
Pseudomonas debido a su importancia médica y biotecnológica. Es una bacteria
oportunista que puede causar infecciones graves en humanos y animales,
especialmente en pacientes con sistemas inmunitarios comprometidos. Por otro lado,
la capacidad de P. aeruginosa para degradar una amplia variedad de compuestos
orgánicos la hace útil para la biodegradación de contaminantes ambientales y la
biorremediación. Por ejemplo, esta bacteria ha sido utilizada para la eliminación de
contaminantes en sitios contaminados por la industria petrolera (Diggle & Whiteley,
2020).

4. METODOLOGÍA
● Buscar cuatro artículos científicos (tesis de investigación) que traten sobre
remediación de suelos con hidrocarburos (ya sea con microorganismos o con plantas).
● Revisar la información contenida en los trabajos de investigación y obtener los datos
referentes a los tratamientos usados, analizando parámetros como el pH, dosis
aplicada, TPH, etc.
● Juntar la información obtenida en un solo trabajo (Art 1 = Tratamiento 1, Art 2 =
Tratamiento 2, Art 3 = Tratamiento 3 y Art 4 = Tratamiento 4).
● Realizar un análisis estadístico, usar un método estadístico que no contemple el uso de
una muestra control.
● Realizar la interpretación de la información obtenida.
 ● Concluir referente a que tratamiento tuvo el mejor resultado.
5. RESULTADOS Y DISCUSIONES
En la Tabla 1 se abordan las características del método de biorremediación empleado
en cada artículo científico. Adicionalmente, en la Tabla 3 se presenta el análisis de
diseño de bloques completamente al azar (DBCA) para los 4 artículos científicos
revisados.
Tabla 1: Métodos de biorremediación analizados

Artículo Descripción Tratamiento Bacterias Método

científico identificadas

Autochthonous Se empleó el suelo 10% de suelo Géneros por Bioaumentación

bioaugmentation de un vertedero de climatizado,por tratamiento
accelerates 50 años de 7 días, con 50 AS:
phenanthrene antigüedad, el cual mg /kg de Rhodococcus,
degradation in contenía basura fenantreno (AS). Otros(Streptomyces
acclimated soil quemada en la Mezclado con , Rhodococcus,
provincia de un 90% de suelo Mycobacterium,
Henan,China. esterilizado y Sphingomonas y
contaminado Nocardioide)
con fenantreno a SS: Streptomyces,
50 mg /kg. (SS). Otros
Etiqueta
(SS+AS)

Effect Of Corn Suelo ácido para Muestras de Pseudomonas sp.

Plant On Survival agricultura sin suelo con 100 UG14Lr
And historial de mg de
Phenanthrene contaminación por fenantreno por
Degradation hidrocarburos. kg de suelo seco.
Capacity Of Colectado de la
Pseudomonas Sp. provincia de Trat,
Ug14lr In Two Tailandia.
Soils

Increased El suelo fue La muestra no Pseudomonas sp.

degradation of recolectado de fue esterilizada, GF3
phenanthrene in Nanjing, se aplicó
soil by China.Suelo fenantreno a
Pseudomonas sp. marron amarillo, tasas de 200
GF3 in the tipo anfisol. Se mg/kg de suelo
presence of wheat encontraba seco
contaminado con
petróleo.

Engineering Suelo La constitución Consorcio Modificación

Pseudomonas artificialmente del tratamiento bacteriano genética
putida To contaminado con fue una mezcla sintético: E. coli
Produce fenantreno. de bacterias M123 y P. putida
Rhamnolipid modificadas KT-ABR
Biosurfactants for genéticamente:
Promoting E. coli M123 y
Phenanthrene P. putida KT-
Biodegradation ABRI
by a Two-Species inoculadas en el
Microbial suelo
Consortium contaminado
con fenantreno a
300 mg/kg de
suelo seco; 1%
glycerol fue
añadido;
contenido de
humedad: 15%.
Se usa
fenantreno y
glicerol para
evitar la
competencia
entre las
bacterias.

Fuente: Elaboración propia

Tabla 2: Concentración de fenantreno residual en cada tratamiento, considerando las
etapas de cada uno.

Etapa Fenantreno residual en cada tratamiento (mg/kg)

T1 T2 T3 T4

Inicial 4.85 53.1 155.8 181.9

Intermedia 1.8 45 98.6 103.4

Final 1.8 35.8 70 55.2

Fuente: Elaboración propia

Tabla 3: Diseño de bloques completamente al azar (DBCA) para el análisis de los
tratamientos

Etapa Porcentaje de remoción de fenantreno por tratamiento (%)

T1 T2 T3 T4

Inicial 90.30 46.90 22.10 39.37

Intermedia 96.40 55.00 50.70 65.53

 Final 96.40 64.20 65.00 81.60

Prueba de Hipótesis
Respecto a los efectos de los tratamientos
H 0 : μi=μ❑ ; i:1 , 2, 3 , 4
H 1: μi ≠ μ❑ ; i :1 ,2 , 3 , 4
Respecto a los efectos de los bloques
H 0 : β i=0 ; i:1 , 2 ,3 , 4
H 1: β i ≠ 0❑ ; i :1, 2 , 3 , 4

Fuente: Elaboración propia

Tabla 4: Análisis de varianza (ANOVA) del DBCA

Fuente de Grados de Suma de Cuadrados Fcal Ftabla

variación libertad cuadrado medios

Tratamiento 3 3976.78 1325.59 9.74 15.026052

Etapas(bloque) 2 1508.45 754.225 3.98 8.549

Error 6 529.32 88.2197

Total 11 6014.55

Fuente: Elaboración propia

•Para los tratamientos

Como el Fcal(15.03)>Ftab(4.75) entonces a un nivel significancia de 0.05 rechazamos
H0. El rendimiento de remoción de fenantreno con al menos uno de los tratamientos
es diferente.
•Para los bloques
Como el Fcal(8.55) >Ftab(5.14) entonces a un nivel sig.0.05 podemos rechazar la H0.
Entonces los etapas influyen sobre el rendimiento de remoción, concluyendo que se
justifica el uso de bloques

Prueba de Tukey
Prueba de Hipótesis
H 0 : μ1=μ2 ; H 0 : μ1 =μ 3 ; H 0 : μ1=μ 4 ; H 0 : μ2=μ 3 ; H 0 : μ2=μ4 ; H 0 : μ3=μ 4
H 1: μ1 ≠ μ 2 ; H 1: μ 1 ≠ μ3 ; H 1 : μ1 ≠ μ4 ; H 1: μ 2 ≠ μ3 ; H 1 : μ2 ≠ μ4 ; H 1: μ 3 ≠ μ4
ALS(T )=AES(T )∗√ ❑
donde: AES(T) es el valor de la tabla para la prueba Tuky, correspondiente a t=4 y 6
grados de libertad del error experimental. CME es el Cuadrado Medio del Error y b es
la cantidad de bloques.
 Tabla 5: Comparativo de Tukey
Comparación ALS(T) |Y i −Y j| Significancia

F1-F2 26.57 39.00 *

F1-F3 26.57 48.43 *

F1-F4 26.57 32.20 *

F2-F3 26.57 9.43 NS

F2-F4 26.57 6.80 NS

F3-F4 26.57 16.23 NS

Fuente: Elaboración propia

A un nivel de significación de 0.05, se puede afirmar que:
No existe diferencia significativa entre el T2 con T3 y T4, tampoco existe diferencia entre la
T3 y T4. Existen diferencias significativas entre la T1 con T2 y T3 y T4.
Las tratamientos que estadísticamente producen un mayor porcentaje de remoción son la T1
y la T4.
De acuerdo con Haiping Gua et al. (2023), Los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAP)
son compuestos que se asocian generalmente con la pirólisis y la combustión incompleta de
sustancias orgánicas, encontrándose en cuerpos de agua, suelo y sedimentos y generan
preocupación debido a su alta carcinogenicidad , teratogenicidad , mutagenicidad y eco-
toxicidad.
En el presente informe se hizo uso del proceso estadístico que consistió en un Análisis de
Varianzas (ANOVA) y una prueba comparativa, que en este caso fue la prueba de Tukey con
la finalidad de observar la eficiencia de cada uno de los tratamientos utilizados para la
remoción de fenantreno y la importancia de las etapas en las que fueron sometidas.
Con respecto al análisis general, se puede concluir que el rendimiento de remoción de
fenantreno con al menos uno de los tratamientos es diferente, asimismo, resaltar que el factor
etapa también influye sobre el rendimiento de remoción. Por otra parte, se observa en los
resultados que los tratamientos más eficientes fueron el 1 y el 4.
Haiping Gua et al. (2023), afirman que los cultivos microbianos mixtos son más eficientes en
la degradación de los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAP), a diferencia de los
cultivos microbianos puros. Asimismo, los autores concluyen que la aclimatación de
fenantreno es una estrategia rentable para la obtención de una comunidad microbiana
degradante de fenantreno y mejorar su eficiencia. Con la argumentación descrita
anteriormente, se puede validar que el tratamiento 1 es el más eficiente con un 94% de
remoción de fenantreno en su etapa final.
Por otra parte, en el artículo Engineering Pseudomonas putida To Produce Rhamnolipid
Biosurfactants for Promoting Phenanthrene Biodegradation by a Two-Species Microbial
Consortium, Ruolin Qin, Tao Xu y Xiaoqiang Jia (2022), explican que la gran eficiencia que
obtuvieron en la remoción de fenantreno en su investigación se debe a que trabajaron con un
consorcio de 2 especies de microorganismos (E. coli-P), compartiendo el mismo criterio que
se comparte en el primer tratamiento.
La práctica realizada permitió comparar tratamientos de cuatro estudios diferentes, pero es
importante tener en cuenta que las condiciones específicas de cada estudio pueden influir
significativamente en los resultados obtenidos mediante el análisis estadístico. De acuerdo
con Viñas (2005), los factores que influyen en la capacidad de biorremediación de un suelo
son la presencia de microorganismos degradadores activos, la estructura molecular,
concentración y biodisponibilidad del contaminante, así como factores ambientales como el
pH, temperatura, humedad, aceptores de electrones y disponibilidad de nutrientes. En
consecuencia, fue difícil encontrar cuatro estudios que aborden todas estas condiciones de
manera homogénea, lo que hubiera permitido un análisis más sólido. Se destaca la
importancia de realizar análisis estadísticos en condiciones controladas y similares al
momento de comparar tratamientos.

6. CONCLUSIONES
● Se logró determinar los tratamientos más efectivos para la biorremediación de
suelos a partir de la aplicación de métodos estadísticos (ANOVA y Tukey) en
el análisis de 4 casos logrando seleccionar al tratamiento 1 y 4, ambos
compuestos por un grupo de bacterias, como los de mayor efectividad en la
remoción de fenantreno.

7. BIBLIOGRAFÍA
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