EXPERIMENTO No.

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ÁCIDOS Y BASES. SISTEMAS BUFFER

OBJETIVO:
1. Comprobar que el pH de una solución cambia cuando varía la concentración de iones hidrógeno.
2. Medir el pH de una solución utilizando papel pH, indicadores.
3. Comprobar la acción amortiguadora de los sistemas buffer.
4. Valorar la importancia de los sistemas buffer en el mantenimiento del equilibrio ácido base del organismo.
5. Analizar los resultados obtenidos y correlacionarlos con la práctica médica

ESTUDIAR EL CAPÍTULO 4 AGUA, ACIDOS, BASES Y AMORTIGUADORES DE LA

BIOQUÍMICA MÉDICA BÁSICA DE MARKS 4ta EDICION
CAPITULO 1 AGUA Y pH DE BIOQUIMICA DE HARVEY 7ª EDICIÓN

INTRODUCCIÓN
El mantenimiento estable de la concentración de hidrogeniones a nivel del organismo es esencial para la vida. Generalmente el pH,
tanto a nivel intra como extracelular, es mantenido a niveles muy constantes. El pH del organismo es estabilizado gracias a la
capacidad amortiguadora que poseen los líquidos corporales.
El agua es una sustancia mineral, la más abundante en nuestro planeta y en nuestro organismo, por lo que todas las reacciones
enzimáticas, la digestión, los procesos celulares y subcelulares se efectúan en un medio acuoso. El agua es el disolvente de la
materia viva. El agua se ioniza insignificantemente en un ion hidrógeno o protón (H +), y en ion hidroxilo (OH-).

El producto de las concentraciones de H + y OH- se denomina producto iónico del agua (Kw) y su valor a 25º C es de 1 x 10 -14.
Considerando que el agua pura se disocia en cantidades iguales de iones H + y de iones OH-, la concentración de iones H+ y de iones
OH- es de 10-7 M para cada uno de los iones.
[H+] = [OH-] = 1 x 10-7 M
Kw = [H+] [OH-]
= (1 x 10-7M) (1 x 10-7 M) = 1 x 10-14 M
En virtud de que estas cantidades son tan pequeñas, en 1909 Sørensen propuso representar la concentración de hidrogeniones con
su logaritmo negativo o el logaritmo inverso de la concentración de iones H +:
pH= - log [H+]
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pH= log
𝐿𝑜𝑔[𝐻 + ]
El principio de la química del ion hidrógeno pone los fundamentos para la definición de ácidos y bases según Brönsted y Lowry así:
“Un ácido es un donador de iones H+ y una base es un aceptor de iones H+ en solución acuosa”.

En base a valores de pH, las soluciones acuosas son ácidas si tienen pH menor de 7, soluciones básicas si su pH es mayor de 7 y
soluciones neutras si su pH es igual a 7.

Los líquidos biológicos de interés en clínica (suero, plasma, orina, líquido cefalorraquídeo, etc.) son soluciones que contienen algunas
sustancias en estado casi completo de ionización.

El conocimiento de la concentración de esos iones y de la fisicoquímica que describen sus interrelaciones, es fundamental para
poder entender muchos problemas fisiológicos y patológicos en el hombre.

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El pH de los líquidos corporales depende de la concentración de iones H + y es mantenido casi constante por medio de la operación
de varios mecanismos fisiológicos. Cada persona que trabaja en áreas relacionadas con la salud debe conocer las formas por las
cuales es mantenido el balance ácido - básico de los fluidos corporales, ya que una desviación de éste conlleva a un desbalance que
puede conducir a un estado patológico e incluso causar la muerte.

SOLUCIONES BUFFER, SOLUCIONES TAMPÓN O AMORTIGUADORAS

Son mezclas de un ÁCIDO débil y una sal de ese ácido. Este tipo de mezclas reaccionan tanto con ácidos como bases, por lo que la
adición de ácidos o bases fuertes a dichas mezclas casi no produce variaciones en el valor de pH.
Un ejemplo de solución buffer es la solución acuosa de ácido acético y acetato de sodio. Esta solución contiene una gran cantidad
de moléculas del ácido débil (CH3-COOH) y de su base conjugada (CH3 - COO-) que proviene de la disociación del acetato de sodio.

Mecanismo de acción de una solución buffer.

Si se añaden pequeñas cantidades de un ácido fuerte a esta solución buffer, los iones H + provenientes del ácido reaccionan con la
base conjugada del sistema buffer, como se indica en la siguiente reacción:

Por lo tanto, la mayoría de los protones agregados al medio no permanecen como tales, sino que forman el ácido débil (CH 3 –COOH)
y el pH apenas varía.
Si se agregan iones (OH-) al sistema buffer, éstos reaccionan con moléculas de ácido del buffer para formar iones acetato y agua.

El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de los iones hidroxilo no se encuentran libres en la solución
y el valor de pH casi no cambia. En resumen, la adición de pequeñas cantidades de ácido fuerte o de base fuerte a una solución
buffer casi no ocasiona cambios en el valor del pH de la solución. Por el contrario, las mismas adiciones hechas al agua producen
una notable variación en el pH, de modo que la adición de pequeñas cantidades de un ácido fuerte, por ejemplo, a soluciones que
no son un buffer, produce alteraciones importantes en el valor de pH de dichas soluciones.
Sin embargo, y como se discutirá posteriormente la capacidad de una solución buffer para reaccionar con ácidos o bases sin variar el
pH es limitada.

PARTE EXPERIMENTAL
REACTIVOS
Ácido acético 0,1 M Ácido clorhídrico 0,1 N
Hidróxido de sodio 0,1 N Solución de acetato de sodio 0,1 M
Buffer Fosfato 0,05 M pH 7.4 Agua destilada
Azul de bromotimol 0,02%

MATERIAL Y EQUIPO
1 gradilla para tubos 2 pipetas volumétricas de 1 mL
6 tubos de ensayo
Pipetas graduadas de 1 mL, 5 mL y 10 mL
Papel pH
1 pipeta volumétrica de 5 mL
1 aparato medidor de pH.
1 perilla succionadora.
3 pipetas graduadas o serológicas de 5 mL.

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MATERIAL TRAIDO POR EL ALUMNO
1 sobre pequeño de bicarbonato de Sodio
1 limón
1 coca cola pequeña
¼ litro de leche por mesa
1 bolsa de lejía (hipoclorito de sodio) por MESA
1 bolsa de vinagre por MESA
1 bolsa de café instantáneo por MESA

A. DETERMINACIONES DE ÁCIDOS, BASES Y SOLUCIONES BUFFERS

PROCEDIMIENTO
1. Rotule cuatro tubos de ensayo limpios y secos, con los números 1, 2, 3 y 4 respectivamente
2. Con una pipeta graduada de 10 mL, mida 9 mL de agua destilada y viértalos en el tubo No. 1. Haga lo
mismo con el tubo No. 2
3. Utilizando diferentes pipetas graduadas de 5 mL, vierta en el tubo No. 3, 4.5 mL de una solución 0.1 M
de ácido acético y 4.5 mL de una solución 0.1 M de acetato de sodio. Mezcle bien, proceda en la misma
forma con el tubo No. 4
4. Mida el pH de los tubos No. 1 y 3 con papel pH que le proporcionará su docente. Reporte los
resultados en su manual
5. A cada uno de los tubos 1 y 3 agrégueles lentamente 1 mL de solución de Ácido Clorhídrico 0.1N luego
mida con papel pH, el pH de cada tubo
Mediante cálculos matemáticos calcule el pH de ambos tubos. Reporte en su manual los resultados
que obtuvo y explique el porqué de las diferencias
6. A cada uno de los tubos 2 y 4 adicióneles 1 mL de solución de hidróxido de sodio 0.1N. Mida el pH con
papel y calcúlelo en cada tubo
7. Determine el pH a los tubos No. 2 y 4 utilizando papel pH
Anote en su manual los resultados, observaciones y conclusiones y anote en el cuadro
CUADRO RESUMEN
Tubos Reactivos Iniciales pH(i) Reactivos pH (F)
Papel Finales papel
1 9 mL de H2O destilada 1 mL de HCl 0,1N
2 9 mL de H2O destilada 1 mL de NaOH 0,1N
4,5 mL de Ac. Acético 0,1M+ 4,5 1 mL de HCl 0,1 N
3
mL de acetato de sodio 0,1 M
4,5 mL de Ac. Acético 0,1M + 4,5 1 mL de NaOH 0,1 N
4
mL de acetato de sodio 0,1M
A.1 DETERMIANCIÓN DE pH
1. Disuelva 1/2cucharadita de bicarbonato en 10 mL de agua en un beaker
a) tome una porción de esta solución y con papel pH mida el pH.
b) Según el pH que resulto como clasificaría esta solución
(Repita el mismo procedimiento con el café)
2. Exprima el jugo de un limón y repita el mismo procedimiento
3. Con la coca cola tome una porción de ella y repita el mismo procedimiento
4. Con una pequeña porción de leche haga el mismo procedimiento
 Reactivo VALOR DE pH

Haga en su manual las reacciones que se están efectuando en cada uno de los tubos y los cálculos de los
tubos 1, 2, 3 y 4

TUBO 1 pH= - log [H+] TUBO 2 pH= - log [H+] 14= pH-pOH
 [sal] [sal]
Tubo 3 pH= pKa + log [acido] Tubo 4 pH= pKa + log [acido]

B. ACCIÓN AMORTIGUADORA EN LOS LÍQUIDOS CORPORALES (IN VITRO)

En esta parte reproduciremos el mecanismo que efectúa el sistema renal para mantener el equilibrio ácido
- base analizando el papel que juega la solución buffer Fosfato presente en el filtrado glomerular (pH 7.4), el
cual acepta los iones hidrógeno eliminados por el riñón durante el proceso de formación de orina (pH 6).

El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO42-) forman una solución buffer, o sea, un
par ácido débil-base conjugada que puede actuar como un amortiguador de pH. El riñón durante la
formación de la orina elimina H+ los cuales reaccionan así:
H+ + HP04 2- H2PO4-
En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación:
2- Con cambios correspondientes en el pH de la orina
HPO4
H2PO4-
Por este mecanismo el riñón elimina H+ y reabsorbe HCO3- hacia la sangre. Por cada ion H+ que es liberado
por las células tubulares hacia la luz del túbulo, un ión Na + es liberado del Na2HPO4, el cual acompaña al ión
HCO3- que también es devuelto a la sangre como se explicó antes.

PARTE EXPERIMENTAL
1- Utilizando una pipeta serológica de 5 mL, mida 5 mL de una solución buffer fosfato pH 7,4 y
transfiéralos a un tubo de ensayo. Este buffer fosfato en esta práctica representa el buffer del filtrado
glomerular.
2- Agregue al tubo 5 gotas de indicador azul de bromotimol, agitar.
3- Titule la solución del tubo agregando gota a gota y agitando ácido clorhídrico (HCl) 0,1N, utilizando
para ello una pipeta serológica de 5mL hasta obtener un color amarillo (esto ocurre aproximadamente
a pH 6,0). Anote en su manual el volumen gastado (mL) de HCl 0,1N en la titulación. (No contar gotas)

Los H+ que se agregan por medio del HCl 0,1N para cambiar el pH del buffer fosfato desde 7,4 hasta 6,0,
representan a los H+ que el riñón agrega al filtrado glomerular para eliminarlos en la orina
intercambiándolos con Na+ recuperarán en esta forma base.
0,1N ------- 0,1 mEq/mL

𝑚𝐸𝑞
𝑁=
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝐺𝑎𝑠𝑡𝑎𝑑𝑜
(Tomar en cuenta que en el experimento se utilizan 5mL de Buffer fosfato pH 7,4)

5 mL de buffer ---------- 2 mEq HCl X = 2 x 1000

1000mL Orina ---------- x 5
X= 400mEq/L

Realizar cálculos de la titulación:

 UNIVERSIDAD SALVADOREÑA “ALBERTO
MASFERRER”
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA
BIOQUIMICA MEDICA I
CICLO I 2024

GUÍA DE PREGUNTAS LABORATORIO # 1 pH y BUFFERS

APELLIDOS:_________________________NOMBRES:____________________________
#________
PREGUNTAS SOBRE pH Y BUFFERS
1. ¿Cómo son eliminados los iones H+ de las células renales a la luz del túbulo?

2. ¿De qué depende el pH de los líquidos corporales?

3. ¿Por qué se clasifica el CH3-COOH como ácido?

4. ¿Por qué es este un ácido débil? ¿Cuál es su nombre químico? ¿Cuál es su nombre trivial?

5. La solución buffer fosfato está formada por las siguientes especies:

6. ¿Cuál es la importancia de este buffer en nuestro organismo?

7. ¿Cuándo está este buffer en su máxima acción amortiguadora?

8. Escriba la reacción, cuando a 5 mL de la solución buffer fosfato se le agrega 1 mL de HCl

9. Calcular el pH de un buffer que se forma al agregar 2.5 mL de Hidróxido de Sodio 0.1N en

un tubo que contiene 5.O mL de Ácido Acético 0.1 N. Utilizando la ecuación de Henderson
Hasselbach. Definir Ka y pKa. pKa del ácido acético = 4.7 y deducir dentro de cuales valores
de pH ejercería un buffer su máxima acción amortiguadora, tomando en cuenta el valor de
pKa del ácido que lo forma.
GLOSARIO: Favor completar con el significado de las siguientes palabras, recuerden
que son términos relacionados con el tema en cuestión

1. Acidosis

2. Cetosis

3. Cuerpos
cetónicos

4. Diabetes

5. Síntoma

6. Signo

7. Alcalosis

8. Hipercarbia

9. Insulina

10. Somnolencia