Instructivo de Perfiles Clínicos 2024

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS

Y TECNOLÓGICOS 15
“Diódoro Antúnez Echegaray”
INSTRUCTIVO DE PRÁCTICAS DE
FEBRERO DE 2024.
CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y TECNOLÓGICOS 15
“Diódoro Antúnez Echegaray “
ACADEMIA DE TÉCNICO LABORATORISTA CLÍNICO
LABORATORIO DE PERFILES CLÍNICOS
Clave: PC Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: S/N
INSTRUCTIVO DE PRÁCTICAS DE
PERFILES CLÍNICOS
PROFESOR TITULAR:
__________________________________________________________
PROFESORES DE LABORATORIO:
________________________________________ y
__________________________________________________________
NOMBRE DEL ESTUDIANTE:

__________________________________________________________
No. DE BOLETA: _________ GRUPO: __________ EQUIPO No.: ____
CICLO ESCOLAR: 2023 -2024 II
PROFESORES:
Dra. Jesús Guadalupe Martínez García
Dra. Paulina Gloria Ruiz Díaz
Q.B.P. María José Alarcón Cornejo
M.C. Teresita de Jesús Mandaluniz Quintana
M. en E. Gil Moisés López Iñiguez
Q.B.P. Julio Aquino Aquino
L en O. Lixandro Soto Arias
FEBRERO DE 2024.
Clave: PC-IND. Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: S/N
ÍNDICE DE PRÁCTICAS
No. CONTENIDO: Pág.
LINEAMIENTOS DE LABORATORIO DE PERFILES CLÍNICOS Y
1 1
PUNTOS QUE COMPRENDE EL REPORTE DE PRÁCTICA
2 CUANTIFICACIÓN DE CALCIO 4
3 CUANTIFICACIÓN DE CLORO 10
4 CUANTIFICACIÓN DE FÓSFORO 15
5 DEPURACIÓN DE CREATININA 21
6 CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL y TRIGLICÉRIDOS 25
7 CUANTIFICACIÓN DE LÍPIDOS TOTALES 35
8 DETERMINACIÓN DE CREATINKINASA (CPK-NAC 39

DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA
9 44
(ASAT)
10 DETERMINACIÓN DE LÁCTICO DESHIDROGENASA (LDH) 50
11 DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA (ALAT) 54
12 DETERMINACIÓN DE GAMMA GLUTAMIL GTRANSFERASA (GGT) 60
13 DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) 64
14 DETERMINACIÓN DE ALFA AMILASA 69
15 DETERMINACIÓN DE LIPASA FOSFATASA ÁCIDA 73
16 DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ÁCIDA (ACP) 78
BIBLIOGRAFÍA Y WEBGRAFÍA 82
Clave: PC-1 Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: 1 de 82
PRÁCTICA No. 1
LINEAMIENTOS DE LABORATORIO DE PERFILES CLÍNICOS:
Desarrollar el trabajo académico en las Unidades Aprendizaje de la carrera de Técnico Laboratorista
Clínico en un ambiente incluyente e igualitario en aras de una cultura de paz y justicia, durante las
sesiones de trabajo teórico y práctico con base a los siguientes lineamientos:
1. Podrán realizar las prácticas los estudiantes que estén inscritos oficialmente o con la
autorización del profesor titular, (Reglamento Interno del IPN; Titulo Tercero, Capitulo 1, Art.
77 y Reglamento General de estudios; Art. 36 apartado I)
2. Se impartirá una sesión por semana a cada grupo, tomándose la asistencia al inicio de cada
una de ellas con un margen de tolerancia de cinco minutos después de la hora señalada para
ingresar al laboratorio, (Código de Ética del IPN, Capitulo IV.2 apartado1 y Reglamento
Interno del IPN, Sección Séptima, Titulo Tercero, Capítulo VI).
3. Es obligación de las alumnas y alumnos asistir con puntualidad y constancia a sus clases, la
academia acuerda que la asistencia se registrara al inicio de cada sesión, dando como
tolerancia de ingreso lo enunciado en el punto 2 de estos lineamientos, (Reglamento Interno
del IPN, Sección Séptima, Titulo Tercero, Capítulo VI).
4. Cuando todo el grupo deje de asistir a alguna práctica y no exista causa justificada
oficialmente, esta se dará por vista registrándose como No Presentada y podrá ser tema de
cualquier evaluación, (Código de Ética del IPN, Capitulo IV.2 apartado1 y Reglamento Interno
del IPN, Sección Séptima, Titulo Tercero, Capítulo VI.
5. Solo podrán ser justificadas las inasistencias mediante el justificante oficial emitido por la
Institución, practica no realizada se calificará con cero, ya que, si no se realiza una práctica,
no se puede evaluar, (Reglamento Interno del IPN, Sección Séptima, Titulo Tercero, Capítulo
VI).
6. Para garantizar espacios confiables y seguros, la entrada al laboratorio será con bata blanca
de manga larga, vestida correcta y perfectamente abotonada; la cual se deberán quitar al salir
de laboratorio, (Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS y NOM-017-STPS-
2008).
7. Para salvaguardar la integridad física de alumnas, alumnos, profesoras y profesores se

requiere que ingresen con zapatos cerrados, cabello recogido, uñas cortadas y sin esmalte,
(Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS y NOM-017-STPS-2008).
8. Entre las buenas prácticas de laboratorio se indican: no comer, beber, fumar y aplicar
cosméticos dentro del laboratorio, (Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS,
Capitulo 3; apartado de Código de Prácticas y Protección Personal).
1
9. Cada alumno deberá trabajar durante todo el curso en el equipo y mesa de trabajo asignado
al inicio de este, salvo que los profesores lo cambien para mejorar su atención, (Código de
Ética del IPN, Capitulo IV.2 apartado1).
10. Es necesario que los alumnos guardar orden, disciplina y atención durante la estancia en el
laboratorio para prevenir accidentes y daños al equipo, (Código de Ética del IPN, Capitulo IV.2
apartado1 y Reglamento Interno del IPN, Sección Séptima, Titulo Tercero, Capítulo VI).
11. Para evitar retraso durante el desarrollo de la práctica a realizar, los alumnos y alumnas
deberán estudiarla cuidadosamente antes de ingresar al laboratorio, de esta forma se
promueve la adquisición de conocimientos y se resolverán las actividades previas indicadas
por los y las profesoras, (Código de Ética del IPN, Capitulo IV.2 apartado1).
12. De acuerdo con las necesidades del trabajo desarrollado en el laboratorio, los profesores
darán las indicaciones en el uso de aparatos electrónicos, (Código de Ética del IPN, Capitulo
IV.1 apartado2 y Reglamento Interno del IPN, Sección Séptima, Titulo Cuarto, Capítulo I).
13. Con base a lo establecido en la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, los RPBI generados (no

anatómicos, punzocortantes, cultivos y cepas.) durante el desarrollo de la practicas deberán
separarse y depositarse en las bolsas rojas y contenedores indicados.
14. Los residuos sólidos urbanos deberán separarse y depositarse en los botes colocado en la
entrada del laboratorio y no en las tarjas cónicas de las mismas ni en los contenedores
indicados para RPBI, (NADF-024-AMBT-2013).
15. El material que se utiliza en la práctica deberá quedar en el lugar que se indique y
perfectamente limpio y seco. (Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS).
16. La entrega del informe practico se hará el mismo día de la practica después de la fecha
indicada no se recibirá, (Código de Ética del IPN, Capitulo IV.1 apartado2 y Reglamento
Interno del IPN, Sección Séptima, Titulo Cuarto, Capítulo I).
17. Para tener derecho a presentar el examen ordinario “C”, será requisito indispensable tener
mínimo el 80% de asistencias y prácticas realizadas, (si no se justifican las inasistencias); si
se tiene menos del porcentaje indicado para poder acreditar el curso, se deberá presentar
una evaluación extraordinaria o ETS, los cuales serán teórico-prácticos, los cuales incluirán
los contenidos del programa de estudio correspondiente, (Reglamento general de estudios
del IPN, capitulo sexto, artículos 45 y 48).
18. El programa de estudios de la carrera de Técnico Laboratorista Clínico está conformado por
Unidades de Aprendizaje Teórico – Prácticas, por tal motivo del 100 % de la evaluación el 40
% comprende la parte teórica y un 50% la parte práctica, así mismo se incluye la evaluación
del Proyecto Aula, al cual se le asigna un 10 % en los parciales A y B, en el parcial C la
ponderación del proyecto aula será del 20 %, realizando los ajustes correspondientes a la
parte práctica, (Reglamento de Academias del IPN, Capítulo I, Art. 3 y Capitulo II Art. 7).
2
TEORÍA
CRITERIO DE EVALUACIÓN ORDINARIO “A” ORDINARIO “B” ORDINARIO “C”
Proyecto Aula 10 % 10 % 20 %
Evidencia Integradora (examen 30 % 30 % 30 %
presencial o en línea) 10% 10% 10%
Evaluación continua
(Exposiciones, tareas y trabajo en
equipo)
Total 50 % 50 % 60 %
LABORATORIO
CRITERIO DE EVALUACIÓN ORDINARIO “A” ORDINARIO “B” ORDINARIO “C”
Examen práctico 30 % 30 % 30 %
Reporte de prácticas 10% 10% 5%
Evaluación Formativa (formulario 10% 10% 5%
previo a la práctica o exposición
de prácticas)
Total 50 % 50 % 40
19. La Evaluación Formativa o Trabajo en el Laboratorio consta de los siguientes puntos:

• Buenas prácticas de laboratorio.
o Respeto y seriedad del grupo durante la exposición.
o Toma de muestra sanguínea.
o Realización del método analítico.
o Participación en el análisis de resultados.
o Desecho adecuado de los RPBI.
o Trabajo colaborativo.
o Limpieza
o Orden
o Disciplina
20. El reporte de las prácticas (20, 20 y 15%) se evaluará de la siguiente forma:

A. Número y título de la práctica
B. Competencia.
C. Organizador Gráfico (introducción y Fundamento) 2 puntos
D. Desarrollo experimental (Flujograma) 1 punto
E. Resultados 2 puntos
F. Análisis de resultados (interpretación por el laboratorio). 2 puntos
G. Conclusiones 1 punto
H. Cuestionario con referencias bibliográficas y/o digitográficas (mínimo 2) 2 puntos
NOTA: Si no presenta referencias bibliográficas y/o digitográficas, se anula el cuestionario.

La calificación obtenida se multiplicará por 2, 2 y 1.5 respectivamente en cada parcial
3
PRÁCTICA No. 2
CUANTIFICACIÓN DE CALCIO
MÉTODO VISIBLE DE PUNTO FINAL DE LA orto-CRESOLFTALEÍNA
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de calcio en una muestra de suero por medio de

un método manual, adaptándose a las características del laboratorio y el paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
El grueso del calcio corporal (98 a 99 %) está almacenado en el esqueleto y
los dientes, los cuales actúan como reservorios enormes para conservar las
concentraciones sanguíneas de calcio. Alrededor de 50 % del calcio sanguíneo está
en forma ionizada; el resto unido a proteínas. No obstante, solo el calcio ionizado
puede ser empleado por el organismo en procesos vitales, como contracción
muscular, función cardiaca, transmisión de los impulsos nerviosos y coagulación de
la sangre. Sin embargo, el calcio ionizado no puede ser medido independientemente
de las cifras de calcio total. Por consiguiente, la proporción de 50 % sólo es una
estimación y puede fluctuar según el equilibrio ácido básico general: en acidosis, el
calcio ionizado será superior a 50 %; en alcalosis, más bajo.
La cantidad de proteínas en la sangre también afectará las concentraciones de
calcio, dado que 50 % del calcio sanguíneo está unido a proteínas. Así una baja en la
albúmina sérica dará como resultado una notoria disminución en el calcio sérico total.
No obstante, la reducción no altera la concentración de la forma ionizada.
4
Un paciente con deficiencia de calcio ionizado mostrará signos de tetania
acompañados de espasmos musculares y convulsiones eventuales (respuesta
neuromuscular a la disminución de calcio en las uniones nerviosas).
Esta prueba mide la concentración de calcio total en la sangre y se utiliza
como una medida de la función paratiroidea, del metabolismo del calcio y en la
evaluación de enfermedades malignas.
El hiperparatiroidismo y el cáncer son las causas más comunes de
hipercalcemia, y la hipoalbuminemia la causa más frecuente de reducción de calcio
total. Una prueba para la fracción de calcio iónico reflejará los estados funcionales
del metabolismo de calcio, mejor que el calcio total.
Los métodos químicos más simples para las determinaciones de calcio se
basan en la fotometría de los productos de reacción coloreados obtenidos entre el
mismo y algunos reactivos. Existen varios métodos de este tipo.
Se ha utilizado ampliamente la orto-Cresolftaleína (metalftaleína) de
Schwarzenbach), para la determinación de calcio en varias muestras biológicas
mediante procedimientos autorizados. El colorante forma un complejo de color rojo
con el calcio a pH = 10 a 12. En las primeras técnicas publicadas con tal reactivo, era
necesario utilizar un pH de 12 para minimizar las interferencias causadas por el
magnesio. Subsiguientemente pudieron eliminarse tales interferencias agregando a
la mezcla de reacción 8-hidroxiquinoleina con lo que se evitó la necesidad de trabajar
a valores de pH tan altos.
III. FUNDAMENTO:
El calcio presente en el suero reacciona con la o-Cresolftaleína en un medio
alcalino, para formar un complejo colorido color violeta. La intensidad del color es
directamente proporcional a la cantidad de calcio presente en la muestra ensayada.
-OH
Ca++ + o-Cresolftaleina Complejo colorido violeta

(SUERO) (ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES) (CROMÓGENO)
5
IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS:
MATERIAL DE VIDRIO
• 5 Tubos de ensaye de 13 x 100 mm. • 2 Vasos de precipitado de 500 y 250
mL
• 1 Pipeta Pasteur con bulbo • 4 Celdillas o cubetas
• 1 Termómetro de -10ºC a +110ºC
UTENSILIOS
• Gradilla • Torundas
• Equipo vacutainer • Franela
• Ligadura o tubo látex • Papel parafilm
• Aplicadores de madera • Escobillón chico
• Papel absorbente
EQUIPO
• Espectrofotómetro • Baño María
• Centrífuga eléctrica • Pipetas semiautomáticas de 1000 y 20
μL. y sus puntillas
correspondientes
• Refrigerador
MATERIAL BIOLÓGICO:
• Suero, plasma heparinizado, orina o líquido cefalorraquídeo
El suero no debe estar en contacto prolongado con el coágulo, pues en estas
condiciones podrá haber paso de calcio hacia las células, dando resultados
falsamente bajos, en caso de desnaturalización de las proteínas plasmáticas, el ión
calcio puede precipitar con las mismas, dando también resultados falsamente bajos.
REACTIVOS: (LAB. SPINREACT)

• R 1. Tampón (Etanolamina 500 mmol/L).
• R 2. Cromógeno (o-Cresolftaleína 0.62 mmol/L. y 8-Hidroxiquinoleína 69 mmol/L)
6
• CALCIUM CAL. (Patrón primario acuoso de Calcio 10 mg/dL) papel absorbente
limpio el primer volumen pipeteado. Con este procedimiento se
Atención: Para evitar la contaminación de la solución patrón, desecha siempre en
eliminan los residuos imperceptibles que no fueron removidos de la punta de la
pipeta por causa de una limpieza inadecuada. No teniendo esta precaución, en el
medio ácido de la solución patrón se puede solubilizar estos residuos, y al
transferirse a ella causarán en consecuencia un aumento en la absorbancia y en la
concentración de la misma, y por lo tanto se obtendrán resultados falsamente bajos.
La absorbancia del patrón no se altera durante el tiempo de uso de los
reactivos a no ser que haya contaminación.
V. PROCEDIMIENTO:
TÉCNICA: Laboratorios SPINREACT
1. Marcar tres tubos de ensayo con las letras y B (Blanco), M (Muestra) y P (Patrón).
Se recomienda utilizar material de vidrio rigurosamente limpio pues la prueba
para el calcio es muy sensible.
2. Adicionar:
REACTIVOS BLANCO MUESTRA PATRÓN CONTROL
R 1 (mL) 2.0 2.0 2.0 2.0
R 2 (gotas) 1 1 1 1
Muestra (μL) ______ 20 ______
Patrón (μL) ______ ______ 20
Suero control ---------- -------------- ------------ 20
(μL)
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C / 15-25°C.
4. Mezclar y leer los tubos a 570 nm, ajustando a cero de absorbancia con el blanco
de reactivos. El color es estable como mínimo 40 minutos
El color es estable como mínimo 40 minutos.
7
CALCULOS:
Suero o plasma
Absorbancia de la muestra
Calcio en la muestra (mg/dL) = ----------------------------------------- x 10 (Conc. Patrón)
Absorbancia del Patrón
Orina 24 horas
(A) Muestra
------------------- x 10 x vol. (dL) orina/24 h = mg/24 h de calcio en la muestra
(A) Patrón
Factor de conversión: mg/dL x 0.25 = mmol/L.

VALORES DE REFERENCIA (LAB. SPINREACT):
Suero o plasma
Adultos: 8.5 a 10.5 mg/dL (2.1 a 2.6 mmol/L)
Niños: 10 a 12 mg/dL (2.5 a 3.0 mmol/L)
Recién nacidos: 8.0 a 13.0 mg/dL (2.0 a 3.2 mmol/L)
Orina
Adultos: 50-300 mg/24 h (1.25 - 7.5 mmol/24 h)
Niños: 80 a 160 mg/24 h (2 - 4 mmol/24 h)
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es la importancia del calcio en el organismo?
2. Menciona 3 fuentes externas que contienen grandes cantidades de calcio.
3. ¿Cuáles son las fuentes principales de calcio en el organismo humano?
4. Menciona 2 alteraciones que producen un aumento de calcio en el organismo

humano.
8
5. Menciona 2 alteraciones que producen una disminución de calcio en el organismo
humano.
6. ¿Cuáles son los principales electrolitos extracelulares?
9
PRÁCTICA No. 3
CUANTIFICACIÓN DE CLORO
MÉTODO VISIBLE DE PUNTO FINAL DEL Tiocianato-Hg
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de Cloruro en una muestra de suero por medio

de un método manual, adaptándose a las características del laboratorio y el
paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
El cloruro, un electrolito sanguíneo, es un anión presente predominante en los
espacios extracelulares, y con predominio menor en los espacios intravasculares y
en la célula misma. Se encuentra de manera primordial combinación como cloruro
de sodio o ácido clorhídrico. El cloruro conserva la integridad celular mediante su
influencia sobre la presión osmótica. También es significativo en la monitorización del
equilibrio ácido-básico e hídrico. El cloruro tiene el poder recíproco de aumentar o
disminuir su concentración siempre que se presenten cambios en la concentración
de otros aniones. En la acidosis metabólica, hay un incremento recíproco en la
concentración de cloruro cuando decae la de bicarbonato de modo semejante,
cuando la aldosterona causa directamente un aumento en la resorción de sodio el
cual es un ión positivo), el efecto indirecto es un aumento en la absorción de cloruro
(que es el ión negativo).
Los cloruros son excretados con cationes (iones positivos) durante una
diuresis masiva por cualquier causa y se pierden del tubo gastrointestinal como
resultado de vómito, diarrea o fístula intestinal.
La alteración de cloruro de sodio es con frecuencia un problema primario. Así,
la medición de cloruro se hace usualmente por su valor de interferencia y es de
10
ayuda en el diagnóstico de trastornos del equilibrio ácido básico e hídrico. Debido a
la concentración relativamente elevada de cloruros en los jugos gástricos, el vómito
prolongado puede originar pérdida considerable de cloruro y reducir la concentración
sérica.
El cloruro es el electrolito menos importante de medir en una urgencia, pero es
especialmente importante de medir en la corrección de la alcalosis hipopotasemia. Si
se administra potasio sin cloruro dicha alcalosis puede persistir.
La inmensa mayoría de las técnicas habitualmente utilizadas para la
determinación de cloro recurren a una conjugación previa de este elemento con plata
o mercurio para formar cloruro de plata o cloruro mercúrico no disociados. Tal ves la
técnica más popular para la determinación de cloro en los líquidos orgánicos es la
mercurimétrica (502). En ella se titula el Cl) con una solución patrón de Hg2+, lo que
da lugar a la formación de HgCl2, no disociado pero soluble. El punto final de la
titulación viene detectado por la aparición de un color azul violeta que se produce
cuando un exceso de Hg2+ forma un complejo con la difenilcarbazona o la
difenilcarbazida, que actúan como indicadores.
III. FUNDAMENTO:
Los iones cloruro presentes en la muestra reaccionan con el tiocianato de
mercurio para formar cloruro de mercurio y iones tiocianato. El tiocianato libre
formado en presencia de iones férricos forma un complejo coloreado de Tiocianato
férrico (Sulfocianato férrico), cuya intensidad es directamente proporcional a la
concentración de iones cloruro presentes en la muestra:
2 Cl- + Hg (SCN)2 HgCl2 + 2 SCN

(IONES CLORURO) (TIOCIANATO MERCÚRICO) (CLORURO MERCÚRICO) (IONES TIOCIANATO)
3 SCN + Fe+++ Fe (SCN)3

(IONES TIOCIANATO) (ION FÉRRICO) (TIOCIANATO FÉRRICO)
11
MATERIAL DE VIDRIO
mL
UTENSILIOS
EQUIPO
correspondientes
• Refrigerador
• Suero, plasma heparinizado, orina o líquido cefalorraquídeo
REACTIVOS:
• R. Tiocianato-Hg (Tiocianato de mercurio 4mmol/L, Nitrato de hierro 40 mmol/L,
Nitrato de mercurio 2 mmol/L y Ácido nítrico 45 mmol/L)
• CLORURO CAL. Patrón primario acuoso de Cloruros 125 mmol/L.
12
V. PROCEDIMIENTO:
Se recomienda utilizar material de vidrio rigurosamente limpio para evitar errores.
2. Adicionar:
BLANCO MUESTRA PATRÓN CONTROL
R. (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0
Muestra (µL) _______ 10 _______ ------
Patrón (µL) _______ _______ 10 ------
Suero control ------ ------ ------ 10
(μL)
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C/15-25°C.

4. Leer a 480 nm, ajustando a cero de absorbancia con el blanco de reactivos. El
color es estable máximo 30 minutos.
CALCULOS:
Absorbancia de la muestra
Cloruro (mmol/L) = -------------------------------------- x 125 (Conc. Patrón)
Absorbancia del patrón
(A) Muestra
Orina 24 h: ---------------- x 125 x vol. (dL) orina 24 h = mmol/24 h iones cloruro
(A) Patrón
Factor de conversión: mmol/L = mEq/L.
VALORES DE REFERENCIA:
Suero o plasma 95 - 115 mmol/L. LCR: 95 - 110 mmol/L.
Orina: 110 a 250 mmol/24 h. Sudor: Hasta 60 mmol/L.
13
RECOMENDACIONES IMPORTANTES:
1. Observar estrictamente la metodología propuesta para obtener resultados exactos.
2. Comprobar periódicamente la solución de nitrato de mercurio utilizando el Patrón y
Sueros Controles.
3. La técnica para la determinación en orina y líquido cefalorraquídeo, es la misma
que la del suero o plasma.
4. Secar con algodón o papel absorbente, la pared externa de la pipeta de 1.0 mL
graduada en centésimas, con la cual se va a hacer la titulación con solución de
nitrato de mercurio.
6. Separar rápidamente el plasma de los hematíes para evitar el intercambio de
cloruros entre ambos componentes.
7. Mantener rigurosamente limpio el material de vidrio.
VI. CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las funciones principales del cloro en el organismo?
2. ¿Quién regula la concentración de cloro en el organismo humano?
3. Indica el nombre que se le da al aumento de cloro en sangre.
14
4. Menciona 2 alteraciones que causen un aumento y una disminución de este
electrolito.
5. Menciona los principales electrolitos intracelulares.
15
PRÁCTICA No. 4
CUANTIFICACIÓN DE FÓSFORO INORGÁNICO
MÉTODO UV DEL FOSFOMOLIBDATO
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de fósforo inorgánico en una muestra de suero

por medio de un método manual, adaptándose a las características del laboratorio y
el paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
Aproximadamente 8.5 % del contenido de fósforo total del organismo está
combinado con el calcio en los huesos. El resto se localiza en el interior de las
células. La mayor parte del fósforo en la sangre está en la forma de fosfatos o de
ésteres. El fosfato es necesario para la generación de tejido óseo y funciones del
metabolismo de la glucosa y lípidos, en la conservación del equilibrio ácido-básico,
almacenamiento y transferencia de energía de un sitio del organismo a otro. El
fósforo penetra al interior de la célula con la glucosa y disminuye después de la
ingestión de carbohidratos. Por estas razones, deben controlarse las
concentraciones de fosfato en sangre dentro de límites razonables constantes.
Las cifras de fosfato siempre son evaluadas con relación a las de calcio
porque siempre existe una relación inversa entre las dos. Cuando las
concentraciones de calcio están disminuidas, las de fósforo se incrementan, y
viceversa. Un exceso de las cifras séricas de uno, hacen que los riñones excreten el
otro. Muchas de las causas de calcio elevado son también causas de
concentraciones menores de fósforo. Como con el calcio, el factor que regula es la
hormona paratiroidea.
16
La mayoría de las técnicas habitualmente utilizadas para la determinación de
fosfato involucran la determinación fotométrica del azul de molibdeno formado por
reducción del molibdodifosfato en condiciones en las cuales no se reduce el exceso
de molibdato presente en la mezcla. El proceso de formación del azul de molibdeno
es bastante complejo e indudablemente heterogéneo. Las distintas técnicas de
reducción propuestas difieren fundamentalmente en el agente reductor utilizado.
III. FUNDAMENTO:
El fósforo inorgánico presente en el suero reacciona en medio ácido con el
molibdato de amonio en presencia de ácido sulfúrico para producir un complejo de
fosfomolibdato no reducido de color amarillo. La intensidad del color es directamente
proporcional a la concentración de fósforo inorgánico presente en la muestra.
H+
Fósforo inorgánico + Molibdato amónico Fosfomolibdato no reducido
(SUERO) (COMPLEJO COLORIDO)

MATERIAL DE VIDRIO
mL
UTENSILIOS
EQUIPO
17
correspondientes
• Refrigerador
• Suero, plasma u orina
REACTIVOS:
• R. Molíbdico. (Molibdato amónico 0.40 mM, Ácido sulfúrico 210 mM y detergente).
• PHOSPHORUS CAL. (Patrón primario acuoso de Fósforo 5 mg/dL.
• Todos los reactivos están listos para su uso-
TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA:

- SUERO: La muestra a analizar debe obtenerse sin hemólisis y el paciente debe
estar en ayuno; refrigerar si no se va a proceder el mismo día. Estabilidad: 7 días de
2 a 8ºC.
- ORINA: Recolectar la orina de 24 horas, (eliminando la primera del día e incluyendo
la primera del siguiente).
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO:
Todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
cuando se mantienen los frascos bien cerrados de 2 a 8ºC y protegidos de la luz.
V. PROCEDIMIENTO.
2. Adicionar:
R (mL) 1.0 1.0 1.0 10
Muestra (µL) _______ 10 _______ ------
Patrón (µL) _______ _______ 10 ------
18
Suero control ------ ------ ------ 10
(µL)
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C.
4. Leer a 340 nm, ajustando a cero de absorbancia con el blanco de reactivos.
CALCULOS:
(A) Muestra
Suero: ------------------- x 5 (Conc. Patrón) = mg/dL de fósforo en la muestra.
(A) Patrón
(A) Muestra
Orina 24 h: ------------------- x 5 x vol. (dL) orina 24 h = mg/24 h de fósforo.
(A) Patrón
Factor de conversión: mg/dL x 0.323 = mmol/L
ORINA:
El procedimiento a seguir es el mismo que para el suero solamente que la orina se
diluye previamente: (0.1 mL. orina en 1.9 mL de agua destilada).
Suero o plasma
Adultos 2.5 a 5.0 mg./dL (0.80 a 1.61 mmol/L)
Niños 4.0 a 7.0 mg./dL. (1.29 a 2.26 mmol/L)
Orina:
Adultos 0.4 a 1.3 g/24 h
VI. CUESTIONARIO:
1. Menciona otras técnicas para la cuantificación de Fósforo inorgánico.
2. ¿Cuál es la importancia del Fósforo en el diagnóstico clínico?
3. ¿Cuál es la función del Fósforo en el organismo humano?
19
4. Menciona 2 alteraciones que producen un aumento de Fósforo en sangre.
5. Menciona 2 alteraciones que producen una disminución de Fósforo en sangre.
20
PRACTICA No. 5
DEPURACIÓN DE CREATININA
MÉTODO VISIBLE CINÉTICO Y FÓRMULA COCKCROFT-GAULT
I. APRENDIZAJE ESPERADO.
Cuantificar la concentración de creatinina en una muestra de suero por
medio de un método manual y posteriormente utilizar este dato para calcular la
depuración de creatinina utilizando la fórmula Cockcroft-Gault (CG).
II. INTRODUCCIÓN.
La creatina es una sustancia nitrogenada que se encuentra casi
exclusivamente en el músculo (98%), también en encéfalo y sangre, y sólo trazas de
ella en orina. Desempeña un papel esencial en la contracción muscular, y se excreta
bajo la forma de su anhídrido, la creatinina. La fosfocreatina existe en grandes
concentraciones especialmente en el músculo, donde es una forma importante de
depósito de fosfato de alta energía y se puede almacenar en cartílago.
La Depuración de Creatinina es una prueba muy utilizada por los médicos de

los hospitales que atienden a los pacientes con enfermedad renal, pues es un
parámetro para monitorear a estos pacientes.
Existen varios métodos para medir la filtración glomerular como la

depuración con inulina, determinando la creatinina en suero y en orina e incluyendo
valores de diuresis o introduciendo valores de superficie corporal.
La fórmula Cockcroft-Gault es una buena opción por su simplicidad ya que

no requiere de la muestra de orina, sino solo de la creatinina sérica, la edad y el
peso del paciente.
21
III. FUNDAMENTO.
La creatinina presente en el plasma reacciona con el picrato alcalino
(formado por ácido pícrico e hidróxido de sodio) a temperatura ambiente, formando
un complejo de color amarillo-rojizo (reacción de Jaffé) de Picrato de creatinina, la
intensidad del color es directamente proporional a la cantidad de creatinina presente
en la muestra
REACCIÓN QUE SE LLEVA A CABO:
Creatinina sérica + Picrato alcalino Picrato de creatinina
(Ácido pícrico + NaOH) (CROMÓGENO AMARILLO–

ROJIZO)
IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS.
REACTIVOS:
MATERIAL DE VIDRIO UTENSILIOS:

• 3 tubos de hemólisis de 13 x 100 mm • Gradilla metálica
• 1 pipeta Pasteur con bulbo • Agujas para vacutainer No. 21 (verde)
• 1 vaso de precipitado de 250 mL. • Tubos vacutainer sin anticoagulante
• 3 celdillas o fotoceldas • Torundas con alcohol
• 1 frascos reactivos color ámbar de 250 mL • Ligadura o tubo látex
• Franela
APARATOS:
• Baño maría eléctrico • Aplicadores de madera
• Centrífuga eléctrica • Papel parafilm
• Espectrofotómetro • Marcador de tinta indeleble
• Refrigerador • Perilla o bulbo de hule
• Pipetas semiautomáticas de 1000 y 10 μL • Escobillón chico y grande
MATERIAL BOIOLÓGICO: • Detergente iónico de pH neutro marca
• Suero o plasma. Extran
R 1: Reactivo Pícrico. Ácido pícrico 17.5 mmol/L
R 2: Reactivo Alcalinizante. Hidróxido sódico 0.29 mol/l
CREATININE CAL. Patrón primario acuoso de Creatinina 2 mg/dL
PRECAUCIONES
Hidróxido sódico: Irritante (Xi): R36/38: Irrita ojos y la piel. S26: En caso de contacto con los ojos,
lavar de inmediato con abundante agua y acudir al médico. S37/39: Usar guantes adecuados y
proteger cara y ojos. S45: En caso de accidente o malestar, acudir inmediatamente al médico.
22
PREPARACIÓN
Reactivo de Trabajo (RT): Mezclar volúmenes iguales de R 1 Reactivo Pícrico y de R 2 Reactivo
Alcalinizante. Estabilidad del reactivo de trabajo: 10 días a 15-25 oC.
V. DESARROLLO.
Técnica: Laboratorios SPINREACT.

1. Marcar tres tubos de ensaye con las letras B (blanco), M (muestra) y P (patrón). Enseguida
agregar
REACTIVO BLANCO MUESTRA PATRÓN S. CONTROL
RT (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0

Muestra (μL) 100.0
Patrón (μL)_____ 100.0
Suero control 100.0
2. Mezclar y poner en marcha el cronómetro.
3. Leer al minuto la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A 2) de la
adición de la muestra a 492 nm., ajustando a cero con el blanco de reactivos, mientras se
mantiene constante la temperatura.
4. En caso de que la segunda lectura sea la misma que la primera, realizar una tercera lectura.
CÁLCULOS:
Calcular: Δ A = A2-A1
Creatinina (mg/dL) = Δ As Muestra x 2 (Conc. Patrón)

Δ As Patrón
Formula Cockcroft-Gault (CG).
Ccr = [(140 - edad) x peso ] / (72 × Creatinina sérica) x 0,85 (si es mujer).
Valores de referencia:
• Hombres: 97 a 137 mL/min (1.65 a 2.33 mL/s)
• Mujeres: 88 a 128 mL/min (14.96 a 2.18 mL/s)
23
VI. RESULTADOS
VII. CUESTIONARIO
1. Que métodos existen para medir la filtración glomerular
2. Ventajas de usar este método para cuantificar depuración de creatinina con otros
métodos
3. Cuál es la utilidad de la filtración glomerula.
24
PRÁCTICA No. 6
CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL TOTAL Y TRIGLICÉRIDOS
CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

MÉTODO ENZIMÁTICO VISIBLE DE PUNTO FINAL
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de colesterol en una muestra de suero por medio
de un método manual, adaptándose a las características del laboratorio y el
paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
El colesterol es un alcohol esteroide (derivado del hidrocarburo tetracíclico
saturado llamado perhidrociclopentanofenantreno) que contiene un radical hidroxilo
en el carbono 3 del anillo A y una cadena ramificada de 8 átomos de carbono en el
carbono 17, lo cual le da la característica de lípido, como ser insoluble en agua, pero
soluble en compuestos orgánicos como éter, cloroformo, benceno y alcohol caliente.
Cualquier célula del organismo, prácticamente, puede producir colesterol a
partir de compuestos simples de dos carbonos (acetato). El hígado, corteza
suprarrenal, ovarios y testículos, así como el epitelio intestinal, son focos
especialmente activos en la síntesis de colesterol. La corteza suprarrenal los ovarios
y los testículos utilizan el colesterol y sus ésteres para producir hormonas
esteroideas. Además de sintetizar colesterol, el hígado también lo esterifica,
transformando parte de él en ácido cólico, el cual se excreta con la bilis
Clínicamente es importante, ya que existe una relación entre la concentración
del colesterol sérico y la presencia de problemas cardiacos coronarios.
III. FUNDAMENTO (LABORATORIOS SPINREACT).

El colesterol esterificado presente en la muestra va a ser hidrolizado por la enzima
COLESTEROL ESTERASA en presencia de H2O para formar Colesterol y ácidos
grasos. El colesterol libre formado, es oxidado por la enzima COLESTEROL
OXIDASA en presencia de O2 para formar 4-Colestenona y peróxido de hidrógeno.
El peróxido de hidrógeno formado reacciona con el Fenol y la 4-Aminifenazona en
25
presencia de la enzima PEROXIDASA para formar quinonimina, cromógeno de color
rosa-rojizo, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la cantidad de
colesterol presente en la muestra
CHE
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + Ácidos grasos
CHOD
Colesterol libre + O2 4-Colestenona + H2O2
POD
2H2O2 + Fenol + 4-Aminofenazona Quinonimina + 4H2O
(ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES) (CRUMÓGENU RUSA–RUJIZU)
IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS.
MATERIAL DE VIDRIO
• 3 tubos de hemólisis de 13 x 100 mm
• 1 pipeta Pasteur con bulbo
• 1 vaso de precipitado de 250 mL.
• 3 celdillas o fotoceldas
• 1 frascos reactivos color ámbar de 250 mL
UTENSILIOS:
• Gradilla metálica
• Agujas para vacutainer No. 21 (verde)
• Tubos vacutainer sin anticoagulante
• Torundas con alcohol
• Ligadura o tubo látex
• Franela
• Aplicadores de madera
• Papel parafilm
• Marcador de tinta indeleble
• Perilla o bulbo de hule
• Escobillón chico y grande
• Detergente iónico de pH neutro marca Extran
26
APARATOS Y EQUIPOS DE LABORATORIO:
• Baño maría eléctrico
• Centrífuga eléctrica
• Espectrofotómetro
• Refrigerador
• Pipetas semiautomáticas de 1000 y 10 Μl
MATERIAL BOIOLÓGICO:
• Suero o plasma.
REACTIVOS: LABORATORIOS SPINREACT

• R 1. Tampón. PIPES pH 6.9 90 mmol/L, Fenol 26 mmol/L.
• R 2. Enzimas. Colesterol esterasa (CHE) 300 U/L, Colesterol oxidasa (CHOD)
300 U/L, Peroxidasa (POD) 1250 U/L, 4-Aminofenazona (4-AF) 0.4 mmol/L.
• CHOLESTEROL CAL. Patrón primario acuoso de colesterol 200 mg/dL (5.2
mmol/L).
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT): Disolver suavemente el contenido de un vial R2 Enzimas
en un frasco de R1 Tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su
contenido. Estabilidad (RT): 4 meses en refrigeración de (2 a 8ºC) o 40 días de 15 a
25ºC. Mantener protegido de la luz.
V. PROCEDIMIENTO:
1. El reactivo de trabajo y las muestras deberán estar a temperatura ambiente al
momento de realizar la prueba.
2. Marcar tres tubos de ensaye con las letras B (blanco), M (muestra) y P (patrón).
Enseguida agregar
REACTIVO BLANCO MUESTRA PATRÓN
RT (mL) 1.0 1.0 1.0
Patrón (μL) 10
Muestra (μL) 10
3. Mezclar e incubar en baño maría a 37°C durante 5 minutos o 10 minutos a
temperatura ambiente.
4. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la Muestra a 505 nm, ajustando a cero con
el
blanco de reactivos.
El color es estable como mínimo 60 minutos.
.
27
CÁLCULOS:
Colesterol Total (mg/dL) = Absorbancia de la muestra x 200 (Conc.
Patrón) Absorbancia del patrón
Factor de conversión: mg/dL x 0.0258 = mmol/L.

Evaluación del riesgo.
Menos de 200 mg/dL (5.2 mmol/L) Normal
200-239 mg/dL Moderado
240 o más Alto
REPORTE DE LA PRÁCTICA:
• Número y título de la práctica
• Competencia
• Introducción*
• Fundamento*
• Desarrollo: Método (diagrama de flujo)*
• Resultados (interpretación por el laboratorio)
• Análisis de resultados
• Conclusiones
• Cuestionario*
• Bibliografía (mínimo 2 bibliografías)
VI.- CUESTIONARIO:
1. Explicar brevemente la biosíntesis del colesterol.
2. Mencione los valores normales de los niveles de colesterol libre

esterificado en una persona sana.
28
3. Qué ácidos se encuentran presentes en el colesterol esterificado.
4. Mencione 3 focos activos en la síntesis de colesterol.
5. Mencione 2 enfermedades en la cual hay aumento de colesterol en la

sangre.
6. Defina que es la arterioesclerosis
29
Clave: PC-TG-S Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: 30 de 82
CUANTIFICACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS SÉRICOS

MÉTODO ENZIMÁTICO VISIBLE DE PUNTO FINAL
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de triglicéridos en una muestra de
suero por medio de un método manual, adaptándose a las características del
laboratorio y el paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
Los triglicéridos se producen en el hígado a partir del glicerol y los ácidos
grasos, y de los triésteres de estos dos componentes. Los triglicéridos son lípidos
que existen normalmente en la sangre y se emplean para producir la energía para el
organismo.
El exceso de triglicéridos se almacena en el tejido adiposo. Esta prueba se
usa para evaluar a los pacientes que se sospecha tienen aterosclerosis y como una
indicación de la capacidad del organismo para metabolizar las grasas.
Los triglicéridos aumentados, junto con el colesterol elevado, son factores de
riesgo en la enfermedad aterosclerótica. Puesto que el colesterol y los triglicéridos
pueden variar independientemente, la medición de ambos índices es más
significativa que la de cualquiera de ellos solo.
III. FUNDAMENTO:
Los triglicéridos presentes en el suero son hidrolizados en presencia de la
enzima Lipoproteinlipasa (LPL) para formar como productos, glicerol y ácidos grasos.
El glicerol que no se hidrolizó es fosforilado por el Adenosin-trifosfato (ATP), en
presencia de la enzima Glicerol Kinasa (GK) para formar Glicerol-3-fosfato (G3P) y
Adenosin-Difosfato (ADP). El Glicerol-3-fosfato es oxidado en presencia de la enzima
Glicerol Fosfato Oxidasa (GPO) para formar Dihidroxiacetona Fosfato (DAP) y
30
Peróxido de Hidrógeno (H2O2). El peróxido de Hidrógeno formado reacciona con la 4-
aminofenazona (4-AF) y el para clorofenol en presencia de la enzima Peroxidasa
(POD) formando como producto final Quinonimina (complejo de color rosa-rojizo) y
agua. La intensidad de este color es directamente proporcional a la cantidad de
triglicéridos presentes en la muestra.
LIPO PROTEIN
Triglicéridos + H2O Glicerol + Ácidos grasos libres
LIPASA
GLICEROL KINASA
Glicerol + ATP Glicerol-3-Fosfato + ADP
GLICEROL FOSFATO
Glicerol-3-Fosfato + O2 Dihidroxiacetonafosfato + H2O2
OXIDASA
PEROXIDASA
H2O2 + 4-AF + p-Clorofenol Quinonimina + H2O
(ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES) (CROMÓGENO ROSA – ROJIZO)
NOTA: En el método de los laboratorios HYCEL, solo cambia el aceptor final de

electrones (4-AAP + 3,5-DHBS) y el producto final es Quinoneimina.

MATERIAL DE VIDRIO:
• 5 Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
• 1 Pipeta Pasteur con bulbo
• 2 Vasos de precipitado de 500 y 250 mL
• 4 Celdillas o cubetas
UTENSILIOS:
• Gradilla
• Equipo vacutainer
• Torundas
31
• Franela
• Papel parafilm
• Escobillón chico
EQUIPO:
• Baño María
• Refrigerador
• Pipetas semiautomáticas de 1000 y 10 μL y sus puntillas correspondientes
REACTIVOS:
• R 1. Tampón. GOOD pH 7.5 50 mmol/L y p-Clorofenol 2 mmol/L.
• R 2 Enzimas. Lipoprotein lipasa (LPL) 150,000 U/L, Glicerol quinasa (GK) 500 U/L,
Glicerol-3-oxidasa (GPO) 2,500 U/L, Peroxidasa (POD) 440 U/L, 4-Aminofenazona
(4-AF) 0.1 mmol/L y ATP 0.1 mmol/L.
• Patrón de triglicéridos de 200 mg/dL
El reactivo de trabajo (RT) se prepara disolviendo el contenido de un vial de R 2
Enzimas en un frasco de R 1 Tampón.
En caso de tener como referencia el No. 1001310. Reconstituir el Reactivo de
trabajo, disolviendo el contenido de un vial de R 2 en 10 mL de R 1. Mezclar
suavemente hasta disolver su contenido. Estable hasta 6 semanas de 2 a 8ºC o una
semana de 15 a 25ºC.
32
V. PROCEDIMIENTO:

Se recomienda utilizar material de vidrio rigurosamente limpio para evitar errores.
2. Adicionar:
Reactivo de trabajo 1.0 1.0 1.0 1.0
(mL)
Muestra (µL) _______ 10 _______ -----
Patrón (µL) _______ _______ 10 -----
Suero control (µL) ----- ----- ----- 10
3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a temperatura ambiente.

4. Leer a 505 nm, ajustando a cero de absorbancia con el blanco de reactivos.
CALCULOS:
As de la muestra
Triglicéridos (mg/100 mL.) = ------------------------- x [Patrón]
As del Patrón
Hombres: 40 a 160 mg/dL (0.45 a 1.81 mmol/L)
Mujeres: 35 a 135 mg/dL (0.40 a 1.57 mmol/L)
VI. CUESTIONARIO:
1. Menciona las enzimas que intervienen, en orden de actividad, en la reacción
que se produce para la cuantificación de triglicéridos.
33
2. ¿Cuál es la función de los triglicéridos en el organismo humano?
3. Menciona 2 alteraciones que producen un aumento de triglicéridos en sangre.
4. Menciona otros métodos de laboratorio para la cuantificación de triglicéridos.
5. ¿Quién transporta a los triglicéridos a través de la sangre?
6. Esquematiza cómo está formado un triglicérido.
7.
34
Clave: PC 7 Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: 35 de 82
PRÁCTICA No. 7
CUANTIFICACIÓN DE LÍPIDOS TOTALES
MÉTODO VISIBLE DE PUNTO FINAL DE LA SULFO-FOSFO VAINILLINA
I. COMPETENCIA:
Cuantifica la concentración de Lípidos totales en una muestra de suero

el paciente.
II. INTRODUCCION:
Las moléculas denominadas genéricamente lípidos (del griego “lipos”, grasa)
presentan una gran variedad estructural, pero todas ellas tienen en común el hecho
de ser moléculas anfipáticas (del griego “anfi”, doble y “patia”, tendencia); esto
significa que contienen grupos polares (o iónicos) saturados en la cabeza de la
molécula, los cuales presentan afinidad por el agua (hidrófilos), grupos
hidrocarbonados no polares hidrófobos), que se sitúan en la cola de la molécula.
Por lo tanto, los lípidos resultan solubles en disolventes orgánicos apolares
como el éter, cloroformo, benzol, éter de petróleo, etc. Considerando desde el punto
de vista químico, la mayoría son ésteres o amidas de ácidos grasos con un
monoalcohol, un polialcohol o con un aminoalcohol.
Pueden clasificarse en:
A) Lípidos simples, constituidos por C, H y O y que son ésteres de ácidos grasos
con alcoholes de distinta estructura.
B) Lípidos complejos, constituidos por C, H y O, pudiendo tener N ó P ó ambos.
Son ésteres o amidas complejas formadas por ácidos, alcoholes y bases
diversas.
35
III. FUNDAMENTO:
Los lípidos insaturados reaccionan con el ácido sulfúrico formando iónes
carbonio que reacciona con el carbonilo de la fosfovainillina produciendo un complejo
de color rosa. La intensidad del color del complejo es proporcional a la concentración
de los lípidos presentes en el suero.
H+
Lípidos insaturados + H2SO4 caliente Iones carbonio
(SUERO) (CONCENTRADO)
Iones carbonio + Fosfovainillina Complejo colorido

(ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES) (CROMÓGENO ROSA-ROJIZO)
IV. MATERIAL UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS:

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
• Agitador o vortex
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EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Parrilla eléctrica
• Pipetas semiautomáticas de 1000 y 100 μL con sus puntillas correspondientes
REACTIVOS.
- R. Fosfovainillina 235 mmol/L Estable a temperatura ambiente por 2 años. Con
el tiempo se puede volver ligeramente colorido, hecho que no interviene con las
determinaciones.
- TOTAL LIPIDS CAL. Patrón primario acuoso de Lípidos Totales 750 mg/100 mL.
Estable a temperatura ambiente, por 2 años. Se aconseja mantener bien
cerrado y en refrigeración para evitar la evaporación del solvente.
- Reactivo adicional: Ácido sulfúrico p. a. (H2SO4)
V. PROCEDIMIENTO
1. Marcar 3 tubos de ensayo con las letras: B (Blanco), MMA (Mezcla Muestra
Ácida), MPA (Mezcla Patrón Ácida) y proceder como sigue:
TUBOS BLANCO MUESTRA PATRÓN CONTROL
H2SO4 (mL) 2.5 2.5 2.5 2.5
Muestra (µL) ____ 100 ____ -----
Patrón (µL) ____ _____ 100 -----
Suero control (µL) ----- ----- ----- 100
2. Mezclar enérgicamente con ayuda de un agitador mecánico.
37
3. Incubar 10 minutos en un baño de agua hirviendo (100oC).
4. Enfriar en agua fría y dosificar en cubetas:
TUBOS BLANCO MUESTRA PATRÓN
R (mL) 1.0 1.0 1.0
Hidrolizado muestra (µL) ------- 50 -------
Hidrolizado calibrador (µL) ------- ------- 50
Hidrolizado suero control (µL) ----- ----- 50
5. Mezclar enérgicamente con ayuda de un agitador mecánico.

6. Incubar 15 minutos a 37°C.
7. Leer a 520 nm, ajustando a cero de absorbancia con el blanco de reactivos. El
color es estable como mínimo 60 minutos.
CALCULOS.
Lípidos Totales (mg/dL) = Absorbancia de la muestra x 750 (Conc. Patrón)
Como el método sigue la ley de Beer, se puede calcular usando el factor de
calibración.
Factor de calibración = Concentración del Patrón
[Lípidos totales mg/dL] = As de la muestra x Factor
Suero o plasma: 450 a 800 mg/dL
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es una apoproteína?
2. ¿Qué es una lipoproteína?
3. ¿Qué son los quilomicrones?
4. ¿Cuál es la función de los lípidos en el organismo?
5. Menciona algunas técnicas para la cuantificación de lípidos en sangre.
6. Menciona algunos lípidos que se encuentren en el organismo.
7. Esquematiza una lipoproteína.
38
PRÁCTICA No. 8
DETERMINAR LA ACTIVIDAD DE LA CREATINKINASA (CPK - NAC)
POR EL MÉTODO UV CINÉTICO CONTÍNUO
I. COMPETENCIA
Determina la actividad enzimática de la C.P.K. en una muestra de suero por

medio de un método manual, adaptándose a las características del laboratorio y el
paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
La C.P.K. es una enzima clasificada como ATP-CREATIN
FOSFOTRANSFERASA (transferasa 2.7.3.2) que requiere un pH óptimo de 7.2,
presencia de ATP y como actividades al Mg++ o al Mn++. Es una enzima esencial para
la actividad muscular y, por lo tanto, se encuentra normalmente en músculo estriado
o esquelético, cardiaco y tejido nervioso. Se sintetiza casi exclusivamente en el
músculo esquelético y, en pequeñas cantidades en el tejido cardíaco y nervioso. Es
una enzima dimérica, es decir, esta constituida de dos cadenas de polipéptidos de
dos tipos: H = Heart (corazón) y B = Brain (cerebro). Se han identificado tres
isoenzimas de la C P K, que provienen de:
1. Músculo Cardiaco: fracciones II y III (H H)
2. Músculo estriado: fracciones III y parte de la II (H B)
3. Encéfalo: fracción I (B B)
Sólo se han encontrado cantidades muy pequeñas de la fracción I en otros
órganos como hígado, riñón, glóbulos rojos y bazo.
39
PATOLOGÍA:
1. Se determina C.P.K. en suero para poner de manifiesto lesiones del músculo
cardíaco y/o estriado, principalmente del INFARTO AL MIOCARDIO, ya que es uno
de los indicadores más tempranos y sensibles en su diagnóstico. Comienza a
elevarse después de 4 a 6 horas del dolor, alcanza su máximo de 10 a 12 veces lo
normal en 24 a 36 horas y vuelve a la normalidad al tercer día.
2. En algunos tipos de distrofia muscular progresiva.
3. En accidentes Cerebro-vasculares (infarto cerebral).
4. En dermatomiositis, miopatía alcohólica, delirium tremens, infarto pulmonar,
edema pulmonar, etc.
5. En L.C.R. se encuentra elevada la C.P.K. durante el infarto cerebral, esclerosis y
tumores cerebrales.
La CPK-NAC, después de su activación mediante la N-acetilcisteína (NAC), se
basa en el siguiente:
III. FUNDAMENTO.
La CPK es una enzima que cataliza la transferencia reversible de un grupo
fosfato de la fosfocreatina al ADP en presencia de la enzima CPK, a un pH de 7.2 y
de Mg++ o Mn++ como activador para formar Creatina más ATP. El ATP formado
fosforila a la glucosa en presencia de la enzima Hexocinasa (HK) para formar ADP
más Glucosa-6-fosfato. Posteriormente la glucosa–6–fosfato es oxidada y el NAD es
reducido en presencia de la enzima Glucosa-6-fosfato Deshidrogenasa (G-6-P-DH)
para formar 6-Fosfogluconato más NADPH + H+. La velocidad de formación del
NADH + H+ es directamente proporcional a la actividad de la CPK en la muestra.
CPK
Fosfocreatina + ADP Creatina + ATP
Mg++ pH = 7.2
HEXOCINASA
ATP + D-glucosa ADP + D-glucosa-6-Fosfato
G–6–P-DH
D–glucosa–6–fosfato + NADP 6 - Fosfogluconato + NADPH + H+
Se mide la velocidad de formación o el aumento de NADPH + H+ a 340 nm.
40
MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Parrilla eléctrica
41
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. Imidazol pH 7.0 100 mmol/L, Glucosa 20 mmol/L, Acetato de
magnesio 10 mmol/L y EDTA 2 mmol/L.
• R 2. Substrato. ADP 2 mmol/L, AMP 5 mmol/L, di-Adenosina-5-pentafosfato 10
mmol/L, NADP+ 2 mmol/L, Hexoquinasa (HK) 2500 U/L,Glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa (G6F-DH) 1500 U/L,N-acetilcisteína 20 mmol/L y fosfato de
creatina 30 mmol/L.
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT):
Disolver un comprimido de R2 en un vial de R 1, o un comprimido de R 2 en 15 mL
de R 2. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 5 días a 2 a 8ºC o 24 horas a temperatura ambiente (15-25oC).
V. PROCEDIMIENTO.

1. Ajustar el espectrofotómetro a cero de absorbancia, utilizando agua destilada
como blanco a 340 nm.
2. Pipetear en una cubeta:
CUBETA MUESTRA
R T (mL) 1.0
Muestra (µL) 40
3. Mezclar e incubar 2 minutos.

4. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer
la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. La temperatura debe ser constante
5. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancias por minuto (ΔA/min).
42
CALCULOS:
25o-30oC ΔA/min x 4127 = U/L CK
37oC ΔA/min x 8095 = U/L CK
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1

µmol de sustrato por minuto en condiciones estándar.
UNIDAD INTERNACIONAL (U.I.): Es la cantidad de enzima necesaria para

transformar un micromol (1 µ mol = 1 x 10-6 moles) de sustrato por minuto, a 25ºC
bajo condiciones óptimas de actividad (P, T y pH). La actividad de las enzimas se
expresa en Unidades por Litro (U/L).
Factores de conversión de temperaturas

Los resultados pueden transformarse a otras temperaturas multiplicando por:
Temperatura Factor para convertir a:

de medición 25ºC 30ºC 37ºC
25ºC 1.00 1.56 2.44
30ºC 0.64 1.00 1.56
37ºC 0.41 0.63 1.00
25ºC 30ºC 37ºC
Hombres, hasta: 80 U/L 130 U/L 195 U/L
Mujeres, hasta: 70 U/L 110 U/L 170 U/L
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
43
PRÁCTICA No. 9
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA (TGO)
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (ASAT)
MÉTODO UV CINÉTICO CONTÍNUO
I. COMPETENCIA.
Determina la actividad enzimática de la Aspartato Amino Transferasa

en una muestra de suero por medio de un método manual, adaptándose a las
características del laboratorio y el paciente.
II. INTRODUCCION.
Se denomina transaminación al proceso de desaminación y aminación
combinada en el cual el radical amino de un aminoácido es transferido de forma
reversible a un alfa-cetoácido, siendo a su vez el radical alfa-cetoácido transferido al
aminoácido original. Las enzimas que catalizan esta reacción reciben el nombre de
TRANSAMINASAS. Este tipo de reacción tiene gran interés en el metabolismo
celular, como se sabe desde hace ya muchos años, pero adquirió gran importancia
en medicina clínica a raíz de los trabajos publicados en 1954 por LaDue, Wroblewski
y Karmen, que se referían al hecho de que la Transaminasa Glutámico Oxalacética
(TGO) o Aspartato Amino Transferasa (ASAT), (EC 2.6.1.1) está aumentada después
de los infartos de miocardio.
La velocidad de la reacción es más rápida de derecha a izquierda que en

sentido contrario, pero no hay ningún procedimiento sencillo para cuantificar ni el
ácido aspártico ni el ácido alfa-cetoglutárico. Por tanto, los métodos propuestos para
la determinación de la GOT (ASAT) utilizan como substratos el ácido aspártico y el
ácido alfa-cetoglutárico.
44
La ASAT es una enzima que se encuentra en los tejidos con actividad
metabólica elevada. Se presenta en concentración decreciente en el corazón,
hígado, músculo esquelético, riñón, cerebro, páncreas, bazo y pulmones. La enzima
es liberada hacia la circulación a consecuencia de daño o muerte de las células.
Cualquier enfermedad que origine un cambio de estos tejidos altamente.
III. FUNDAMENTOS:
A. Método visible de punto final de Reitman Frankel Modificado. (Laboratorios
HYCEL):
La T. G. O. (A. S. A. T.) es una enzima que cataliza la transferencia reversible
del grupo amino del ácido Aspártico al lugar del grupo ceto del ácido alfa ceto
glutárico en presencia de vitamina B6 y a un pH de 7.4, para formar como productos,
ácido oxalacético y ácido glutámico. El ácido oxalacético formado, reacciona con la
2,4-dinitro fenil hidracina, para formar la oxalacético hidrazona que en presencia de
hidróxido de sodio produce un cromógeno de color café intenso, cuya intensidad es
directamente proporcional a la cantidad de enzima presente en la muestra.
COOH COOH
COOH CH2 COOH CH2

T. G. O.
CH – NH2 + CH2 C=O + CH2
Vit. B6
CH2 C=O pH = 7.4 CH2 CH – NH2
COOH COOH COOH COOH
Ácido Ácido Alfa-ceto Ácido Oxalacético Ácido Glutámico

Aspártico Glutárico +
2,4 – Dinitrofenil Hidrazina
(ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES)
NaOH (DETIENE LA REACCIÓN)
Oxalacético Hidrazona
CROMÓGENO DE COLOR CAFÉ (505 nm)
45
B. Método UV Cinético Continuo de Henry y col.
La Aspartato Amino Transferasa (ASAT) presente en la muestra cataliza la
transferencia reversible del grupo amino del L-aspartato al 2-Oxoglutarato en
presencia de la vitamina B6 y a un pH de 7.4 para formar Oxalacetato y L-Glutamato.
El Oxalacetato formado, en presencia de la coenzima NADH + H+ y de la enzima

Malato Deshidrogenasa (MDH) es reducido a L-Malato y NAD+.
La reacción se evalúa midiendo la oxidación de la coenzima NADH + H+ /min a 340

nm. durante 5 minutos, se calcula la As/min. y se multiplica por el factor que
aparece en el inserto o se calcula la actividad por volumen a 25 oC en la tabla anexa
(inserto).
TGO
L-Aspartato + 2 – Oxoglutarato Oxalacetato + L-Glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH + H+ Malato + NAD+
La adición de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) es necesaria para lograr una

rápida y completa reducción del piruvato endógeno para que este no interfiera en su
determinación.
C. Método Enzimático UV Cinético Continuo (Laboratorios SPINREACT).

La Aspartato Amino Transferasa (ASAT) presente en la muestra cataliza la transferencia
del grupo amino del L-aspartato al α-cetoglutarato en presencia de la vitamina B6 y a
un pH de 7.4 para formar Oxalacetato y Glutamato. El Oxalacetato formado, en
presencia de la coenzima NADH + H+ y de la enzima Malato Deshidrogenasa (MDH)
es reducido a L-Malato y NAD+.
La LDH se incluye en el reactivo para convertir el piruvato endógeno de la muestra a
Lactato durante la fase anterior a la medición.
TGO
L-Aspartato + 2-Oxoglutarato Oxalacetato + L-Glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH + H+ L-Malato + NAD+
46
nm. durante 5 minutos, se calcula la A/min. y se multiplica por el factor que aparece
en el inserto (1750) o se calcula la actividad por volumen a 25 oC en la tabla anexa
(inserto).

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
47
• Suero, plasma
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. TRIS pH 7.8 80 mmol/L, Lactato deshidrogenasa (LDH) 800 U/L,
Malato deshidrogenasa (MDH) 600 U/L y L-Aspartato 200 mmol/L.
• Reactivo No. 2. Substrato. NADH 0.10 mmol/L y α-Cetoglutarato 12 mmol/L
PREPARACIÓN
Reactivo de Trabajo (RT):
Mezclar: 1 volumen de (R2) Sustrato + 4 volúmenes de (R1) Tampón.
Estabilidad: 21 días a 2-8oC o 72 horas a temperatura ambiente.
V. PROCEDIMIENTO.
Método UV cinético contínuo de Laboratorios SPINREACT
RT (mL) 1.0
Muestra (μL) 100
3. Mezclar e incubar 1 minuto.

la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
5. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
CALCULOS:
ΔA/minuto x 1750 = U/L de ASAT

48
25ºC 1.00 1.37 2.08
30ºC 0.73 1.00 1.54
37ºC 0.48 0.65 1.00
VALORES DE REFERENCIA
25ºC 30ºC 37ºC
Hombres Hasta: 19 U/L 26 U/L 38 U/L
Mujeres Hasta: 16 U/L 22 U/L 31 U/L
propios valores de referencia
CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es la importancia clínica de la TGO en el diagnóstico clínico?
2. Menciona 2 alteraciones que produce un aumento de la enzima TGO en

sangre.
3. Indica otros métodos de laboratorio para la cuantificación de esta enzima.
4. Menciona las pruebas que se realizan en un perfil cardiaco.
5. Menciona las pruebas que se realizan en un infarto al miocardio.
49
PRÁCTICA No. 10
DETERMINACIÓN DE DESHIDROGENSASA LÁCTICA (LDH)
(OXIDORREDUCTASA DE LACTATO-NAD+)
I COMPETENCIA.
Determina la actividad enzimática de la Deshidrogenasa Láctica en una

muestra de suero por medio de un método manual, adaptándose a las
II. INTRODUCCIÓN.
La deshidrogenasa láctica cataliza la oxidación reversible de ácido láctico a
ácido pirúvico. Es una enzima que se produce en miocardio, riñón, hígado y músculo.
Esta enzima tiene cinco isoenzimas y su determinación en el laboratorio es

importante en casos de infarto al miocardio.
La enzima deshidrogenasa láctica se encuentra acumulada en corazón, riñón,

hígado, músculo y otros tejidos corporales, por consiguiente, al dañarse estos tejidos
se elevan los niveles séricos de la LDH. Los niveles altos de Lactato Deshidrogenasa
son clínicamente importantes y pueden encontrarse en estados patológicos que
causan daño celular. Los infartos del miocardio, enfermedades hepáticas y renales,
anemias megaloblásticas, distrofia muscular progresiva y algunas neoplasias
producen altos valores de LDH en el suero.
Wacker y col. Publicaron un método para medir la LDH utilizando Lactato

como substrato y Dinucleótido de Nicotinamida Adenina (NAD) como coenzima
indicadora. Wroblewski y LaDue describieron el uso de la reacción inversa, de
Piruvato a Lactato (LDH-P). Amador y col. Afirman que el método de Lactato a
50
Piruvato (LDH-L) es el método de elección debido a que amplía la linealidad de la
reacción y mejora la estabilidad de los reactivos utilizados. Gay y col. Estudiaron
posteriormente la reacción LDL-L y delinearon las condiciones óptimas de la misma.
Este procedimiento utiliza el método de LDH-L de Wacker de acuerdo con las
recomendaciones de la Federación Internacional de Química Clínica (IFCC).
III. FUNDAMENTO.
La enzima Deshidrogenasa Láctica presente en el suero cataliza la reducción
del Piruvato en presencia de NADH + H+, para formar Lactato y NAD+. La velocidad
de desaparición (Oxidación) de la coenzima NADH + H+ es directamente proporcional
a la actividad catalítica de la LDH en la muestra.
LDH
PIRUVATO + NADH + H+ L - LACTATO + NAD+

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
51
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Suero o plasma
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. Imidazol 65 mmol/L y Piruvato 0.6 mmol/L
• R 2. Substrato. NADH 0.18 mmol/L
PREPARACIÓN DEL REACTIVO.

Reactivo de trabajo (RT):
Mezclar 4 volúmenes de (R1) Tampón + 1 volumen de (R2) Sustrato.
Estabilidad: 15 días a 2-8oC o 5 días a 15-25oC.
V. PROCEDIMIENTO
A. TECNICA: Laboratorios SPINREACT
TUBOS 25 - 30ºC 37ºC
RT (mL) 3.0 3.0
Muestra (µL) 100 50

52
CALCULOS:
25 - 30ºC ΔA/minuto x 4925 = U/L de LDH
37ºC ΔA/minuto x 9690 = U/L de LDH

25ºC 1.00 1.33 1.82
30ºC 0.75 1.00 1.39
37ºC 0.52 0.70 1.00
25ºC 30ºC 37ºC
120 a 240 U/L 160 a 320 U/L 230 a 460 U/L
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es la importancia de la enzima LDH en el diagnóstico clínico?
2. Menciona otros métodos de laboratorio para el diagnóstico de esta enzima.
3. Esquematiza el comportamiento de esta enzima en un infarto al miocardio.
4. Indica las isoenzimas de la LDH.
5. Menciona 2 precauciones que debe tener la muestra para determinar la LDH.
53
PRÁCTICA No. 11
DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA (TGP)
ALANINA AMINO TRANSFERASA (ALAT)
I. COMPETENCIA.
Determina la actividad enzimática de la Alanina Amino Transferasa en

una muestra de suero por medio de un método manual, adaptándose a las
II. INTRODUCCIÓN:
Como se deduce de trabajos efectuados mediante electroforesis sobre papel,
se encuentra la enzima en la fracción globulínica . Algunos autores no han sido
capaces de detectar más de un componente, en cambio, en otro estudio, se encontró
actividad en las zonas correspondientes a la albúmina y a las globulinas a-1, a-2 y β.
La distribución variaba, según ese trabajo, en distintas enfermedades.
Explicación de la prueba:
Esta prueba de mediciones de actividades enzimáticas se hace principalmente
para diagnosticar alguna enfermedad hepática. Se presentan actividades elevadas
de esta enzima en el hígado, y actividades relativamente bajas en corazón, músculo
y riñón. Estas enzimas se utilizan también en la monitorización de la evolución del
tratamiento de hepatitis, cirrosis posnecrótica activa, o de los efectos del tratamiento
con fármacos tóxicos para el hígado. Esta prueba se usa también para diferenciar
entre ictericia hemolítica y la ictericia debida a alguna enfermedad hepática. En
comparación con la valoración de la Aspartato AminoTransferasa (ASAT), la
54
medición de ALAT es más especifica para algún funcionamiento irregular del hígado
además, ésta enzima aumenta en el infarto de miocardio.
Utilidad Clínica:
La determinación de la Transaminasa Glutámico Oxalacética (TGO), junto con
la de la Transaminasa Glutámico Pirúvica (TGP), es de gran utilidad en el estudio y
diferenciación de los padecimientos cardíacos y hepáticos. La TGP es especialmente
útil para el diagnóstico y diferenciación de las hepatitis agudas y crónicas, cirrosis
hepática, infarto agudo de miocardio, daño celular y miopatías, entre otras.
III. FUNDAMENTOS:
A. Método visible de punto final de Reitman Frankel Modificado. (Laboratorios
HYCEL).
La TGP (ALAT) es una enzima que posee la propiedad de transferir el grupo
amino de la alanina al lugar del grupo ceto del ácido alfa cetoglutárico en presencia
de la vitamina B6 y a un pH de 7.4 para formar ácido pirúvico y ácido glutámico. El
ácido pirúvico formado reacciona con la 2,4-dinitrofenilhidrazina para formar la
pirúvico hidrazona, que en presencia de NaOH produce una coloración café, la
intensidad del color café es directamente proporcional a la cantidad de enzima
presente en la muestra.
COOH COOH
‫ו‬ ‫ו‬
CH3 CH2 CH3 CH2
‫ו‬ ‫ו‬ T. G. P. ‫ו‬ ‫ו‬
CH-NH2 + CH2 C=O + CH2
‫ו‬ ‫ו‬ Vit. B6 ‫ו‬ ‫ו‬
COOH C=O pH = 7.4 COOH CH – NH2
‫ו‬ ‫ו‬
COOH COOH
Alanina Ácido Alfa Ácido Pirúvico Ácido Glutámico
ceto - glutárico +
2,4 – Dinitrofeni Hidrazina
(ACEPTOR FINAL DE ELECTRONES)
NaOH (DETIENE LA REACCIÓN)
Pirúvico Hidrazona
CROMÓGENO DE COLOR CAFÉ (505 nm)
55
B. Método UV Cinético contínuo de Henry y Col.
La Alanina Amino Transferasa (ALAT) presente en la muestra cataliza la
transferencia reversible del grupo amino de la L-Alanina al 2-Oxoglutarato en
presencia de vitamina B6 y a un pH de 7.4 para formar Piruvato y L-glutamato.
El Piruvato formado en presencia del NADH + H+ y de la enzima Deshidrogenasa
Láctica (LDH) es reducido a L- Lactato y NAD+.
nm. durante 5 minutos, se calcula la As/min. y se multiplica por el factor que
aparece en el inserto o se calcula la actividad por volumen a 25 oC en la tabla anexa
(inserto).
TGP
L – Alanina + 2 – Oxoglutarato Piruvato + L – Glutamato
LDH
Piruvato + NADH + H+ L - Lactato + NAD+
La adición de la enzima Lactato Deshidrogenasa (LDH) es necesaria para lograr una

rápida y completa reducción del piruvato endógeno para que este no interfiera en su
determinación.
C. Método Enzimático UV Cinético Continuo de Laboratorios SPINREACT).

La Alanina Amino Transferasa (ALAT) presente en la muestra cataliza la transferencia del
grupo amino de la L-Alanina al α-Cetoglutarato en presencia de vitamina B6 y a un
pH de 7.4 para formar Piruvato y Glutamato. El Piruvato formado, en presencia del
NADH + H+ y de la enzima Deshidrogenasa Láctica (LDH) es reducido a L-Lactato y
NAD+.
La actividad de la ALAT se evalúa midiendo la oxidación de la coenzima NADH + H+
/min a 340 nm. durante 5 minutos, se calcula la As/min. y se multiplica por el factor
que aparece en el inserto (1750) o se calcula la actividad por volumen a 25 oC en la
tabla anexa (inserto).
TGP
L-Alanina + 2-Oxoglutarato Piruvato + L-Glutamato
LDH
Piruvato + NADH + H+ L-Lactato + NAD+
56
MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Suero, plasma
57
PREPARACIÓN
Reactivo de Trabajo (RT):
Mezclar: 1 volumen de (R2) Sustrato + 4 volúmenes de (R1) Tampón.
Estabilidad: 21 días a 2-8oC o 72 horas a temperatura ambiente.
V. PROCEDIMIENTO.
Método UV cinético contínuo de Laboratorios SPINREACT.
RT (mL) 1.0
Muestra (μL) 100

CALCULOS:
Δ A/minuto x 1750 = U/L de ALAT

25ºC 1.00 1.32 1.82
30ºC 0.76 1.00 1.39
37ºC 0.55 0.72 1.00
58
25ºC 30ºC 37ºC
Hombres Hasta: 22 U/L 29 U/L 40 U/L
Mujeres Hasta: 18 U/L 22 U/L 32 U/L
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿Cual es la importancia de esta enzima en el diagnóstico clínico?
2. Menciona otros métodos de laboratorio para la determinación de la TGP
3. Anota 2 alteraciones que ocasionen un aumento de esta enzima.
4. Anota 2 alteraciones que ocasionen una disminución de esta enzima.
5. Menciona las pruebas que se realizan en un perfil hepático.
6. Menciona la estabilidad de la muestra para realizar la prueba de ALAT.
59
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
39.

40.
41.
42.
43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.

53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.

64.
65.
66.
67.
68.
69.
70.
71.
72.
73.
74.
75.
76.
77.
78.
79.
80.
81.
82.
PRÁCTICA No. 12
DETERMINACIÓN DE GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA (GGT)
MÉTODO VISIBLE CINÉTICO
I. COMPETENCIA.
Determina la actividad enzimática de la Gamma Glutamil Transferasa en una

muestra de suero por medio de un método manual, adaptándose a las
II. INTRODUCCIÓN.
La gamma-glutamil transferasa (GGT) pertenece a un largo grupo de enzimas
conocidas como peptidasas. Aunque los tejidos renales tienen los mayores niveles
de GGT, la mayor fuente de esta enzima en suero es de origen hepático. Los niveles
elevados de GGT, están asociados con desórdenes hepatobiliares y pancreáticos;
alcohólicos y bebedores fuertes, desórdenes del miocardio y en diabetes.
En una actividad diferente de la Fosfatasa Alcalina, la actividad de la GGT en
suero permanece normal en enfermedades que afectan a los huesos y también
durante el crecimiento normal de los mismos. Por lo tanto, un incremento de la
actividad de la GGT puede ser considerado como un indicador más específico y
sensible de una enfermedad hepática, en comparación con la actividad de la
Fosfatasa Alcalina.
Las características que se distinguen de la GGT de otras enzimas que se
emplean para evaluar la función del hígado en su respuesta al alcohol,
aparentemente el alcohol estimula elevaciones de GGT dentro de un plazo de 18
horas aun con ingestión relativamente reducida y sin otra evidencia como incremento
en las concentraciones de otras enzimas.
60
III. FUNDAMENTO.
La gamma-glutamiltransferasa (GGT) presente en el suero cataliza la
transferencia del grupo gamma-glutamilo de la L-gamma-Glutamil-3-carboxi-4-
nitroanilida a la Glicilglicina, para formar L-gamma-Glutamilglicilglicina y 5-amino-2-
nitrobenzoato. El rango de liberación de 5-amino-2-nitrobenzoato es directamente
proporcional a la actividad de la GGT presente en la muestra.
GGT
L-gamma-Glutamil-3-carboxi-4-nitroanilina + Glicilglicina L-gamma-
Glutamilglicilglicina + 5-amino-2-nitrobenzoato
Se mide el incremento de absorbancia por minuto a 405 nm.

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
61
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Suero, plasma con EDTA libre de hemólisis
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. TRIS pH 8.25 100 mmol/L.
• R 2. Substrato. Glicilglicina 100 mmol/L y L-ϫ-glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida
3mmol/L.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO

Disolver un comprimido de R 2 Sustrato en un vial de R 1 Tampón.
Disolver un comprimido de R 2 Sustrato en 15 mL. de R 1 Tampón.
Disolver el contenido de un vial de R 2 Sustrato en 50 mL. de R 1 Tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
V. PROCEDIMIENTO.
Método visible cinético de Laboratorios SPINREACT.
RT (mL) 1.0
Muestra (µL) 100
3. Mezclar y esperar 1 minuto.

4. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y
leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
62
CALCULOS:
Δ A/minuto x 1190 = U/L de GGT
Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que

convierte 1 µmol de sustrato por minuto en condiciones estándar.
25ºC 1.00 1.37 1.79
30ºC 0.73 1.00 1.30
37ºC 0.56 0.77 1.00
25oC 30oC 37oC
Mujeres: 4-18 U/L 5-25 U/L 7-32 U/L
Hombres: 6-28 U/L 8-38 U/L 11-50 U/L
VI. CUESTIONARIO.
1. Menciona en orden decreciente los órganos donde presenta mayor actividad la
enzima GGT.
2. Menciona la importancia clínica que tiene esta enzima.
3. Anota 4 alteraciones en la cuales se encuentre aumentada la GGT.
4. Explica el concepto de cirrosis hepática.
63
PRÁCTICA No. 13
DETERMINACIÓN DE LA FOSFATASA ALCALINA (FAL)
ORTOFOSFÓRICO MONOESTER FOSFORILASA
MÉTODO VISIBLE CINÉTICO CONTÍNUO
I. COMPETENCIA
Determina la actividad de la Fosfatasa alcalina en una muestra de

II. INTRODUCCIÓN
Las fosfatasas inespecíficas que efectúan la hidrólisis de los ésteres del ácido
ortofosfórico a un pH alcalino reciben el nombre de fosfatasas alcalinas
(fosfohidrolasas de monoésteres ortofofóricos E. C. 3.1.3.1). Este tipo de enzimas
actúa sobre los ésteres alifáticos, aromáticos y heterocíclicos del ácido fosfórico.
El pH óptimo para la medida de las fosfatasas alcalinas varía según el tipo de
sustrato utilizado, según la concentración del sustrato, la temperatura de incubación
y el tejido del que procede la enzima. Por tanto, no debe sorprender, teniendo en
cuenta todos estos datos, que los pH óptimos publicados en la literatura oscilen
desde 8.6 a 10.3.
Origines tisulares.
La fosfatasa alcalina es una enzima que se encuentra en los osteoblastos y
hepatocitos, así como en intestino, riñón y placenta. Las fosfatasas alcalinas de estos
distintos tejidos se han podido separar por electroforesis en tres tipos, y por sus
características se agrupan en función de los órganos de procedencia.
64
Significado clínico:
En general, se mide la fosfatasa alcalina como elemento del diagnóstico
diferencial de las enfermedades del hígado, esta técnica ha formado parte del
conjunto habitual de pruebas de función hepática durante más de 30 años. Su otra
aplicación clínica es en el estudio de las enfermedades óseas y del hipertiroidismo.
Las fosfatasas catalizan la hidrólisis de los ésteres del ácido fosfórico. En

función de los valores pH a que logran su actividad óptima, se distinguen dos tipos
de fosfatasa: ácida y alcalina.
Para la determinación de las fosfatasas según Bessey, Lowry y Brock, se

utiliza como sustrato el p-nitrofenilfosfato que por acción de la enzima se escinde en
p-nitrofenol y ácido fosfórico. Añadiendo hidróxido de sodio se interrumpe la reacción
y el p-nitrofenol liberado es transformado en el anión de color amarillo, que puede
determinarse espectrofotométricamente. La cantidad de p-nitrofenol liberado en la
unidad de tiempo es directamente proporcional a la actividad de la fosfatasa.
III. FUNDAMENTO:
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato (pNPP) en
presencia de magnesio y a un pH de 10.4 para formar p-nitrofenol y fosfato de sodio
dibásico. El incremento de absorbancia es proporcional a la actividad de la fosfatasa
alcalina.
FAL
p- Nitrofenilfosfato + H2O p-Nitrofenol + Fosfato de sodio

MATERIAL DE VIDRIO
65
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Suero, plasma con EDTA libre de hemólisis
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. Dietanolamina (DEA) pH 10.4 1mmol/L y cloruro de magnesio 0.5
mmol/L
• R 2. Substrato. p-Nitrofenilfosfato (pNPP) 10 mmol/L
PREPARACION
Reactivo de trabajo (RT).
Disolver un comprimido de R 2 Sustrato en un vial de R 1 Tampón.
Disolver un comprimido de R 2 Sustrato en 1.5 mL de R 1 Tampón
Disolver un comprimido de R 2 Sustrato en 50 mL de R 1 Tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
66
Estabilidad: 21 días a 2 - 8ºC o 5 días a temperatura ambiente.
V. PROCEDIMIENTO.
2. Enseguida agregar:
RT (mL) 1.2
Muestra (μL) 20

CALCULOS:
ΔA/min x 3300 = U/L de FAL

25ºC 1.00 1.22 1.64
30ºC 0.82 1.00 1.33
37ºC 0.61 0.75 1.00
25ºC 30ºC 37ºC
Niños (1 a 14 años) < 400 U/L < 480 U/L < 645 U/L
Adultos 60 - 170 U/L 73 - 207 U/L 98 - 279 U/L
67
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿Para qué se determina la fosfatasa alcalina en suero?
2. ¿Qué factores producen o alteran la actividad enzimática de esta enzima?
3. Anota la reacción enzimática en la que actúa esta enzima?
4. Menciona otros métodos para la determinación de la Fosfatasa Alcalina.
5. Indica 3 alteraciones donde se encuentre aumentada la Fosfatasa Alcalina.
68
PRÁCTICA No. 14
DETERMINACION DE AMILASA
(ALFA-1,4-GLUCAN-GLUCANO HIDROLASA)
MÉTODO CINÉTICO – CNPG3
I. COMPETENCIA
Determina la actividad de la enzima alfa-amilasa en una muestra de

II. INTRODUCCIÓN
La alfa-amilasa cataliza la hidrólisis de oligosacáridos, polisacáridos,
almidones y glucógeno. La acción de la alfa amilasa está restringida a hidrólisis de
enlaces alfa 1, 4 glucosídicos. Esta enzima es activada por el calcio, por lo tanto, los
compuestos capaces de quelar el calcio son potentes inhibidores de la misma. En
algunas alteraciones tales como pancreatitis u obstrucción del ducto pancreático
debido a cálculos o carcinoma el flujo de esta enzima al duodeno es impedido. Esto
da como resultado que el jugo pancreático en el duodeno baje y al mismo tiempo se
incremente la amilasa en el torrente sanguíneo bajo tales condiciones.
La alfa amilasa es una enzima del aparato digestivo, normalmente secretada
en el tubo digestivo a partir de las glándulas parótidas y el páncreas. En
enfermedades que afectan estas glándulas y particularmente cuando el conducto
pancreático está obstruido, disminuye la cantidad de la enzima en el suero.
Lo más frecuentemente, la alfa amilasa se cuantifica en el diagnóstico de la
pancreatitis aguda, cuando los niveles séricos pueden ser extremadamente
elevados. En la pancreatitis aguda, los niveles de alfa amilasa comienzan aumentar
69
entre 5 y 8 horas después de la aparición de los síntomas, alcanzan un máximo entre
12 y 72 horas y vuelven a los niveles normales al cabo del tercer día.
III. FUNDAMENTO
La alfa amilasa hidroliza el substrato 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNPG3)
dando lugar a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP), 2-cloro-4-nitrofenol-ά-D-maltosido (CNPG2),
maltotriosa (G3) y glucosa. La cantidad de CNP formado es directamente
proporcional a la actividad de la alfa amilasa en la muestra.
α - AMILASA
2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido + H2O CNP + CNPG2 + G3 + G
Se mide la velocidad de formación de CNP a 405 nm
Donde:
CNPG3 = 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriosido
CNP = 2-cloro-4-nitrofenol
CNPG2 = 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltosido
G3 = Maltotriosa
G = Glucosa

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
70
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Suero, plasma heparinizado u orina
REACTIVOS.
• R. MES pH 6.0 100 mmol/L, CNPG3 2.25 mmol/L, Cloruro sódico 350 mmol/L,
Acetato cálcico 6 mmol/L, Tiocianato potásico 900 mmol/L y Acida sódica 0.95 gr/L
PREPARACIÓN
Reactivo listo para su uso.
V. PROCEDIMIENTO.
TUBOS MUESTRA
R (mL) 1.0
Muestra (μL) 20
71
3. Mezclar e incubar 30 segundos.
4. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y
leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
CALCULOS:
Suero o plasma ΔA/min x 3954 = U/L AMS
Orina ΔA/min x 7908 = U/L AMS

Factor de conversión: U/L x 0.1667 = μkat/L
Suero o plasma Hasta 90 U/L de α-amilasa
Orina Hasta 450 U/L de α-amilasa
VI. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es la importancia en el diagnóstico clínico de esta enzima?.
2. Menciona 2 isoenzimas de la amilasa.
3. Anota 2 alteraciones que producen un aumento de esta enzima.
4. Anota 2 alteraciones que producen una disminución de esta enzima.
5. Menciona otros métodos de laboratorio para su determinación.
72
PRÁCTICA No. 15
DETERMINACIÓN DE LIPASA (TRIACIL GLICEROL ACIL HIDROLASA)
MÉTODO VISIBLE CINÉTICO
I. COMPETENCIA
Determina la actividad de la lipasa en una muestra de suero por medio de un

método manual, adaptándose a las características del laboratorio y el paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
La lipasa es una enzima hidrolítica que es segregada por el páncreas en el
duodeno, donde, ayudada por las sales biliares y los iones de calcio, descomponen
los ácidos grasos de los triglicéridos, la lipasa se encuentra dentro de las células
secretadas y aparece en el torrente circulatorio después de una lesión del páncreas.
Las esterasas y otras enzimas se inhiben en este método por la presencia de las
sales biliares en el sustrato y por el uso de un pH mayor. La lipasa constituye el
origen principal y primario de la lipasa sérica. La lipasa pancreática humana es una
glicoproteína, con un peso molecular de 45000 daltons. Al contrario que la amilasa,
que se encuentra tanto en el páncreas como en las glándulas salivales. Las lipasas
se definen como enzimas que hidrolizan preferentemente los ésteres de glicerol de
los ácidos grasos de cadena larga en las uniones de carbono 1 y 3, produciendo 2
mol de ácidos grasos y 1 mol de beta-mono-glicérido por mol de triglicérido.
La prueba se utiliza para diagnosticar pancreatitis y diferenciar pancreatitis de
alguna urgencia abdominal quirúrgica aguda. Cuando se bloquean las secreciones
del páncreas, aumentarán las concentraciones de lipasa en suero sanguíneo.
73
III. FUNDAMENTO:
La lipasa pancreática en presencia de colipasa, iones calcio y desoxicolato,
hidroliza el subtrato 1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6-metilresorufina)-ester,
para formar 1-2-O-dilauril-rac-glicerol + Ácido glutárico-6-metilresorufina-ester (no
estable) en un medio alcalino, dando lugar a Ácido glutárico + Metilresorufina. La
velocidad de formación de la metilresorufina es directamente proporcional a la
actividad catalítica de lipasa en la muestra.
LIPASA
1-2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6´-metilresorufina)-ester
1-2-O-dilauril-rac-glicerol + Ácido glutárico -6´-etilresorufina-ester (no estable)

-OH
Ácido glutárico + Metilresorufina
Se mide la velocidad de formación de la metilresorufina a 580 nm

MATERIAL DE VIDRIO
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
74
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Pipetas semiautomáticas de 1000, 200, y 10 μL con sus puntillas
correspondientes.
• Suero, plasma con citrato de sodio, EDTA o heparina
REACTIVOS.
• R 1. Tampón. TRIS pH 8.3 40 mmol/L, Colipasa ≥ 1 mg/L, Desoxicolato 1.8
mmol/L y Taurodesoxicolato 7.2 mmol/L
• R 2. Substrato. (micro-emulsión). Tartrato pH 4.0 15 mmol/L Sustrato de Lipasa ≥
0.7 mmol/L y Cloruro cálcico (CaCl2) 0.1 mmol/L
• LIPASE CAL. Patrón. Suero humano liofilizado 52 U/L
PREPARACIÓN
R1 y R2 Listos para su uso. Estabilidad una vez abiertos 90 días a 2-8ºC. R2 mezclar
suavemente antes de usar.
LIPASE CAL: Reconstituir con 1 mL de agua destilada. Tapar y mezclar suavemente
hasta disolver su contenido. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC,
congelado en alícuotas.
75
V. PROCEDIMIENTO.
TÉCNICA: Laboratorios SPINREACT.
TUBOS BLANCO MUESTRA PATRÓN

R1(mL) 1.0 1.0 1.0
R2 (μL) 200 200 200
Agua destilada (μL) 10 _____ _____
Muestra (μL) _____ 10 _____
Patrón (μL) _____ _____ 10
3. Mezclar, incubar a 37ºC 1 minuto.

CALCULOS:
(ΔA/min) Muestra - (ΔA/min) Blanco = (ΔA/min) Muestra
(ΔA/min) Patrón – (ΔA/min) Blanco = (ΔA/min) Patrón
(ΔA/min) Muestra x Actividad Calibrador = U/L de Lipasa en la muestra
(ΔA/min) Patrón

μmol de sustrato por minuto, en condiciones estándar.
≤ 38 U/L (U/L de metilresorufina a 37oC)
76
VI. CUESTIONARIO:
1. ¿En qué sitios del organismo humano se encuentra la lipasa?
2. Menciona los nombres que se le da al aumento y disminución de esta enzima

en sangre.
3. Indica dos alteraciones que producen una elevación de esta enzima en el

organismo humano.
4. Menciona otros métodos utilizados para la determinación de esta enzima.
5. Menciona la importancia clínica que tiene esta enzima.
77
PRÁCTICA No. 16
DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ACIDA (ACP)
ORTOFOSFÓRICO MONOESTER FOSFORILASA
MÉTODO VISIBLE CINÉTICO CONTINUO
I. COMPETENCIA:
Determina la actividad de la Fosfatasa ácida en una muestra de suero

el paciente.
II. INTRODUCCIÓN:
Las fosfatasas ácidas, una variante de las fosfomonoesterasas inespecíficas
(fosfohidrolasa del monoéster ortofosfórico E. C. 3.1.3.2), hidroliza los ésteres del
ácido ortofosfórico a un pH ácido.
Las fosfatasas ácidas tienen una buena relación entre actividad y pH bastante
plana en la zona entre un pH de 4 un pH de 7, siendo medidas la mayoría de las
reacciones en que intervienen a un pH comprendido entre 4.8-6.0. el pH óptimo varía
según la procedencia de la enzima y el substrato empleado.
Se encuentra actividad fosfatasa ácida en el suero, en los eritrocitos, en las

plaquetas, y en los leucocitos, en la próstata, en el hígado, en el bazo, en el hueso,
en el riñón y otros tejidos. La mayoría de estos tejidos contienen dos o más
isoenzimas. Se ha publicado en la literatura, la existencia, como mínimo de seis
isoenzimas, genéticamente determinadas, en los eritrocitos. Los leucocitos dan,
normalmente, cuatro bandas con actividad enzimática, pero en algunas
enfermedades se detectan incluso siete bandas de esta procedencia.
78
SIGNIFICADO CLÍNICO.
El nivel sérico de la variedad de fosfatasa ácida sensible al tartrato, que
proviene de la próstata, suele ser alto en caso de invasión del hueso por un cáncer
de la próstata. Los aumentos pueden ser considerables, pero no siempre existen,
pues un tumor muy aplásico con células de tipo primitivo quizá no pueda producir
enzima. En presencia de un cáncer de próstata demostrado, un aumento de la cifra
sérica de fosfatasa ácida de origen prostático, puede interpretarse como metástasis
ósea, si desciende el nivel enzimático, puede pensarse que la terapéutica hormonal
está surtiendo efecto; un aumento ulterior suele indicar nueva actividad de la
metástasis.
III. FUNDAMENTO
La Fosfatasa Ácida cataliza la hidrólisis del α-Naftilfosfato en presencia de la
propia enzima y a un pH de 5.0 para formar alfa naftol y fósforo inorgánico.
Posteriormente el alfa naftol reacciona con un cromógeno diazotado de 4-cloro-2-
metilfenil-diazonio (Fast Red TR) para formar un cromógeno diazo (amarillo). La
intensidad del color es directamente proporcional a la actividad de la ACP presente
en la muestra.
ACP
α – naftilfosfato + H2O α – naftol + Fosforo inorgánico
pH = 5.0
α – naftol + 4-cloro-2-metilfenil-diazonio Cromógeno diazo (Azo Dye)

(Fast Red TR) (amarillo)

MATERIAL DE VIDRIO
79
UTENSILIOS
• Gradilla
• Torundas
• Franela
• Papel parafilm
EQUIPO
• Baño María
• Refrigerador
• Pipetas semiautomáticas de 1000, 100 y 10 μL con sus puntillas correspondientes
• Suero libre de hemólisis
REACTIVOS.
• Tampon (R1): Citrato sódico pH 5.2
• Sustrato (R2): alfa-Naftil fosfato
• Tartrato (R3): Tartrato de sodio
• Ácido acético (R4)
V. PROCEDIMIENTO.
2. Enseguida pipetear
80
TUBOS ACP TOTAL ACP NO PROSTÁTICA
Reactivo de trabajo 1.0 mL 1.0 mL
Tartrato de sodio (R3) _______ 10 μL
Suero 100 μL 100 μL
3. Mezclar e incubar 5 minutos en baño maría a 37°C.

4. En tiempos cronometrados de 60 segundos por cada lectura, leer la muestra a 1’,
2’, 3’, 4 y 5 minutos. La temperatura debe ser constante en cada lectura.
5. Obtener la diferencia de absorbancias por minuto de la muestra de Fosfatasa
Ácida Total y Fosfatasa Ácida No Prostática (Δ As/min).
CALCULOS:
ΔAs/min x 750 = U/L de ACP TOTAL
ΔAs/min x 750 = U/L de ACP NO PROSTÁTICA
Donde:
ACP Prostática en U/L = Fosfatasa Ácida Total – Fosfatasa Ácida no Prostática
Fosfatasa Ácida Total: 30ºC 37ºC
Hombres: hasta 4.3 U/L hasta 5.4 U/L
Mujeres; hasta 3.1 U/L hasta 4.2 U/L
ACP Prostática: Adultos: Hasta 1.5 U/L hasta 1.7 U/L
VI. CUESTIONARIO:
1. Menciona otros métodos para la determinación de fosfatasa ácida en el
laboratorio.
2. Anota las fuentes importantes clínicamente de producción de fosfatasa ácida.
3. Menciona 3 recomendaciones especiales para obtener resultados precisos y
exactos en la metodología propuesta.
4. Indica otro método de laboratorio para la determinación de fosfatasa ácida
total y fosfatasa ácida prostática.
5. Menciona 3 alteraciones donde este aumentada la fosfatasa ácida.
81
Clave: PC-B,W Revisión: Enero 2024 Fecha de emisión: febrero 2024 Página: 82 de 82
BIBLIOGRAFÍA:
1. BALCELLS, A. LA CLÍNICA Y EL LABORATORIO, 1991, 18ª. edición,
Barcelona, Salvat.
2. CEBALLOS, Ferríz Estela & Norma TREJO Medina. MANUAL DE
PRÁCTICAS DEL CURSO ANÁLISIS BIOQUÍMICO CLÍNICO, 1990
3. DAVIDSOHN, I & J. B. HENRY. DIAGNÓSTICO CLÍNICO POR EL
LABORATORIO TODD-SANFORD, 1978, 6ª. ed., Barcelona, Salvat.
4. DIXON, M. E.C. Webbs. ENZIMAS, 1979, 3ª. edición, Ed. W.B. Saunders Co.
5. HARPER, H.A. QUÍMICA FISIOLÓGICA, 1978, México, el Manual Moderno.
6. HENRY, R. I. & D. C. CANNON. QUÍMICA CLÍNICA: BASES Y TÉCNICAS.
TOMO II, 1980, 2ª. ed., Buenos aires, Panamericana.
7. Insertos de los laboratorios: Hycel, Spinreact, Wiener, Randox y Stanbio.
8. LEÓN, Hernández Alberto. APUNTES DE PERFILES CLÍNICOS, 2009,
México, Academia de Perfiles Clínicos del C. E. C. y T. No. 15 “D.A.E.” del
I.P.N.
9. LYNCH, Matéu, et al. MÉTODOS DE LABORATORIO, 1985, 2ª. ed., México,
Interamericana.
WEBGRAFÍA:
1. http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/
2. http://www.farestaie.com.ar
3. http://www.geosalud.com
4. www.wanadoo.com
5. www.MedlinePlus.com.mx
6. www.perfilbioquimico.com
82

Instructivo de Perfiles Clínicos 2024

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS

NOMBRE DEL ESTUDIANTE:

No. DE BOLETA: _________ GRUPO: __________ EQUIPO No.: ____

CICLO ESCOLAR: 2023 -2024 II

6 CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL y TRIGLICÉRIDOS 25

7 CUANTIFICACIÓN DE LÍPIDOS TOTALES 35

8 DETERMINACIÓN DE CREATINKINASA (CPK-NAC 39

11 DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA (ALAT) 54

12 DETERMINACIÓN DE GAMMA GLUTAMIL GTRANSFERASA (GGT) 60

13 DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA (ALP) 64

14 DETERMINACIÓN DE ALFA AMILASA 69

15 DETERMINACIÓN DE LIPASA FOSFATASA ÁCIDA 73

16 DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ÁCIDA (ACP) 78

7. Para salvaguardar la integridad física de alumnas, alumnos, profesoras y profesores se

13. Con base a lo establecido en la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, los RPBI generados (no

19. La Evaluación Formativa o Trabajo en el Laboratorio consta de los siguientes puntos:

20. El reporte de las prácticas (20, 20 y 15%) se evaluará de la siguiente forma:

NOTA: Si no presenta referencias bibliográficas y/o digitográficas, se anula el cuestionario.

Cuantifica la concentración de calcio en una muestra de suero por medio de

Ca++ + o-Cresolftaleina Complejo colorido violeta

REACTIVOS: (LAB. SPINREACT)

Factor de conversión: mg/dL x 0.25 = mmol/L.

2. Menciona 3 fuentes externas que contienen grandes cantidades de calcio.

3. ¿Cuáles son las fuentes principales de calcio en el organismo humano?

4. Menciona 2 alteraciones que producen un aumento de calcio en el organismo

6. ¿Cuáles son los principales electrolitos extracelulares?

Cuantifica la concentración de Cloruro en una muestra de suero por medio

2 Cl- + Hg (SCN)2 HgCl2 + 2 SCN

3 SCN + Fe+++ Fe (SCN)3

3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C/15-25°C.

Factor de conversión: mmol/L = mEq/L.

2. ¿Quién regula la concentración de cloro en el organismo humano?

3. Indica el nombre que se le da al aumento de cloro en sangre.

5. Menciona los principales electrolitos intracelulares.

Cuantifica la concentración de fósforo inorgánico en una muestra de suero

IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS:

TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA:

Factor de conversión: mg/dL x 0.323 = mmol/L

2. ¿Cuál es la importancia del Fósforo en el diagnóstico clínico?

3. ¿Cuál es la función del Fósforo en el organismo humano?

5. Menciona 2 alteraciones que producen una disminución de Fósforo en sangre.

La Depuración de Creatinina es una prueba muy utilizada por los médicos de

Existen varios métodos para medir la filtración glomerular como la

La fórmula Cockcroft-Gault es una buena opción por su simplicidad ya que

REACCIÓN QUE SE LLEVA A CABO:

Creatinina sérica + Picrato alcalino Picrato de creatinina

(Ácido pícrico + NaOH) (CROMÓGENO AMARILLO–

IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS.

MATERIAL DE VIDRIO UTENSILIOS:

Técnica: Laboratorios SPINREACT.

RT (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0

Creatinina (mg/dL) = Δ As Muestra x 2 (Conc. Patrón)

Factor de conversión: mg/dL x 88.4 = mmol/L

Formula Cockcroft-Gault (CG).

• Hombres: 97 a 137 mL/min (1.65 a 2.33 mL/s)

• Mujeres: 88 a 128 mL/min (14.96 a 2.18 mL/s)

1. Que métodos existen para medir la filtración glomerular

3. Cuál es la utilidad de la filtración glomerula.

CUANTIFICACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

III. FUNDAMENTO (LABORATORIOS SPINREACT).

IV. MATERIAL, UTENSILIOS, EQUIPO Y REACTIVOS.

REACTIVOS: LABORATORIOS SPINREACT

No. DE BOLETA: ___ GRUPO: EQUIPO No.: