UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA RRNN

Trabajo de Titulación

Tema:

Desarrollo de un sistema de aprovechamiento de la

Sangre de drago Croton lechleri Mull. Arg (fam.

Euphorbiaceae) y formulación de una forma

farmacéutica

Autor:

Luis Andrés Llulluma Anchatuña

Tutor:

PhD. Marco Cerna

 Contenido
1. Título:............................................................................................................................................3

2. Problema:.....................................................................................................................................3

3. Justificación..................................................................................................................................4

4. Objetivos.......................................................................................................................................5

4.1.1.Objetivo General..........................................................................................................5

4.1.2.Objetivos Específicos...................................................................................................5

5. Marco Teórico..............................................................................................................................6

5.1.1.Descripción de Croton Lechleri...................................................................................6

5.1.2.Taxonomía y nombres comunes..................................................................................6

5.1.3.Distribución, nivel de conservación UICN.................................................................6

5.1.4.Fitoquímica...................................................................................................................6

5.1.5.Usos Tradicionales.......................................................................................................6

5.1.6.Bioactividad de resina sangre de drago.....................................................................6

5.1.7.Cultivo in vitro de Croton lechleri...............................................................................6

6. Bibliografía...................................................................................................................................7
 Contenido de tablas

Tabla 1. Compuestos principales presentes en resina de sangre de drago................11

Tabla 2. Catequinas y proantocianidinas oligomericas identificadas en la sangre de

drago de C. lechleri............................................................................................. 12
 Título: Establecimiento de un protocolo de micro propagación in vitro de Croton

lechleri Mull. Arg para la obtención de resina a nivel industrial para uso en formulación

de un jarabe terapéutico

Problema:

En el ecuador un país con alta biodiversidad que a lo largo del tiempo se han logrado

descubrir nuevas alternativas tanto el área medicinal e industrial, mediante la

investigación como tan de la flora del país, lo menciona (Bordino, 2022), “El Ecuador es

considerada, según sus altos índices de biodiversidad un país mega diverso, lo que en su

territorio representa puntos calientes con altas concentraciones de biodiversidad siendo

estas la región biogeográfica Chocó y los Andes Tropicales; la riqueza de biodiversidad

que representa Ecuador, lo ha llevado a ser clasificado según el foro mundial para la

naturaleza como el octavo país a nivel mundial en cuanto a diversidad de especies, esto

debido a la pluralidad de ecosistemas que el país posee”. Destacando una especie de

angiosperma en particular como lo es Croton lechleri nativa de América del Sur, famosa

por su resina conocida como sangre de grado la cual ha sido objeto de investigación a lo

largo del tiempo y en la actualidad, “por las propiedades medicinales atribuidas al látex

en la cicatrización de heridas y en el tratamiento de afecciones estomacales como

ulceras” (Castillo & Dominguez , 2010).

 La producción actual del resina procede de árboles de regeneración natural existentes

en los bosques secundarios de la amazonia y escasamente de árboles plantados, la mayor

producción de resina esta en relación directa al diámetro del árbol, sin embargo que a

mayor diámetro mayor tiempo de espera para la cosecha y recuperación de la inversión,

para lograr arboles con diámetros mayores a 40 o 50 cm, se requieren de periodos

mayores a 20 años, por tal motivo muchos agricultores no se interesan en manejar la

especie (Castillo & Dominguez , 2010).

Debido a esta situación se ha implementado como una alternativa tecnológica la micro

propagación in vitro la cual es una herramienta de gran ayuda para la producción rápida

de plantas de interés económico para el hombre, las condiciones medio ambientales in

vitro como luz, temperatura, nutrientes, fitohormonas, favorecen en su desarrollo porque

son controlables y facilitan por ello el aprendizaje de los procesos biológicos

involucrados en el desarrollo de las plantas, actualmente ya existe evidencia científica de

micro propagación in vitro de Croton Lechleri

 Justificación

A lo largo del tiempo se evidencia una preocupación por las especies vegetales de uso

medicinal y su conservación como tal de los recursos naturales. El uso terapéutico de

plantas medicinales como sustitutos de las medicinas farmacéuticas se aplica desde la

antigüedad para curar o aliviar las enfermedades, manteniendo esta alternativa

poblaciones de comunidades amazónicas como primer tratamiento con plantas

medicinales y que en la actualidad se ha visto que poblaciones urbanas también hacen el

uso de las mismas y sus subproductos, dada la demanda como tal y el crecimiento

poblacional se han establecido nuevas tecnologías aplicables para obtener productos en

menor tiempo, menor costo y mayor producción, una de ellas es el uso de la

biotecnología vegetal, la cual nos permite obtener especies vegetales a gran escala en

laboratorio y conseguir como tal la materia prima de las mismas; obtener la resina de

sangre de drago de manera tradicional demanda un gran periodo de tiempo y costo, por

lo tanto “dado el creciente interés del uso medicinal de diversas especies vegetales entre

ellas Croton lechleri, su supervivencia se encuentra amenazada por lo que es imperativo

establecer metodologías de micro propagación in vitro que incrementen su número y

enfrente la creciente demanda del mercado, evitando el deterioro de su ecosistema

natural” (Jimenez, Mora, Rosete, & Cabrera, 2021).

De la especie de interés se han reportado constituyentes químicos como alcaloides,

fenoles, di terpenos y esteroides, a su vez reportes científicos indican que se han

realizado diversos ensayos biológicos para evaluar su actividad antimicrobiana,

antioxidante, antimutagénica, citotóxica, antiinflamatoria, inmunomoduladora y

cicatrizante (Lock & Rojas, 2004).

Para lo cual en la presente revisión bibliográfica se establecerá un protocolo de micro

propagación in vitro para Croton lechleri permitiendo obtener una resina a gran escala

para posterior formulación de un posible jarabe con fines terapéuticos

Objetivos

Objetivo General

Establecer un protocolo de micro propagación in vitro de Croton lechleri Mull. Arg

para la obtención de resina a nivel industrial para uso en formulación de capsulas con

efecto gastrico

Objetivos Específicos

1. Describir la especie vegetal de estudio, taxonomía, nombres comunes,

distribución, nivel de conservación, fitoquímica, usos tradicionales, e

identificación molecular

2. Establecer un protocolo de micro propagación para la especie de interés

3. Implementación de un proceso de extracción y almacenamiento de resina para

uso industrial

4. Indagar bibliográficamente la bioactividad de la resina de sangre de drago para

uso terapéutico
 MARCO TEÓRICO

Descripción de Croton Lechleri

Descripción botánica

Es una especie de angiosperma perteneciente a la familia de las Euphorbiaceae, es un

árbol de copa amplia que alcanza los 10 a 20 metros de altura, su raíz es en forma

cilíndrica cónica, axomorfa, la corteza externa del tallo posee abundantes lenticelas y la

resina que presenta es de colo rojo oscuro, en cuanto a sus hojas son simples con dos

glándulas en la base, alternas, a veces opuestas de 12 a 20 cm de largo por 5 a 14 cm de

ancho, las hojas más tiernas tienen un color blanco rojizo y con abundante indumento,

inflorescencia terminal en racimos laxos, fruto capsular globoso de 3 mm de largo por

4,5 mm de ancho, sus semillas son lisas con caruncula y endosperma oleaginoso

Taxonomía y nombres comunes

Distribución, nivel de conservación UICN

Las especies vegetales de sangre de drago se encuentran distribuidas en las zonas

tropicales y subtropicales desde el sur de México hasta América del Sur, Croton lechleri

es nativo de Bolivia, Colombia, Ecuador, Perú y Brasil; dentro de la distribución

geográfica en el Ecuador es conocido en los flancos de las cordilleras oriental y en la

amazonia (Altamirano, 2015).

 Fitoquímica

La sangre de drago comúnmente como se le conoce en el Ecuador y varios lugares

adicionales, perneciente al genere Croton de la familia Euphorbiaceae, denominado así

con ese nombre por la presencia de una resina de color rojo vino que se obtiene de su

corteza; mencionando a Croton Lechleri Muell, Arg., como una de las especies más

estudiadas a nivel científico debido a su composición fitoquímica los cuales ya se

encuentran reportados en varias bases científicas como lo menciona (Lock & Rojas,

2004), “los constituyentes químicos reportados para C. Lechleri se encuentran

principalmente los alcaloides, compuestos fenólicos dentro de ellos lignanos y taninos,

diterpenos, esteroides y otros fenólicos simples”.

Uno de los componentes con mayor porcentaje aislados de la sangre de drago

representando más del 90% del peso seco de acuerdo a varios autores son las

proantocinidinas dentro de las que se incluyen tanto catequinas como oligomeros

proantocinidinicos. Uno de los primeros alcaloides aislados de la resina de C. Lechleri

fue la taspina la cual estuvo relacionada por su actividad farmacológica, el contenido de

este alcaloide en la resina varia ampliamente en un rango de 1,3% al 20,4% respecto al

peso seco; a diferencia de la resina las hojas de esta especie contienen otros alcaloides

adicionales de los cuales se ha definido tres quimiotipos diferentes (Risco, Vila,

Henriques, & Cañigueral, 2005).

 Proantocianidinas

Dentro de este grupo se encuentran las proantocianidinas de las cuales incluyen tanto

catequinas como oligómeros proantocinidinicos de hasta 20 unidades, entre las

catequinas destacan: catequina, epicatequina, galocatequina, epigalocatequina, y en lo

respecta a proantocianidinas oligomericas se ha identificado oligómeros de varios

tamaños: dímeros como como las procianidinas B-1 (epicatequina-(4β-8)-epicatequina)

y B-4 (catequina-(4α-8)-epicatequina), catequina(4α-8)-epigalocatequina,

galocatequina(4α-8)-epicatequina, galocatequina(4α-6)-epigalocatequina; trímeros como

catequina(4α-8)-galocatequina-(4α-8)-galocatequina y galocatequina-(4α-8)-

galocatequina-(4α-8)-epigalocatequina, otros oligómeros con más unidades destaca el

SP-303 un oligómero proantocianidínico heterogéneo constituido por 5 a 11 unidades de

catequina, galocatequina, epicatequina y galoepicatequina, predominando la

galocatequina y epigalocatequina (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005).

Lignanos y componentes minoritarios

“Dentro de su corteza se encuentran diterpenos tipo clerodano: ácido hardwickiico,

bicantrol, crolechicol y ácido crolechinico, korberin A y korberin B” (Lock & Rojas,

2004). “Ademas se encuentran presentes β-sitosterol y β-sitosterol-3-O-β-D-

glucopiranosido,1,3,5-trimetoxibenceno, 2,4,6-trimetroxifenol, 3,4-dimetoxifenol,

alcohol 3,4-dimetoxibenzilico y alcohol 4-hidroxifenetilico como compuestos

minoritarios” (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005).

Tabla 1. Compuestos principales presentes en resina de sangre de drago
Alcaloides Lignanos
Taspina 3, 4-O-Dimetilcedrusina

Diterpenos
ácido hardwickiico Bincatriol Crolequinol

ácido crolequinico Korberina A Korberina B

Fuente: (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005)

Elaborado por: Llulluma Andrés

Tabla 2. Catequinas y proantocianidinas oligomericas identificadas en la sangre de
drago de C. lechleri.
Catequinas (flavan-3-oles-monoméricos)

Dimeros proantocianidínicos

Trimeros y otros oligómeros proantocianidínicos

Fuente: (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005)

Elaborado por: Llulluma Andrés

 Usos Tradicionales

La resina tiene usos en la medicina popular para el tratamiento de las

heridas como cicatrizante, antidiarreico, a su vez en el tratamiento de las

ulceras gastrointestinales, cólicos uterinos, retención de orina y como

anticancerígeno, a su vez es un producto de exportación para uso industrial

ya sea en la fabricación de pastillas, en cuanto al tronco, es maderable

usado para trabajos de encofrado, mondadientes, cajones para transporte

de frutos, la resina utilizada como colorante para barnices y mármoles, así

como en la preparación de lacas para oro (Ramirez, 2003).

Bioactividad de resina sangre de drago

Actividad cicatrizante y anti ulcerosa

Es una de las actividades con mayor aplicación y conocimiento de estudio de la sangre

de drago dentro de la cual están involucrados más de un principio activo, la resina de

sangre de drago estimula la contracción de la herida, favorece la formación de la cicatriz

y regenera rápidamente la piel ayudando a la producción de colágeno, y regeneración

del epitelio, esto se da por la acción de la taspina, 3´-4-O-dimetilcedrusina y los

polifenoles como la catequina y proantocinidinas (Bruneton, 2003).

La sangre de drago mezclada con óxido de zinc puede ser utilizada en el tratamiento

de la alveolitis seca puesto que induce la formación del tejido de granulación y elimina

el dolor y mal olor después de 1 a 4 días de tratamiento; también se menciona que la

resina facilita la curación de ulceras gástricas, reduciendo la actividad mieloperoxidasa y

el tamaño de la ulcera previniendo a su vez la sobreinfección, se han realizado estudios

del efecto de la taspina en cuanto al tratamiento de la ulcera gástrica aguda inducida por

indometacina en rata, comprobando que reduce los índices de ulceración y aumenta la

consistencia de la capa de mucus gástrico (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005)

Actividad antimicrobiana

Varias investigaciones sustentan la acción antiviral y antibacteriana de la sangre de

drago la resina posee actividad antimicrobiana debido a la presencia de polifenoles,

poliacetilenos, flavonoles, terpenoides, esteroides, alcaloides, propóleos cloquinico, las

korberinas A y B potentes frente a Bacillus subtilis, a su vez presenta actividad frente a

bacterias Gram positivas como S. aureus ATCC 6538 (Carrion, 2010).

En otro estudio reportan la actividad antimicrobiana y antiviral de la sangre de drago

principalmente de la SP-303 una proantocianidina que haya sido ensayada tanto en

modelos antivirales in vitro e in vivo en varios animales como ratas, cobayas, monos

infectados, demostrando que inhibe varios virus de ADN y ARN en los cuales se incluye

al virus del herpes de tipo 1 y 2, virus de la hepatitis A y B, virus de la influenza A y el

virus sincital respiratorio, el efecto se basa en que impide la penetración del virus en la

celula; la sangre de drago es poco activa frente Escherichia coli (Risco, Vila,

Henriques, & Cañigueral, 2005).

Actividad inmunomoduladora

Se ha demostrado que presenta actividad inmunomoduladora en modelos

experimentales in vitro debido a su actividad inhibidora del sistema del

complemento, su actividad dual sobre la producción de especies reactivas de

oxigeno ROS y sobre la fagocitosis y sobre la proliferación linfocitaria. Actividad

sobre el sistema del complemento, forma parte de la primera línea de defensa y

posee un alto grado de sofisticación que le confiere capacidad de interactuar

eficientemente con otros sistemas efectores de la inmunidad humoral y celular

asi como de la inflamación, debido a que la activación del sistema del

complemento desempeña un papel importante en la patogénesis de numerosas

enfermedades humanas y enfermedades neurológicas, es interesante

desarrollar inhibidores del complemento que interfieran en el proceso de dichas

enfermedades, como tal la sangre de drago liofilizada ha mostrado una potente

actividad inhibidora de las vías clásica y alternativa del sistema del

complemento dicha actividad de la resina sobre el sistema de complemento

podría ser debido a la presencia de monómeros de flavan-3-oles,

proantocianidinas dimericas y trimericas, parte también de la actividad de la

sangre de drago se estaría relacionado con la reducción de los niveles de calcio

y magnesio necesarios para la actividad del sistema del complemento puesto

que la resina precipita ambos cationes

Actividad antiinflamatoria

Uno de los compuestos activos más estudiados ha sido la taspina por ende

se la evidencia en tres modelos farmacológicos

En el modelo del edema inducido por carragenina en la región subplantar

de la rata produciendo inhibición dosis-dependiente con una DE 50 de 58

mg/kg a las tres horas, siendo 3 a 4 veces más potente que la fenilbutazona
 En el modelo del granuloma inducido por torunda de algodón, la taspina

inhibió la formación de granulomas de forma estadísticamente significativas

durante una semana

En modelo de artritis inducida por un coadyuvante en rata la taspina se

observó que inhibió la inflamación de forma estadísticamente significativa a

20 mg/kg/día (Risco, Vila, Henriques, & Cañigueral, 2005).

Cultivo in vitro de Croton lechleri

 Bibliografía

Bordino, J. (12 de Enero de 2022). Ecologia Verde. Obtenido de Flora y Fauna del

Ecuador: https://www.ecologiaverde.com/flora-y-fauna-del-ecuador-3707.html

Castillo, A., & Dominguez , G. (2010). EVALUATION OF THE “DRAGON’S BLOOD”

(Croton lechleri) LATEX PRODUCTION, TAKING INTO CONSIDERATION

ITS DIAMETER AND FOUR PERIODS OF RAINFALL IN NATURAL

POPULATIONS FROM UCAYALI, PERÚ. Scielo, 1-9. doi: 1726-2216

Jimenez, A., Mora, K., Rosete, S., & Cabrera, C. (2021). Utilización de plantas

medicinales en cuatro localidades de la zona sur de Manabí, Ecuador. in Siembra.

doi:.org/10.29166/siembra.v8i2.3223

Lock, O., & Rojas, R. (2004). Química y farmacología del Croton lechleri Muell.Arg.,

("Sangre de grado"). Revista de Quimica, 11-18. Obtenido de

https://revistas.pucp.edu.pe/index.php/quimica/article/view/18661