CÉLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA MORFOLOGÍA BACTERIANA - peptidoglicano → arabinogalactano: puente único diglicosil-fosforil

(ramnosa + NAG)
- Tipos de células: eucariota y procariota
- lipoarabinomanano: glicolípido anclado a peptidoglicano y m.c.
- Microorganismos como células (Lynn Margulis):
(núcleo de manosas + cadenas ramificadas arabinofuranosil-manosa
Prokaryotae: Monera → Archaebacteria, Eubacteria
+ unidad fosfatidilinositol)
Eukaryotae: Protistas, Fungy-micota, Animalia, Plantae
- Sistema de los 3 dominios (Carl Woese): Archaea, Bacteria, Eukarya  GRAM (-): LPS y proteína (membrana extracelular) + peptidoglicano +
espacio periplásmico + membrana plasmática
- aa3 (a. meso diaminopimélico) + aa4 (D-alanina) → lipoproteína
ESTRUCTURA BACTERIANA (con membrana ext.)
- membrana externa:
֎ Elementos obligados:
 porinas: proteínas, paso de moléculas (específicas e
- Pared celular
inespecíficas)
- Membrana celular
 LPS: lípido A + core polisacárido + o-polisacárido
- Citoplasma
֎ Funciones:
- Cromosoma bacteriano (genoma, nucleoide)
- Rigidez
֎ Elementos facultativos:
- Forma celular
- Cápsula
- Protección (factores externos, diferencia presión osmótica)
- Glicocálix
- Flagelos, fimbrias o pilis o TINCIÓN DE GRAM:
- ADN extracromosómico - Cristal violeta: G (+), G (-)
- Esporas - Lugol: G (+), G (-)
- Alcohol-acetona: G (+), G (-)
1. Pared celular
- Safranina: G (+), G (-)
֎ Composición mureína (bacterias): NAM+ NAG β (1,4)
- NAM → L-alanina + D-ácid. glutámico + aa3 [L-lisina (+) o ácid. o TINCIÓN ZIELH NEELSEN:
Meso-diaminopimélico (-)] + D-alanina - Fucsina fenicada (calentar 5 min., dejar enfriar y lavar)
- Alcohol ácido (1-2 min., lavar)
 GRAM (+): peptidoglicano + membrana plasmática
- Azul de metileno (2 min., lavar y dejar secar)
- aa3 (L-lisina) + aa4 (D-alanina) → puente pentaglicina
- ácido teicoico y ácid. lipoteicoico (polímeros de ribitol o glicerol,
 ARCHEOBACTERIAS
enlace fosfodiéster).
֎ Composición sin mureína: NAG + N-acetilosaminurónico β (1,3)
o Género: Mycobacterium (+): peptidoglicano + arabinogalactano + ácido
micólico + lipoarabinomanano (P. C. inusual) - Glucoproteínas, proteínas, polisacáridos (capa S)
- M. tuberculosis: R. Koch - Halófilas: heteropolímeros sulfatados
- BAAR (bacilos ácido-alcohol resistentes): ácidos grasos y ceras - Metanógenas: pseudopeptidoglicano
2. Mesosomas - Unidad de replicación
- Ausentes en eucariotas - Molécula ADN bicateriano circular
- Posible función: reproducción y metabolismo - 5 millones de pares de base
- Fisión binaria: formación de septo transverso, unión de ADN
bacteriano con m.c., repartición de ADN entre células hijas. 6. Plásmidos:
- Molécula ADN extracromosómico, bicateriano circular
3. Membrana celular: - 1 o 2 genes resistencia (antibióticos y virulencia)
֎ Composición: - Autoduplicación
- Fosfolípidos - Vectores de clonación (ingeniería genética): viabilidad celular no
- Glicolípidos afectada, fácil manipulación (inserción secuencias de ADN extraño
- Oligosacáridos 4 kb)
- Proteínas periféricas o integrales
7. Inclusiones citoplasmáticas:
֎ Funciones: - Gránulos votulina (corpúsculos metacromáticos): reserva fosfato
- Permeabilidad selectiva inorgánico para síntesis de ATP
- Transporte activo - Gránulos polisacáridos: en yodo glucógeno (marrón-rojizo) y
- Recepción señales químicas almidón (azules)
- Producción ATP - Carboxisoma (fija CO2): poliédricas o hexagonales con enzima
- Potencial de membrana electroquímica ribulosa-1, 5-difosfato carboxilasa
- Clorosoma (captura luz)
- Sistema transporte de electrones (citocromo fosforilación oxidativa)
- Vacuolas de gas (flotación): filas de vesículas gaseosas individuales,
- Motor rotatorio
cilindros huecos cubiertos de proteínas. Microcystis, Anabaena
- Parte del aparato fotosintético (fotótrofas)
- Poli-β-hidroxibutirato (PHB): plásticos biodegradables
- Síntesis pared y estructuras extracelulares
8. Flagelos
- Filamentosos extracelulares, helicoidal, hueco
4. Ribosomas:
֎ Composición: fibrillas compuestas de flagelina (antígeno H)
- Libres en citoplasma (10,000)
- Filamento: subfibrillas de flagelina, diámetro 13-17 nm,
- Unidos a 5 o 6 polirribosomas
monómeros ensamblados en región terminal del flagelo.
- Gancho: proteínas ≠ flagelina, helicoidal corto, trasmite
֎ Composición: 70S (Svedberg)
movimiento
- Subunidad mayor: 50S (34 proteínas + 2 ARNr [23S + 5S]) - Corpúsculo basal: M (m.c.) + S (espacio periplásmico) + P
- Subunidad menor: 30S (21 proteínas + 1 ARNr [16S]) (peptidoglicano) + L (polisacárido m. ext.) [L y P solo en G (-)]
- Motor del flagelo: fuerza motriz de bomba de protones (flujo iones
5. Cromosoma bacteriano: H por m.c.)
- PM: 3×109  Proteínas integrales Mot (A y B): control de motor flagelar,
- ADN girasa, topoisomerasa rotación filamento, rodea doble anillo MS
  Anillo C (proteínas Fli, M y N): conmutador de motor,
cambio de sentido (antihorario-horario)
֎ Función:
- Movilidad, traslado en superficies sólidas, presente en G (+) y G (-),
frecuente en bacilos, raro en cocos.
o Quimiotaxis: órganos sensoriales regulan dirección de motor flagelar
(alejamiento o acercamiento a un compuesto)
9. Fimbrias y pilis
- Filamentosos, rectos y rígidos (diámetro 3-10 nm, longitud 10-20
nm), G (-)
֎ Función
- Fimbrias: Fijación y adherencia a tejidos, en bacterias patógenas
- Pilis: Fijación a tejidos, contacto inicial (conjugación bacteriana),
órgano de reconocimiento entre bacteria donadora y receptora,
permite transferencias de plásmidos (pilis sexual)
֎ Composición
- Fimbrias: pilina, no participa en motilidad
- Pilis: pilina sexual, T y I
10. Esporas
- En G (+)
- Tipos: terminal, sub terminal, central
- Endosporas y exosporas
- Coloración: verde malaquita, eosina, safranina
- Forma criptobiótica: de reposo, durmiente
- Bacterias formadoras de esporas por lo general en el suelo
- Desarrollo en células vegetativas ante carencia nutricional
֎ Función:
- Resistencia a agentes agresivos ambientales, físicos y químicos
֎ Partes:
- Exosporio: cubierta fina y más externa, composición proteica
- Cubierta: varias capas, composición proteica, impermeable,
resistencia a sustancias químicas
- Núcleo: aumento termorresistencia, resistencia peróxido de
hidrógeno, inactivación enzimas del núcleo, producción proteínas
SASP (protección daño radiación UV, desecación y calor seco,
fuente de carbono y energía para formar nueva célula vegetativa)
o Esporulación (esporogénesis)
- Inicio: cesa el crecimiento por falta de nutrientes, cesa la función de
genes vegetativos y expresión de nuevos genes.
- Agotamiento de represor libera inhibición e inicia esporulación
- Factor regulador de inicio de esporulación: trifosfato de guanosina
(GTP)
- Final: partícula deshidratada con DNA genómico
- Metabolismo en latencia y regreso al estado vegetativo por
germinación
- 15% peso seco de espora ꞊ ácido dipicolínico (formación complejos
con iones de calcio)
11. Cápsula (glicocálix)
֎ Función
- Protectora – desecación, agentes agresivos
- Resistencia a fagocitosis o ataque de anticuerpos
- Adhesión y fijación en sustratos inertes o vivos (adhesinas: célula
bacteriana)
- Adhesión celular: formación de micro colonias
- Factor de virulencia en procesos patológicos
- Mejora de propiedades de difusión de nutrientes hacia célula
֎ Composición:
- Cápsulas polisacáridas
Heteropolisacáridos aniónicos: azucares, aminoazucares, ácidos
urónicos, polioles.
Homopolisacáridos neutros: levanos (polímeros de unidades de
fructosa), dextranos, celulosa, alginatos
- Cápsulas polipeptídicas: glutamil-polipéptidos (propio de Bacillus)
 Fuente de carbono
TIPOS DE NUTRICIÓN: CONDICIONES FÍSICAS-QUÍMICAS Inorgánico CO2 Orgánico
PARA DESARROLLO Y CRECIMIENTO
(Litótrofos ) (Organótrofos )
- Fines energéticos: aporte energético para el desarrollo de las Autótrofos Heterótrofos
bacterias Sustrato oxidable Quimiolitotrofos Quimioorganótrofos

Fuente de energía
- Fines biosintéticos: fuente de carbono para síntesis de componentes (Quimiosíntesis) bacterias del S, saprofitas, parasitas,
celulares Quimiótrofos nitrificantes, del H, Fe comensal, simbionte
1. Requerimientos nutricionales: energéticos y constitutivos
Luz Fotolitótrofos Fotoorganótrofos
- Macroelementos: 90% materia microorganismo, C -H - O - N - P - S
(fotosínteis) bacterias S, vegetales, bacterias púrpuras no
 Fuentes de C: CO2 (autótrofos), carbohidratos
Fotótrofos cianobacterias sulfúreas
(quimiorganótrofos)
 Fuentes de N: NO3, NH3, N2(autótrofos), aa, bases púricas, 3. Según requerimiento de oxígeno
pirimidicas (quimiótrofos) - Aeróbicas: ambiente con O2
 Fuentes de P: Formación de ATP y ADN - Anaeróbicas: nutrientes sin oxígeno, procesos de fermentación
 Fuentes de S: Producción de aa y coenzimas
4. Según el requerimiento de N, P, S
- Microelementos: metales en pequeñas cantidades, estructura de
- Nitrificación: nitrificantes, convierten NH3 → NH4 o NO2- → NO3-
enzimas, vitaminas, transportadores de electrones (citocromos),
(ciclo del nitrógeno)
contaminantes de macroelementos, en medios de cultivo.
 Nitrosomonas: NH4 → NO2-
 Frecuentemente esenciales: Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W,
 Nitrobacter: NO2- → NO3-
V, Zn
- Desnitrificación: NO3- → N (atmosférico libre, agota fertilidad de
 Inhibidores del crecimiento: Au, Ag, Cd, Cr, Pb (tóxicos
la tierra)
para el desarrollo de microorganismos)
- Agua: 80 – 90% peso total de célula
5. Según el medio en el que habitan
- Factores de crecimiento: moléculas en pequeñas cantidades, no
- Saprofitas: desperdicios de alimentos
sintetizadas por bacterias (coenzimas, precursores de vitaminas).
- Simbióticas: asociación con organismos
 Aa: síntesis de proteínas
- Comensales: no dañan ni benefician a su huésped
 Purinas y pirimidinas: síntesis de ácidos nucleicos
- Parásitas: causan enfermedades, a costa de organismos
 Vitaminas: múltiples funciones
-
2. Tipos de bacterias según nutrición, metabolismo 6. Condiciones físicas y el crecimiento bacteriano
- Temperatura
 Termófilos: 45-70 °C
 Mesófilos: 20-45 °C
 Psicrófilos: 5-20 °C
 Psicrotrofos: <0 °C
- Presión osmótica
- Presencia de oxígeno
  Aerobios estrictos: resp. aerobia - Se incorpora en aa y coenzimas
 Anaerobios obligados: O2 tóxico, metabolismo
fermentativo o resp. anaerobia. ֎ Fuente de K+, Mg2+, Ca2+
 Anaerobios facultativos: metabolismo resp., metabolismo - Cationes que estabilizan macromoléculas aniónicas
fermentativo y resp. anaerobia. - K+ coenzima y estabiliza ARN
 Microaerófilos: bajas tensiones O2 (5-10%), atm rica en - Mg2+ se integra a la clorofila
CO2, resp. aerobia.
- Ca2+ abunda en esporas (dipicolinato de calcio)
 Anaerobios aerotolerantes: metabolismo fermentativo,
pero resisten a presencia de O2.
֎ Fuente de Na:
- Humedad: ambiente mucho más húmedo, en desecación formación
- Equilibra presión osmótica de medio extracel.
de esporas.
- Luz: para MO fotosintéticos - Se agrega como: NaCl
- pH: medio neutro o leve alcalino (7-7.6). Lactobacilos (pH 5
acidófilos), Vibrio cholerae (pH 8.6), hongos (pH 5)
2.2. FACTORES DE CRECIMIENTO:
- Requeridos en baja concentración
MEDIOS DE CULTIVO - No sintetizados por las células
- Se agregan al MC en forma de extractos (carne levadura, malta)
1. Características de los MO para la preparación de un medio de cultivo
- Tipo trófico: autótrofos, heterótrofo, quimiótrofo, fotótrofo, etc.
2.3. AGENTES SOLIDIFICANTES:
- Tipo respiratorio: aerobio, anaerobio, anaerobio facultativo, etc.
- Opcional (+ usado: agar)
- Temperatura: termófilo, mesófilo, psicrófilo, psicrotrofo.
- Diferentes concentraciones: 1.5 – 2% (medios sólidos), 0.2 – 0.3%
- pH: acidófilo, neutrófilo, basófilo. (medios semisólidos), 5% (medios de consistencia firme)
2.4. AGUA:
2. Composición química: - Fundamental en procesos metabólicos, funciones enzimáticas
2.1. MACROELEMENTOS:
- MC preparados con agua destilada
֎ Fuente de N:
- 80-90% peso de una célula
- Provee proteínas, acid. nucleicos, polímeros de pared
- Algunos MO incorporan N en aa, bases purínicas o pirimidínicas. 3. Clasificación:
- Aporte por peptonas (en ciertos medios) 3.1. Según su composición
֎ Medios líquidos: caldo
֎ Fuente de P: - Uso: diluciones, homogenizar mezclas, enriquecer cultivos,
- Se agrega como: fosfatos de Na o K rehidratar cepas liofilizadas
- Se incorpora en acid. nucleicos, fosfolípidos, polímeros de
membrana, ATP, sustancias de reserva. ֎ Medios sólidos: agar (se añade 2%, en cajas Petri o tubos)
- Uso: separar MO, favorecer desarrollo de colonias aisladas
֎ Fuente de S:
- Se agrega como: SO4, cisteína o metionina ֎ Medios semisólidos: consistencia gelatinosa (añadir 0.4-0.8% agar)
 - Uso: determinar movilidad de MO microaerófilos
3.2. Según su finalidad
֎ Medio común: nutrientes mínimos necesarios para desarrollo de
bacterias (caldo común, caldo de carne)
֎ Medios de transporte: mantienen viables a los MO
- Buffer + sustancias criopreservantes (glicerol)
P.ej. Cary-Blayr, Hajna, Stuard
3.3. Según su presentación
֎ Medios para mantenimiento de cepas: nutrientes para mantener cepas
vivas por largos periodos de tiempo, generalmente a temperaturas bajas
para impedir crecimiento.
P.ej. leche descremada congelada
֎ Medio de enriquecimiento: líquidos, favorece crecimiento de MO
particulares.
- P. ej. Caldo selenito para salmonellas, caldo tetrationato, caldo
lactosado
֎ Medio enriquecido: sustancia agregada que aumenta poder nutritivo,
aporta factor de crecimiento para MO con exigencias en nutrientes.
- Componentes básicos + 1 o más elementos nutritivos
P. ej.
Agar sangre (TSA enriquecido 5-10% de sangre de carnero
desfibrinada, agar a 37 °C al añadir sangre): bacterias heterótrofas,
hemolisis α y β
Agar chocolate (medio de agar sangre llevado a baño de agua por 5
min a 50 °C): ruptura de eritrocitos aporta factores de crecimiento
nuevos como factor X (hemina termoestable) y factor V (fospiririna
termolábil)
֎ Medio selectivo de aislamiento: sustancias favorecen crecimiento de
un MO e inhibe el crecimiento de otro, útil en muestras mixtas,
sustancia inhibidora agregada (antibiótico, colorantes).
- Poco selectivos: agar McConkey, EMB, ENDO (enterobacterias)
- Medianamente selectivos: agar SS para Salmonella y Shigellas
- Altamente selectivos: agar Chapman y Manitol salado.
֎ Medios diferenciales o bioquímicos: desdoblamiento de sustratos por
acción de enzimas bacterianas, indicador adicionado (colorante) para
diferenciación de reacciones químicas.
- Medio corriente (caldo o agar) + sustrato conocido + inhibidor de
pH
P.ej. TSI, SIM, LIA, Urea, Citrato de Sinmons, Caldo MR-VP
֎ M. deshidratados (liofilizados): Deben ser preparados en el lab., se
añade agua, condiciones asépticas, esterilización en autoclave,
composición variada.
֎ M. ya preparados
- Sólidos en placa Petri
- Sólidos en tubo
 Inclinado
 Semi-inclinado (pico de flauta): Crecimiento aerobio
microbiano (por estría) o anaerobio (por picadura,
anaerobiosis facultativa), conservación de cepas
(desecación < en placas Petri)
P. ej. Agar KIA, LIA
- Líquidos en tubo: No permite visualizar colonias, sí pruebas
bioquímicas (determinación del Indol, reducción de nitratos a
nitritos, fermentación de carbohidratos, aumento de concentración
de MO inoculado), sin agar.
- Semisólidos en tubo: sembrado por picadura, pruebas bioquímicas
(de movilidad, oxidación-fermentación o Hugh-Leiffson)
- De doble fase en frasco o tubo: fase sólida y líquida (determinación
de MO en sangre). 2 fases crecen en mismo medio, carácter aerobio
o anaerobio, obturadores de caucho para mantener aislamiento del
medio.
P.ej. Medio de Ruiz Castañeda para aislamiento de Brucella,
Medio para Hemocultivo
 CONSTITUYENTES DE MC BACTERIOLÓGICO: naturales o
sintéticos
 Fuentes energéticas: C, N
 Fuentes no energéticas
- F. de S, P (sales minerales)
- Iones metálicos: Na, K Mg
- Factores de crecimiento: aa (cistina, sangre, suero, extracto de
levadura)
- Factores de arranque: fase latente → crecimiento exponencial (ión
que estimula crecimiento)
- Factores inhibidores: inhibe crecimiento de MO no deseados
(colorantes de anilina, metales pesados, sustancias químicas, agentes
antimicrobianos)