UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS - ESPE

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA

AGRICULTURA

MICROBIOLOGÍA II

INFORME DE LABORATORIO 6

GRUPO IV

Integrantes: Abad Myriam, Flores David, Ortega Soledad, Quishpe Jean Pierre
Fecha: 09/08/2018 Práctica N°: 6
NRC: 4287

1. Tema: Aislamiento de bacterias de suelos contaminados con hidrocarburos.

2. Palabras clave: fenantreno, HAPs, microorganismos biorremediadores
3. Resumen

4. Introducción

4.1 Antecedentes

Muchos trabajos anteriores se han enfocado en descubrir, o buscar microorganismos que

sean capaces de desgradar distintos tipos de hidrocarburos, entre ellos aquellos

pertenecientes a los HAPs, con este fin, se propusieron distintos métodos para su

búsqueda y aislamiento. Por ejemplo, (Wong, y otros, 2017) en su trabajo “

Degradación de Fenantreno por bacterias del género Burkholderia y Rhizobium aisladas

de nódulos de mimosas” proponen métodos para identificar microorganismos en las

plantas conocidas como mimosas que sean capaces de degradar el fenantreno, para con

ello saber si eran útiles para biorremediación de suelos contaminados con este

compuesto.

4.2 Justificación
Los hidrocarburos, aunque útiles en distintas aplicaciones, al ser derramados en la

naturaleza son nocivos para los organismos vivientes que ahí se encuentren. Para lograr

mitigar sus efectos se emplean distintas técnicas de remediación, entre ellas el uso de

microorganismos. Se sabe que naturalmente en algunos suelos hay presencia de

microorganismos degradadores de ciertos hidrocarburos como por ejemplo el

fenantreno por lo que lograr identificarlos, estudiarlos y saber cómo actúan es

importante para poder usarlos en biorremediación de suelos o agua.

4.3 Marco teórico:

Según (Echeverri, Manjarrez, & Cabrera, 2011) hay bacterias que utilizan petróleo para

lograr crecer y desarrollarse. Entre los géneros capaces de lograrlos se han encontrado

Pseudomonas, Mycobacterias, Mycromycetes. De igual manera se están estudiando

distintos géneros para medir su capacidad de degradación, también podemos encontrar a

Burkholderia y Rhizobium las cuales se han analizado para degradación de fenantreno.

El fenantreno es un tipo de hidrocarburo perteneciente al grupo de HAPs (hidrocarburos

aromáticos policíclicos), su unidad estructural es el benceno por lo que consta de tres

anillos fusionados de benceno (Guerrero & Rodríguez, 2009). De acuerdo con (Torres,

2018) existen distintas maneras de obtener fenantreno, entre las que se destaca el

derrame de petróleo o de algunos de sus derivados. Además, la IARC lo ha estipulado

como no carcinógeno, pero podría tener efectos no deseables en la salud.

5. Objetivo General:

6. Objetivos Específicos

7. Hipótesis

8. Materiales y Métodos
Se tomó una muestra de suelo de una vulcanizadora en un frasco estéril y se la llevó al

laboratorio para su análisis. La muestra fue homogeneizada agitándola varias veces en

el mismo frasco, posteriormente se pesó 10 gr de la muestra junto al mechero y se

colocó en solución salina 0,9%. Esta mezcla fue llevada a agitación durante 30 minutos

y luego se la dejó reposar 30 minutos más para que decante. Luego del sobrenadante se

tomó alícuotas de 100 mL y se las sembró en medio mineral basal que contenía como

única fuente de carbono: fenantreno. Las cajas Petri fueron dejadas en incubación a

36ºC durante 5-7 días. Pasado este tiempo se observó resultados y se realizó tinción

Gram.

9. Resultados

En ambas cajas Petri se obtuvo crecimiento masivo sin embargo en una de las cajas el

crecimiento fue blanquecino mientras que en la otra fue amarillo opaco (ver figura Nº1).

Caja 1 Caja 2
 Figura N°01: Crecimiento en medio mineral basal con fenantreno tras 6 días de
incubación a 36ºC.

Las microorganismos observados en la caja 1 fueron cocos, diplococos y estreptococos

Gram (-), mientras que en los de la caja 2 se vio cocos tanto Gram (-) como Gram (+)

(ver figura Nº02).

Caja 1 Caja 2

Figura N°02: Tinción Gram de los crecimientos previamente obtenidos del medio
mineral basal.

10. Discusión

Existen bacterias capaces de utilizar petróleo para su crecimiento y mantenimiento,

conocidas como bacterias degradadoras de hidrocarburos, dentro de las cuales se

encuentran diversos géneros que por su versatilidad metabólica son capaces de convertir

sustratos habitualmente no degradables en metabolitos fácilmente asimilables o

susceptibles de ser catalizados enzimáticamente (Echeverri, Manjarrez, & Cabrera,

2010). El crecimiento masivo en el medio enriquecido con petróleo confirma que la

muestra de suelo contenía bacterias degradadoras de hidrocarburos que pueden servir

para biorremediación.

Desde un punto de vista ambiental, las bacterias son muy importantes, pues tienen la

capacidad de transformar una gran variedad de contaminantes orgánicos e inorgánicos a

sustancias inocuas, que pueden ser reciclados al medio ambiente y también de aquellas

bacterias que tienen la capacidad de oxidar una gran cantidad de compuestos orgánicos

producidos y utilizados industrialmente (Goez, 1999). Se estima que, de todos los

microorganismos presentes en el suelo, las bacterias son aquellas que se presentan en un

mayor número y también las más importantes en la degradación de hidrocarburos,

verificando su presencia mediante las diferentes pruebas.

11. Conclusiones

Se logró aislar microorganismos degradadores de petróleo, lo cual se evidenció con el

crecimiento masivo que hubo en los medios de cultivo con petróleo a partir de muestras

de suelo contaminado con combustible. También se pudo determinar que estas bacterias

están presentes de manera natural en el suelo debido al crecimiento obtenido de la

muestra de suelo no contaminado.

Diferenciamos las morfologías de Cocos sp y Baillus ps Gram negativos en las colonias

de las baterías que degradaron el petróleo a través de tinción Gram.

12. Bibliografía
Echeverri, G., Manjarrez, G., & Cabrera, M. (2010). Aislamiento de bacterias
potencialmente degradadoras de petróleo en hábitats de ecosistemas costeros en
la Bahía de Cartagena, Colombia. NOVA - Publicación Científica EN CIENCIAS
BIOMÉDICAS 8 (13), 76-86.
Echeverri, G., Manjarrez, G., & Cabrera, M. (6 de Junio de 2011). Aislamiento de
bacterias potencialmente degradadoras de petróleo en hábitats de ecosistemas
costeros en la Bahía de Cartagena, Colombia. Obtenido de
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/NOVA13_ARTORIG7.pdf
Goez, M. (1999). Determinación y diferenciación de E. Coli y Coliformes Totales
usando un mismo sustrato cromogénico. . CEPIS.
Guerrero, A., & Rodríguez, A. (2009). Efecto de la presencia de fenantreno sobre la
expresión de proteínas y la actividad enzimática radical de Cyperus
hermaphroditus. Obtenido de Scielo:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405-
27682009000100007
Torres, L. (2018). Fenantreno: Estructura Química, Propiedades y Usos. Obtenido de
Lifeder: https://www.lifeder.com/fenantreno/
Wong, A., Mendez, E., Hernández, E., Yáñez, G., Giácoman, G., Ramírez, S., y otros.
(2017). Degradación de Fenantreno por bacterias del género Burkholderia y
Rhizobium aisladas de nódulos de mimosas. Obtenido de Scielo:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2007-
07052017000200291

13. Anexos

Anexo N°01: Recolección de la muestra de suelo de una vulcanizadora