Protocolo de extracción de solventes

- Se deben tomar muestras del reactor de 200mL (dos muestras)

- Tomo una muestra y hago una filtración (filtros P5) al vacío de toda esta. Filtro para separar
la muestra del medio exhausto. Para esta filtración debo completar y unir el Matraz de
Kitasato, con el embudo de Buhner y la bomba al vacío.
- Con ese sobrenadante resultante se hace la roto-evaporación (La idea es concentrar la
muestra hasta 20mL (ESTE VOLUMEN PUEDE CAMBIAR, TIENE QUE SER CERCANO) en x
tiempo. (Se debe anotar el volumen que se sacó de la filtración y el volumen resultante
de la rotoevaporación)
- Tomo la muestra concentrada y la llevo a extracción
- La extracción es 1:1 con acetato de etilo (recuperado). Para eso prepare su espacio de
trabajo montando el embudo decantador en la base universal y poniendo abajo un beaker
de 50mL para recoger la fase acuosa.
- Ponga en el embudo decantador acetato de etilo al mismo volumen que tiene la muestra
concentrada que trajo del rotoevaporador (es por esto que la extracción es 1:1). Luego
ponga toda la muestra concentrada sobre el acetato de etilo. Agite este embudo
decantador cada 2 minutos durante 20 minutos y déjelo reposar en la base universal por x
tiempo, hasta que vea la separación de ambas fases.
- Se extrae del decantador la fase orgánica
- Falta como agregar dentro de los eppedorf (se reparte en diferentes Eppenddor de 2 mL,
agregar máximo 1,2 ml)
- Cuando se tengan todas las muestras en los eppedorf, llevar a centrifuga al vacío
(condiciones) tenga en cuenta la calibración de la centrifuga. Consultar en las condiciones
del semestre pasado o sino con Liseth Blanco.
- Al final de la centrifugación al vacío se abran eliminado las trazas de acetato de etilo
restantes. Aquí se podrá ver dentro de los eppendorf una fase solida (este es el extracto
con los metabolitos) la cual deberá suspenderse en metanol (volumen x) con ayuda de una
micropipeta. RECORDAR PESAR EL EXTRCTO SECO PARA PODER UNIFICAR LAS
CONCENTRACIONES Y COMPARAR
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