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CICLO CELULAR

Mantenimiento del centrómero durante la replicación del ADN.

La identidad del centrómero debe mantenerse a través de múltiples generaciones. Un nuevo estudio revela una retención dependiente de la red
asociada a centrómeros constitutivos (CCAN) de CENP-A, una marca epigenética clave para los centrómeros, en los centrómeros durante la
replicación del ADN y una corrección de errores dependiente de la replicación para eliminar la CENP-A ectópica en los brazos cromosómicos.

Masatoshi Hara y Tatsuo Fukagawa

C
los cromosomas duplicados durante la fase S Centrómero brazo cromosómico
deben dividirse por igual en células hijas CENP-A CCAN (CENP-C)
durante la fase M. Una región importante de
H3 preexistente GRAMO1

la cromatina para la segregación cromosómica

H3 recién depositado
precisa en la división celular es el centrómero, que
proporciona una plataforma para establecer el horquilla de replicación

cinetocoro, un gran CCAN (CENP-C)

complejo proteico para unir los cromosomas y los
microtúbulos del huso1. En numerosas especies
eucariotas, incluidos los humanos, el centrómero está Dependiente de CENP-C
S reciclaje
presente en un lugar específico del cromosoma.2. La
pérdida o ganancia de centrómero conduce a la mala
segregación y rotura de los cromosomas, lo que da
como resultado aneuploidía y trastornos genéticos
posteriores, incluido el cáncer. Los centrómeros
humanos abarcan regiones de megapares de bases
en un locus particular en cada cromosoma2. Las
regiones centroméricas humanas contienen matrices GRAMO2

complejas de repetición de orden superior (HOR) de

satélites α2. Sin embargo, la secuencia repetida del
satélite α no es esencial ni suficiente para la identidad Retención CENP-A centromérica Eliminación ectópica de CENP-A

del centrómero en células humanas.1,2. En cambio, una

variante de histona H3 específica del centrómero,
CENP-A, juega un papel fundamental en la
especificación del centrómero, sirviendo como una
marca epigenética importante.1,2. CENP-A forma un
nucleosoma octámero con histonas canónicas (H4,
H2A y H2B), que recluta un subcomplejo de cinetocoro
llamado CCAN1. La cromatina CENP-A debe
conservarse a través de múltiples divisiones celulares
para mantener la identidad del centrómero.
Deposición de CENP-A de novo en los centrómeros a
principios de G1fase está mediada por su chaperona
específica HJURP en células humanas1. Sin embargo,
no está claro cómo se mantienen los nucleosomas
preexistentes que contienen CENP-A en los
centrómeros durante la replicación del ADN, ya que la
maquinaria de replicación del ADN requiere la
eliminación de los nucleosomas existentes para la
síntesis del ADN.3. En la edición actual deBiología
celular de la naturaleza, Nechemia-Arbely et al.4
demostrar que CCAN juega un papel fundamental en
la recarga precisa del CENP-A centromérico, que se
desaloja durante la progresión de la horquilla de
replicación, y que la replicación del ADN proporciona
un sistema de corrección de errores para
Figura 1 |Retención centromérica de CeNP-a y eliminación ectópica de CeNP-a durante la replicación del ADN. Durante la fase
S, los nucleosomas preexistentes en la cromatina duplicada son desalojados por la horquilla de replicación. Los CENP-A desalojados
en centrómeros que contienen CCAN (CENP-C) se vuelven a depositar en hebras nacientes de una manera dependiente de CENP-C
(reciclado dependiente de CENP-C); por lo tanto, CENP-A se retiene en la cromatina centromérica después de la replicación del ADN.
Los sitios depositados por CENP-A durante la fase S son los mismos que en G1fase. Por el contrario, después del desalojo por la
horquilla de replicación, las CENP-A incorporadas ectópicamente en el brazo cromosómico no se vuelven a depositar en la cromatina
naciente durante la replicación del ADN. La retención de CENP-A en los centrómeros y la eliminación de CENP-A en los brazos
cromosómicos durante la replicación del ADN aseguran el mantenimiento de la identidad del centrómero a través de múltiples
generaciones.
eliminar CENP-A mal incorporado en brazos modelos de referencia, Nechemia-Arbely et al.4
cromosómicos no centroméricos (Fig.1). identificó secuencias precisas de unión a CENP-A en
Los nucleosomas que contienen CENP-A centrómeros humanos. Aislaron mononucleosomas
representan ~4% de la región del centrómero CENP-A de células HeLa que expresan CENP-A
humano5. Sin embargo, la posición precisa de marcado con localización y purificación por afinidad
unión a CENP en los centrómeros aún no está (LAP) a niveles endógenos o niveles elevados de CENP-
clara, ya que los centrómeros humanos A marcado con purificación por afinidad en tándem
comprenden largas matrices de ADN de satélite α (TAP) sincronizado en G1o g2Fase y lectura de
casi idénticos, lo que impide los análisis de todo el secuencias de ADN unidas a nucleosomas CENP-A.
genoma en los centrómeros. El progreso reciente Debido a que los modelos de referencia de
en tecnología de secuenciación y algoritmos ha centrómero incluyen variaciones de secuencia en
ayudado a generar modelos de referencia de matrices HOR, las lecturas de secuencia se asignaron
centrómeros para 23 cromosomas humanos: 22 correctamente a cada matriz HOR. Primero, el satélite
autosomas (incorporados en GRCh38) y el α más activo
cromosoma X6,7. Utilizando el

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las matrices se enriquecen para la ocupación
CENP-A (niveles de expresión endógena) de 20 a
40 veces4. Diecisiete centrómeros comprenden
múltiples conjuntos de satélites α, entre los cuales
seis centrómeros contienen solo un conjunto que
se une activamente a CENP-A4. Los 11 centrómeros
restantes tienen dos o más arreglos que están
ocupados por CENP-A4, consistente con el hallazgo
de centrómeros en el cromosoma 17, donde CENP-
A se une a diferentes matrices en cada homólogo8.
Además, los niveles elevados de expresión de
CENP-A no cambiaron el número de sitios de unión
de CENP-A, pero mejoraron su acumulación en
cada sitio en los centrómeros.4, apoyando así el
modelo de acción de masas CENP-A propuesto
anteriormente5.
La deposición de CENP-A de novo por HJURP
ocurre a principios de G1fase1,2, y los sitios de unión
a CENP-A en los centrómeros son estables a lo largo
de múltiples ciclos celulares. El número de
nucleosomas CENP-A y el tamaño de la cromatina
centromérica permanecen sin cambios durante el
ciclo celular. Debido a que las histonas en la
cromatina duplicada son desalojadas y recargadas
durante la replicación del ADN.3, Nechemia-Arbely et
al.4
examinó cómo la replicación del ADN afecta la
distribución de CENP-A en los centrómeros usando
células sincronizadas en G1o g2fase. Su análisis de
satélite α de copia única utilizando células con niveles
elevados de CENP-A reveló que casi todos los sitios
centroméricos únicos unidos a CENP-A se mapearon
en G1fase se retuvieron en G2fase, y la abundancia de
CENP-A en cada sitio también se mantuvo antes y
después de la replicación del ADN4. Las células que
expresan CENP-A a niveles endógenos también
mostraron perfiles de unión de CENP-A sin cambios
dentro de los centrómeros.4. Estos datos sugieren un
mecanismo para la retención de CENP-A en los
centrómeros.
Además, Nechemia-Arbely et al.4
identificó los sitios de unión a CENP-A asignados a
brazos cromosómicos no centroméricos, en
consonancia con estudios previos5,9: 11.390 y 40.279
sitios en G1-Células en fase que expresan CENP-A a
niveles endógenos y elevados, respectivamente. Estos
sitios de unión a CENP-A ectópicos en los brazos
cromosómicos se superponen con marcas de
transcripción activas de modificaciones de histonas y
sitios hipersensibles a la ADNasa I, lo que sugiere que
el CENP-A ectópico se carga preferentemente para
abrir la cromatina activa en los brazos cromosómicos.4,
como se observó anteriormente para la mala
localización de CENP-A dependiente de DAXX (proteína
asociada al dominio de la muerte) en líneas celulares
de cáncer4,9. Sin embargo, los picos CENP-A no
centroméricos identificados en G1-Las células de fase
no se detectaron en G2-células en fase, lo que indica la
eliminación de la ocupación ectópica no centromérica
CENP-A después de la replicación del ADN4(Higo.1).
Para investigar más a fondo la asociación entre
670
Eliminación de CENP-A y el momento de la
replicación del ADN, Nechemia-Arbely et al.4
combinó la secuenciación de ADN de unión a
CENP-A con Repli-seq, que mapea secuencias de
hebras de replicación de ADN naciente en células
sincronizadas para determinar regiones de
replicación temprana, media y tardía.
Demostraron que más del 90% de los sitios de
unión ectópica de CENP-A en el
GRAMO1Las células de la fase se replicaron en la fase
S temprana o media, y los sitios de unión a CENP-A
mapeados ectópicamente se eliminaron poco
después de la replicación del ADN, lo que respalda
firmemente la participación de la horquilla de
replicación en la eliminación de CENP-A ectópico en
los brazos cromosómicos.4(Higo.1). A diferencia de la
región del brazo, la secuencia de ADN centromérico
que contiene satélites α se replica en la fase S tardía y
se detectó ocupación de CENP-A en los mismos sitios
en los centrómeros antes y después de la replicación
del ADN.4. Aunque el 10% de las secuencias de unión a
CENP-A no centroméricas se replicaron en la fase S
tardía, el CENP-A depositado en estas regiones
también se eliminó después de la replicación del ADN.
Esto sugiere que la retención de CENP-A en el
centrómero durante la replicación del ADN está
mediada por un mecanismo específico en lugar de un
simple evento de fase S tardía.4(Higo.1).
Para comprender cómo se retiene CENP-A en
la cromatina centromérica durante la replicación
del ADN, Nechemia-Arbely et al.4
nucleosomas CENP-A aislados de células en fase S
tardía e identificaron sus proteínas interactuantes.
Estos incluyen las subunidades p150 y p60 de CAF-1,
un complejo de chaperonas de histonas que media la
deposición de histonas acoplada a la replicación.3, y
componentes del complejo de helicasa replicativa
MCM2-7, que desempeña un papel clave en el
reciclaje de histonas durante la progresión de la
horquilla de replicación3,10. Por lo tanto, Nechemia-
Arbely et al.4proponen que el reciclaje de CENP-A
específico del centrómero junto con la replicación del
ADN está mediado por los complejos CAF-1 y MCM2-7.
Porque los nucleosomas que contienen CENP-A
también están asociados con CCAN que se localiza en
los centrómeros a lo largo del ciclo celular.1, los
autores plantearon la hipótesis de que CCAN involucra
a CENP-A para el reciclaje de CENP-A específico de
centrómero. Entre los componentes de CCAN,
Nechemia-Arbely et al.4
se centró particularmente en CENP-C, dada su
interacción con el nucleosoma que contiene CENP-A
y la proteína CENP-B de unión a satélite α11. De
hecho, el rápido agotamiento de CENP-C en la fase S
temprana comprometió la retención de CENP-A en
las regiones centroméricas durante la replicación del
ADN. Esto sugiere que CENP-C juega un papel crítico
en la retención centromérica de CENP-A,
contribuyendo así a la herencia centrómero en
hebras hermanas de ADN naciente.4(Higo.1).
naturaleza biología celular|VOL 21 | JUNIO 2019 | 665–673 |www.nature.com/naturecellbiology
Usando un análisis de secuencia completo de los
ADN de unión a CENP-A con modelos de referencia de
centrómeros humanos recientes, Nechemia-Arbely et
al.4demuestran la retención de CENP-A dependiente
de CENP-C dentro de los centrómeros durante la
replicación del ADN y la eliminación dependiente de la
replicación de ADN de CENP-A ectópico en los brazos
cromosómicos (Fig.1). Estos mecanismos reguladores
junto con la deposición de CENP-A de novo por HJURP
a principios de G1fase permite la herencia estable de la
identidad del centrómero a través de múltiples
generaciones, en consonancia con nuestro estudio
anterior que informa que CCAN retiene las posiciones
del centrómero en las células DT40 de pollo, que
contienen centrómeros no repetitivos en algunos
cromosomas12. Estos estudios sugieren que el
mantenimiento de la identidad del centrómero en la
posición precisa es una función crucial de CCAN en la
interfase, mientras que CCAN juega un papel clave en
el reclutamiento de complejos de unión a
microtúbulos para establecer una estructura de
cinetocoro funcional en
fase M13. Curiosamente, otro estudio reciente
muestra que CENP-A expulsado por la horquilla de
replicación se retiene en la cromatina
centromérica por MCM2 y HJURP.14. Dado que la
retención de CENP-A en los centrómeros depende
de CENP-C durante la replicación del ADN4, una
pregunta clave posterior que debe abordarse es
cómo se vincula el sistema MCM2-HJURP con
CENP-C en este proceso. El dímero canónico de la
histona H3-H4 forma un complejo con MCM2 y
ASF1, una chaperona H3-H4, generando así un
modelo en el que MCM2 retiene H3-H4 expulsado
por la horquilla de replicación del ADN y funciona
con ASF1 para recargar los antiguos complejos H3-
H4 en cromatina replicada10. Los datos
bioquímicos sugieren que los dímeros CENP-A–H4
se unen simultáneamente a MCM2 y HJURP4,14. Sin
embargo, HJURP se une no solo a la hélice α2 de
CENP-A sino también a la hélice α1, que también
se prevé que se una a MCM2 (refs.10,15),
aumentando la posibilidad de colisión entre MCM2
y HJURP en CENP-A. Por otro lado, MCM2 puede
unirse a HJURP de manera independiente de las
histonas.10. Por lo tanto, una comprensión precisa
de cómo interactúan CENP-A–H4, MCM2 y HJURP
es un desafío importante. Además, a veces se
forma un nuevo centrómero en un sitio ectópico
en el brazo del cromosoma como un
neocentrómero.2. Sería interesante investigar
cómo la región del neocentrómero evade el
mecanismo de corrección de errores dependiente
de la replicación del ADN en el brazo
cromosómico.
-
masatoshi hara *y
Tatsuo Fukagawa *
Escuela de Graduados en Biociencias Fronterizas, Osaka

Universidad, Suita, Osaka, Japón.
* correo electrónico:mahara@fbs.osaka-u.ac.jp;
tfukagawa@fbs. osaka-u.ac.jp
Publicado en línea: 3 de junio de 2019 https://
doi.org/10.1038/s41556-019-0335-0
Referencias
1. Quesero, MIHarb de primavera fría. Perspectiva. Biol.6,
a015826 (2014).
CÉLULAS MADRE
Un impulso hacia la totipotencia de las células madre
Las células madre embrionarias derivadas de la masa celular interna pueden diferenciarse en todos los linajes embrionarios de cualquier tipo de
célula adulta y, hasta cierto punto, en tejidos extraembrionarios. Ahora, un estudio permite la generación de células madre porcinas y humanas
con un mayor potencial de diferenciación hacia todos los destinos embrionarios y extraembrionarios, un paso más cerca del estado totipotente del
óvulo fertilizado.
Fred Etoc y Ali Brivanlou
W
Cuando se disocian las células de un
embrión temprano, se pueden mantener
en cultivo bajo un ambiente estable y
estado pluripotente proliferativo. El descubrimiento
inicial de las células madre embrionarias (ESC) en el
sistema murino1seguido por la derivación de sus
contrapartes humanas2condujo a una explosión en el
campo de la biología ESC. Sin embargo, el embrión es
muy dinámico, y el hecho de que sus células puedan
aislarse y mantenerse en una etapa de desarrollo
estable y congelada sigue siendo un hallazgo
sorprendente. Aunque las ESC humanas y de ratón se
derivan de embriones en etapas similares, se
observan en cultivo dentro de dos estados
pluripotentes diferentes asociados con diferentes
requisitos de señalización.3. Las ESC de ratón se
califican como "ingenuas" y coinciden con la masa
celular interna (ICM) del blastocisto antes de la
implantación, mientras que las ESC humanas se
asemejan a una etapa posterior del desarrollo del
epiblasto, después de la implantación pero justo
antes de la gastrulación, en un estado "preparado".4.
Otros estudios han identificado condiciones de
señalización para que los ESC cambien de un estado
a otro5e intentó devolverlos a la etapa de desarrollo
totipotente más temprana del embrión en etapa de
dos células6(similar a 2C).
Dado el potencial de la investigación de ESC en
biotecnologías y el uso de organismos modelo de
mamíferos para estudiar enfermedades, se requiere
de manera crítica el desarrollo de métodos para
derivar de manera confiable ESC de diferentes
especies de mamíferos bajo un conjunto común de
condiciones que dan lugar a estados similares y
potentes de pluripotencia. . En este contexto, un
estado pluripotente para ratón
naturaleza biología celular|VOL 21 | JUNIO 2019 | 665–673 |www.nature.com/naturecellbiology
2. Fukagawa, T. y Earnshaw, WCdesarrollo Celúla30, 496–508
(2014).
3. Anuncio, ATbioquimica Biografía. acta1819, 196–
210 (2013).
4. Nechemia-Arbely, Y. et al.Nat. Biol celular.https://doi.org/10.1038/
s41556-019-0331-4(2019).
5. Bodor, DL et al.eLife3, e02137 (2014).
6. Miga, KH et al.Genoma Res.24, 697–707 (2014).
7. Schneider, VA et al.Genoma Res.27, 849–864 (2017).
8. Maloney, KA et al.proc. Academia Nacional. ciencia EE.UU
109, 13704–13709 (2012).
9. Lacoste, N. et al.mol. Celúla53, 631–644 (2014).
Células denominadas 'pluripotencialidad expandida'
fueron descubiertas recientemente7. En este número de
Biología celular de la naturaleza, Gao et al. ampliar este
hallazgo para generar células madre de potencial
expandido (EPSC) porcino y humano, proporcionando un
enfoque general para derivar estas células madre de
otras especies de mamíferos8.
Durante las etapas previas a la implantación del
desarrollo embrionario, todas las células
experimentan una serie de transiciones y finalmente
se segregan dentro de la población embrionaria, el
epiblasto o uno de los dos destinos
extraembrionarios: el trofoblasto y el hipoblasto.
Dependiendo del posicionamiento temporal de sus
estados pluripotentes con respecto a esas
transiciones en la línea de tiempo del desarrollo,
algunos ESC pierden la capacidad de dar lugar de
manera eficiente a destinos extraembrionarios y
pueden diferenciarse preferentemente hacia destinos
embrionarios cuando se reimplantan en el entorno
embrionario.9(Higo.1). En comparación con las células
preparadas, las células vírgenes pueden contribuir a
los animales quiméricos de manera mucho más
eficiente cuando se implantan en blastocistos.10, pero
ni los ESC ingenuos ni preparados pueden contribuir
a los linajes derivados del trofoblasto (p. ej., la
placenta)11. Para resolver esta limitación, un estudio
anterior aisló blastómeros de embriones de ratón en
etapa de ocho células para establecer células
pluripotentes que podrían diferenciarse hacia linajes
embrionarios y extraembrionarios.7. Luego, dados los
componentes conocidos de la ruta de señalización de
la transición ICM-trofoblasto, desarrollaron un
conjunto de condiciones para bloquear
sistemáticamente estas señales y generar murino
estable.
noticias y vistas
10. Huang, H. et al.Nat. Estructura. mol. Biol.22, 618–626
(2015).
11. Hoffmann, S. et al.Informes de celda17, 2394–2404 (2016).
12. Hori, T. et al.J. Cell Biol.216, 101–113 (2017).
13. Hara, M., Ariyoshi, M., Okumura, E.-I., Hori, T. y Fukagawa, T. Nat.
Biol celular.20, 1378–1388 (2018).
14. Zasadzińska, E. et al.desarrollo Celúla47, 348–362.e7 (2018).
15. Hu, H. et al.Genes Dev.25, 901–906 (2011).
Conflicto de intereses
Los autores declaran no tener conflictos de intereses.
células madre de potencial expandido (mEPSC),
que se pueden colocar entre el estado similar a 2C
y el estado ingenuo. De acuerdo con este
posicionamiento único dentro del espectro de
estados pluripotentes, las mEPSC podrían dar
lugar a linajes tanto embrionarios como
extraembrionarios por diferenciación in vitro o
cuando se formaron quimeras por reintroducción
en blastocistos.7.
Tras estos descubrimientos, la siguiente
pregunta era si el estado pluripotente mejorado
es universal y si pueden alcanzarlo células madre
de otras especies. En este sentido, las células
madre porcinas son un desafío interesante dado
que no se han derivado ESC de buena fe. Sin
embargo, debido a las diferencias entre especies,
es poco probable que el medio desarrollado
anteriormente para crear mEPSCs7se traduciría
directamente al modelo porcino. Por lo tanto,
para optimizar las condiciones de cultivo, Gao et
al. no partió de embriones de ocho células, sino
que desarrolló una ingeniosa plataforma de
detección a partir de células madre pluripotentes
inducidas porcinas (iPSC)8. La expresión de los
factores de Yamanaka bajo el control de la
doxiciclina (dox) en fibroblastos porcinos condujo
a su reprogramación y a la creación de iPSC
dependientes de dox. La eliminación de dox
condujo a la inhibición de la expresión de los
factores de Yamanaka y una rápida pérdida de
pluripotencia. Usando esta herramienta básica y
una receta de cultivo inicial con su medio mEPSC
previamente optimizado, los autores buscaron
condiciones de cultivo que mantuvieran las iPSC
porcinas pluripotentes tras la eliminación de dox.
En última instancia, Gao et al.8
671