OPTIMIZACIÓN DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE FLAVONOIDES

DE FLOR DE MANZANILLA (Matricaria recutita L.)

Br. Edwin M. Laguna Laguna, Br. Cindy N. Mangas Lira, Br. Jaysel A. Roiz Salgado,
Br. Kathleen N. Roiz Zapata y Br. Adriana T. Ruiz Bucardo.
RESUMEN
Matricaria recutita L. tiene varios usos medicinales, alimenticios y cosméticos. Su flor
contiene Su flor contiene altas cantidades de flavonoides, principalmente apigenina; su
acción farmacológica y la calidad del extracto hidro-alcohólico varían según el contenido
de este compuesto. Para optimizar el proceso de extracción de flavonoides y obtener un
mayor rendimiento se usó el método de Taguchi.
INTRODUCCIÓN Las flores de Matricaria recutita son una
fuente natural de aceite esencial de color
La manzanilla (Matricaria recutita L.),
azul, (a razón de más de 4 ml/Kg), en el
una planta herbácea de la familia
que se incluyen como principales
Asteraceae, se cultiva principalmente en
constituyentes sesquiterpenos (αbisabolol
Argentina, Egipto, Bulgaria, Hungría,
y sus óxidos A, B y C) y azulenos,
España, República Checa, Alemania e
principalmente camazuleno (1-15%). Este
Italia (Meireles, 2001; Tavares y Fonseca,
compuesto tiene una estructura
2004, Franke y Schilcher, 2005). Hay dos
seudosesquiterpénica bicíclica que se
derivados principales de la flor de
origina durante la destilación en el
manzanilla: el aceite esencial y el extracto
proceso de obtención de la esencia a
hidroalcohólico, que tienen usos
partir de una lactona sesquiterpénica: la
medicinales, alimenticios y cosméticos.
matricina (protoazuleno), que se
El extracto hidro-alcohólico se usa como
encuentra en los capítulos florales frescos.
antiinflamatorio y antipirético,
Entre los compuestos fenólicos
musculotrópico espasmolítico, ansiolítico,
identificados se incluyen numerosos
vulnerario, desodorante, antibacteriano y
flavonoides como apigenina, quercetina,
estimulante del metabolismo de la piel
luteolina y sus heterósidos además,
(Svehlíková y Repcák, 2000; Franke y
cumarinas como herniarina y
Schilcher, 2005; Svehlíková y Repcák,
umbeliferona adicionalmente, contiene
2006). Se puede señalar que, es una de las
mucílagos (10%).
hierbas medicinales más ampliamente
usada y mejor documentada del mundo.
GENERALIDADES DE LA PLANTA
Alrededor de 120 componentes químicos
Se trata de un compuesto orgánico,
han sido identificados como metabolitos
conocido científicamente como
secundarios: 28 terpenoides, 36
Chamaemelum nobile, y es una hierba
flavonoides y 56
perenne nativa de Europa, normalmente
es consumida como Te, con un sabor
compuestos adicionales con actividad
dulce muy aromático, tiene propiedades
farmacológica potencial.
digestivas, calmantes, relajantes e incluso
para aclarar piel y cabello.La manzanilla
ha sido muy estudiada y su composición
es muy compleja. La escencia, uno de sus
Partes de la planta de manzanilla
En su totalidad la manzanilla posee una
serie de compuestos complejos que hacen
una planta con virtudes medicinales.
La manzanilla contiene una variedad de
constituyentes activos, en donde cada uno
actúa en determinadas condiciones y
juegan papeles importantes en otras
situaciones.
Según Schilcher (1987), El bisabolol es
uno de los mayores constituyentes anti
inflamatorios, pero el total efecto anti
inflamatorio depende de la presencia de
los flavonoides, como la apiginina y
luteolina. Por muchos años se ha
principales productos que es la base para
todos los productos tiene la siguiente
composición
atribuido el efecto anti espasmódico a los
flavonoides, pero recientemente se ha
demostrado que numerosas interacciones
de otros componentes se han atribuido
sustancialmente a la acción sedante.
TAXONOMIA
 Reino: Plantae y
 Subreino: Tracheobionta
 Divison: Magnoliophyta
 Clase: Magnolipsida
 Subclase: Asteridae
 Orden: Asterales
 Familia: Asteraceae
 Subfamilia: Asteroideae
  Tribu: Anthemideae
 Género: Matricaria
DESCRIPCIÓN TECNICA
Basada en Abrams y Ferris, 1960;
Cronquist et al., 1994; Dillon, 1981;
Gleason y Cronquist, 1991; Rzedowski y
Rzedowski, 2001 y observaciones propias
(A. Hanan).
Hábito y forma de vida: Hierba
anual, a veces persistiendo por más
tiempo, glabra o casi glabra.
Tamaño: Hasta de 60 cm de alto.
Tallo: Ramificado.
Hojas: Alternas, de 5 a 7 cm de largo,
finamente 2 a 3 veces pinnado
divididas (bi a tripinnatisectas), los
segmentos linear-filiformes, agudos.
Inflorescencia: Compuesta de
cabezuelas solitarias a agrupadas por
varias en el extremo de las ramas, a
veces numerosas, sobre pedúnculos
hasta de 10 cm de largo.
Cabezuela/Flores: La cabezuela,
aunque tiene el aspecto de una flor, es
una inflorescencia formada por
pequeñas flores sésiles dispuestas
sobre un receptáculo largamente
cónico a subcilíndrico en la madurez,
hueco, que no presenta brácteas
(páleas) sobre él, es decir es desnudo;
el conjunto de flores está rodeado por
fuera por 30 a 50 brácteas dispuestas
en 2 series que constituyen el
involucro, las brácteas lanceoladas a
oblanceoladas, de 2 a 3 mm de largo,
con el ápice agudo a obtuso, escariosas
en el margen, las exteriores a veces un
 Especie: Matricaria recutita L.
poco más cortas. Flores liguladas 10 a
20, femeninas, ubicadas en la periferia
de la cabezuela, la corola es un tubo
corto en la base y a manera de cinta en
la mayor parte de su longitud,
semejando un pétalo de una flor
sencilla, su forma es oblonga con 3
dientes en el ápice, de color blanco y
de 5 a 9 mm de largo, con tendencia a
curvarse hacia atrás. Flores del
disco 200 a 500, hermafroditas,
ubicadas en la parte central; la corola
es un tubo que hacia el ápice se
ensancha (“garganta”) y se divide en 5
lóbulos, de color amarillo y de 1 a 2
mm de largo; los estambres alternos
con los lóbulos de la corola, sus
filamentos libres e insertos sobre el
tubo de la corola, las anteras soldadas
entre sí formando un tubo alrededor
del estilo, con un apéndice en el ápice
y la base obtusa; el ovario ínfero.
Frutos y semillas: El fruto es seco y
no se abre (indehiscente), contiene una
sola semilla, se le conoce como
aquenio (o cipsela), es cilíndrico, a
menudo oblicuo, de un poco menos de
1 mm de largo, con 4 o 5 costillas en
la cara ventral, en el ápice del fruto
puede presentarse una estructura
llamada vilano en forma de corona de
tamaño variable.
Características especiales: Aromática
al estrujarse.
USOS DE LA PANTA
La Matricaria recutita es una planta con
propiedades medicinales, tal y como lo
señalan numerosos autores, se ha
utilizado desde tiempos remotos por sus
propiedades espasmóliticas,
antiinflamatoria y antiúlcera gástrica. Su
actividad antiinflamatoria se ha
comprobado en animales de
experimentación, en los que se han
inducido procesos inflamatorios y la
reducción del edema obtenido por la
aplicación de la manzanilla, ha sido
similar a la obtenida con benzidamina,
antiinflamatorio no esteroideo utilizado
como referencia. La actividad
antiinflamatoria comprende la interacción
de flavonoides y componentes del aceite
esencial (cumarinas, y el bisabolol),
inhibiendo la 5- lipoxigenasa y el sistema
de peroxidación, suprimiendo la
formación de mediadores inflamatorios
(LTB4, 12-HHT y 12-HETE) y
presentando un efecto anti-hialuronidasa,
así como también, disminuyendo la
actividad capilar. Adicionalmente, el
camazuleno inhibe la liberación de
histamina y serotonina, a su vez inhibe la
formación del leucotrieno B-4; lo que
disminuye la inflamación.
La manzanilla, también actúa sobre el
Sistema Nervioso Central, provocando un
efecto ansiolítico y ligeramente sedante.
Esta acción resulta beneficiosa en los
malestares gastrointestinales debido a que
éstos muchas veces presentan un
componente nervioso, principalmente en
el Síndrome del Intestino Irritable. Los
flavonoides son moléculas que activan el
sistema nervioso y la modificación
química del núcleo de la flavona
incrementando dramáticamente la
potencia ansiolítica. La apigenina, es un
ligando para el receptor benzodiacepínico
ejerciendo un efecto ansiolítico y
ligeramente sedante.
En cuanto a la actividad espasmolítica, ha
sido estudiada con diferentes preparados
de manzanilla sobre el órgano aislado, los
flavonoides de la manzanilla contrarrestan
efectivamente las contracciones de la
musculatura lisa (en estudios con
animales provocadas por cloruro de bario,
acetilcolina e histamina), también el α-
bisabolol y sus derivados oxidados A y B,
además de los flavonoides, apigenina,
quercetina y luteolina son responsables de
esta actividad
METODOS DE EXTRACCIÓN
Se realizó una extracción
Hidroalcoholica. La extracción se hizo en
tubos de ensaye con tapa de bakelita
conteniendo 20 mL de disolvente y 1 g de
flor de manzanilla; para tener la
concentración deseada de disolvente se
empleó agua desionizada.
El contenido de flavonoides en el extracto
hidroalcohólico de flor de manzanilla es
el factor de calidad, y la apigenina es un
constituyente mayoritario de este
extracto; además en las preparaciones
comerciales de flor de manzanilla se
encuentra un espectro heterogéneo de
contenido de este tipo de flavonoide
(Franke y Schilcher, 2005). Considerando
lo anterior, es necesario buscar métodos
analíticos simples, rápidos y sensibles
para cuantificar los flavonoides en la flor
de manzanilla que validen su calidad.
Se han usado diferentes técnicas para
extraer flavonoides presentes en flor de
manzanilla y su éxito depende de: parte
utilizada de la planta, proporciones de
disolventes, tiempo y temperatura. Por
ejemplo, si el tiempo de extracción es 1 h
los disolventes más usados son alcohol
mezclado con agua.

Cuadro 1. Trabajos sobre extracción de flavonoides

Nombre de la Reacción Reactivos Resultado positivo

Reacción de Shinoda Adicionar HCl y limaduras Espuma abundante y/o
de magnesio coloración intensa
Reacción en medio Gotas de KOH 5% en Coloración amarillo-naranja
alcalino etanol de 95°GL y al añadir gotas de FeCl3
2% da coloración azul
verdosa.
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
 Los extractos fueron evaluados mediante CCF, con sílica gel, empleando como fases
móviles: acetato de etilo – ácido acético – ácido fórmico
 Agua en proporciones 2 ( 0.2, 0.2)
 0.5 para la identificación de flavonoides. Los patrones usados fueron: rutina y querceti
na
ESTRUCTURA DE LA PLANTA
La fórmula química de la manzanilla corresponde a:

Manzanilla = C14H16.
 Estructura de los fitoquimicos de la manzanilla.
Estructura básica de flavonoides
Estructura de Apigenina
ENSAYOS
Los flavonoides se cuantificaron con el
método colorimétrico de cloruro de
aluminio (Chang et al., 2002). Para
obtener la curva tipo en la cuantificación
de flavonoides, expresados como
quercetina, se prepararon soluciones en
concentraciones de 0 a 100 μg mL−1 y la
ecuación generada fue:
A = −0.00869 + 0.007017C
Donde, A = la absorbancia a 415 nm; C =
la concentración de la solución usada para
el análisis colorimétrico (μg mL−1).
Para el análisis estadístico se
consideraron factores controlables:
proporción del disolvente, tiempo-
temperatura y tamaño de partícula. Los
niveles para proporción de disolvente se
determinaron con base en lo reportado en
la literatura (Cuadro 1) y se complementó
con pruebas preliminares. El tiempo de
extracción se seleccionó con base en lo
donde los períodos varían de 1 min a 24 h
y con respecto a los datos descritos en
literatura (Cuadro 1); para la temperatura
se incluyó un tratamiento a temperatura
ambiente; respecto al tamaño de partícula
para la flor de manzanilla.
Se usó un diseño experimental con un
arreglo factorial 6×4×3 y cuatro
repeticiones. El modelo estadístico fue:

Taguchi (1991) define la Ecuación 3
cuando se desea optimizar el proceso,
maximizando la variable de respuesta. A
esta transformación la denomina mayor es
mejor (larger-the-better), que maximiza la
señal sobre el ruido. SNLijk significa el
efecto que tiene el i-ésimo nivel de
tiempo-temperatura, del j-ésimo nivel de
disolvente, del k-ésimo nivel de tamaño
de partícula sobre mg de quercetina g−1
materia seca (y), transformado (Ecuación
3) μ = media general; temhi = tiempo-
temperatura al i-ésimo nivel; i = 1,…, 6;
disolj = proporción disolvente al j-ésimo
nivel; i = 1,…, 4; tampartk = tamaño de
partícula al k-ésimo nivel; i = 1,…, 3; eijk
= error del iésimo nivel de tiempo-
temperatura, del j-ésimo nivel de
proporción del disolvente, del k-ésimo
nivel de tamaño de partícula. Conviene
destacar que cuando el objetivo del
proceso es alcanzar el valor máximo
como en este caso, los valores máximos
obtenidos por SNL son los óptimos
DISCUSION Y RESULTADOS
Con la curva de calibración (Ecuación 1)
se calculó la concentración de flavonoides
de los extractos preparados en el
experimento. El diagrama de Box y
Whiskers para el contenido de
flavonoides se muestra en la Figura 1,
donde se aprecia que los extractos están
entre 1.42 a 10.89 mg g−1 y se forman
dos grupos: los rendimientos altos se
obtienen con los tratamientos realizados a
70±0.5 °C y los bajos con los efectuados
a la temperatura ambiente (20±2 °C).
Para encontrar los niveles óptimos de
cada factor (tiempo-temperatura,
proporción del disolvente y tamaño de
partícula), primero se obtuvo el promedio
de cada corrida. El promedio de cada
corrida se sustituyó en la Ecuación 3 para
obtener los valores SNL. Con los
resultados originales (y) y SNL (Cuadro
3), se realizaron dos análisis de varianza
(A de V) (Cuadros 4 y 5), usando SAS
versión 8.0. Los tres factores principales
y todas las interacciones resultaron
significativas respecto a y (Cuadro 4). corrida, lo que no ocurre con la variable
Para la variable SNL los factores de respuesta sin transformar.
principales y la interacción tiempo-
temperatura×proporción de disolvente,
sólo resultaron significativos (Cuadro 5).
Además, la transformación “mayor es
mejor” identifica las señales significativas
a pesar del ruido existente en cada

Figura 1. Diagrama de Box y Whiskers, para el contenido de flavonoides en los extractos de

los tratamientos.

Cuadro 3. Arreglo ortogonal del diseño experimental y variables de respuesta: y, SNL.

Cuadro 4. Análisis de varianza de la variable respuesta y.

Cuadro 5. Análisis de varianza de la variable respuesta SNL.

En la Figura 2 se muestra el comportamiento de las medias SNL de los niveles de cada

factor y sus interacciones. Se observa que existen diferencias significativas en los seis
tratamientos, formándose dos grupos en tiempo-temperatura. No hubo diferencias
significativas en tres niveles de proporción del disolvente (75:25, 80:20 y 70:30), ni en
tamaño de partícula en dos niveles (mediano y grande).
Figura 2. Efectos de los factores principales en unidades de SNL. Medias con diferente
letra son estadísticamente diferentes (Tukey;
p≤0.05). amb = 20±2 °C.

Una vez definidas las condiciones proceso óptimo esperado y confirmando

óptimas del proceso (Cuadro 6) y
establecido el intervalo de confianza, se
continuó con la prueba de confirmación
con los mismos parámetros óptimos y el
resultado fue 9.76 mg quercetina g−1
muestra en base seca (b.s.) (I.C. ±0.68), el
cual es superior al Y óptimo estimado con
valor de 10.34 mg quercetina g−1 muestra
b.s. La media general en rendimiento fue
6.48 mg quercetina g−1 muestra b.s.,
siendo 59.56% menor con respecto al
la eficiencia del proceso. El proceso con
la combinación óptima obtuvo un
rendimiento de 8.69 mg quercetina g−1
muestra b.s., un resultado que se
encuentra dentro de los valores reportados
(Cuadro 1). Las diferencias observadas
entre el valor estimado y el promedio de
las tres corridas de confirmación se deben
a factores como variedades empleadas
(Redaelli et al., 1981), condiciones de
desarrollo del cultivo (Tavares y Fonseca,
2004), manejo poscosecha (Franke y
Schilcher, 2005) y proceso de extracción
(Cuadro 1).
Cuadro 6. Niveles óptimos de los
factores significativos
Naczk y Shahidi (2004) reportan que los
largosperiodos de extracción que varían
de 1 min a 24 h, incrementan la
oportunidad de oxidación de los fenoles.
Respecto a la proporción del disolvente
metanol:agua, 50:50 fue la menos
eficiente. El contenido de flavonoides fue
alto en la partícula grande, lo cual
contradice el hecho de que un menor
tamaño de partícula ofrece una mayor
área de transferencia y por ende una
mayor extracción. La explicación a esta
discrepancia radica en que la partícula
grande contiene flores liguladas que
contienen 7-9% de apigenina-7-
glucósido, el flavonoide más abundante
en la flor de manzanilla.
CONCLUSION
Las condiciones óptimas de extracción de
flavonoides a partir de manzanilla son
tratamiento de 1 h a 70±0.5°C,
proporción de disolventes de 80:20
(metanol: agua), empleando un tamaño de
partícula grande (>2.00 mm, donde
existen flores liguladas). Los valores
predichos y los de confirmación están
dentro del intervalo de confianza;
entonces el modelo es adecuado para
obtener un mayor rendimiento
en la extracción de flavonoides.
Las condiciones óptimas
identificadas con la metodología
de Taguchi fueron reproducidas
en el laboratorio. Este proceso
de laboratorio es muy útil y
puede reproducirse a escala
industrial.
REFERENCIAS
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Padilla Fernández, Esteban Andrés
(2015). Formulación y control de calidad
de un enjuague bucal elaborado a partir
de los extractos totales de Matricaria
recutita L. (Manzanilla) y de Salvia
officinalis L. (Salvia). Tesis de Grado
para optar por el Título Profesional de
Química Farmacéutica. Carrera de
Química Farmaceútica. Quito: UCE. 142
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Osorio E. Aspectos Básicos de
Farmacognosia. Facultad de Química
Farmacéutica. Universidad de Antioquia.
Medellín, Colombia; 2009. 2. McKay DL,
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