HIV-1 Conserved Mosaics Delivered by Regimens

with Integration-Deficient DC-Targeting Lentiviral

Vector Induce Robust T Cells
Paula Benencio
Valeria Adoue
Diciembre, 2016
Introducción
“Epítopes señuelo” Muy accesibles e inmunogénicos, pero no esenciales.
Mutan rápidamente y respuesta montada pierde efecto.

Uso de epítopes subdominantes

(menos accesibilidad, menos capacidad de escapar del sistema inmune)
Potencial uso contra cepas de diferentes variantes del mundo y
contra virus en reservorios

LVs Alta producción de células T de memoria, baja respuesta inflamatoria e

inmunogénica contra el vector. Específicas contra CDs por proteína de
envoltura de Sindbis Virus que interaccionan con DC-SIGN.
Construcciones
6 regiones altamente conservadas
de Gag y Pol de HIV para
generación computacional de 2
mosaicos.

Reshuffling para generar 6

construcciones, que se insertaran
en 3 tipos de vectores.
Ordenamiento minimiza respuestas
contra regiones de uniones.

ZVex LV de 3º generación.
Auto inactivado y no integrativo.

Cotransfección de 5 plásmidos.
Inmunogenicidad en Ratón

De los 2 mosaicos se generaron Inmunogenicidad de componentes ZVex por separado en Balb/c.

401 péptidos superpuestos en
11 aminoácidos, agrupados en ELISPOT con anticuerpos anti-IFN-γ biotinilados usando esplenocitos.
10 pools.

Usados para estimulación de

esplenocitos. Pooles 1 y 4
demostraron mayor efectividad.

Dosis elegida 5x109

Respuesta celular a
refuerzos heterólogos
Nuevo ELISPOT con regímenes de
aplicación heterólogos.
● 1 función
● 2 funciones
Respuesta T fuertemente ● 3 funciones
amplificada. ● 4 funciones

Expresión de proteínas de superficie

en T CD8+ por citometría de flujo.

Valores comparables con los

obtenidos en ELISPOT.

Regímenes prime/boost heterólogos

indujeron respuesta plurifuncional
más alta.
Reconocimiento de
variantes de epítopes
Comparación de vacunas con LV
contra el usado hasta el momento
MVA/ChAdOx1.

1. Inmunogenicidad por
producción de T CD8+ medida
por ELISPOT.
2. % de T CD8+ que producen IFN-
γ por tinción intracelular de
citoquinas.

Inmunogenicidad de protocolos solo

M, C o Z sin inserto derivado de HIV
estimulados por los 10 pooles en
ELISPOT anti IFN-γ.
 Potencial reconocimiento
cruzado de HIV-1
Inmunización con ZVex-ZVex.

Respuesta a epítopes AMQ y VLV inducida por

MHC I.

Pool, 2 variantes altamente inmunogénicas de

15 aa, y 4 péptidos mínimos presentes en HIV
naturalmente obtenidos de base de datos.

Péptidos mínimos tienden a inducir respuesta

más fuerte dado que no requieren
procesamiento previo.

Reconocimiento de epítopes mutados aún en

variantes no presentes en construcciones.
 Vacunas ZVex inducen respuestas T
específicas y robustas en animales
exogámicos
Ratones CD1-Swiss Modelo más realista

Cuantificación de respuesta T inducida por ELISPOT IFN-⋎ usando todos los

pools.
Mediana de las magnitudes 6280-3730-6040 SFU/10 6 esplenocitos
Conclusión

ZVex es un vector de 3ºgen Especificidad por proteína de cubierta de

Sindbis virus contra DC-SIGN en CDs.

Vpx para resistencia por SAMHD-1.

Actualmente, Vacuna
con ZVex está siendo
No integrativo por eliminación de actividad
probada como terapia
contra el cáncer en integrasa y deleción de región 3’.
estudios clínicos en
fase I y II. Respuesta fuerte T CD8 polifuncional efectora y
de memoria con fines profilácticos y terapéuticos
Conclusión

● Los datos obtenidos en el estudio apoyan el desarrollo de una vacuna

mosaico contra HIV-1, usando régimen prime/boost heterólogo.
● Un panel de vectores que expresen el mismo transgen podría permitir
terapia personalizada, evitando respuestas inmunes preexistentes contra
el vector, y múltiples dosis cuando se observe bajo nivel de respuesta.
● Múltiples medidas de seguridad lo hacen factible de ser usado tanto en
población HIV-1 positiva como cura, como en población HIV-1 negativa
como estrategia de prevención, en combinación con vacunas que generen
respuesta humoral ampliamente neutralizante.